Name: Ablacja za pośrednictwem nitroreduktazy/metronidazolu oraz platforma MATLAB (RpEGEN) do badania regeneracji nabłonka barwnikowego siatkówki danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 12 s
Description: Poznaj metodę ablacji nabłonka barwnikowego siatkówki u danio pręgowanego z wykorzystaniem systemu nitroreduktazy/metronidazolu oraz platformy MATLAB do ilościowej analizy regeneracji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca opisana tutaj była wspierana przez National Institutes of Health (RO1-EY29410 dla J.M.G. i NIH CORE Grant P30-EY08098 dla Wydziału Okulistyki); Centrum Transplantacji i Terapii Immunologicznej UPMC (do L.L.L. i J.M.G.); oraz E. Ronald Salvitti Chair in Ophthalmology Research (do J.M.G.). Dodatkowe wsparcie otrzymano od Wiegand Fellowship in Ophthalmology (dla L.L.L), Eye & Ear Foundation z Pittsburgha oraz nieograniczonego grantu od Research to Prevent Blindness, Nowy Jork, NY. Autorzy pragną również podziękować Amandzie Platt za pomoc techniczną oraz dr Hugh Hammerowi i personelowi wodnemu za doskonałe wsparcie w opiece nad zwierzętami.

L.L.L. jest współtwórcą amerykańskiego patentu #9,458,428, który opisuje przyspieszoną metodę pozyskiwania nabłonka barwnikowego siatkówki z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych; Nie ma to związku z treścią niniejszego dokumentu. J.M.G. i G.B.F. nie mają nic do ujawnienia.

Protokół ten opisuje metodologię genetycznej ablacji RPE oraz badania mechanizmów degeneracji i regeneracji u danio pręgowanego w wieku larwalnym. Protokół ten został również z powodzeniem przeprowadzony u dorosłych zebry3, ale z mniej obszerną charakterystyką, dlatego w centrum uwagi znajdują się tutaj larwy. Krytyczne aspekty tej części protokołu (kroki 1-4) obejmują: 1) dodanie 1,5 x PTU do zarodków przed rozpoczęciem melanogenezy, 2) dechorionację zarodków leczonych PTU przy 2-3 dpf, 3) staran...

