Generowanie mysiego modelu sztucznego decydualizacji z owariektomią do badań nad decydualizacją endometrium
27 lipca 2022
Tutaj opisujemy metodę generowania sztucznego modelu decydualizacji za pomocą myszy z owariektomią, klasyczny eksperyment decydualizacji endometrium w dziedzinie badań nad decydualizacją endometrium.
Upośledzenie decentralizacji prowadzi do wirusowych zaburzeń endometrium, takich jak zgon, nawracające poronienia. Metoda ta zapewnia dobry i wiarygodny model zwierzęcy do badania decentralizacji endometrium. Ten sztuczny model decentralizacji z owariektomią może uniknąć wpływu angeliny na hormony, co często może być wysoce powtarzalne wyniki z niewielkimi różnicami w grupie.
Aby rozpocząć sterylizację narzędzi chirurgicznych za pomocą sterylizatora wysokotemperaturowego i wysokociśnieniowego na dzień przed operacją. Nałóż ochronną maść na oczy na gałki oczne, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia. Rozpocznij operację, gdy myszy są całkowicie znieczulone.
Umieść myszy w pozycji leżącej na powierzchni operacyjnej i ogol włosy z tyłu po zwilżeniu ich wodą z mydłem. Zdezynfekuj skórę 70% etanolem. Znajdź miejsce nacięcia operacji w odległości 0,5 centymetra na górnej krawędzi nasady uda obu kończyn tylnych równolegle do kręgosłupa.
Weź miejsce nacięcia jako środek i trzykrotnie zdezynfekuj obszar nacięcia jodoforem. Wykonaj podłużne nacięcie o długości około 0,5 do jednego centymetra za pomocą nożyczek. Przetnij powięź i biernie oddziel mięśnie pęsetą.
Znajdź kawałek białej poduszeczki tłuszczowej w polu nacięcia w pobliżu dolnego bieguna nerki przez cienką warstwę mięśni. Zacisnąć masę tłuszczową za pomocą klipsów hemostatycznych i wyciągnąć jajnik owinięty poduszką tłuszczową z nacięcia. Zacisnąć połączenie jajnika i jajowodu zakrzywioną pęsetą i usunąć jajnik wzdłuż szypułki jajnika nożyczkami.
Zatamować krwawienie za pomocą wstrzykiwacza do elektrokoagulacji lub igły jednomililitrowej strzykawki podgrzanej na lampie alkoholowej. Przepłucz nacięcie chirurgiczne zwykłą solą fizjologiczną, aby zapobiec zrostowi tkanek. Użyj szwu 4-0, aby zasiać odpowiednio mięsień i skórę i ponownie zdezynfekować nacięcie chirurgiczne jodoforem.
Umieść myszy w pozycji leżącej w klatce i reanimuj je w inkubatorze o temperaturze 25 stopni Celsjusza. Wyposażony w źródło światła i system wentylacji na około dwie godziny. Zwróć uwagę na myszy po operacji.
Umieść je z powrotem w pierwotnym miejscu karmienia samodzielnie, aż całkowicie wyzdrowieją i zapewnij im wystarczającą ilość wody i jedzenia. Podskórnie wstrzyknij 100 nanogramów estrogenu w 50 mikrolitrach oleju sezamowego każdej myszy przez trzy dni, a następnie dwa dni odpoczynku. Wstrzyknij jeden miligram progesteronu i 10 nanogramów estrogenu w 50 mikrolitrach oleju sezamowego każdej myszy przez kolejne trzy dni.
Operuj myszy, aby wywołać model sztucznej rezydualizacji sześć godzin po trzecim połączonym wstrzyknięciu estrogenu i progesteronu. Znajdź róg macicy na dolnym końcu jajowodu i powoli wstrzyknij 20 mikrolitrów oleju sezamowego wzdłuż rogu macicy. Odepchnij tkankę do tyłu, zszyj nacięcie i pozwól myszy dojść do siebie.
Przymocuj trzy do pięciu mililitrów tkanki macicy za pomocą 10% formaliny zatopionej w parafinie i pokrój je. Wybarwić skrawki hematoksyliną i eozyną, aby zaobserwować zmiany morfologiczne. Osadź kolejne trzy do pięciu milimetrów tkanki macicy w optymalnej temperaturze cięcia, zamroź związek w ciekłym azocie i przechowuj w zamrażarce o temperaturze minus 80 stopni Celsjusza.
Zamrożona tkanka dzieli się na 10 mikrometrów i wykrywa aktywność fosfatazy alkalicznej w tkance macicy metodą sprzęgania Azo. Ogólna morfologia sztucznej zdecentralizowanej macicy myszy wywołanej olejem jest bliższa morfologii macicy w ciąży. Trzon macicy staje się gruby, a jama macicy staje się mniejsza niż strona nieindukowana.
Objętość i masa indukowanego rogu macicy są znacznie wyższe niż po stronie nieindukowanej. Barwienie tkanki macicy hematoksyliną i eozyną wykazało, że gruczoły zanikają, a końcowe komórki zrębu endometrium na indukowanym rozdarciu różnicują się w duże, okrągłe, cytoplazmatyczne i wielojądrowe komórki dziesiętne z niejasnymi granicami komórkowymi. Nieindukowane odcinki boczne pokazują morfologię tkanki endometrium w normalnym stanie fizjologicznym.
