Określanie preferencji temperaturowych komarów i innych ektotermów

Ta dwukomorowa konfiguracja aparatury służy do badania preferencji temperaturowych owadów i może być modyfikowana w celu zbadania innych sytuacji preferencji wyboru binarnego, takich jak światło kontra ciemność lub wysoka kontra niska wilgotność. Głównymi zaletami tej techniki są prosta konfiguracja, przestronny obszar, który pozwala owadom pokazać swoją latającą naturę przy wyborze preferowanej temperatury, oraz łatwe punktowanie bez zewnętrznego sprzętu. Najtrudniejszą częścią protokołu jest usunięcie akrylowego wyłomu po eksperymencie.

Dzieje się tak, ponieważ istnieje duża szansa na ucieczkę owadów. Dlatego tak ważne jest dla nas, aby wykorzystać dwutlenek węgla do znieczulenia owadów. Zabieg zademonstrują Kinga Stobierska i Lorna Glenn, obie mistrzynie z mojego laboratorium.

Na początek przygotuj 2 puste klatki na komary z 12-centymetrowymi otworami na rękawy i upewnij się, że nie ma ani innych uszkodzeń. Następnie za pomocą mechanicznego aspiratora przenieś 30 owadów do osobnej klatki, aby ułatwić obsługę i utylizację po eksperymencie. Ustaw inkubatory na żądaną temperaturę i pozwól im się nagrzać i ustabilizować.

Osiągnięcie temperatury w zakresie od 25 do 30 stopni Celsjusza zajmuje około 30 minut. Następnie umieść pustą klatkę na komary w inkubatorze i przełóż rękawy klatki przez przedni otwór inkubatora. Potwierdź temperaturę powietrza wewnątrz inkubatora za pomocą sondy temperatury.

Następnie umieść otwieraną klapkę przygotowaną z taśmą klejącą na otworze w akrylowej tubie. Zwiń rękaw wystający przez otwór przed pierwszym inkubatorem i zabezpiecz go na jednym końcu akrylowej rurki za pomocą elastycznej opaski. Następnie umieść inkubatory naprzeciwko siebie i włóż jeden koniec rurki akrylowej do tulei drugiego otworu inkubatora.

Upewnij się, że średnica rurki akrylowej jest większa niż otwór z przodu inkubatora, tak aby całkowicie zakryła otwór. Upewnij się, że rurka akrylowa nie jest luźna i nie zwisa między inkubatorami. Jeśli tak, pociągnij za tuleje klatki, aby usunąć nadmiar materiału między klatką a gumką.

Aby umieścić komary w środku, otwórz klapę z taśmą klejącą. Umieść lejek w otworze akrylowej tuby, a następnie opróżnij owady do rurki przez lejek. Po opróżnieniu owadów wyjmij lejek i zakryj otwór rurki klapką z taśmy klejącej.

Pozostaw na 30 minut, aby owady wybrały preferowaną komorę. Pod koniec czasu ustalania obserwuj wzrokowo i zapisz liczbę owadów widocznych w mostku rurki akrylowej. Następnie postukaj lub zdmuchnij wszystkie owady w mostku po obu stronach inkubatora lub uwalniając dwutlenek węgla do mostu.

Następnie ściśnij i zamknij rękawy z rurki akrylowej po obu stronach, szybko zapinając je ciasnym węzłem. Następnie wyjmij klatki z obu inkubatorów i wizualnie policz owady w każdej klatce. Upewnij się, że liczby z obu inkubatorów i mostka sumują się do 30.

W niniejszej pracy określono preferencję temperaturową komarów i muszek owocowych za pomocą modelu dwukomorowego. Wyniki nie wykazały znaczącej różnicy, gdy obie klatki były utrzymywane w temperaturze 27 stopni Celsjusza, co wskazuje na zdolność komarów do swobodnego wyboru między klatkami wykazującymi ich naturalne zachowania. I odwrotnie, gdy obie komory były ustawione na różne temperatury, komary konsekwentnie wybierały optymalną temperaturę 27 stopni Celsjusza zamiast 30 stopni Celsjusza.

Podobnie, gdy konfiguracja została przetestowana z Drosophila Melanogaster, innym modelem ektodermy, muszki owocowe unikały cieplejszej komory i preferowały optymalną temperaturę 25 stopni Celsjusza. Upewnij się, że konfiguracja jest całkowicie uszczelniona, bez kryjówek i siatki zakłócającej obszar latania, aby owady mogły swobodnie wybierać między 2 komorami.