Name: Ustandaryzowane przygotowanie pierścienia wieńcowego u szczurów i rejestracja w czasie rzeczywistym dynamicznych zmian napięcia wzdłuż średnicy naczynia (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-16T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Poznaj technikę myografu drucikowego do pomiaru reaktywności naczyń wieńcowych szczurów. Ta metoda umożliwia stabilny zapis dynamicznych zmian napięcia tętniczego in vitro i badanie mechanizmów chorób układu krążenia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez kluczowy projekt badawczo-rozwojowy Planu Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (2022YFS0438), Chińską Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych (82104533), Chińską Fundację Nauk Podoktoranckich (2020M683273) oraz Departament Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (2021YJ0175).

Protokół dla zwierząt został sprawdzony i zatwierdzony przez Komitet Zarządzający Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (Rekord nr 2021-11). W niniejszym badaniu wykorzystano samce szczurów Sprague Dawley (SD) (260-300 g, 8-10 tygodniowe). Szczury były trzymane w komorze dla zwierząt i mogły swobodnie pić i jeść podczas eksperymentu.
1. Przygotowanie roztworu
<ol>
	<li>Przygotować fizjologiczny roztwór soli (PSS), rozpuszczając 118 mM NaCl, 4,7 mM K+, 2,5 mM CaCl2, 1,2 mM KH2PO4, 1,2 mM MgCl2∙6H2O, 25 mM NaHCO3, 11 mM D-glukozy i 5 mM HEPES (patrz Tabela materiałów).</li>
	<li>Przygotować roztwór soli o wysokiej zawartości K+, rozpuszczając 58 mM NaCl, 60 mM K+, 2,5 mM CaCl2, 1,2 mM KH2PO4, 1,2 mM MgCl2∙6H2O, 25 mM NaHCO3, 11 mM D-glukozy i 5 mM HEPES.</li>
	<li>Nasącz powyższe dwa roztwory i pęcherzyk zmieszanym gazem o stężeniach 95%O2 i 5%CO2. W międzyczasie utrzymuj wartości pH roztworu między 7,38 a 7,42 przy 2 mM NaOH, 
	UWAGA: Szczegółowe informacje na temat przygotowania roztworu można znaleźć w pliku reference15.</li>
</ol>
2. Rozwarstwienie tętnicy wieńcowej u szczura
<ol>
	<li>Znieczulić szczura przez inhalację 2% izofluranu. Potwierdź głębokie znieczulenie przez uszczypnięcie palca u nogi i, jeśli to konieczne, podaj dodatkowe środki znieczulające. Następnie natychmiast otwórz klatkę piersiową, aby odsłonić serce na przenośnym stole operacyjnym zgodnie z wcześniej opublikowanym raportem12.</li>
	<li>Po dysocjacji i usunięciu serca spuść pozostałą krew ze wszystkich komór serca, delikatnie ściskając medycznymi kleszczami z tworzywa sztucznego. Szybko umieścić wstępnie przetworzone serce na szalce Petriego zawierającej 95%O2 + 5% nasyconego CO2 PSS w temperaturze 4 °C, o wartości pH 7,40.</li>
	<li>Aby dokładnie określić anatomiczne położenie tętnic wieńcowych, dostosuj pozycję izolowanego serca pod mikroskopem świetlnym zgodnie ze schematem ideowym (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2A). 
	UWAGA: W widoku z przodu prawa małżowina uszna i tętnica płucna znajdowały się odpowiednio w lewym górnym i prawym górnym rogu.
	<ol>
		<li>Wytnij lewą i prawą komorę wzdłuż przegrody międzykomorowej od nasady tętnicy płucnej za pomocą nożyczek chirurgicznych i pęsety (<silna klasa = "xfig">Ryc. 2B).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aby oddzielić lewą i prawą tętnicę wieńcową od tkanki mięśnia sercowego, należy rozciąć prawą komorę pod optycznym mikroskopem anatomicznym, aby dokładnie odsłonić prawą gałąź tętnicy wieńcowej. Następnie określ położenie lewej tętnicy wieńcowej, obracając tkankę serca o 45° zgodnie z ruchem wskazówek zegara (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2D).</li>