Metodologia opisana tutaj szczegółowo opisuje protokół genetycznej ablacji nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) przy użyciu larw danio pręgowanego. RPE rozciąga się nad tylną częścią oka i znajduje się między warstwowymi warstwami siatkówki nerwowej a warstwą naczyń krwionośnych stanowiącą naczyniówkę. Wsparcie troficzne, absorpcja światła fototoksycznego i utrzymanie białek cyklu wzrokowego to tylko niektóre z krytycznych funkcji, które wykonuje RPE, a które są niezbędne do utrzymania zdrowia i integralności tych sąsiednich tkanek1. Uszkodzenia RPE u ssaków są naprawialne, gdy zmiany są małe2; Jednak uszkodzenia odniesione w wyniku większych urazów lub postępującej choroby zwyrodnieniowej są nieodwracalne. U ludzi choroby zwyrodnieniowe RPE (np. zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD) i choroba Stargardta) prowadzą do trwałej utraty wzroku i, przy niewielu dostępnych opcjach leczenia, do obniżenia jakości życia pacjenta. Ograniczona zdolność ssaków do samonaprawy stworzyła lukę w wiedzy w dziedzinie procesów regeneracyjnych RPE. Biorąc pod uwagę solidną zdolność regeneracyjną danio pręgowanego w wielu różnych typach tkanek, protokół ten został opracowany w celu ustanowienia systemu kręgowców in vivo, aby ułatwić badania nad wewnętrznie regenerującym się RPE i odkryć mechanizmy, które napędzają tę reakcję. Korzystając z opisanego tutaj paradygmatu ablacji, kanoniczny szlak sygnałowy Wnt class3, mTOR pathway4 i odpowiedzi związane z odpornością5 zostały zidentyfikowane jako krytyczne mediatory regeneracji RPE, prawdopodobnie z nakładającymi się funkcjami.
W tym paradygmacie ablacji genetycznej, Tg(rpe65a:nfsB-eGFP)3 danio pręgowany wyraża gen nitroreduktazy pochodzenia bakteryjnego (NTR/nfsB) class6 połączony z eGFP pod kontrolą elementu wzmacniającego RPE, rpe65a7. Ablację uzyskuje się poprzez dodanie proleku, metronidazolu (MTZ), do wody systemu, w której znajduje się danio pręgowany. Wewnątrzkomórkowa aktywacja MTZ przez nitroreduktazę powoduje sieciowanie DNA i apoptozę w komórkach wykazujących ekspresję NTR/nfsB8,9. Technologia ta jest szeroko stosowana u danio pręgowanego do ablacji komórek siatkówki10,11,12,13 i innych tkanek8. Razem elementy te umożliwiają ukierunkowaną ekspresję (rpe65a) indukowalnej metodologii ablacji komórek (NTR/MTZ)8,9 oraz markera fluorescencyjnego (eGFP) do wizualizacji.
Istnieją również inne interesujące modele in vivo, które mogą być wykorzystane do badania potencjału regeneracyjnego RPE14. Są one szerokie i obejmują transdyferencjację RPE do siatkówki po retinektomii u, w której komórki RPE utracone w wyniku odrastania siatkówki są zastępowane15,16; Odbudowa RPE po urazie w "super gojącym" MRL/MpJ mouse17; oraz egzogenna stymulacja proliferacji RPE w szczurzym modelu spontanicznego RPE i zwyrodnienia siatkówki18, między innymi. Opracowano również modele in vitro, takie jak dorosłe ludzkie komórki macierzyste RPE (RPESCs)19. Wszystkie te modele są cennymi narzędziami pracującymi nad odkryciem procesów komórkowych związanych z regeneracją RPE (np. proliferacji, różnicowania itp.); jednak danio pręgowany jest wyjątkowy pod względem zdolności do wewnętrznej naprawy RPE po ablacji.
Chociaż metodologia tutaj jest napisana tak, aby skupić się na zrozumieniu mechanizmów napędzających regenerację RPE, linia Tg(rpe65a:nfsB-eGFP) i ten protokół ablacji genetycznej mogą być wykorzystane do badania innych procesów komórkowych, takich jak apoptoza RPE, zwyrodnienie RPE i wpływ uszkodzenia RPE na sąsiednie tkanki siatkówki i naczyń. Protokół ablacji może być również zmodyfikowany w celu uwzględnienia manipulacji farmakologicznej, która jest wygodną wstępną strategią badania przesiewowego szlaków sygnałowych będących przedmiotem zainteresowania. Na przykład, wykazano, że blokowanie kanonicznego szlaku Wnt za pomocą inhibitora odpowiedzi Wnt-1 (IWR-1)20, upośledza regenerację RPE3. Zostało to powtórzone tutaj, aby przeprowadzić użytkowników przez eksperyment manipulacji farmakologicznej i posłużyć jako dowód koncepcji do walidacji skryptu MATLAB (RpEGEN) stworzonego do ilościowego określania regeneracji RPE w oparciu o odzyskiwanie pigmentacji. Podobnie jak linia transgeniczna i protokół ablacji, skrypty RpEGEN są adaptowalne i mogą być wykorzystywane do ilościowego określania innych markerów/procesów komórkowych w obrębie RPE.

