Name: Wizualizacja ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 44 s
Description: Poznaj metodę TTC do wykrywania ruchliwości bakterii Staphylococcus aureus i Escherichia coli w półstałym agarze. Protokół oparty na reakcji kolorystycznej z dehydrogenazami umożliwia szybką ocenę patogenności bez specjalistycznego sprzętu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane przez Priorytetowy Program Akademicki Rozwoju Instytucji Szkolnictwa Wyższego w Jiangsu (PAPD) oraz Projekt Badawczy Reformy Nauczania Chińskiego Uniwersytetu Farmaceutycznego (2019XJYB18).

1. Przygotowanie podłoża półstałego
<ol>
	<li>Tradycyjny agar półstały
	<ol>
		<li>Przygotuj tradycyjny półstały agar zgodnie z recepturą pożywki do badania ruchliwości bakterii, używając podstawowych składników11. Rozpuścić 10 g tryptozy, 15 g NaCl, 4 g agaru w wystarczającej ilości wody destylowanej, dostosować pH do 7,2 ± 0,2 i uzupełnić końcową objętość do 1000 ml.</li>
		<li>Autoklawować agar w temperaturze 121 °C przez 20 minut i dozować go do probówek o pojemności 10 ml jako półstałe podłoże o wysokości 3 cm.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Tradycyjny agar półstały z TTC
	<ol>
		<li>Po autoklawowaniu konwencjonalnej pożywki półstałej, schłodzić ją do 50 °C, dodać 5 ml sterylnego 1% roztworu TTC do 100 ml pożywki, wymieszać i dozować do probówek o pojemności 10 ml, aby utworzyć półstałe podłoże o wysokości 3 cm.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Szczepy bakteryjne
UWAGA: Osiemdziesiąt szczepów zostało wyizolowanych ze środowiska wodnego i zidentyfikowanych za pomocą automatycznego narzędzia do identyfikacji bakterii (zobacz Tabelę Materiałów), w tym Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae i Aeromonas hydrophila (Tabela 1). Staphylococcus aureus (patrz tabela materiałów) zastosowano jako ujemną kontrolę nieruchomą; Jako szczepy kontroli pozytywnej wykorzystano Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa i Salmonella typhimurium (patrz tabela materiałów).
<ol>
	<li>Zidentyfikuj testowe szczepy bakterii, które zostaną wykorzystane do analizy ruchliwości.</li>
	<li>Obejmują ujemne nieruchome kontrole i ruchliwe dodatnie szczepy kontrolne.</li>
</ol>
3. Obserwacja ruchliwości bakterii wzmocniona TTC
<ol>
	<li>Pobrać pojedyncze kolonie badanych bakterii z płytek agarowych i zaszczepić je w powyższych dwóch półstałych pożywkach (kroki 1.1.2 i 1.2.1) przez nakłucie za pomocą igieł do zaszczepiania.</li>
	<li>Hodować probówki w temperaturze 37 °C w inkubatorze przez 24-48 godzin w celu obserwacji wyników.</li>
	<li>Obserwuj stan wzrostu: scharakteryzuj bakterie jako nieruchome (-), jeśli tylko linia nakłucia jest czerwona. Scharakteryzuj bakterię jako ruchliwą (+), jeśli czerwony kolor rozprzestrzenia się lekko na zewnątrz wzdłuż linii nakłucia12.</li>
</ol>
4. Wpływ różnych stężeń agaru na ruchliwość bakterii
<ol>
	<li>Przygotować pożywki półstałe zawierające 0,3%, 0,5% i 0,8% agaru i zaszczepić je przez nakłucie, jak opisano powyżej. Obserwuj wyniki po 24-48 godzinach inkubacji.</li>
</ol>

