Name: Model tętniaka aorty brzusznej myszy wywołany fosforanem wapnia (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Poznaj model tętniaka aorty brzusznej indukowany fosforanem wapnia u myszy C57BL6J do badania mechanizmów molekularnych i strategii terapeutycznych. Szybka i ekonomiczna metoda pozwala analizować patogenezę choroby naczyniowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Te badania były wspierane przez fundusze z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 i 91529203) oraz Narodowego Kluczowego Programu Badawczo-Rozwojowego Chin (2019YFA 0801600).

Badania na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Centrum Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Pekińskiego i zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Biomedycznej Uniwersytetu Pekińskiego (LA2015142). Wszystkie myszy przeznaczone do operacji zostały znieczulone izofluranem (1,5%-2%), a znieczulenie było dokładnie monitorowane, aby uniknąć bólu lub dyskomfortu u myszy.
1. Przygotowanie
<ol>
	<li>Wytnij paski o szerokości 0,3 cm z bezpudrowych gumowych rękawiczek i gazy.</li>
	<li>Kup 8-10-tygodniowe samce myszy C57BL/6J. Trzymaj zwierzęta w klimatyzowanym pomieszczeniu z 12-godzinnym cyklem światła i ciemności oraz swobodnym dostępem do jedzenia i wody.</li>
	<li>Przed zabiegiem należy autoklawować gazę, waciki, nożyczki i kleszcze.</li>
	<li>Zaopatrz się w betadynę, 70% etanol i antyseptyczne mycie rąk.</li>
	<li>Załóż maskę, fartuch i sterylne rękawiczki.</li>
</ol>
2. Zabieg chirurgiczny
<ol>
	<li>Tabletki karprofenu do żucia (dawka 5 mg/kg) należy podawać 8-10-tygodniowej myszy C57BL/6J na 2-4 godziny przed zabiegiem. Następnie umieść mysz w komorze indukcyjnej (206 mm x 210 mm x 140 mm) z izofluranem o natężeniu przepływu 1,5%-2%.
	<ol>
		<li>Monitoruj mysz przez około 5 minut, aż oddychanie zostanie wyraźnie spowolnione. Upewnij się, że mysz nie reaguje na stymulację bólu przed zabiegiem.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Nałóż maść okulistyczną na oczy i zapewnij wsparcie termiczne za pomocą poduszki grzewczej lub koca. Potwierdzaj głębokość znieczulenia szczyptą palca u nogi co 15 minut podczas zabiegu chirurgicznego.</li>
	<li>Ogol włosy na brzuchu myszy za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia lub kremu do depilacji. Przetrzyj i przetrzyj ogolony obszar betadyną, a następnie 70% etanolem, kilka razy okrężnymi ruchami. Zmień rękawice, aby zachować sterylność.</li>
	<li>Użyj nożyczek, aby wykonać nacięcie ~1,5 cm w dolnej części brzucha wzdłuż linii środkowej brzucha.</li>
	<li>Użyj sterylnego bawełnianego wacika zwilżonego solą fizjologiczną, aby ostrożnie usunąć jelito, aż aorta podnerkowa będzie widoczna.</li>
	<li>Wypreparuj tkankę łączną i tłuszcz z aorty podnerkowej na odcinek około 0,5 cm. Zwróć uwagę na małe naczynia po stronie grzbietowej i unikaj ich rozrywania się. Nie ma potrzeby oddzielania aorty brzusznej od żyły głównej jamy brzusznej.</li>
	<li>Zapakuj kawałek nasączonego solą fizjologiczną gumowego paska rękawicy pod aortę brzuszną i główną żyłę brzuszną. Użyj bawełnianego wacika, aby zetrzeć nadmiar płynu.</li>
	<li>Zapakuj kawałek gazy nasączonej 0,5 M CaCl2 na przydankę podnerkowego naczynia brzusznego na 10 minut. W przypadku grupy myszy pozorowanych zastąp 0,5 M CaCl2 zwykłą solą fizjologiczną.</li>
	<li>Usuń gazę i zapakuj kolejny kawałek gazy nasączony roztworem PBS na 5 minut, aby wytworzyć kryształy CaPO4 in situ w przydance aorty.</li>
	<li>Ostrożnie zdejmij gumowy pasek rękawicy i gazę. Zresetuj przewód pokarmowy myszy.</li>
	<li>Zszyj nacięcie brzucha i skórę szwem 5-0.</li>
	<li>Umieść mysz na poduszce grzewczej, aż mysz odzyska przytomność. Zapewnij zakwaterowanie w celu rehabilitacji bólu pooperacyjnego i analgezji, zgodnie z lokalną komisją etyki zwierząt.</li>
	<li>Trzymaj mysz w domu przez kolejne 14 dni. Uważnie monitoruj mysz po zabiegu i obserwuj co najmniej 1 raz dziennie. Natychmiast przeprowadź sekcję zwłok, jeśli w tym okresie umrą jakieś myszy.</li>
</ol>
3. Pobieranie do obrazowania aort
<ol>
	<li>14 dni po operacji należy złożyć ofiary myszy za pomocą CO2 .</li>
	<li>Rozetnij brzusznie jamę piersiową i brzuszną myszy i rozetnij prawy przedsionek.</li>
	<li>Przeprowadź perfuzję myszy z buforem PBS przez lewą komorę serca, aby usunąć krew z aorty, a następnie perfuzję z 4% paraformaldehydem, jak opisano wcześniej8.</li>
	<li>Zbierz aortę pod stereoskopem.</li>
	<li>Pobrane aorty należy umieścić w probówkach zawierających 5 ml 4% paraformaldehydu na 48 godzin.</li>
	<li>Ostrożnie usuń tkankę przybyszową i tłuszcz pod stereoskopem i przypnij aortę do czarnej woskowej płytki za pomocą igieł owadzich.</li>
	<li>Uzyskaj obrazy aorty.</li>
</ol>
4. Ocena degradacji włókien elastycznych
<ol>
