Mysi model tętniaka aorty brzusznej indukowany przez okołonaczyniowe zastosowanie elastazy
11 lutego 2022
Obecny protokół opisuje ustandaryzowaną metodę chirurgiczną dla modelu AAA wywołanego elastazą poprzez bezpośrednie zastosowanie elastazy do przydanki podnerkowej aorty brzusznej u myszy.
Jest to ustandaryzowany protokół dla tętniaka aorty brzusznej wywołanego elastazą, który znacznie zwiększyłby odtwarzalność i spójność badań z wykorzystaniem tego modelu. Ta technika zapewnia stałą szybkość indukcji tętniaka aorty brzusznej. Ma również tę zaletę, że niskie koszty i krótki czas operacji, co skutkuje większą mocą statystyczną i odtwarzalnością.
Musisz upewnić się, że tkanki łączne pokrywające aortę zostały usunięte, aby elastaza miała większe szanse na penetrację, ale uważaj, aby nie uszkodzić naczyń. Na początek podawaj podskórnie pięć miligramów na kilogram karprofenu, 30 minut przed indukcją znieczulenia. Przetestuj znieczuloną mysz pod kątem braku reakcji na uszczypnięcie palca u nogi przed nacięciem skóry.
Wykonaj 2,5-centymetrowe podłużne nacięcie na skórze, wzdłuż linii środkowej środkowej i dolnej części brzucha. Delikatnie podciągnij leżący pod spodem mięsień i wykonaj 2,5-centymetrowe nacięcie podłużne wzdłuż linii białej. Użyj zwilżonych aplikatorów z bawełnianą końcówką, aby przesunąć jelita i żołądek na prawą stronę myszy i uzyskać dostęp do jamy brzusznej.
Za pomocą kleszczy delikatnie usuń tkankę łączną pokrywającą aortę brzuszną i żyłę główną dolną. Użyj kleszczy, aby delikatnie wypreparować tylną stronę aorty brzusznej i żyłę główną dolną od leżących poniżej mięśni. Umieść kawałek paska rękawicy o wymiarach cztery centymetry na cztery milimetry przez tylną część aorty brzusznej i żyły głównej dolnej i wyprostuj pasek.
Umieść pasek w odległości około 0,5 centymetra od prawej tętnicy nerkowej. Nad paskiem umieść kawałek wacika o wymiarach trzy centymetry na dwa milimetry przez tylną część aorty brzusznej i żyły głównej dolnej. Następnie wyprostuj wacik.
Aby inkubować elastazę, za pomocą pipety upuść 30 mikrolitrów elastazy trzustkowej świni na segment aorty nad wacikiem. Owiń wacik i pasek wokół aorty i żyły głównej dolnej. Opłucz kawałek gazy o wymiarach 10 centymetrów na 10 centymetrów sterylnym 0,9% soli fizjologicznej i umieść go na brzuchu.
Po 30 minutach usuń pasek i wacik za pomocą kleszczy. Przepłukać aortę i jamę brzuszną 500 mikrolitrami sterylnego 0,9% soli fizjologicznej. Użyj gazy, aby wchłonąć pozostałą sól fizjologiczną.
Ponownie przybliż warstwy mięśniowe za pomocą niewchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0. Następnie zamknij skórę trzema do czterech przerwanymi na 6-0 niewchłanialnych szwów monofilamentowych. Częstość występowania tętniaka aorty brzusznej w 14. dobie po operacji wynosiła 91,7% u samic, podczas gdy częstość występowania u samców wynosiła 72,7%Wśród 19 zwierząt, u których rozwinął się tętniak aorty brzusznej, zaobserwowano 1,7-krotny i 1,6-krotny wzrost maksymalnej średnicy aorty brzusznej, odpowiednio u samic i samców. w porównaniu z kontrolami nieoperacyjnymi.
Wyświetlane są reprezentatywne obrazy aorty z grup niechirurgicznych i chirurgicznych w 14. dniu po operacji. Technika ta posłużyła jako potencjalne narzędzie pomocne w analizie patofizjologii potrójnego A i pomoc w odkryciu nowych potencjalnych celów terapeutycznych.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejsza praca przedstawia zestandaryzowany protokół chirurgiczny indukowania tętniaka aorty brzusznej (AAA) u myszy z wykorzystaniem elastazy. Metoda ta zapewnia wysoką powtarzalność i niskie koszty operacyjne, co czyni ją skutecznym narzędziem do badania AAA.
Kluczowe elementy badania
Obszar badawczy
- Biologia układu sercowo-naczyniowego
- Patofizjologia chorób aorty
- Modelowanie eksperymentalne u myszy
Wstęp
- Tętniak aorty brzusznej to poważny stan medyczny wiążący się ze znaczną chorobowością.
- Obecne modele różnią się pod względem powtarzalności i kosztów.
- Znormalizowane podejście mogłoby poprawić wyniki badań.