<ol><li>Jordan, E. O., Caldwell, M. E., Reiter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Bacterial motility.</a> Journal of Bacteriology. 27 (2), 165(1934).</li>
<li>Lai, S. L., Hou, H., Jiang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+motility+and+its+role+during+initial+stage+of+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial motility and its role during initial stage of pathogenesis.</a> Journal of Microbiology. 26 (5), in Chinese 68-70 (2006).</li>
<li>Ding, S. S., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+flagella-dependent+motility+and+biofilm+in+bacteria+-+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Microbiologica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Relationship between flagella-dependent motility and biofilm in bacteria - A review.</a> Acta Microbiologica Sinica. 49 (4), in Chinese 417-422 (2009).</li>
<li>Zeng, J., Wang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+mechanism+of+bacterial+resistance+and+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the mechanism of bacterial resistance and tolerance.</a> Chinese Journal of Antibiotics. 45 (2), 113-121 (2020).</li>
<li>Xu, M., Zhou, M. X., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+the+mechanism+of+bacterial+flagellum+motility%2C+adhesion+and+immune+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Progress in the mechanism of bacterial flagellum motility, adhesion and immune escape.</a> Chinese Journal of Veterinary Science. 37 (2), 369-375 (2017).</li>
<li>Leboffe, M. J., Pierce, B. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeboffe%2C+MJ+%22Microbiology%3A+laboratory+theory+and+application.+Third+edition%22">Microbiology: laboratory theory and application. Third edition</a>. , Morton Publishing Company. Colorado. (2015).</li>
<li>Ball, R. J., Sellers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+motility+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Improved motility medium.</a> Applied Microbiology. 14, 670-673 (1966).</li>
<li>An, S., Wu, J., Zhang, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+dispersal+by+a+cyclic-di-GMP+phosphodiesterase+with+a+putative+hypoxia-sensing+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Modulation of Pseudomonas aeruginosa biofilm dispersal by a cyclic-di-GMP phosphodiesterase with a putative hypoxia-sensing domain.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (24), 8160-8173 (2010).</li>
<li>Chouhan, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+site-directed+mutagenesis+at+the+GGEEF+domain+of+the+biofilm+forming+GGEEF+protein+from+Vibrio+cholerae%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">Effect of site-directed mutagenesis at the GGEEF domain of the biofilm forming GGEEF protein from Vibrio cholerae.</a> AMB Express. 6 (1), 2(2016).</li>
<li>McLaughlin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+colorimetric+microplate+test+of+phage+lysis+in+Salmonella+enterica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Simple colorimetric microplate test of phage lysis in Salmonella enterica.</a> Journal of Microbiological Methods. 69 (2), 394-398 (2007).</li>
<li>Difco Laboratories. Difco manual: Dehydrated culture media and reagents for microbiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Difco+Laboratories%22">Difco Laboratories</a>. , Detroit. (1984).</li>
<li>Tittsler, R. P., Sandholzer, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+semi-solid+agar+for+the+detection+of+bacterial+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">The use of semi-solid agar for the detection of bacterial motility.</a> Journal of Bacteriology. 31 (6), 575(1936).</li>
<li>Qian, Y., Tian, X. Y., Zhang, S. Y., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explore+the+influencing+factors+of+bacterial+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Care+Today%22%5BJournal%5D)">Explore the influencing factors of bacterial motility.</a> Health Care Today. 6, 50-51 (2018).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filamentous+Phytophthora+pathogens+deploy+effectors+to+interfere+with+bacterial+growth+and+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Filamentous Phytophthora pathogens deploy effectors to interfere with bacterial growth and motility.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 581511(2020).</li>
<li>Kühn, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+arrangement+of+several+flagellins+within+bacterial+flagella+improves+motility+in+different+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Spatial arrangement of several flagellins within bacterial flagella improves motility in different environments.</a> Nature Communication. 9 (1), 5369(2018).</li>
<li>Mitchell, A. J., Wimpenny, J. W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+agar+concentration+on+the+growth+and+morphology+of+submerged+colonies+of+motile+and+non-motile+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The effects of agar concentration on the growth and morphology of submerged colonies of motile and non-motile bacteria.</a> Journal of Applied Microbiology. 83 (1), 76-84 (2010).</li>
<li>Xu, A., Zhang, M., Du, W., Wang, D., Ma, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+mechanism+for+how+sigma+factor+AlgT+and+transcriptional+regulator+AmrZ+inhibit+twitching+motility+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A molecular mechanism for how sigma factor AlgT and transcriptional regulator AmrZ inhibit twitching motility in Pseudomonas aeruginosa.</a> Environmental Microbiology. 23 (2), 572-587 (2021).</li>
<li>Bartley, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+and+invasion+of+Neisseria+meningitidis+to+host+cells+is+related+to+surface+hydrophobicity%2C+bacterial+cell+size+and+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Attachment and invasion of Neisseria meningitidis to host cells is related to surface hydrophobicity, bacterial cell size and capsule.</a> PLoS One. 8, 55798(2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Na wykrywanie ruchliwości bakterii metodą pożywki półstałej wpływa wiele czynników13,14. Warunki rozwoju bakterii, takie jak tlen (tlenowy na powierzchni agaru, nietlenowy na dnie probówki z pożywką półstałą), pH i temperatura, mogą wpływać na żywotność wici bakteryjnych, co może prowadzić do zmniejszenia ruchliwości, a nawet utraty ruchliwości15. Ponadto na niektóre bakterie śluzowe, jak ich ruchliwość, może wpływać produkcja podokoniugat...