	<li>Po usunięciu otaczającej lepkiej tkanki mięśnia sercowego wyraźnie rozróżnij pulsującą lewą (około 5 mm) i prawą (około 5 mm) tętnicę wieńcową. Natychmiast oddzielić tętnice wieńcowe w środku i całkowicie zanurzyć w PSS w temperaturze 4 °C. Uzyskać pierścień tętniczy o średnicy około 2 mm, pionowo przecinając odłączoną tętnicę anatomicznymi nożyczkami, aby zarejestrować napięcie naczyniowe pod wpływem różnych bodźców (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2E).</li>
</ol>
3. Zawieszenie i unieruchomienie pierścienia tętniczego
UWAGA: Aby uzyskać szczegółowe informacje na temat tego kroku, zobacz reference14.
<ol>
	<li>Przygotować dwa druty ze stali nierdzewnej o średnicy 2 cm (patrz tabela materiałów) i wstępnie zanurzyć w roztworze PSS o temperaturze 4 °C nasyconym 95%O2 + 5% CO2 . Przeprowadź oba druty równolegle przez pierścień tętniczy zgodnie z kierunkiem naczynia pod optycznym mikroskopem anatomicznym i z drutami o równej długości odsłoniętymi na obu końcach jamy naczyniowej.</li>
	<li>Zamocuj pierścień tętniczy drutem stalowym z przodu iz tyłu w kąpieli mikrofotografii drutu wypełnionej bulgoczącym PSS o zawartości 95% O2 + 5% CO2 . Obróć poziome pokrętło, aby uzyskać odpowiedni odstęp z przodu i z tyłu, tak aby oba przewody były poziome, a pierścień tętniczy znajdował się w naturalnym stanie relaksu.</li>
	<li>Po zainstalowaniu kąpieli DMT na aparacie termostatycznym należy otworzyć oprogramowanie do akwizycji danych (patrz Tabela materiałów), aby upewnić się, że zarejestrowano odpowiedni sygnał ścieżki. Ustaw następujące parametry: kalibracja okularu (mm/dz.): 0.36; ciśnienie docelowe (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0,9; Czas uśredniania online: 2 s; Czas opóźnienia: 60 s. Etapy mocowania pierścienia tętniczego są pokazane w <silna klasa="xfig">Rysunek 3.</li>
</ol>
4. Standaryzacja napięcia naczyniowego w pierścieniu tętniczym szczura
UWAGA: Dla różnych próbek z jamy, optymalne napięcie początkowe było konieczne, aby naczynia utrzymywały wyjątkową aktywność in vitro. Aby uzyskać szczegółowe informacje, zobacz reference15.
<ol>
	<li>Osiągnij optymalne napięcie początkowe pierścienia tętniczego, stosując rozsądne napięcie wzdłuż średnicy naczynia. 
	UWAGA: Na podstawie poprzedniego badania16, maksymalne napięcie wywołane przez agonistę zostało osiągnięte przy wartości czynnika k 0,90 przy początkowym naprężeniu rozciągającym 1,16 ± 0,04 mN/mm (wartości referencyjne dla różnych próbek naczyń: wartość k, 0,90-0,95; napięcie początkowe, 1,16-1,52 mN/mm).</li>
	<li>W tym momencie ustaw wyświetlaną wartość napięcia naczyniowego na zero. Następnie zastosuj bodziec ciągnący o wartości 3 mN do pierścienia tętniczego, obracając spiralną oś wanny.</li>
	<li>Po inkubacji przez 1 godzinę w nasyconym tlenem buforze PSS w temperaturze 37 °C, pH 7,40, ponownie ustawić wartość naprężenia na 0 mN na panelu kontroli naprężenia mikrografu drutu. Proces ustawiania napięcia początkowego pierścienia tętniczego jest pokazany na rysunku Rysunek 4.</li>
</ol>
5. Wykrywanie reaktywności pierścienia tętnicy wieńcowej
<ol>
	<li>Wykonaj aktywność skurczową pierścienia tętnicy wieńcowej za pomocą techniki miografu drutowego14 i zweryfikuj w trzech oddzielnych operacjach, stymulując 60 mM roztworu K+ przez 10 minut każda.</li>
	<li>Po każdej stymulacji płukać kąpiel nasyconym tlenem PSS, aż napięcie naczyniowe powróci do stanu początkowego. 
	UWAGA: Tylko wtedy, gdy fluktuacja napięcia w trzech równoległych pomiarach była mniejsza niż 10%, a amplituda każdego skurczu była większa niż 1 mN/mm, kwalifikowane i wysoce aktywne pierścienie tętnicze mogły być używane do dalszych eksperymentów. Weryfikacja aktywności pierścienia wieńcowego szczura jest pokazana na <silna klasa="xfig">Rysunek 5.</li>
</ol>
6. Leczenie pooperacyjne
<ol>
	<li>Po operacji należy poddać zwierzęta eutanazji zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami. 
	UWAGA: W niniejszym badaniu zwierzęta zostały poddane eutanazji poprzez wdychanie nadmiaru izofluranu.</li>
</ol>