<table><tbody><tr><td>Lab Materiał/Sprzęt</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2-(4-amidinofenylo)-6-indolokarbamidyny dichlorowodorek (DAPI)</td><td>Millipore Sigma</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>6-dołkowe płytki</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-83</td><td></td></tr><tr><td>Stożkowe probówki wirówkowe z polipropylenu</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-13</td><td>Numer katalogowy dotyczy probówek 50 ml</td></tr><tr><td>Pisak do pisania z diamentową końcówką</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-254-51</td><td>Wyprodukowany przez Electron Microscopy Sciences, elementy podobne do tego numeru części są odpowiednie</td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek (DMSO) &ge; 99.7 %</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP231</td><td>Sprawdź wymagania dotyczące utylizacji odpadów chemicznych</td></tr><tr><td>Inkubator zarodków (duży)</td><td>Fisher Scientific</td><td>3720A</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator zarodków (mini/blat)</td><td>Labnet</td><td>I5110A</td><td></td></tr><tr><td>Stereoskopowy mikroskop fluorescencyjny</td><td>Zeiss</td><td>Axio Zoom.V16</td><td>Lub podobny, z laserem/filtrem wzbudzającym 488 nm</td></tr><tr><td>Szklana pipeta Pasteura</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-4</td><td>Wyprodukowany przez Corning, niesterylny</td></tr><tr><td>InSolution Wnt Antagonist I, IWR-1-endo</td><td>Millipore Sigma</td><td>5.04462</td><td>Wyprodukowany przez Calbiochem; 25 mM w DMSO; sprawdź wymagania dotyczące utylizacji odpadów chemicznych</td></tr><tr><td>Błękit metylenowy (proszek)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP117-100</td><td>Dostępny również jako gotowy roztwór wodny</td></tr><tr><td>Metronidazol (MTZ)</td><td>Millipore Sigma</td><td>M3761</td><td>Sprawdź wymagania dotyczące utylizacji odpadów chemicznych</td></tr><tr><td>N-fenylotiomocznik (PTU)</td><td>Millipore Sigma</td><td>P7629</td><td>Sprawdź wymagania dotyczące utylizacji odpadów chemicznych</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (16 % w/v) bez metanolu</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA433689M</td><td>Odpady chemiczne, wymagana odpowiednia utylizacja</td></tr><tr><td>Szalki Petriego</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td><td>Średnica 10 cm</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (saszetki z proszkiem)</td><td>Millipore Sigma</td><td>P3813</td><td>Służy do produkcji 10 X PBS stock</td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Millipore Sigma</td><td>PRON-RO</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator z wytrząsaniem</td><td>Benchmark</td><td>H2010</td><td>Służy do inkubacji MTZ przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni Celsjusza</td></tr><tr><td>Mikroskop stereoskopowy</td><td>Leica</td><td>S9i</td><td>Lub podobny, ze światłem przechodzącym iluminacja</td></tr><tr><td>Kleszcze Student Dumont #5</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td>Kleszczyki z cienką końcówką do ręcznej dechorionacji</td></tr><tr><td>Rotator/wytrząsarka stołowa</td><td>Scilogex</td><td>SK-D1807-E</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta transferowa</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z135003</td><td>3,2 mL do pobierania bańki, niesterylna</td></tr><tr><td>Metanosulfonian trikainy (MS-222)</td><td>Pentair</td><td>TRS1, TRS2, TRS5</td><td>Dostępne również w Fisher Scientific (NC0342409)</td></tr><tr><td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium z DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Software Material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FIJI (Fiji to tylko ImageJ)FIJI (Fidżi to tylko</td> <td>ImageJ)</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td> <td>Wersja: 2.0.0-rc-69/1.52p; Kompilacja: 269a0ad53f; Potrzebna wtyczka: Przykłady Bio-Formats</td></tr><tr><td>GRAMM i instrukcje</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/matlabcentral/fileexchange/54465-gramm-complete-data-visualization-toolbox-ggplot2-r-like.</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/products/get-matlab.html</td><td>Zestawy narzędzi potrzebne do uruchomienia RpEGEN: Image Processing Toolbox, Curve Fitting Toolbox, Statistics and Machine Learning Toolbox</td></tr><tr><td>Obsługa MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>https://www.mathworks.com/support.html</td><td></td></tr></tbody></table>

ablacja za pośrednictwem nitroreduktazy/metronidazolu oraz platforma matlab (rpegen) do badania regeneracji nabłonka barwnikowego siatkówki danio pręgowanego

Nitroreductase/Metronidazole-Mediated Ablation and a MATLAB Platform (RpEGEN) for Studying Regeneration of the Zebrafish Retinal Pigment Epithelium