Ruchliwość bakterii odgrywa kluczową rolę w patogeniczności bakterii, tworzeniu biofilmu i odporności na leki1. Ruchliwość bakterii jest ściśle związana z chorobotwórczością i jest niezbędna do kolonizacji bakteryjnej podczas wczesnej infekcji komórek gospodarza2. Tworzenie biofilmu jest ściśle związane z ruchliwością bakterii, w której bakterie przylegają do powierzchni pożywki stałej poprzez ruchliwość. Od dawna uważa się, że ruchliwość bakterii jest dodatnio skorelowana z tworzeniem biofilmu. Wysoki stopień lekooporności bakterii spowodowany biofilmem może prowadzić do uporczywych infekcji, które stanowią zagrożenie dla zdrowia ludzkiego3,4,5. Dlatego ważne jest, aby wykryć ruchliwość bakterii. Test ruchliwości bakterii służy głównie do badania ruchliwości różnych form bakterii w stanie żywym, które mogą pośrednio określać obecność lub brak wici, a tym samym odgrywają ważną rolę w identyfikacji bakterii.
Istnieją bezpośrednie i pośrednie metody wykrywania ruchliwości bakterii6. Ponieważ bakterie z wiciami wykazują ruchliwość, możliwe jest wykrycie, czy bakterie są ruchliwe pośrednio, wykrywając obecność lub brak wici. Na przykład możliwe jest pośrednie wykrycie ruchliwości za pomocą mikroskopii elektronowej i barwienia wiciowego, aby wskazać, że bakterie są ruchliwe. Możliwe jest również wykrycie metodami bezpośrednimi, takimi jak kropla zawiesiny i metody nakłuwania półstałego. 
Metoda semisolid punkture powszechnie stosowana w laboratoriach mikrobiologicznych do wykrywania ruchliwości bakterii wprowadza bakterie do nakłucia w półstałym podłożu agarowym zawierającym 0,4-0,8% agaru, zgodnie z kierunkiem rozwoju bakterii. Jeśli bakterie rosną wzdłuż linii nakłucia, aby się rozprzestrzeniać, pojawiają się ślady wzrostu przypominające chmury (przypominające szczotki), wskazujące na obecność wici, a tym samym ruchliwość. Jeśli nie ma śladów wzrostu na linii nakłucia, bakteria nie jest ani wiciowa, ani ruchliwa. 
Jednak ta metoda ma swoje wady: bakterie są bezbarwne i przezroczyste, na aktywność wiciowców wpływają fizjologiczne cechy żywych bakterii i inne czynniki, a także stężenie agaru i mała średnica probówki. Co więcej, bakterie tlenowe nadają się do wzrostu tylko na powierzchni agaru, wpływając na obserwację ruchliwości bakterii. Stąd, aby ulepszyć ten eksperyment, chlorek 2,3,5-trifenylotetrazolu (TTC) (bezbarwny) został dodany do pożywki, aby ustalić bardziej wiarygodną i intuicyjną metodę określania ruchliwości bakterii niż obecna metoda bezpośredniego nakłuwania wykorzystująca dehydrogenazy wewnątrzkomórkowe do katalizowania tworzenia czerwonego produktu TTC7,8,9,10.