	<li>Pociąć tkanki tętniaka aorty na szeregowe kriosekcje (o grubości 7 μm).</li>
	<li>Przeanalizuj włókna elastyczne za pomocą komercyjnego zestawu do barwienia elastycznego van Giesona (EVG) zgodnie z protokołem producenta.</li>
	<li>Oceń degradację elastyny. Stopień 1: <25% degradacji; stopień 2: degradacja od 25% do 50%; stopień 3: degradacja od 50% do 75%; lub stopień 4: >75% degradacji.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371, 2101-2108 (2014).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysm+of+the+rabbit+common+carotid+artery+induced+by+periarterial+application+of+calcium-chloride+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).</li>
<li>Yamanouchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+aneurysmal+dilation+associated+with+apoptosis+and+inflammation+in+a+newly+developed+calcium+phosphate+rodent+abdominal+aortic+aneurysm+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Accelerated aneurysmal dilation associated with apoptosis and inflammation in a newly developed calcium phosphate rodent abdominal aortic aneurysm model.</a> Journal of Vascular Surgery. 56 (2), 455-461 (2012).</li>
<li>Wang, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+apolipoprotein+E%2C+age+and+aortic+site+on+calcium+phosphate+induced+abdominal+aortic+aneurysm+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Influence of apolipoprotein E, age and aortic site on calcium phosphate induced abdominal aortic aneurysm in mice.</a> Atherosclerosis. 235 (1), 204-212 (2014).</li>
<li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unspliced+xbp1+confers+VSMC+homeostasis+and+prevents+aortic+aneurysm+formation+via+foxo4+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Unspliced xbp1 confers VSMC homeostasis and prevents aortic aneurysm formation via foxo4 interaction.</a> Circulation Research. 121 (12), 1331-1345 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+macrophage+TFEB-14-3-3+epsilon+interface+by+naringenin+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Targeting macrophage TFEB-14-3-3 epsilon interface by naringenin inhibits abdominal aortic aneurysm.</a> Cell Discovery. 8 (1), 21(2022).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).</li>
<li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYLD+deubiquitinates+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+4+contributing+to+adventitial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">CYLD deubiquitinates nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 contributing to adventitial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (8), 1698-1709 (2017).</li>
<li>Altobelli, E., Rapacchietta, L., Profeta, V. F., Fagnano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+abdominal+aortic+aneurysm+in+population-based+studies%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Risk factors for abdominal aortic aneurysm in population-based studies: A systematic review and meta-analysis.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (12), 2805(2018).</li>
<li>Theivacumar, N. S., Stephenson, M. A., Mistry, H., Valenti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+and+aortic+aneurysm+rupture%3A+A+favorable+association%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus and aortic aneurysm rupture: A favorable association.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 48 (1), 45-50 (2014).</li>
<li>Tanaka, T., Takei, Y., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+suppresses+calcium+phosphate-induced+aneurysm+formation+through+inhibition+of+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia suppresses calcium phosphate-induced aneurysm formation through inhibition of macrophage activation.</a> Journal of the American Heart Association. 5 (3), 003062(2016).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53191(2015).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutral+sites+for+calcium+ion+binding+to+elastin+and+collagen%3A+A+charge+neutralization+theory+for+calcification+and+its+relationship+to+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neutral sites for calcium ion binding to elastin and collagen: A charge neutralization theory for calcification and its relationship to atherosclerosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (4), 810-814 (1971).</li>
<li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Runx2+%28runt-related+transcription+factor+2%29-mediated+microcalcification+is+a+novel+pathological+characteristic+and+potential+mediator+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).</li>
<li>Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast-like+cells+in+aneurysmal+disease+exhibit+an+enhanced+proteolytic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689(2019).</li>
</ol>