Wynik metody sprzęgania azowego wykazał, że zawartość fosfatazy alkalicznej po stronie indukowanej olejem była znacznie wyższa niż po stronie nieindukowanej. Wyniki QPCR wykazały, że ekspresja mRNA PRL-8-A-2, ALPL i IGFBP-1 w indukowanym rogu była znacznie wyższa niż w nieindukowanym, co sugeruje, że olej może indukować sztuczną decentralizację u myszy. Suplementacja homo to długotrwały proces, który wymaga szczególnej uwagi: zanieczyszczenie między homo, co jest kluczem do sukcesu.
Na podstawie tego modelu można wykonać iniekcję adenowirusa do rogu macicy, który może badać odpowiedni mechanizm działania określonych cząsteczek regulujących resztkowość.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Ten artykuł opisuje metodę generowania sztucznego modelu decydualizacji przy użyciu myszy z usuniętymi jajnikami. Ten model jest istotny dla badania decydualizacji endometrium i powiązanych z nią zaburzeń.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauki
- Biologia rozrodu
- Modele zwierzęce
Tło
- Decydualizacja jest kluczowa dla udanego zaszczepienia i ciąży.
- Upośledzenie tego procesu może prowadzić do zaburzeń endometrium.
- Myszy z usuniętymi jajnikami służą jako niezawodny model do badania tych stanów.
- Ten model pomaga zrozumieć wpływ hormonów na decydualizację.
Cel badania
- Ustanowienie modelu zwierzęcego do badań endometrium.
- Zbadanie wpływu zmian hormonalnych na decydualizację.
- Dostarczenie wglądu w mechanizmy leżące u podstaw nawracających poronień.
Stosowane metody
- Sterylizacja narzędzi chirurgicznych przed operacją.
- Zastosowanie maści ochronnej dla oczu w celu zapobiegania wysuszeniu podczas znieczulenia.
- Wprowadzenie znieczulenia u myszy przed zabiegami chirurgicznymi.
- Stworzenie sztucznego modelu decydualizacji poprzez owariekctomię.
Główne wyniki
- Model umożliwia kontrolowane badania reakcji endometrium.
- Wyniki pokazują wysoką powtarzalność z minimalnymi różnicami wewnątrz grupy.
- Ta metoda unika wpływu hormonów z czynników zewnętrznych.
- Zapewnia niezawodną ramę dla przyszłych badań nad zaburzeniami endometrium.
Wnioski
- Sztuczny model decydualizacji jest skuteczny w badaniu zdrowia endometrium.
- Może pomóc wyjaśnić mechanizmy zaburzeń endometrium.
- To podejście może prowadzić do lepszego zrozumienia i leczenia nawracających poronień.
Często zadawane pytania
Executive Industry Relevance
Highly reproducible artificial decidualization models in ovariectomized mice enable precise investigation of endometrial differentiation, eliminating confounding ovarian hormone effects. This model supports robust target validation and mechanistic de-risking for endometrial biology, facilitating translational research on infertility and pregnancy disorders. Its reliability and quantitative outputs strengthen early discovery and preclinical decision-making across reproductive health portfolios.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables rigorous interrogation of endometrial differentiation pathways under controlled hormonal conditions.
- Supports functional target validation by isolating uterine responses from ovarian influences.
- Facilitates mechanistic de-risking for candidate targets implicated in endometrial disorders.
- Provides quantitative benchmarks for portfolio triage in reproductive health research.
Screening & Assay Development
- Establishes a standardized, reproducible in vivo system for evaluating endometrial responses.
- Delivers quantitative outputs such as uterine horn weight, morphology, and gene expression.
- Enables assay readiness for downstream molecular or pharmacological screening.
- Supports platform reuse for comparative studies of candidate interventions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant models for infertility, miscarriage, and endometrial dysfunction.
- Provides continuity from mechanistic discovery to preclinical validation of therapeutic hypotheses.
- Enables risk-adjusted advancement decisions based on robust, reproducible phenotypes.
- Supports biomarker development through quantitative molecular and histological readouts.
Pipeline & Workflow Integration
This model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for reproductive health, supporting hypothesis testing, target validation, and translational research on endometrial disorders.
- Discovery Biology: Isolates uterine-specific mechanisms by removing ovarian hormone confounders.
- Screening: Provides reproducible, quantitative endpoints for assay development and compound evaluation.
- Analytics: Enables statistical comparison of induced versus non-induced uterine horns using weight, morphology, and gene expression.
- Translational Research: Bridges mechanistic findings to disease-relevant preclinical models for infertility and miscarriage.
- Enterprise Reuse: Offers a validated, scalable platform for ongoing reproductive biology and therapeutic studies.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in endometrial research.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable in vivo workflows.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by minimizing biological variability.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of reproductive health programs.
Implementation Considerations
- Requires surgical expertise in ovariectomy and uterine horn manipulation.
- Needs access to animal facilities, histology, and molecular analysis infrastructure.
- Demands strict cross-team standardization to ensure reproducibility and minimize contamination.
- Adaptable to various mouse strains but may require protocol optimization for different genetic backgrounds.
- Dependent on careful hormone supplementation and timing to achieve consistent decidualization.