<table><tbody><tr><td>Bacto Agar</td><td>Difco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>ATCC25922</td><td>Kontrola pozytywna</td></tr><tr><td>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td>ATCC27853</td><td>Kontrola pozytywna</td></tr><tr><td>Salmonella typhimurium</td><td>ATCC</td><td>ATCC14028</td><td>Kontrola pozytywna</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>ATCC25923</td><td>Ujemna kontrola nieruchoma</td></tr><tr><td>Tryptoza</td><td>&nbsp; OXOID</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma</td><td>298-96-4</td><td></td></tr><tr><td>VITEK 2 zautomatyzowany system identyfikacji mikrobiologicznej</td><td>Bio M&eacute; rieux</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> powiedział:

wizualizacja ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej

Visualizing Bacterial Motility Based on a Color Reaction

Ruchliwość bakterii jest kluczowa dla patogenności bakterii, tworzenia biofilmu i odporności na leki. Ruchliwość bakterii ma kluczowe znaczenie dla inwazji i/lub rozprzestrzeniania się wielu gatunków chorobotwórczych. Dlatego ważne jest, aby wykryć ruchliwość bakterii. Warunki wzrostu bakterii, takie jak tlen, pH i temperatura, mogą wpływać na wzrost bakterii i ekspresję wici bakteryjnych. Może to prowadzić do zmniejszenia ruchliwości, a nawet utraty ruchliwości, co skutkuje niedokładną oceną ruchliwości bakterii. Opierając się na reakcji barwnej chlorku 2,3,5-trifenylotetrazolowego (TTC) przez wewnątrzkomórkowe dehydrogenazy żywych bakterii, TTC dodano do tradycyjnego półstałego agaru w celu wykrycia ruchliwości bakterii. Wyniki pokazały, że ta półstała metoda agaru TTC do wykrywania ruchliwości bakterii jest prosta, łatwa w obsłudze i nie wymaga dużych i drogich instrumentów. Wyniki wykazały również, że największą ruchliwość zaobserwowano w pożywce półstałej przygotowanej z 0,3% agarem. W porównaniu z tradycyjną pożywką półstałą wyniki są łatwiejsze do oceny i dokładniejsze.

Zarówno szczepy wzorcowe, jak i szczepy izolowane porównano pod kątem wykrywania ruchliwości, a wyniki przedstawiono w Tabeli 1. Ze względu na brak wici, Staphylococcus aureus oraz Klebsiella pneumoniae rosły wyłącznie wzdłuż linii inokulacji zarówno na tradycyjnym, jak i TTC półstałym podłożu. W przeciwieństwie do nich, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli oraz Salmonella typhimurium wykazały wzrost we wszystkich kierunkach wokół linii inokulacji po 24 h ...

Tutaj prezentujemy protokół wykrywania ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej. Kluczowymi zaletami tej metody jest to, że jest łatwa do oceny i dokładniejsza oraz nie wymaga specjalistycznego sprzętu.

Wizualizacja ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej

Bacterial motility is crucial for bacterial pathogenicity, biofilm formation, and drug resistance. Bacterial motility is crucial for the invasion and/or ...