Okołoortyczne zastosowanie CaPO4 jest solidnym podejściem do indukcji AAA u myszy. W kilku badaniach wykorzystano model CaPO4 i konsekwentnie stwierdzono, że jest to szybka i powtarzalna metoda badania AAA u myszy 7,9. Uważa się, że model ten podsumowuje część cech ludzkiego tętniaka aorty i zapewnia mechanistyczny wgląd w patogenezę AAA, w tym stan zapalny i degradację macierzy zewnątrzkomórkowej.
Do czynników ry...

Tętniak aorty brzusznej (AAA) jest śmiertelną chorobą sercowo-naczyniową charakteryzującą się trwałym rozszerzeniem aorty brzusznej, z wysoką śmiertelnością po wystąpieniu pęknięcia. AAA jest związane ze starzeniem się, paleniem tytoniu, płcią męską, nadciśnieniem tętniczym i hiperlipidemią1. Wykazano, że kilka procesów patologicznych przyczynia się do powstawania AAA, w tym proteoliza włókien macierzy zewnątrzkomórkowej, infiltracja komórek odpornościowych i utrata komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych. Obecnie mechanizmy patologiczne AAA pozostają nieuchwytne i nie ma sprawdzonych leków na leczenie AAA1. Badania nad ludzkim AAA są ograniczone ze względu na istnienie niewielu próbek ludzkiej aorty; w związku z tym ustanowiono i szeroko przyjęto kilka zwierzęcych modeli AAA wywołanych modyfikacją chemiczną, w tym podskórny wlew angiotensyny II (AngII), inkubację elastazy okołonaczyniowej lub śródświetlnej oraz okołonaczyniowe zastosowanie fosforanu wapnia<klasa sup = "xref">2. Powszechnie stosowanym modelem mysim jest zastosowanie fosforanu wapnia (CaPO4) do przydanki aorty brzusznej podnerkowej, co jest opłacalne i nie wymaga modyfikacji genetycznej.
Bezpośrednie okołoaortalne zastosowanie CaCl2 do tętnicy szyjnej królików w celu wywołania zmiany tętniaka zostało początkowo zgłoszone przez Gertza i wsp.3 i później zostało zastosowane do aort brzusznych myszy. Model został opracowany przez Yamanouchi i wsp. w celu przyspieszenia rozszerzenia aorty przy użyciu kryształów CaPO4 u myszy4. Naciekanie CaPO4 do aort myszy podsumowuje wiele patologicznych cech obserwowanych u ludzkich AAA, w tym głęboką infiltrację makrofagów, degradację macierzy zewnątrzkomórkowej i odkładanie się wapnia. Czynniki ryzyka ludzkiego AAA, takie jak hiperlipidemia, zwiększają również AAA indukowane przez CaPO4 u myszy5. W przeciwieństwie do AAA indukowanego perfuzją AngII u myszy ApoE-/- lub LDLR-/-, AAA indukowane przez CaPO4 występuje w podnerkowym obszarze aorty, który naśladuje ludzkie AAA. Obecnie metoda ta jest szeroko stosowana do oceny podatności na rozwój AAA u genetycznie zmodyfikowanych myszy i oceny efektów anty-AAA leków6,7.

