Pomiar termogenezy mięśni szkieletowych u myszy i szczurów

Protokół ten jest istotny, ponieważ zapewnia bezpośrednią i opłacalną metodę pomiaru temperatury mięśni szkieletowych. Co więcej, może być stosowany w różnych kontekstach i pod wpływem środków farmakologicznych. Główną zaletą tej techniki jest liczba zwierząt, które mogą być testowane jednocześnie.

Opisane tutaj minimalne niepokojenie zwierząt pozwala uniknąć konieczności stosowania zaawansowanych technologicznie metod, takich jak termografia w podczerwieni. Osobniki mogą mieć trudności z pomiarem temperatury zwierząt w klatce domowej lub na bieżniach podczas ruchu. Można temu zapobiec, ćwicząc techniki pomiarowe podczas prób habituacji.

Zacznij od ogrzania dołączonych transponderów między dłońmi w rękawiczkach i upewnij się, że zachowujesz sterylność podczas pracy z transponderami. Zmierz temperaturę za pomocą skanera temperatury i sprawdź, czy transponder odczytuje zmiany temperatury. Po znieczuleniu myszy zgodnie z opisem w manuskrypcie, użyj nożyczek chirurgicznych, aby wykonać płytkie nacięcie przez skórę na prawej tylnej kończynie.

Umieść ostrą krawędź wstępnie zaprogramowanego i niezakorkowanego sterylnego transpondera w nacięciu, równolegle do mięśnia brzuchatego łydki. Upewnij się, że zielony tłok jest skierowany do góry i jest widoczny. Kontynuuj wciskanie aplikatora transpondera w nacięcie, aż otwór aplikatora transpondera przestanie być widoczny.

Obróć aplikator o 180 stopni, tak aby zielony tłok był skierowany w dół w kierunku kończyny myszy i nie był już widoczny dla eksperymentatora. Gdy aplikator transpondera zostanie umieszczony obok lub częściowo zamknięty w brzuchatym łydce, popchnij zielony tłok, pozwalając, aby nacisk aplikatora odciągnął rękę badacza od myszy. Za pomocą kleszczy trzymaj otwartą skórę razem.

Umieść klips do rany ze sterylnym automatycznym klipsem, w razie potrzeby zegnij. Użyj wchłanialnych szwów przed sterylnym autoclipem, aby zamknąć warstwę powięzi. Za pomocą czytnika transponderów sprawdź temperaturę mięśnia myszy.

Po wyjęciu myszy ze znieczulenia umieść ją w czystej klatce domowej na poduszce grzewczej i upewnij się, że klatka domowa zawiera kulkę herbaty z bezwonnym ręcznikiem, aby rozpocząć przyzwyczajenie. Przypisz lokalizację do pionu w pomieszczeniu testowym, a aby uniknąć mylących zmiennych, oddziel taśmy ustawione na odbiór różnych bodźców kontekstowych na co najmniej dwa metry. Za pomocą pasków magnetycznych przymocuj arkusze chirurgiczne w poprzek pionu i stwórz barierę wizualną, aby zminimalizować wahania temperatury spowodowane aktywnością myszy w odpowiedzi na ruch eksperymentatora.

Przygotuj kulki do herbaty z ręcznikami kontrolnymi i zapachowymi drapieżników. Przenieś zwierzę do przygotowanego pomieszczenia do badań. Umieść zwierzę w wyznaczonym miejscu na podstopnicy i unikaj zmiany położenia podstopnicy między procedurami habituacji i testowania.

Wyjmij piłkę z klatki domowej z klatki domowej myszy. Odzyskaj klatkę za pomocą szmatki lub prześcieradła chirurgicznego i pozwól myszy zaaklimatyzować się w przestrzeni testowej przez jedną do dwóch godzin. Po zakończeniu aklimatyzacji użyj skanera, aby zmierzyć i zarejestrować temperaturę bazową obiektu.

Otwórz klatkę i umieść kulkę herbaty na podłodze klatki domowej. Załóż pokrywę klatki i pokrycie z tkaniny. Uruchom stoper i zmierz temperaturę badanych w tej samej kolejności, w jakiej umieszczono kulki do herbaty.

Zapisz temperatury i czas zegarowy pomiarów, podążając za żądanymi punktami czasowymi. Przygotuj bieżnie do testów, upewniając się, że amortyzatory są sprawne. Upewnij się, że zwierzęta używają tej samej bieżni do przyzwyczajania i procedur testowych.

Przenieś mysz do pokoju testowego i pozwól jej zaaklimatyzować się przez jedną do dwóch godzin w klatce domowej. Przed przeniesieniem myszy na bieżnię zmierz i zapisz jej temperaturę bazową. Aby ułatwić zakładanie i zdejmowanie, przyklej ręczniki kontrolne lub przeciwzapachowe drapieżników do sufitu lub pod przodem bieżni.

Skieruj mysz na przypisaną bieżnię. Włącz pas bieżni i amortyzator, uruchom stoper i wykonaj pomiary badanych w tej samej kolejności, w jakiej zostały ustawione na bieżniach. Zapisz temperatury i czas zegarowy pomiarów, podążając za żądanymi punktami czasowymi.

Po zakończeniu testu wyłącz amortyzator i bieżnię, a następnie umieść mysz w klatce domowej. Wyczyść bieżnię za pomocą płynnego detergentu i wody i usuń resztki zapachu drapieżnika. Wielokrotne próby habituacji znacznie obniżyły temperaturę mięśni myszy, pokazując, że myszy są przyzwyczajone do środowiska testowego i protokołu.

Połączona analiza płci w czwartym badaniu nie wykazała istotnej różnicy między pomiarami temperatury przed ruchem a pomiarami temperatury wyjściowej, co świadczy o skuteczności jednogodzinnej aklimatyzacji do kontekstu testowego. Stymulacja farmakologiczna przy użyciu oksytocyny u myszy wykazała obniżoną temperaturę mięśni w stosunku do wartości wyjściowej z maksymalnym spadkiem po 30 minutach. Temperatura mięśni została znormalizowana 60 minut po wstrzyknięciu oksytocyny.

U szczurów Sprague Dawley zaobserwowano trwały wzrost temperatury mięśni po usunięciu zapachu drapieżnika jako bodźców kontekstowych. Szczury Sprague Dawley wykazywały silny wzrost temperatury w odpowiedzi na zapach fretki w porównaniu z zapachem kontrolnym. W obecności innych awersyjnych zapachów zapach fretki wytwarza i utrzymuje silną zmianę termogeniczną w porównaniu ze wszystkimi innymi warunkami.

Podczas próby przeprowadzenia tej procedury bardzo ważne jest, aby przyzwyczaić zwierzęta do protokołu testowego i zaplanować od jednej do dwóch godzin aklimatyzacji każdego dnia testów.