<ol><li>Malakar, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+coronary+artery+disease%2C+its+risk+factors%2C+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">A review on coronary artery disease, its risk factors, and therapeutics.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 16812-16823 (2019).</li>
<li>Murray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((national+age-sex+specific+all-cause+and+cause-specific+mortality+for+240+causes+of+death%2C+1990-2013%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+Study+2013%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: A systematic analysis for the global burden of disease Study 2013.</a> The Lancet. 385 (9963), 117-171 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+and+adenosine+receptor-mediated+action+in+coronary+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Adenosine and adenosine receptor-mediated action in coronary microcirculation.</a> Basic Research in Cardiology. 116 (1), 22(2021).</li>
<li>Allaqaband, H., Gutterman, D. D., Kadlec, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+consequences+of+coronary+arteriolar+dysfunction+and+its+influence+on+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Physiological consequences of coronary arteriolar dysfunction and its influence on cardiovascular disease.</a> Physiology. 33 (5), 338-347 (2018).</li>
<li>Minelli, S., Minelli, P., Montinari, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+atherosclerosis%3A+Lesson+from+the+past+and+future+research+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Multidisciplinary+Healthcare%22%5BJournal%5D)">Reflections on atherosclerosis: Lesson from the past and future research directions.</a> Journal of Multidisciplinary Healthcare. 13, 621-633 (2020).</li>
<li>Alvarez-Alvarez, M. M., Zanetti, D., Carreras-Torres, R., Moral, P., Athanasiadis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+sub-saharan+gene+flow+into+the+mediterranean+at+risk+loci+for+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">A survey of sub-saharan gene flow into the mediterranean at risk loci for coronary artery disease.</a> European Journal of Human Genetics. 25 (4), 472-476 (2017).</li>
<li>LaCombe, P., Tariq, M. A., Lappin, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology%2C+Afterload+Reduction%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls+%5BInternet%5D%22%5BJournal%5D)">Physiology, Afterload Reduction.</a> StatPearls [Internet]. , StatPearls Publishing. Treasure Island (FL). (2022).</li>
<li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+microcirculation%3A+regulation+of+flow+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">The human microcirculation: regulation of flow and beyond.</a> Circulation Research. 118 (1), 157-172 (2016).</li>
<li>Wang, G., Li, F., Hou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+and+alternative+therapies+for+stable+angina+pectoris+of+coronary+heart+disease%3A+A+protocol+for+systematic+review+and+network+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine%22%5BJournal%5D)">Complementary and alternative therapies for stable angina pectoris of coronary heart disease: A protocol for systematic review and network meta-analysis.</a> Medicine. 101 (7), 28850(2022).</li>
<li>Markousis-Mavrogenis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+disease%3A+the+%26%2334%3Bmeeting+point%26%2334%3B+of+cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular disease: the &#34;meeting point&#34; of cardiology.</a> European Journal of Clinical Investigation. 52 (5), 13737(2021).</li>
<li>Allison, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+in+vivo+continuous+cardiovascular+function+during+chronic+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fetal in vivo continuous cardiovascular function during chronic hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 594 (5), 1247-1264 (2016).</li>
<li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Ca2%2B+handling+for+the+regulation+of+vasoconstriction+between+rat+coronary+and+renal+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of Ca2+ handling for the regulation of vasoconstriction between rat coronary and renal arteries.</a> Journal of Vascular Research. 56 (4), 191-203 (2019).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isometric+contractility+measurement+of+the+mouse+mesenteric+artery+using+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e58064(2018).</li>
<li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+hypercontractility+to+acidosis+owes+to+the+greater+activity+of+TMEM16A%2FANO1+in+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Coronary hypercontractility to acidosis owes to the greater activity of TMEM16A/ANO1 in the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 139, 111615(2021).</li>
<li>Ping, N. N., Cao, L., Xiao, X., Li, S., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+optimal+initial+tension+in+rat+coronary+artery+using+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">The determination of optimal initial tension in rat coronary artery using wire myography.</a> Physiological Research. 63 (1), 143-146 (2014).</li>
<li>Niccoli, G., Scalone, G., Lerman, A., Crea, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+obstruction+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular obstruction in acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 37 (13), 1024-1033 (2016).</li>
<li>Mumma, B., Flacke, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+diagnostic+and+therapeutic+strategies+in+microvascular+angina%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Emergency+and+Hospital+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Current diagnostic and therapeutic strategies in microvascular angina.</a> Current Emergency and Hospital Medicine Reports. 3 (1), 30-37 (2015).</li>
<li>Lanza, G. A., Parrinello, R., Figliozzi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+microvascular+angina+pectoris%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cardiovascular+Drugs%22%5BJournal%5D)">Management of microvascular angina pectoris.</a> American Journal of Cardiovascular Drugs. 14 (1), 31-40 (2014).</li>
<li>Zhu, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+intracoronary+tirofiban+bolus+administration+following+upstream+intravenous+treatment+in+patients+with+ST-elevation+myocardial+infarction+undergoing+primary+percutaneous+coronary+intervention%3A+The+ICT-AMI+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of intracoronary tirofiban bolus administration following upstream intravenous treatment in patients with ST-elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous coronary intervention: The ICT-AMI study.</a> International Journal of Cardiology. 165 (3), 437-443 (2013).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+coronary+flow+in+patients+with+no-reflow+after+primary+coronary+intervention+of+acute+myocardial+infarction+%28RECOVER%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Restoration of coronary flow in patients with no-reflow after primary coronary intervention of acute myocardial infarction (RECOVER).</a> American Heart Journal. 164 (3), 394-401 (2012).</li>
<li>Fu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-atherosclerosis+and+cardio-protective+effects+of+the+Angong+Niuhuang+Pill+on+a+high+fat+and+vitamin+D3+induced+rodent+model+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-atherosclerosis and cardio-protective effects of the Angong Niuhuang Pill on a high fat and vitamin D3 induced rodent model of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 195, 118-126 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chinese+medicine+She-Xiang-Xin-Tong-Ning%2C+containing+moschus%2C+corydalis+and+ginseng%2C+protects+from+myocardial+ischemia+injury+via+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, containing moschus, corydalis and ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis.</a> The American Journal of Chinese Medicine. 48 (1), 107-126 (2020).</li>
<li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+reconstruction+of+coronary+artery+stents+from+optical+coherence+tomography%3A+Experimental+validation+and+clinical+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Three dimensional reconstruction of coronary artery stents from optical coherence tomography: Experimental validation and clinical feasibility.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-like+role+of+fibroblast+growth+factor+2+in+arteriosclerotic+coronary+artery+disease%3A+Atherogenesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Janus-like role of fibroblast growth factor 2 in arteriosclerotic coronary artery disease: Atherogenesis and angiogenesis.</a> Atherosclerosis. 229 (1), 10-17 (2013).</li>
<li>Hu, G., Li, X., Zhang, S., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+rat+thoracic+aorta+dilatation+by+astragaloside+IV+with+the+generation+of+endothelium-derived+hyperpolarizing+factors+and+nitric+oxide%2C+and+the+blockade+of+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+reports%22%5BJournal%5D)">Association of rat thoracic aorta dilatation by astragaloside IV with the generation of endothelium-derived hyperpolarizing factors and nitric oxide, and the blockade of Ca2+ channels.</a> Biomedical reports. 5 (1), 27-34 (2016).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticonstriction+effect+of+MCA+in+rats+by+danggui+buxue+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Anticonstriction effect of MCA in rats by danggui buxue decoction.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 749915(2021).</li>
<li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apigenin+relaxes+rat+intrarenal+arteries%2C+depresses+Ca2%2B-activated+Cl%E2%88%92+currents+and+augments+voltage-dependent+K%2B+currents+of+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Apigenin relaxes rat intrarenal arteries, depresses Ca2+-activated Cl− currents and augments voltage-dependent K+ currents of the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 115, 108926(2019).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Zaburzenie mikrokrążenia wieńcowego, które dotyczy szerokiego grona pacjentów z chorobą wieńcową, zostało stopniowo rozpoznane i stało się podstawą do odpowiedniej perfuzji mięśnia sercowego. Biorąc pod uwagę poważne powikłania nagłej choroby niedokrwiennej serca i choroby sercowo-naczyniowej, terminowe zapobieganie i leczenie farmakologiczne są niezwykle ważne dla osoby klinicznej z CAD17. Nieuchronnie tajemnica anatomii tętnic wieńcowych i złożoność jej struktury fizjologicznej poważnie ogranicz...