<table><tbody><tr><td>CaCl2</td><td>MECKLIN</td><td>C805225</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Biomed</td><td>SH5001-01</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>HARVEYBIO</td><td>MB5051</td><td></td></tr><tr><td>Wentylator dla małych zwierząt</td><td>RWD</td><td>H1550501-012</td><td></td></tr></tbody></table>

model tętniaka aorty brzusznej myszy wywołany fosforanem wapnia

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

Tętniak aorty brzusznej (AAA) jest zagrażającą życiu chorobą sercowo-naczyniową, która występuje na całym świecie i charakteryzuje się nieodwracalnym rozszerzeniem aorty brzusznej. Obecnie stosuje się kilka chemicznie indukowanych mysich modeli AAA, z których każdy symuluje inny aspekt patogenezy AAA. Model AAA indukowany fosforanem wapnia jest szybkim i opłacalnym modelem w porównaniu z modelami AAA indukowanymi angiotensyną II i elastazą. Zastosowanie kryształów CaPO4 do aorty myszy powoduje degradację włókien elastycznych, utratę komórek mięśni gładkich, stan zapalny i odkładanie się wapnia związane z rozszerzeniem aorty. W tym artykule przedstawiono standardowy protokół dla modelu AAA indukowanego przez CaPO4. Protokół obejmuje przygotowanie materiału, chirurgiczne zastosowanie CaPO4 do przydanki podnerkowej aorty brzusznej, pobranie aort w celu uwidocznienia tętniaków aorty oraz analizy histologiczne u myszy.

14 dni po aplikacji CaPO4 samce myszy C57BL/6J zostały poddane eutanazji, a ich aorty zostały pobrane i oczyszczone. Wykonano obrazowanie morfologii aorty w celu wizualizacji powstania AAA. Jak pokazano na Rysunku 1A-B, aplikacja CaPO4 doprowadziła do rozszerzenia podnerkowej aorty brzusznej. Histologicznie CaPO4 spowodowało gwałtowną degradację włókien elastycznych, co zilustrowano przerwami w elastynie (<strong class="xfig"...

Ten protokół opisuje mysi model tętniaka aorty brzusznej (AAA) wywołanego fosforanem wapnia w celu zbadania cech patologicznych i mechanizmów molekularnych AAA.

