27 lipca 2022
Tutaj opisujemy metodę generowania sztucznego modelu decydualizacji za pomocą myszy z owariektomią, klasyczny eksperyment decydualizacji endometrium w dziedzinie badań nad decydualizacją endometrium.
Upośledzenie decentralizacji prowadzi do wirusowych zaburzeń endometrium, takich jak zgon, nawracające poronienia. Metoda ta zapewnia dobry i wiarygodny model zwierzęcy do badania decentralizacji endometrium. Ten sztuczny model decentralizacji z owariektomią może uniknąć wpływu angeliny na hormony, co często może być wysoce powtarzalne wyniki z niewielkimi różnicami w grupie.
Aby rozpocząć sterylizację narzędzi chirurgicznych za pomocą sterylizatora wysokotemperaturowego i wysokociśnieniowego na dzień przed operacją. Nałóż ochronną maść na oczy na gałki oczne, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia. Rozpocznij operację, gdy myszy są całkowicie znieczulone.
Umieść myszy w pozycji leżącej na powierzchni operacyjnej i ogol włosy z tyłu po zwilżeniu ich wodą z mydłem. Zdezynfekuj skórę 70% etanolem. Znajdź miejsce nacięcia operacji w odległości 0,5 centymetra na górnej krawędzi nasady uda obu kończyn tylnych równolegle do kręgosłupa.
Weź miejsce nacięcia jako środek i trzykrotnie zdezynfekuj obszar nacięcia jodoforem. Wykonaj podłużne nacięcie o długości około 0,5 do jednego centymetra za pomocą nożyczek. Przetnij powięź i biernie oddziel mięśnie pęsetą.
Znajdź kawałek białej poduszeczki tłuszczowej w polu nacięcia w pobliżu dolnego bieguna nerki przez cienką warstwę mięśni. Zacisnąć masę tłuszczową za pomocą klipsów hemostatycznych i wyciągnąć jajnik owinięty poduszką tłuszczową z nacięcia. Zacisnąć połączenie jajnika i jajowodu zakrzywioną pęsetą i usunąć jajnik wzdłuż szypułki jajnika nożyczkami.
Zatamować krwawienie za pomocą wstrzykiwacza do elektrokoagulacji lub igły jednomililitrowej strzykawki podgrzanej na lampie alkoholowej. Przepłucz nacięcie chirurgiczne zwykłą solą fizjologiczną, aby zapobiec zrostowi tkanek. Użyj szwu 4-0, aby zasiać odpowiednio mięsień i skórę i ponownie zdezynfekować nacięcie chirurgiczne jodoforem.
Umieść myszy w pozycji leżącej w klatce i reanimuj je w inkubatorze o temperaturze 25 stopni Celsjusza. Wyposażony w źródło światła i system wentylacji na około dwie godziny. Zwróć uwagę na myszy po operacji.
Umieść je z powrotem w pierwotnym miejscu karmienia samodzielnie, aż całkowicie wyzdrowieją i zapewnij im wystarczającą ilość wody i jedzenia. Podskórnie wstrzyknij 100 nanogramów estrogenu w 50 mikrolitrach oleju sezamowego każdej myszy przez trzy dni, a następnie dwa dni odpoczynku. Wstrzyknij jeden miligram progesteronu i 10 nanogramów estrogenu w 50 mikrolitrach oleju sezamowego każdej myszy przez kolejne trzy dni.
Operuj myszy, aby wywołać model sztucznej rezydualizacji sześć godzin po trzecim połączonym wstrzyknięciu estrogenu i progesteronu. Znajdź róg macicy na dolnym końcu jajowodu i powoli wstrzyknij 20 mikrolitrów oleju sezamowego wzdłuż rogu macicy. Odepchnij tkankę do tyłu, zszyj nacięcie i pozwól myszy dojść do siebie.
Przymocuj trzy do pięciu mililitrów tkanki macicy za pomocą 10% formaliny zatopionej w parafinie i pokrój je. Wybarwić skrawki hematoksyliną i eozyną, aby zaobserwować zmiany morfologiczne. Osadź kolejne trzy do pięciu milimetrów tkanki macicy w optymalnej temperaturze cięcia, zamroź związek w ciekłym azocie i przechowuj w zamrażarce o temperaturze minus 80 stopni Celsjusza.
Zamrożona tkanka dzieli się na 10 mikrometrów i wykrywa aktywność fosfatazy alkalicznej w tkance macicy metodą sprzęgania Azo. Ogólna morfologia sztucznej zdecentralizowanej macicy myszy wywołanej olejem jest bliższa morfologii macicy w ciąży. Trzon macicy staje się gruby, a jama macicy staje się mniejsza niż strona nieindukowana.
Objętość i masa indukowanego rogu macicy są znacznie wyższe niż po stronie nieindukowanej. Barwienie tkanki macicy hematoksyliną i eozyną wykazało, że gruczoły zanikają, a końcowe komórki zrębu endometrium na indukowanym rozdarciu różnicują się w duże, okrągłe, cytoplazmatyczne i wielojądrowe komórki dziesiętne z niejasnymi granicami komórkowymi. Nieindukowane odcinki boczne pokazują morfologię tkanki endometrium w normalnym stanie fizjologicznym.
Wynik metody sprzęgania azowego wykazał, że zawartość fosfatazy alkalicznej po stronie indukowanej olejem była znacznie wyższa niż po stronie nieindukowanej. Wyniki QPCR wykazały, że ekspresja mRNA PRL-8-A-2, ALPL i IGFBP-1 w indukowanym rogu była znacznie wyższa niż w nieindukowanym, co sugeruje, że olej może indukować sztuczną decentralizację u myszy. Suplementacja homo to długotrwały proces, który wymaga szczególnej uwagi: zanieczyszczenie między homo, co jest kluczem do sukcesu.
Na podstawie tego modelu można wykonać iniekcję adenowirusa do rogu macicy, który może badać odpowiedni mechanizm działania określonych cząsteczek regulujących resztkowość.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
W niniejszym artykule opisano metodę tworzenia sztucznego modelu decydualizacji z wykorzystaniem myszy po owariektomii. Model ten jest istotny dla badania decydualizacji błony śluzowej macicy oraz związanych z nią zaburzeń.
Wysoce powtarzalne modele sztucznej decidualizacji u myszy po owariektomii umożliwiają precyzyjne badanie różnicowania endometrium, eliminując zakłócający wpływ hormonów jajnikowych. Model ten zapewnia solidną walidację celów i mechanistyczne ograniczanie ryzyka w badaniach nad biologią endometrium, co ułatwia badania translacyjne nad niepłodnością i zaburzeniami ciąży. Jego niezawodność oraz ilościowe wyniki wzmacniają wczesny etap odkrywania i procesy podejmowania decyzji przedklinicznych w ramach portfela projektów dotyczących zdrowia reprodukcyjnego.
Model ten integruje się z kontinuum od odkryć do badań przedklinicznych w obszarze zdrowia reprodukcyjnego, wspierając testowanie hipotez, walidację celów terapeutycznych oraz badania translacyjne nad schorzeniami endometrium.