Choroba wieńcowa (CAD) jest powszechnie uznawana i uznawana za typową i reprezentatywną chorobę sercowo-naczyniową, stanowiącą główną przyczynę zgonów zarówno w krajach rozwiniętych, jak i rozwijających się1,2. Jako droga dostarczania krwi i tlenu dla prawidłowych funkcji fizjologicznych serca, krążąca krew dostaje się do serca i odżywia je przez dwie główne tętnice wieńcowe i sieć naczyń krwionośnych na powierzchni mięśnia sercowego3,4. Złogi cholesterolu i tłuszczu w tętnicach wieńcowych odcinają dopływ krwi do serca i gwałtowną reakcję zapalną układu naczyniowego, powodując miażdżycę, stabilną dławicę piersiową, niestabilną dławicę piersiową, zawał mięśnia sercowego lub nagłą śmierć sercową5,6. W odpowiedzi na patologiczne zwężenie tętnic wieńcowych, kompensacyjne przyspieszone fizjologiczne bicie serca zaspokaja ukrwienie samego serca lub ważnych narządów ciała poprzez zwiększenie wydatku lewej komory7. Jeśli przedłużające się zwężenie tętnicy wieńcowej nie zostanie złagodzone na czas, w niektórych obszarach serca mogą rozwinąć się rozległe nowe naczynia krwionośne 8. Obecnie leczenie kliniczne CAD często przyjmuje trombolizę lekową lub chirurgiczną trombolizę mechaniczną i egzogenne bioniczne obejście naczyniowe z częstymi lekami i dużą niepełnosprawnością chirurgiczną9. W związku z tym funkcjonalne badanie fizjologicznej aktywności tętnic wieńcowych jest nadal pilnym przełomem w leczeniu chorób sercowo-naczyniowych10.
Nie ma dostępnych technicznych środków do wykrywania fizjologicznej aktywności wieńcowej, z wyjątkiem bezprzewodowych systemów telemetrycznych, które mogą dynamicznie rejestrować in vivo ciśnienie wieńcowe, napięcie naczyniowe, nasycenie krwi tlenem i wartości pH11. Dlatego, biorąc pod uwagę tajemniczość i złożoność tekstury tętnic wieńcowych, dokładna identyfikacja i izolacja tętnic wieńcowych są bez wątpienia najlepszym wyborem do zbadania wielu mechanizmów CAD in vitro4.
System multimiograficzny serii A, w szczególności detektor napięcia mikronaczyniowego z mikrografem (patrz Tabela Materiałów), jest bardzo dojrzałym urządzeniem rynkowym do rejestrowania in vitro zmian napięcia tkanek małych naczyń krwionośnych, limfatycznych i oskrzelowych o charakterystyce wysokiej precyzji i ciągłego dynamicznego zapisu12. System ten jest szeroko stosowany do rejestrowania in vitro charakterystyk napięcia tkanek struktur jamowych o średnicach od 60 μm do 10 mm. Ciągłe cechy grzewcze platformy mikrofotografii drucianej w dużej mierze równoważą stymulację niekorzystnego środowiska zewnętrznego. Tymczasem stałe dane wejściowe mieszaniny gazowej i wartości pH pozwalają nam uzyskać dokładniejsze dane dotyczące napięcia naczyń krwionośnych w podobnym stanie fizjologicznym13. Jednak biorąc pod uwagę złożoność anatomicznej lokalizacji tętnic wieńcowych szczurów (<silna klasa="xfig">Ryc. 1), jej izolacja była kłopotliwa i ograniczała badanie mechanizmu zróżnicowanych chorób sercowo-naczyniowych i opracowywanie leków. Dlatego niniejszy protokół szczegółowo przedstawia anatomiczną lokalizację i proces separacji tętnicy wieńcowej szczura, a następnie pomiar napięcia na platformie mikrofotografii drucianej14.