Model tętniaka aorty brzusznej myszy wywołany fosforanem wapnia

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

Protokół ten opisuje model mysi tętniaka aorty brzusznej indukowany fosforanem wapnia potrójny A w celu zbadania cech patologicznych mechanizmów molekularnych tętniaka aorty brzusznej. Model tętniaka aorty brzusznej indukowany fosforanem wapnia jest szybkim i opłacalnym modelem w porównaniu z modelami tętniaka aorty brzusznej indukowanym angiotensyną i elastazą. Procedurę zademonstruje Zeyu Cai, doktor habilitowany, pracownik naszego laboratorium.Na początek wytnij paski bezpudrowej gumy o szerokości 0,3 centymetra i gazy. Następnie kup od ośmiu do dziesięciu tygodni myszy C57BL6J Mayo i trzymaj je w klimatyzowanym środowisku z 12-godzinnym cyklem światła i ciemności oraz swobodnym dostępem do jedzenia i wody. Następnie przed zabiegiem należy autoklawować gazę, waciki, nożyczki i kleszcze, a następnie uzyskać betadynę, 70% etanol i antyseptyczne płyny do mycia rąk.Ogol włosy na brzuchu znieczulonej myszy za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia lub kremu do depilacji. Następnie przetrzyj ogolony obszar Betadine, a następnie 70% etanolem kilka razy okrężnymi ruchami. Następnie wykonaj nożyczki około 1,5-centymetrowe nacięcie w dolnej części brzucha wzdłuż linii środkowej brzucha.Za pomocą sterylnego wacika zwilżonego solą fizjologiczną ostrożnie wyjmij jelito, aż aorta podnerkowa będzie widoczna. Następnie wypreparuj tkankę łączną i tłuszcz z aorty podnerkowej na odcinku około 0,5 centymetra, unikając rozdarcia małych naczyń po stronie grzbietowej. Następnie zapakuj kawałek nasączonego solą fizjologiczną gumowego paska rękawicy pod aortę brzuszną i główną żyłę brzuszną, wycierając nadmiar płynu za pomocą bawełnianego wacika.Następnie zapakuj kawałek gazy nasączonej 0,5 molowym chlorkiem wapnia na przydankę podnerkowego naczynia brzusznego na 10 minut. Usuń gazę i zapakuj kolejny kawałek gazy nasączony roztworem PBS na pięć minut, aby wytworzyć kryształy ortofosforanu wapnia w C2 w przydance aorty. Następnie ostrożnie zdejmij gumowy pasek rękawicy i gazę.Po zresetowaniu przewodu pokarmowego myszy zszyj nacięcie brzucha i skórę szwem z pięcioma zerami. Następnie umieść mysz na poduszce grzewczej, aż mysz odzyska przytomność. Trzymaj mysz w domu przez kolejne 14 dni i uważnie monitoruj ją po operacji, a następnie obserwuj co najmniej codziennie.Po 14 dniach od operacji należy brzusznie rozciąć uśpioną jamę piersiową i brzuszną myszy oraz rozciąć prawy przedsionek. Obficie podawaj myszom bufor PBS przez lewą komorę serca, aby usunąć krew z aorty, a następnie perfuzjuj 4% paraformaldehydem, jak opisano w manuskrypcie. Ostrożnie usuń tkankę przybyszową i tłuszcz pod mikroskopem stereoskopowym.Następnie zbierz aortę i umieść ją w probówce zawierającej pięć mililitrów 4% paraformaldehydu na 48 godzin. Następnie przypnij aortę do czarnej płytki woskowej za pomocą igieł do owadów i przystąp do pozyskiwania obrazów aorty. Po 14 dniach stosowania ortofosforanu wapnia zobrazowano morfologię aort w celu uwidocznienia powstawania tętniaka aorty brzusznej.Zaobserwowano, że ortofosforan wapnia doprowadził do poszerzenia podnerkowej aorty brzusznej i doprowadził do dramatycznej degradacji włókien elastycznych, czego przykładem były pęknięcia elastyny. Za pomocą sterylnego wacika zwilżonego solą fizjologiczną należy usunąć jelito, aż aorta podnerkowa będzie widoczna, a następnie usunąć tkankę łączną i tłuszcz z aorty podnerkowej. Ogólnie rzecz biorąc, model tętniaka aorty brzusznej indukowany fosforanem wapnia u myszy jest szybkim i opłacalnym podejściem do badania mechanizmów molekularnych i strategii terapeutycznych tętniaka aorty brzusznej i może być stosowany równolegle z innymi modelami, aby w pełni naśladować cechy ludzkiego tętniaka aorty brzusznej.

a-calcium-phosphate-induced-mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

W niniejszym filmie pokazano, jak indukować tętniaki aorty brzusznej (AAA) u myszy poprzez przejściową infuzję wewnątrznaczyniową elastazy trzustkowej pochodzenia świńskiego do odcinka podnerkowego aorty brzusznej. Model ten pozwala na uzyskanie szerokiego wglądu w patobiologię AAA dzięki dostępności licznych myszy transgenicznych i z nokautem genowym.

Wytwarzanie eksperymentalnych tętniaków aorty brzusznej u myszy z użyciem elastazy

Ten artykuł opisuje szczegółową metodologię użycia nieprzepuszczającego promieni rentgenowskich kauczuku silikonowego na bazie ołowiu do perfuzji mysiego układu krwionośnego do ilościowego określenia średnicy aorty w mysim modelu tętniaka i rozwarstwienia aorty.

