Izolacja lizatów białkowych całych komórek z procesów twarzy myszy i hodowanych komórek mezenchymy podniebienia do analizy fosfoprotein

Protokół ten może być wykorzystany do uzyskania lepszego wglądu w dynamikę i rolę fosfoprotein aktywnych podczas rozwoju twarzoczaszki u ssaków. Protokół ten pokonuje powszechną barierę defosforylacji podczas izolacji białek z dwóch fizjologicznie istotnych kontekstów, procesów twarzy myszy i hodowanych mysich embrionalnych komórek mezenchymy podniebiennej. Konieczne jest szybkie poruszanie się, trzymając wszystkie odczynniki i materiały na lodzie oraz stosowanie inhibitorów fosfatazy we wszystkich do lizy, aby zachować integralność fosforylowanych białek.

Na początek połóż ciało myszy na desce preparacyjnej brzuszną stroną skierowaną do góry i spryskaj brzuch myszy 70% etanolem. Następnie otwórz jamę brzuszną, ściskając i unosząc skórę przed otworem pochwy za pomocą prostych kleszczy Semken. Następnie przetnij uniesioną skórę w warstwach leżących pod spodem za pomocą nożyczek chirurgicznych z prostym ostrzem pod kątem 45 stopni po obu stronach, aby uzyskać kształt litery V, który rozciąga się na każdą powierzchnię boczną mniej więcej w połowie odległości między czterema kończynami a kończynami tylnymi.