<table><tbody><tr><td>Apigenin</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>150731</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A501330</td><td></td></tr><tr><td>D-glukoza</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A610219</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, Chiny</td><td>S3872</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A100781</td><td></td></tr><tr><td>LabChart Professional wersja 8.3&nbsp;</td><td>ADInstruments, Australia</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot; 6H2O</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A100288</td><td></td></tr><tr><td>System Multi miografu&nbsp;</td><td>Danish Myo Technology, Aarhus, Dania</td><td>620M</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A100241</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>A100865</td><td></td></tr><tr><td>Druty stalowe</td><td>Danish Myo Technology, Aarhus, Dania</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>U46619</td><td>Sigma, Stany Zjednoczone</td><td>D8174</td><td></td></tr></tbody></table>

ustandaryzowane przygotowanie pierścienia wieńcowego u szczurów i rejestracja w czasie rzeczywistym dynamicznych zmian napięcia wzdłuż średnicy naczynia

Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter

Jako kluczowe zdarzenie chorób układu sercowo-naczyniowego, choroba wieńcowa (CAD) jest powszechnie uważana za głównego winowajcę miażdżycy, zawału mięśnia sercowego i dławicy piersiowej, które poważnie zagrażają życiu i zdrowiu ludzi na całym świecie. Jednak sposób rejestrowania dynamicznych cech biomechanicznych izolowanych naczyń krwionośnych od dawna intryguje ludzi. Tymczasem precyzyjne pozycjonowanie i izolacja tętnic wieńcowych w celu pomiaru dynamicznych zmian napięcia naczyniowego in vitro stała się trendem w opracowywaniu leków na CAD. Niniejszy protokół opisuje makroskopową identyfikację i mikroskopowe oddzielenie tętnic wieńcowych szczurów. Funkcję skurczu i dylatacji pierścienia tętnicy wieńcowej wzdłuż średnicy naczynia monitorowano za pomocą opracowanego systemu multimiografu. Ustandaryzowane i zaprogramowane protokoły pomiaru napięcia pierścienia wieńcowego, od pobierania próbek po akwizycję danych, ogromnie poprawiają powtarzalność danych eksperymentalnych, co zapewnia autentyczność zapisów napięcia naczyniowego po interwencji fizjologicznej, patologicznej i farmakologicznej.