Wykrywanie ruchliwości bakterii jest ważne, ponieważ ruchliwość ma kluczowe znaczenie dla patogenności. Opisany tutaj protokół jest niezawodną metodą wykrywania ruchliwości bakterii, ponieważ opiera się na reakcji barwnej TTC z wewnątrzkomórkowymi dehydrogenazami żywych bakterii. Metoda agaru półstałego TTC do wykrywania ruchliwości bakterii jest prosta, łatwa w obsłudze i nie wymaga dużych i drogich instrumentów.Metoda może być stosowana przez mikrobiologów klinicznych lub badaczy do badania bakterii chorobotwórczych. Procedurę zademonstruje Xiyi Zhuang, starszy eksperymentator z mojego laboratorium. Na początek przygotuj tradycyjną półstałą pożywkę, dodając 10 gramów tryptozy, 15 gramów chlorku sodu i cztery gramy agaru w odpowiedniej objętości wody destylowanej.Dostosuj pH do 7,2 i uzupełnij końcową objętość do 1 000 mililitrów. Autoklawuj pożywkę w temperaturze 121 stopni Celsjusza przez 20 minut i dozuj pożywkę do 10-mililitrowych probówek na wysokość trzech centymetrów. Aby przygotować pożywkę TTC, schłodź autoklawowane tradycyjne podłoże do 50 stopni Celsjusza, a następnie dodaj pięć mililitrów sterylnego 1% roztworu TTC do 100 mililitrów pożywki.Wymieszaj i dozuj pożywkę do 10-mililitrowych probówek na wysokość trzech centymetrów. Pobrać pojedyncze kolonie bakterii z płytek agarowych i zaszczepić je w obu półstałych pożywkach przez nakłucie za pomocą igieł do zaszczepiania. Należy pamiętać, aby włączyć szczepy niemodalne jako kontrole ujemne, a szczepy modalne jako kontrole pozytywne.Aby zaobserwować wpływ stężenia agaru na ruchliwość bakterii, należy przygotować półstałe podłoża zawierające różne stężenia agaru i zaszczepić je przez nakłucie. Inkubować probówki w temperaturze 37 stopni Celsjusza i obserwować wyniki po 24 do 48 godzinach inkubacji. Jeśli tylko linia nakłucia jest czerwona, scharakteryzuj bakterie jako niemodalne.Jeśli czerwony kolor rozprzestrzenia się na zewnątrz wzdłuż linii nakłucia, scharakteryzuj bakterie jako modalne. Ruchliwość bakterii porównano dla różnych szczepów na podłożach tradycyjnych i półstałych TTC i podsumowano w tej tabeli. Po 24-godzinnym hodowaniu na półstałym podłożu TTC, Staphylococcus aureus wykazał wzrost wzdłuż zaszczepionej linii.Natomiast Escherichia coli wykazywała wzrost we wszystkich kierunkach wokół zaszczepionej linii. Największą ruchliwość dla Escherichia coli zaobserwowano w pożywce półstałej TTC przygotowanej z 0,3% agarem, w której pożywka zmieniła kolor na prawie całkowicie czerwony. Natomiast obszar czerwonej dyfuzji zmniejszył się w 0,5% agarze i dyfuzja została przedłużona wraz ze wzrostem stężenia agaru do 0,8%Ważne jest, aby dostosować pH do 7,2 i schłodzić autoklawowane podłoże do 50 stopni Celsjusza przed inokulacją za pomocą igieł.Bakterie należy zaszczepić przez nakłucie w półstałej pożywce zawierającej TTC. Jest to bezpośrednia metoda wykrywania ruchliwości bakterii. Możliwe jest również pośrednie wykrycie ruchliwości za pomocą mikroskopu elektronicznego i

visualizing-bacterial-motility-based-on-a-color-reaction

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Niniejszy protokół opisuje opracowanie urządzenia mikroprzepływowego do badania chemotaksji bakteryjnej w stabilnych gradientach stężeń chemoefektorów.

Urządzenie mikroprzepływowe do ilościowego oznaczania chemotaksji bakteryjnej w stabilnych gradientach stężeń

Źródło: Morales-Soto, N. i wsp., Przygotowanie, obrazowanie i kwantyfikacja testów ruchliwości powierzchni bakterii. J. Vis. Exp. (2015)Ten film przedstawia test roju z wykorzystaniem bakterii, które wyrażają zielone białko fluorescencyjne, w celu obserwacji ruchliwości powierzchni na miękkim agarze. Obrazowanie poklatkowe rejestruje skoordynowaną ekspansję i tworzenie wąsów, podkreślając ruchliwość powierzchni bakterii.

Test roju do wizualizacji ruchliwości powierzchni bakterii

Źródło: Chu, W. i Zhuang, X. Wizualizacja ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej. J. Vis. Exp. (2022)Ten film przedstawia półstały test agarowy na bazie barwnika redoks do oceny ruchliwości bakterii poprzez wizualne rozróżnienie szczepów ruchliwych i nieruchliwych.

Wizualizacja ruchliwości bakterii za pomocą pożywki półstałej uzupełnionej barwnikiem redoks

Źródło: Yarringto, K. D., et al. Kinetyczna wizualizacja jednokomórkowych międzygatunkowych oddziaływań bakteryjnych. J. Vis. Exp. (2020)Ten film przedstawia przygotowanie systemu kokultury z wykorzystaniem ruchliwych i nieruchliwych bakterii pod podkładką agarozową do obrazowania żywych komórek. Pokazuje, w jaki sposób ruchliwe bakterie wykrywają chemiczne atraktanty i atakują nieruchliwe kolonie, ujawniając interakcje bakteryjne.