Zastosowane metody
- Bezpośrednie zastosowanie elastazy trzustkowej świni do błony zewnętrznej aorty.
- Model mysi (szczepy C57BL/6 lub podobne).
- Techniki dyssekcji chirurgicznej i oceny kontrolne.
Główne wyniki
- Częstość występowania AAA w 14. dniu po operacji wyniosła 91,7% u samic myszy i 72,7% u samców.
- Zaobserwowano istotne wzrosty maksymalnej średnicy aorty brzusznej.
- Potwierdza to przydatność modelu do dalszego zgłębiania mechanizmów AAA oraz odkrywania celów terapeutycznych.
Wnioski
- Niniejszy protokół przedstawia wiarygodną metodę indukcji AAA.
- Może on przyczynić się do rozwoju badań w dziedzinie biologii układu sercowo-naczyniowego oraz opracowywania nowych terapii.
Najczęściej Zadawane Pytania
Znaczenie dla przemysłu
Ustandaryzowane modele mysie tętniaka aorty brzusznej (AAA) są kluczowe dla ograniczania ryzyka we wczesnym etapie odkrywania celów sercowo-naczyniowych oraz umożliwiają prowadzenie powtarzalnych badań mechanistycznych. Protokół aplikacji elastazy okołonaczyniowej zapewnia wysoką spójność i moc statystyczną, wspierając rzetelną weryfikację hipotez oraz porównywalność między badaniami. Model ten zwiększa pewność w odniesieniu do portfela badań, dostarczając niezawodnego systemu przedklinicznego do analizy patogenezy AAA oraz oceny celów terapeutycznych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wstępne odkrycia i walidacja celu
- Umożliwia badanie patofizjologii AAA oraz identyfikację mechanizmów napędzających rozwój choroby.
- Wspiera walidację funkcjonalną potencjalnych celów terapeutycznych w powtarzalnym kontekście in vivo.
- Zwiększa pewność prognostyczną we wczesnych fazach programów kardyvaskularnych.
Przesiewy i opracowanie testów
- Zapewnia zwalidowany system in vivo do oceny interwencji farmakologicznych ukierunkowanych na AAA.
- Dostarcza zestandaryzowanych, ilościowych wyników, takich jak zmiany średnicy aorty, na potrzeby opracowywania testów.
- Umożliwia powtarzalność i skalowalność przesiewania związków w badaniach przedklinicznych.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodny z punktami końcowymi istotnymi dla choroby w badaniach nad biomarkerami translacyjnymi.
- Zapewnia ciągłość od odkryć mechanistycznych do oceny skuteczności przedklinicznej.
- Zmniejsza ryzyko biologiczne poprzez modelowanie kluczowych cech ludzkiego AAA u myszy.
Integracja potoku i przepływu pracy
Model ten integruje się z kontinuum od odkryć do fazy przedklinicznej, stanowiąc pomost między badaniami mechanicznymi a identyfikacją wiodących związków w terapii AAA.
- Biologia odkrywcza: Wspiera testowanie hipotez dotyczących mechanizmów AAA oraz roli celów terapeutycznych.
- Przesiewanie: Zapewnia powtarzalne, ilościowe wyniki do oceny skuteczności związków.
- Analityka: Umożliwia statystyczne porównanie rozszerzenia aorty oraz częstości występowania zmian w grupach eksperymentalnych.
- Badania translacyjne: Ułatwia dopasowanie do cech klinicznych AAA w celu opracowania biomarkerów i punktów końcowych.
- Ponowne wykorzystanie w organizacji: Oferuje ustandaryzowany, kosztowo efektywny model, który można dostosować do potrzeb różnych zespołów badawczych zajmujących się układem sercowo-naczyniowym.
Wpływ operacyjny i korporacyjny
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną w badaniach nad AAA.
- Wartość operacyjna: Poprawia powtarzalność, standaryzację i wydajność badań in vivo.
- Wartość strategiczna: Poprawia jakość decyzji typu go/no-go oraz alokację kapitału we wczesnych etapach rozwoju leków w obszarze układu sercowo-naczyniowego.
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację celów terapeutycznych i kandydatów na leki w leczeniu AAA z uwzględnieniem analizy ryzyka.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymagana jest wiedza chirurgiczna oraz standaryzowane przeszkolenie proceduralne w celu uzyskania spójnych wyników.
- Niezbędny jest dostęp do sal chirurgicznych dla zwierząt oraz narzędzi do ilościowego obrazowania lub pomiarów.
- Wymagane jest rygorystyczne przestrzeganie protokołu przez wszystkie zespoły, aby zminimalizować zmienność między badaniami.
- Możlina może być konieczność adaptacji metody dla różnych szczepów myszy lub końcowych punktów eksperymentalnych.
- Potencjalne ograniczenia obejmują zmienność techniczną oraz specyficzne dla modelu cechy patofizjologiczne.