Ze względu na położenie anatomiczne, tętnice wieńcowe szczura, rozgałęzione i ukryte głęboko w tkance mięśnia sercowego, nie są łatwe do zidentyfikowania. Poprzez porównanie tętnic wieńcowych ludzi (Rysunek 1A) i szczurów (Rysunek 1B), przeprowadzono szybką i dokładną separację tętnic wieńcowych szczura zgodnie z procesem pobierania próbek przedstawionym na Rysunku 2. Po precyzyjnym zlokalizowaniu od przodu ucha prawego, tętnicy płu...

Obecny protokół opisuje technikę miografu drutowego do pomiaru reaktywności naczyniowej tętnicy wieńcowej szczura.

Ustandaryzowane przygotowanie pierścienia wieńcowego u szczurów i rejestracja w czasie rzeczywistym dynamicznych zmian napięcia wzdłuż średnicy naczynia

As a key event of cardiovascular system diseases, coronary artery disease (CAD) has been widely regarded as the main culprit of atherosclerosis, ...

Protokół ten szczegółowo przedstawia lokalizację, separację i utrwalenie pierścienia mięśniowego tętnic wieńcowych szczura. Zapewnienie nowej metody mechanizmów, eksploracji i leczenia różnych chorób sercowo-naczyniowych. System nadaje się do stabilnego rejestrowania dynamicznych zmian napięcia tętniczego in vitro, odczytując średnicę od 60 mikrometrów do 10 milimetrów.Sugerujemy, aby nowicjusze najpierw dokładnie zrozumieli anatomiczne położenie każdego naczynia i mogli zacząć od nieco większego naczynia, takiego jak tętnica piersiowa i tętnica krezkowa. Po dysocjacji i usunięciu serca zacznij od spuszczenia pozostałej krwi ze wszystkich komór serca, delikatnie ściskając medycznymi kleszczami z tworzywa sztucznego. Szybko umieść wstępnie przetworzone serce na szalce Petriego zawierającej 95% tlenu i 5% nasyconego dwutlenkiem węgla roztworu soli fizjologicznej o temperaturze czterech stopni Celsjusza, o wartości pH 7,40.Aby dokładnie określić anatomiczne położenie tętnic wieńcowych, dostosuj postawę izolowanego serca pod mikroskopem świetlnym zgodnie ze schematem ideowym. Wytnij lewą i prawą jamę komorową wzdłuż przegrody międzykomorowej od nasady tętnicy płucnej za pomocą nożyczek chirurgicznych i pęsety. Aby oddzielić lewą i prawą tętnicę wieńcową od tkanki mięśnia sercowego, należy rozciąć prawą komorę pod optycznym mikroskopem anatomicznym, aby dokładnie odsłonić prawą gałąź tętnicy wieńcowej.Następnie określ położenie lewej tętnicy wieńcowej, obracając tkankę serca o 45 stopni zgodnie z ruchem wskazówek zegara. Po usunięciu otaczającej lepkiej tkanki mięśnia sercowego wyraźnie rozróżnij pulsującą lewą i prawą tętnicę wieńcową. Natychmiast oddziel tętnice wieńcowe na środku i całkowicie zanurz w fizjologicznym roztworze soli o temperaturze czterech stopni Celsjusza.Uzyskaj pierścień tętniczy o długości około dwóch milimetrów, przecinając pionowo odłączoną tętnicę anatomicznymi nożyczkami, aby zarejestrować napięcie naczyniowe pod wpływem różnych bodźców. Przygotuj dwa dwucentymetrowe druty ze stali nierdzewnej i wstępnie zanurz w roztworze soli fizjologicznej o temperaturze czterech stopni Celsjusza nasyconym 95% tlenu i 5% dwutlenkiem węgla. Przeprowadź oba druty równolegle przez pierścień tętniczy zgodnie z kierunkiem naczynia pod optycznym mikroskopem anatomicznym i z drutami o równej długości odsłoniętymi na obu końcach jamy naczyniowej.Zamocuj pierścień tętniczy za pomocą drutu stalowego z przodu iz tyłu w kąpieli mikrofotografii drucianej wypełnionej bulgoczącym roztworem soli fizjologicznej z 95% tlenem i 5% dwutlenkiem węgla. Obróć poziome pokrętło, aby uzyskać odpowiedni odstęp z przodu i z tyłu, tak aby oba przewody były poziome, a pierścień tętniczy znajdował się w naturalnym stanie relaksu. Po zainstalowaniu kąpieli DMT na aparacie termostatycznym należy otworzyć oprogramowanie do akwizycji danych, aby