Nabłonek barwnikowy siatkówki (RPE) znajduje się w tylnej części oka i pełni funkcje niezbędne do utrzymania zdrowia i integralności sąsiednich tkanek siatkówki i naczyń krwionośnych. Obecnie ograniczona zdolność naprawcza RPE ssaków, która ogranicza się do małych urazów, utrudnia postęp w zrozumieniu procesów regeneracyjnych RPE in vivo. W tym miejscu przedstawiono szczegółową metodologię ułatwiającą badanie naprawy RPE in vivo z wykorzystaniem danio pręgowanego, modelu kręgowców zdolnego do solidnej regeneracji tkanek. Protokół ten opisuje transgeniczny paradygmat uszkodzenia za pośrednictwem nitroreduktazy/metronidazolu (NTR/MTZ) (rpe65a:nfsB-eGFP), który powoduje ablację centralnych dwóch trzecich RPE po 24-godzinnym leczeniu MTZ, a następnie regenerację tkanek. Skoncentrowano się na ablacjach RPE u larw danio pręgowanego, a także przedstawiono metody badania wpływu związków farmakologicznych na regenerację RPE. Omówiono również generowanie i walidację RpEGEN, skryptu MATLAB stworzonego w celu automatyzacji kwantyfikacji regeneracji RPE na podstawie pigmentacji. Poza aktywnymi mechanizmami naprawy RPE, protokół ten można rozszerzyć o badania zwyrodnień RPE i reakcji na urazy, a także wpływu uszkodzenia RPE na sąsiednie tkanki siatkówki i naczyń krwionośnych, a także inne procesy komórkowe i molekularne. Ten system danio pręgowanego jest bardzo obiecujący w identyfikacji genów, sieci i procesów, które napędzają regenerację RPE i mechanizmy związane z chorobą RPE, z długoterminowym celem zastosowania tej wiedzy w systemach ssaków, a ostatecznie w kierunku rozwoju terapeutycznego.

Wiadomo, że hamowanie kanonicznej ścieżki sygnałowej Wnt znacząco upośledza regenerację RPE u rybek zebrafish, przy zastosowaniu paradygmatu ablacji genetycznej (rpe65a:nfsB-eGFP) oraz metodologii manipulacji farmakologicznej (IWR-1) opisanych w protokole3. Niniejszy eksperyment został powtórzony w celu walidacji zautomatyzowanej metody ilościowego określania regeneracji RPE u rybek zebrafish w oparciu o pigmentację. Poniższe podsumowanie wyników obejmuje wszystkie etapy protokołu, od dni...

Ten protokół opisuje metodologię genetycznej ablacji nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) przy użyciu transgenicznego modelu danio pręgowanego. Dostosowanie protokołu w celu włączenia modulacji szlaku sygnałowego za pomocą związków farmakologicznych jest bardzo szczegółowe. Opracowano platformę MATLAB do ilościowego określania regeneracji RPE na podstawie pigmentacji, która została zaprezentowana i omówiona.

Ablacja za pośrednictwem nitroreduktazy/metronidazolu oraz platforma MATLAB (RpEGEN) do badania regeneracji nabłonka barwnikowego siatkówki danio pręgowanego

The retinal pigment epithelium (RPE) resides at the back of the eye and performs functions essential for maintaining the health and integrity of adjacent ...