Ilościowa analiza aortapatii metodą mikro-CT w mysim modelu tętniaka i rozwarstwienia aorty wywołanego β-aminopropionitrylem

Ten nowatorski model tworzy silne tętniaki aorty podnerkowej u świń za pomocą kombinacji angioplastyki balonowej, perfuzji elastazy/kolagenazy, miejscowego stosowania elastazy i doustnego podawania związków β-aminopropionitrylu, które zakłócają sieciowanie kolagenu.

Świński model tętniaka aorty brzusznej

Obecny protokół opisuje ustandaryzowaną metodę chirurgiczną dla modelu AAA wywołanego elastazą poprzez bezpośrednie zastosowanie elastazy do przydanki podnerkowej aorty brzusznej u myszy.

Mysi model tętniaka aorty brzusznej indukowany przez okołonaczyniowe zastosowanie elastazy

Ten manuskrypt przedstawia protokół tworzenia mysiego modelu tętniaka aorty brzusznej myszy przy użyciu chlorku wapnia i elastazy, łącząc zalety poprzednich metod modelowania. Model ten można wykorzystać do badania mechanizmów patofizjologicznych leżących u podstaw tętniaków aorty brzusznej.

Mysi model tętniaka aorty brzusznej za pomocą okołoprzybytkowego nacieku chlorku wapnia i elastazy

Ten protokół opisuje metodyczne podejście chirurgiczne do modelowania zaawansowanych tętniaków aorty brzusznej u myszy poprzez kombinację bezpośredniego stosowania elastazy do aorty podnerkowej i podawania ß-aminopropionitrylu przez wodę pitną.

Zaawansowane modelowanie tętniaka aorty brzusznej u myszy poprzez połączenie miejscowej elastazy i doustnego ß-aminopropionitrylu

Ten protokół zapewnia powtarzalną i niezawodną metodę wywoływania tętniaków tętnicy brzusznej (TTB) u myszy C57BL/6 przy użyciu uczulenia elastyny i przynaczynowego stosowania elastazy, jako model TTB, który obejmuje komponent uczulenia immunologicznego.

Wiarygodne stworzenie modelu tętniaka tętnicy brzusznej u myszy przy użyciu uczulenia na elastynę i peryvaskularnej elastazy

Angiogeneza, czyli wypączkowanie naczyń krwionośnych z istniejącej sieci naczyniowej, wiąże się zarówno z procesami naturalnymi, jak i patologicznymi. W niniejszej pracy prezentujemy test pierścienia aorty, który umożliwia bezpośrednie dodawanie potencjalnych stymulatorów i inhibitorów angiogenezy do pierścieni aorty w hodowli. Wypączkowanie oraz wzrost nowych naczyń można ocenić poprzez inspekcję pierścieni aorty w okresie od 6 do 12 dni.

Test pierścienia aortalnego

Ortotopowe modele zwierzęce raka jajnika lepiej odwzorowują przebieg choroby u ludzi, a tym samym zwiększają naszą wiedzę na temat progresji nowotworu i odpowiedzi guza na terapię. W modelu mysim wykonuje się wstrzyknięcie do wnętrza woreczka otrzewnej komórek nowotworu jajnika wykazujących ekspresję lucyferazy. Leczenie podaje się poprzez zgłębnik żołądkowy. Wzrost guza monitoruje się za pomocą systemu obrazowania in vivo.

Obrazowanie in vivo i leczenie terapeutyczne w ortotopowym modelu raka jajnika u myszy

Komórki śródbłonka naczyniowego odgrywają znaczącą rolę w wielu ważnych zaburzeniach sercowo-naczyniowych. W tym artykule opisano prostą metodę izolowania i rozszerzania komórek śródbłonka z aorty myszy bez użycia specjalnego sprzętu. Nasz protokół zapewnia skuteczny sposób identyfikacji mechanizmów w fizjopatologii komórek śródbłonka.

Izolacja i pierwotna hodowla komórek śródbłonka aorty myszy

Poznaj model tętniaka aorty brzusznej indukowany fosforanem wapnia u myszy C57BL6J do badania mechanizmów molekularnych i strategii terapeutycznych. Szybka i ekonomiczna metoda pozwala analizować patogenezę choroby naczyniowej.

Model tętniaka aorty brzusznej myszy wywołany fosforanem wapnia

Przeglądaj więcej filmów