Name: Test biologiczny śmiertelności przy użyciu Artemia salina L. (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Poznaj biotest śmiertelności Artemia salina do oceny ogólnej toksyczności ekstraktów, frakcji i związków. Ta prosta i ekonomiczna metoda umożliwia przesiewowe badanie próbek przed dalszymi testami.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Pamięci stylu <span="kolor: rgb(34, 34, 34); rodzina czcionek: Arial, Helvetica, bezszeryfowa; rozmiar czcionki: mały;">Profesor Amilcar Roberto.
Ta praca była wspierana finansowo przez Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portugalia) w ramach projektów UIDB/04567/2020 i UIDP/04567/2020 przypisanych CBIOS i grantu doktoranckiego SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca).

1. Przygotowanie sprzętu
<ol>
	<li>Należy nabyć dostępne w sprzedaży komercyjnie urządzenie do wylęgu. Wybrać odpowiednie miejsce do ustawienia urządzenia (Rycina 2A). Umieścić pojemnik w kształcie lejka w czarnym uchwycie (dołączonym do zestawu) i obrócić lejek w taki sposób, aby widoczne były oznaczenia poziomu oraz kranik.</li>
	<li>W celu wykonania własnego urządzenia do migracji, należy odciąć górne części dwóch plastikowych butelek o pojemności 0,5 L (średnica 5,8 cm), tak aby uzyskać końcową wysokość 12 cm. W każdej butelce, na jednej z jej ścianek, należy wykonać otwór o średnicy 1,5 cm w odległości 7 cm od dna, a następnie wsunąć 13 cm gumowej rurki (średnica zewnętrzna 1,3 cm, wewnętrzna 0,9 cm) pomiędzy oba otwory. Uszczelnić otwory klejem na gorąco (Rycina 2B>) i pozostawić do wyschnięcia na 15 min; ustawić butelki na płaskiej powierzchni i napełnić je wodą, aby sprawdzić, czy nie ma wycieków.</li>
</ol>
2. Przygotowanie sztucznego roztworu soli
<ol>
	<li>W zlewce szklanej przygotować sztuczny roztwór soli (soli dla solowców) o stężeniu 35 g/L. W tym celu, zgodnie z instrukcją producenta, dodać 28 g soli do 800 mL wody z kranu. Mieszać za pomocą pręta szklanego do całkowitego rozpuszczenia soli. 
	UWAGA: Dostosować objętość przygotowanego roztworu soli do wielkości dostępnych pojemników.</li>
</ol>
3. Przygotowanie próbek
<ol>
	<li>Przygotować wszystkie próbki w probówkach do mikrocentryfugi, rozpuszczając odpowiednią ilość ekstraktów (ekstrakty z Plectranthus: Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; oraz Pe- P. ecklonii) lub związków 1-5 (dwóch związków naturalnych [1 i 2] otrzymanych z Plectranthus spp. oraz trzech pochodnych półsyntetycznych [3, 4, 5]; Rycina 3) w dimetylosulfotlenku (DMSO)12, aby uzyskać stężenie końcowe 10 mg/mL (jeśli próbka jest rozpuszczalna w wodzie, zastosowanie DMSO nie jest konieczne).</li>
	<li>Rozcieńczyć 10 µL każdej próbki (oraz DMSO dla kontroli negatywnej) w nowej probówce do mikrocentryfugi, używając 990 µL sztucznej soli fizjologicznej przygotowanej w kroku 2.1, aby uzyskać stężenie końcowe 0,1 mg/mL.</li>
	<li>W dygestorium, w kolbie Erlenmeyera, przygotować roztwór dichromianu potasu (K2Cr2O7) w wodzie destylowanej o stężeniu 1 mg/mL13,14,15.</li>
</ol>
4. Bioanaliza letalności na krewetkach solankowych
UWAGA: Analiza ta została opracowana na podstawie prac kilku autorów z wprowadzonymi modyfikacjami1,16,17,18,19.
<ol>
	<li>Napełnić naczynie do wylęgania medium przygotowanym w kroku 2.1 do poziomu oznaczonego kreską (500 mL) (Rysunek 2C).</li>
	<li>Umieścić jedną łyżkę (około 0.75 g) cyst artemii w roztworze soli, a następnie zamknąć pojemnik. Ustawić lampę (lampa stołowa, 40 W, 230 V, 50 Hz, z żarówką LED 8 W, 4 000 K, 830 lm) skierowaną bezpośrednio na urządzenie (Rysunek 2A) i włączyć ją.</li>
	<li>Podłączyć system napowietrzania (wyjście 3 W, 50 Hz, 230 V) do złącza znajdującego się na górze urządzenia i włączyć pompę.</li>
	<li>Utrzymywać temperaturę w pomieszczeniu na poziomie 25 ± 3 °C. Cysty artemii wylęgają się w sztucznym roztworze soli, przy intensywnym napowietrzaniu, ciągłym oświetleniu i stabilnej temperaturze, po upływie od 24 h do 48 h. 