Danio pręgowany jest wyjątkowy ze względu na swoją wewnętrzną zdolność do regeneracji wielu różnych typów tkanek, w tym RPE. Protokół ten może być wykorzystany do identyfikacji szlaków molekularnych, które napędzają regenerację RPE i mechanizmy związane z chorobą RPE. Podstawową zaletą tej metodologii jest wszechstronność.Oprócz badania regeneracji RPE, protokół ten może być wykorzystany do badania procesów zwyrodnieniowych RPE i wpływu uszkodzenia RPE na sąsiednie tkanki w oku. Ssaki, w tym ludzie, nie są w stanie naprawić dużych urazów RPE wynikających z urazu lub choroby zwyrodnieniowej. Wykorzystanie danio pręgowanego jako narzędzia do odkrywania czynników proregeneracyjnych RPE jest znaczącym krokiem w kierunku promowania regeneracji RPE u ssaków.Aby przygotować świeży 10-milimolowy roztwór MTZ, pięć dni po zapłodnieniu, dodaj proszek MTZ do wody systemowej bez PTU i dokładnie wymieszaj przez energiczne wstrząsanie przez godzinę w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Schłodzić 10-milimolowy roztwór MTZ przez godzinę w temperaturze pokojowej na rotatorze stołowym lub wytrząsarce. Aby przebadać larwy danio pręgowanego przed transgenem rpe65a:nsfB-eGFP, należy oddzielić transgeniczn

nitroreductasemetronidazole-mediated-ablation-matlab-platform-rpegen

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

W tym filmie przedstawiono techniki wielokolorowego konfokalnego obrazowania time-lapse oraz celowanej ablacji komórek. Obrazowanie time-lapse jest wykorzystywane do monitorowania zachowania wielu wybranych typów komórek in vivo. Celowana ablacja komórek ułatwia badanie funkcji obwodów neuronalnych oraz paradygmatów regeneracji neuronów specyficznych dla danej grupy komórek.

Wielokolorowe obrazowanie poklatkowe transgenicznych rybek zebrafish: wizualizacja komórek macierzystych siatkówki aktywowanych przez ukierunkowaną ablację komórek neuronalnych

Ostre uszkodzenie nerek (AKI) u ludzi jest częstym problemem klinicznym spowodowanym uszkodzeniem komórek nabłonkowych tworzących nefrony nerkowe, a AKI wiąże się z wysoką śmiertelnością na poziomie 50-70%1. Po zniszczeniu komórek nabłonkowych nefrony mają ograniczoną zdolność do regeneracji, choć mechanizmy i ograniczenia sterujące tym zjawiskiem pozostają słabo poznane. W niniejszym artykule wideo opisujemy naszą technikę celowanej ablacji laserowej komórek nefronu nerki w nerce zarodka ryby...

Ablacja laserowa pronefry ryby danio w celu badania regeneracji nabłonka nerkowego

Opisano metodę warunkowego wyciszania ekspresji białka docelowego w siatkówce dorosłego danio-zebry, która polega na dokonywaniu iniekcji domięśniowych morfolino antysensownych oraz ich elektroporacji do siatkówki. W wyniku tego procesu ekspresja białka jest wyciszona przez kilka dni, co umożliwia zbadanie roli tego białka w regenerującej się lub nienaruszonej siatkówce.

In vivo elektroporacja morfolin do siatkówki dorosłego danio pręgowanego

Ten film demonstruje procedurę wywoływania zwyrodnienia siatkówki u dorosłych ryb pręgowanych za pomocą uszkodzenia laserowego. Laser celuje w komórki fotoreceptorowe w siatkówce, wywołując śmierć komórki i proces zwyrodnieniowy. To uszkodzenie aktywuje komórki glejowe Müllera (MG), prowadząc do ich odróżnicowania w komórki progenitorowe komórek macierzystych, które pomagają w regeneracji siatkówki.

Modelowanie zwyrodnienia i regeneracji siatkówki u danio pręgowanego za pomocą ogniskowego urazu laserowego

Opisano wiele protokołów uszkodzeń światłem, które uszkadzają fotoreceptory i w konsekwencji wywołują reakcję regeneracji siatkówki u dorosłych ryb pręgowanych. Protokół ten opisuje ulepszoną metodę, która może być stosowana u zwierząt pigmentowanych i która uszkadza zdecydowaną większość fotoreceptorów pręcików i czopków w całej siatkówce.