upewnić się, że zarejestrowano odpowiedni sygnał ścieżki.Ustaw parametry. Osiągnij optymalne napięcie początkowe pierścienia tętniczego, stosując rozsądne napięcie wzdłuż średnicy naczynia. W tym momencie ustaw wyświetlaną wartość napięcia naczyniowego na zero.Następnie zastosuj bodziec impulsowy o sile trzech miliniutonów do pierścienia tętniczego, obracając oś spiralną wanny. Kliknij panel LCD, aby ustawić go na zero miliniutonów i utrzymać przez jedną godzinę. Po inkubacji przez godzinę w nasyconym tlenem buforze roztworu soli fizjologicznej o pH 37 stopni Celsjusza 7,40, ponownie ustaw wartość naprężenia na zero miliniutonów na panelu sterowania napięciem mikrografu drutu.Wykonaj aktywność skurczową pierścienia tętnicy wieńcowej za pomocą techniki miografu drucianego i zwaliduj w trzech oddzielnych operacjach, stymulując 60 milimolami roztworu jonów potasu przez 10 minut każda. Po każdej stymulacji należy przepłukać kąpiel nasyconym tlenem roztworem soli fizjologicznej, aż napięcie naczyniowe powróci do stanu początkowego. Dodać 0,3 mikromola U46619 do kąpieli i obserwować przez 10 minut.Dodaj jedną apigeninę mikromolową i obserwuj efekty naczyniowe. Gdy rozwarcie osiągnie plateau, dodaj następne stężenie. Dodaj jedną apigeninę mikromolową do 60-milimolowego roztworu wstępnego obkurczania potasu, aby zaobserwować efekt naczyniowy.Gdy rozwarcie osiągnie plateau, dodaj następne stężenie. Dodaj 28 milimolowy jon potasu do spoczynkowego pierścienia naczyniowego. Gdy skurcz osiągnie plateau, dodaj następne stężenie.Dodać 0,01 mikromola U46619 do spoczynkowego pierścienia naczyniowego. Gdy skurcz osiągnie plateau, dodaj następne stężenie. Po przyłożeniu początkowego napięcia o wartości trzech miliniutonów do pierścienia tętniczego, jego napięcie przekroczyło ponad dwa miliniutony poprzez trzykrotne przyłożenie równolegle 60-milimolowego stężenia jonów potasu.W ten sposób powyższe procedury doprowadziły do powstania izolowanego pierścienia wieńcowego o doskonałej aktywności fizjologicznej. Skumulowane stężenie jonów potasu lub U46619 dodano do kąpieli DMT620M, co spowodowało zależny od stężenia wzrost napięcia naczyniowego in vitro. Następne stężenie jonu potasu lub U46619 dodawano, gdy efekt zwężenia naczyń krwionośnych osiągnął plateau.W przypadku izolowanych pierścieni wieńcowych zwężonych przez jon potasu i U46619, badany lek apigenina powodował rozszerzenie naczyń krwionośnych w zaskakująco zależny od stężenia. Serce jest preparowane wzdłuż przegrody komorowej od nasady tętnicy płucnej, odsłaniając i oddzielając dwumilimetrowy pierścień mięśniowy naczyń wieńcowych. Po tym zabiegu możemy zarejestrować napięcie naczyniowe w mikronaczyniach siatkówki, funkcji nerek, tętnicy nerkowej oraz w tętnicy środkowej mózgu.Dynamika obszaru od 60 mikrometrów do 10 milimetrów.

standardized-rat-coronary-ring-preparation-real-time-recording

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Opisano zautomatyzowaną metodę miografii do pomiarów siły w izolowanych tętnicach krezkowych. Wykorzystuje ona urządzenie Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A do określania reakcji na fenylefrynę oraz wapń zewnątrzkomórkowy. Metoda ta pozwala na spójne określanie odpowiedzi izometrycznych na agonistów w małych naczyniach o średnicach od 60 do 300 μm, niezależnie od siebie.

Badania skurczu i rozkurczu tętnicy krezkowej z wykorzystaniem zautomatyzowanej miografii drucianej

Ten manuskrypt opisuje protokoły mikroskopii wideo in vitro do oceny funkcji naczyniowej w tętnicach oporowych mózgu szczurów. W manuskrypcie opisano również techniki oceny gęstości mikronaczyń za pomocą znakowanej fluorescencyjnie lektyny i perfuzji tkanek za pomocą laserowej przepływometrii dopplerowskiej.