Wizualizacja oddziaływań bakterii jednokomórkowych

Źródło: Scheidweiler, D. i in. Łączenie urządzeń płynowych z mikroskopią i cytometrią przepływową do badania transportu mikroorganizmów w ośrodkach porowatych na skalach przestrzennych. J. Vis. Exp. (2020).Ten film demonstruje użycie urządzenia mikrofluidycznego do ilościowego określania ruchliwości bakterii poprzez porowatą matrycę złożoną z losowo ułożonych filarów. Do urządzenia wprowadzane są fluorescencyjnie znakowane bakterie, obrazowane mikroskopią podczas przemieszczania się przez...

Ocena ruchliwości bakteryjnej za pomocą urządzenia mikrofluidycznego

Na ruchliwość roju wpływają czynniki fizyczne i środowiskowe. Opisujemy dwufazowy protokół i wytyczne mające na celu obejście wyzwań powszechnie związanych z przygotowaniem testów roju i gromadzeniem danych. Technika obrazowania makroskopowego jest stosowana w celu uzyskania szczegółowych informacji na temat zachowania roju, których nie zapewniają obecne techniki analizy.

Przygotowanie, obrazowanie i kwantyfikacja testów ruchliwości powierzchni bakterii

Ostatnie odkrycia sugerują, że bakteryjne silniki wiciowe wyczuwają różne sygnały środowiskowe i w odpowiedzi na nie przebudowują się. Oczekuje się, że omówione tutaj testy perełkowe pomogą wyjaśnić rolę przebudowy w adaptacji komórek do stresorów środowiskowych.

Biofizyczna charakterystyka funkcji motorycznych wici

Przedstawiono protokół do generowania dynamicznych krajobrazów chemicznych przez fotolizę w układach mikroprzepływowych i milifluidowych. Metodologia ta jest odpowiednia do badania różnych procesów biologicznych, w tym zachowania ruchliwego, pobierania składników odżywczych lub adaptacji mikroorganizmów do substancji chemicznych, zarówno na poziomie pojedynczej komórki, jak i populacji.

Generowanie kontrolowanych, dynamicznych krajobrazów chemicznych w celu badania zachowania mikroorganizmów

Wiele bakterii wykorzystuje ruchliwość sterowaną wiciami do poruszania się po swoim środowisku i kolonizowania korzystnego otoczenia, zarówno indywidualnie, jak i zbiorowo. Zademonstrowano tutaj zastosowanie trzech uznanych metod, które wykorzystują ruchliwość jako narzędzie selekcyjne do identyfikacji składników/ścieżek przyczyniających się do pływania i ruchliwości roju.

Badanie ruchliwości sterowanej wiciami u Escherichia coli poprzez zastosowanie trzech ustalonych technik w serii

Ten protokół obrazowania żywych komórek bakteryjnych pozwala na wizualizację interakcji między wieloma gatunkami bakterii na poziomie pojedynczej komórki w czasie. Obrazowanie poklatkowe pozwala na obserwację każdego gatunku bakterii w monokulturze lub kokulturze w celu zbadania interakcji międzygatunkowych w wielogatunkowych społecznościach bakteryjnych, w tym ruchliwości i żywotności poszczególnych komórek.

Kinetyczna wizualizacja jednokomórkowych międzygatunkowych interakcji bakteryjnych

Tutaj opisujemy użycie płytek gradientu induktora do oceny ruchliwości roju bakterii, jednocześnie uzyskując wiele odpowiedzi stężenia.

Kwantyfikacja ruchliwości roju powierzchni bakterii na płytkach gradientu induktora

Poznaj metodę TTC do wykrywania ruchliwości bakterii Staphylococcus aureus i Escherichia coli w półstałym agarze. Protokół oparty na reakcji kolorystycznej z dehydrogenazami umożliwia szybką ocenę patogenności bez specjalistycznego sprzętu.

Wizualizacja ruchliwości bakterii na podstawie reakcji kolorystycznej

Przeglądaj więcej filmów