Nowy paradygmat uszkodzeń spowodowanych światłem do wykorzystania w badaniach nad regeneracją siatkówki u dorosłych danio pręgowanych

Tutaj pokazujemy ilościowe określenie de- i regeneracji siatkówki oraz jej wpływu na funkcje wzrokowe za pomocą N-metylo-N-nitrozourea u dorosłego danio pręgowanego. Utrata ostrości wzroku i zmniejszenie liczby fotoreceptorów wiązały się z proliferacją w wewnętrznej warstwie jądrowej. Całkowita regeneracja morfologiczna i funkcjonalna nastąpiła po 30 dniach od pierwszego zabiegu.

Zwyrodnienie i regeneracja siatkówki wywołane przez metylonitromocznik (MNU) u danio pręgowanego: charakterystyka histologiczna i funkcjonalna

Aby pomóc ocenić mechanizmy molekularne leżące u podstaw regeneracji wątroby u danio pręgowanego za pomocą dróg żółciowych, stworzyliśmy model uszkodzenia wątroby, w którym hepatocyty wykazujące ekspresję nitroreduktazy są genetycznie ablowane po leczeniu metronidazolem.  W tym protokole opisujemy, jak umiejętnie manipulować, monitorować i analizować ablację hepatocytów i regenerację wątroby napędzaną przez żółć.

Ablacja specyficzna dla hepatocytów u danio pręgowanego w celu zbadania regeneracji wątroby napędzanej przez drogi żółciowe

Regeneracja siatkówki danio pręgowanego była głównie badana przy użyciu stałych siatek oka. Jednak dynamiczne procesy, takie jak interkinetyczna migracja jądrowa, zachodzą podczas odpowiedzi regeneracyjnej i wymagają obrazowania żywych komórek w celu zbadania mechanizmów leżących u ich podstaw. W tym miejscu opisujemy warunki hodowli i obrazowania w celu monitorowania międzykinetycznej migracji jądrowej (INM) w czasie rzeczywistym za pomocą mikroskopii wielofotonowej.

Hodowla dorosłych transgenicznych eksplantatów siatkówki danio pręgowanego do obrazowania żywych komórek za pomocą mikroskopii wielofotonowej

Danio pręgowany jest popularnym modelem zwierzęcym do badania mechanizmów degeneracji/regeneracji siatkówki u kręgowców. Protokół ten opisuje metodę wywoływania miejscowego urazu zakłócającego zewnętrzną siatkówkę przy minimalnym uszkodzeniu wewnętrznej siatkówki. Następnie monitorujemy in vivo morfologię siatkówki i odpowiedź glejową Müllera przez cały okres regeneracji siatkówki.

Aktywacja komórek glejowych Müllera w indukowanym laserowo modelu zwyrodnienia i regeneracji siatkówki u danio pręgowanego

Laserowa ablacja jest szeroko stosowaną technologią do badania regeneracji w systemach biologicznych. Prezentowany protokół opisuje zastosowanie standardowego laserowo-skaningowego mikroskopu konfokalnego do ablacji laserowej, a następnie obrazowania poklatkowego regenerujących się komórek międzynerwowych w linii bocznej danio pręgowanego.

Test ablacji i regeneracji laserowej oparty na mikroskopie konfokalnym w komórkach międzynerwowych danio pręgowanego

Opracowaliśmy kilka protokołów do wywoływania uszkodzeń siatkówki lub degeneracji siatkówki u kijanek Xenopus laevis. Modele te dają możliwość badania mechanizmów regeneracji siatkówki.

Generowanie modeli uszkodzeń siatkówki w kijankach Xenopus

Poznaj metodę ablacji nabłonka barwnikowego siatkówki u danio pręgowanego z wykorzystaniem systemu nitroreduktazy/metronidazolu oraz platformy MATLAB do ilościowej analizy regeneracji.

Ablacja za pośrednictwem nitroreduktazy/metronidazolu oraz platforma MATLAB (RpEGEN) do badania regeneracji nabłonka barwnikowego siatkówki danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal

Ablacja za pośrednictwem nitroreduktazy/metronidazolu oraz platforma MATLAB (RpEGEN) do badania regeneracji nabłonka barwnikowego siatkówki danio pręgowanego

Przeglądaj więcej filmów