Ocena mechanizmów kontroli naczyniowej z wykorzystaniem wideomikroskopii izolowanych tętnic opornych szczurów

Protokół opisuje użycie miografii drucianej do oceny przezściennego napięcia izometrycznego tętnic krezkowych wyizolowanych od myszy, ze szczególnym uwzględnieniem modulacji przez czynniki uwalniane z komórek śródbłonka i okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej.

Ocena reakcji na napięcie naczyniowe przy użyciu izolowanych tętnic krezkowych z naciskiem na modulację przez okołonaczyniowe tkanki tłuszczowe

Prezentowany tutaj jest protokół do badania mikrokrążenia wieńcowego w żywej tkance serca mysiego poprzez monitorowanie ex vivo ciśnienia perfuzji tętniczej i przepływu, który utrzymuje ciśnienie, a także składników drzewa naczyniowego, w tym łożysk naczyń włosowatych i perycytów, gdy tętnica przegrody jest kaniulowana i poddawana ciśnieniu.

Dynamiczny pomiar i obrazowanie naczyń włosowatych, tętniczek i perycytów w sercu myszy

Niniejszy protokół opisuje koncepcje i techniczne zastosowanie techniki miografu tensometrycznego z wykorzystaniem wielokomorowego systemu miograficznego w eksperymentalnej ocenie ex vivo funkcji śródbłonka aorty myszy.

Pomiar zależnej od śródbłonka wazorelaksacji w aorcie piersiowej myszy za pomocą tensometrycznej miografii komory o małej objętości

Ten protokół opisuje metodę jednoczesnego pomiaru cytozolu, wolnego wapnia [Ca2+]i i średnicy naczynia w kurczących się naczyniach limfatycznych w czasie rzeczywistym, a następnie obliczania bezwzględnych stężeń Ca2+ oraz parametrów kurczliwości/rytmiczności. Protokół ten może być stosowany do badania Ca2+ i dynamiki kurczliwości w różnych warunkach eksperymentalnych.

Ocena w czasie rzeczywistym bezwzględnego, cytozolowego, wolnego Ca2+ i odpowiadającej mu kurczliwości w izolowanych, ciśnieniowych naczyniach limfatycznych

Niewydolność prawego serca (RHF) charakteryzuje się prawostronnym rozszerzeniem i przerostem serca, co prowadzi do nieprawidłowego funkcjonowania komór i przedsionków. Chorobom krążeniowo-oddechowym związanym z RHF towarzyszy zwiększone ryzyko zaburzeń rytmu serca. W artykule opisano standaryzowany model RHF indukowanego pasmami tętnic płucnych związanego ze zwiększoną arytmogenezą komorową i przedsionkową.

Szczurzy model prawostronnej przebudowy serca i arytmii z wykorzystaniem pasma tętnicy płucnej

W artykule przedstawiono krok po kroku protokół izolacji i oceny funkcjonalnej ludzkich gałęzi tętnic nerkowych, ułatwiający badania przedkliniczne w celu opracowania farmaceutycznego.

Wielopoziomowa mikrodysekcja i profilowanie funkcjonalno-strukturalne gałęzi tętniczych ludzkiego nerki

Opracowujemy technikę dynamicznej adaptacyjnej ekspozycji z wykorzystaniem naszego cyfrowego systemu rentgenowskiego z wiązką skanującą. Zamiast jednorodnego naświetlania obiektu, ekspozycja jest dostosowywana w zależności od jego nieprzezroczystości. Przedstawiamy tutaj eksperyment na fantomie antropomorficznym, który pozwolił na redukcję dawki o 30%.

Redukcja dawki promieniowania rentgenowskiego poprzez adaptacyjną ekspozycję w obrazowaniu fluoroskopowym

Wizualizacja naczyń wieńcowych ma kluczowe znaczenie dla pogłębienia naszej wiedzy na temat chorób układu sercowo-naczyniowego. Opisujemy tutaj metodę perfuzji naczyń wieńcowych myszy radiologicznym silikonem (Microfil) w ramach przygotowania do obrazowania mikrotomografią komputerową (μCT).

Wsteczna perfuzja i wypełnianie naczyń wieńcowych myszy w ramach przygotowania do obrazowania mikrotomografią komputerową

Poznaj technikę myografu drucikowego do pomiaru reaktywności naczyń wieńcowych szczurów. Ta metoda umożliwia stabilny zapis dynamicznych zmian napięcia tętniczego in vitro i badanie mechanizmów chorób układu krążenia.

Ustandaryzowane przygotowanie pierścienia wieńcowego u szczurów i rejestracja w czasie rzeczywistym dynamicznych zmian napięcia wzdłuż średnicy naczynia (Wideo) | JoVE Journal

Ustandaryzowane przygotowanie pierścienia wieńcowego u szczurów i rejestracja w czasie rzeczywistym dynamicznych zmian napięcia wzdłuż średnicy naczynia

Przeglądaj więcej filmów