	UWAGA: Alternatywnie można użyć inkubatora pionowego.</li>
	<li>Po wykluciu się jaj wyłączyć pompę napowietrzającą i poczekać, aż nauplii (poruszające się w stronę dna lejka) oddzielą się od pustych osłon jajowych (pływających na powierzchni).</li>
	<li>Aby oddzielić niewylęgłe jaja od żywych nauplii, otworzyć kran wylotowy na dnie i spuścić zawartość lejka do jednego z pojemników własnoręcznie wykonanego zestawu do migracji (opisanego w kroku 1.2). Upewnić się, że roztwór zawierający nauplii i pozostałe niewylęgłe jaja znajduje się poniżej poziomu rurki. Do drugiego pojemnika dodać pozostały roztwór soli powyżej wysokości rurki.</li>
	<li>Przykryć pojemnik z nauplii i niewylęgłymi jajami folią aluminiową. Umieścić lampę nad drugim pojemnikiem zawierającym tylko roztwór soli. Artemie zostaną przyciągnięte przez światło i zmigrują z jednego pojemnika do drugiego (pojemnika zbiorczego), co pozwoli na skuteczne oddzielenie jaj (które powoli opadają na dno) od żywych Artemia.</li>
	<li>Następnie umieścić urządzenie w inkubatorze w tych samych warunkach, które zastosowano w kroku 4.4, na 4 h (Rysunek 2E). Z pojemnika zbiorczego pobrać 900 µL roztworu soli zawierającego od 10 do 15 nauplii. Przenieść roztwór soli z nauplii do każdej studni płytki 24-dołkowej (Rysunek 2F); wszystkie próbki badane są w czterech powtórzeniach.</li>
	<li>Do odpowiednich studni (Rysunek 2F) dodać po 100 µL kontroli negatywnej (DMSO), kontroli pozytywnej (K2Cr2O7, dichromian potasu), sztucznego roztworu soli oraz każdej z próbek13,14. 
	UWAGA: Próbki w każdej studni będą miały stężenie 0,01 mg/mL. Końcowe stężenie kontroli pozytywnej w roztworze soli wyniesie 0,1 mg/mL, aby upewnić się, że wszystkie nauplii w studni zostaną poddane toksycznemu działaniu dichromianu potasu i zginą. Sztuczny roztwór soli będzie służył jako ślepa próba.</li>
	<li>Inkubować płytkę w temperaturze 25 ± 3 °C pod oświetleniem przez 24 h (Rysunek 2G). Po 24 h zarejestrować liczbę martwych larw (nauplii nie wykazujących ruchu przez 5 s) w każdej studni pod mikroskopem binokularowym (12x)20 (Rysunek 2H). Alternatywnie można użyć lupy ręcznej.</li>
	<li>Dodać 100 µL roztworu dichromianu potasu, aby wywołać śmierć pozostałych żywych larw, i odczekać 6 h. Policzyć całkowitą liczbę martwych larw w każdej studni pod mikroskopem. Obliczyć wskaźnik śmiertelności zgodnie z następującym równaniem: 
	<img alt="Wzór na wskaźnik śmiertelności, równanie: (Suma A. salina - Żyjące A. salina) / (Suma A. salina) × 100" src="/files/ftp_upload/64472/64472eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Równanie 1"></li>
	<li>Wszystkie testy przeprowadzić w trzech powtórzeniach. Obliczyć odchylenia standardowe (SD) i przedstawić wyniki jako średnią z trzech niezależnych eksperymentów, z których każdy obejmował wewnętrzne cztery powtórzenia (n = 12), ± SD. Zgodnie z publikacją Meyer i wsp., ekstrakty surowe i czyste związki z LC50&lt; 1 000 µg/mL należy uznać za toksyczne; należy również wziąć pod uwagę, że wskaźnik śmiertelności artemii jest proporcjonalny do stężenia badanych próbek21.</li>
</ol>
<img alt="Układ filtracji w równowadze statycznej: schemat filtra wodnego zasilanego grawitacyjnie, mieszanie roztworów, sprzęt laboratoryjny." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64472/64472fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Metoda bioanalizy letalności Artemia salina. (A) Dostępny w sprzedaży sprzęt wykorzystywany do wylęgu cyst solnych krewetek; (B) Samodzielnie wykonany zestaw do migracji; (C) Naczynie do wylęgu wypełnione roztworem soli; (D) Zbieranie niewylężonych jaj i naupliów; (E) Samodzielnie wykonany zestaw w inkubatorze podczas etapu migracji. Pojemnik oddalony od lampy powinien być przykryty folią aluminiową; w celu lepszego zobrazowania instalacji została ona tutaj usunięta; (F) Zbieranie Artemia w studzienkach przed wykonaniem analizy. Związki powinny zostać umieszczone w sposób przedstawiony: - oznacza kontrolę negatywną (DMSO), + kontrolę pozytywną (K2Cr2O7), salt sztuczny roztwór soli, a 1 do 3 próbki do przetestowania (w tym przypadku związki 1-3); (G) Inkubacja płytki 24-dołkowej zawierającej Artemia oraz wybrane próbki; (H) Liczenie Artemia pod mikroskopem binokularnym. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64472/64472fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat struktur chemicznych; cząsteczki z grupami funkcyjnymi, edukacyjna treść chemiczna." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64472/64472fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Struktury wybranych związków. Struktura związków 1-2, wyekstrahowanych z gatunków Plectranthus, oraz związków 3-5, otrzymanych w drodze semisyntezy. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64472/64472fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>

<ol><li>Ntungwe, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artemia+species%3A+An+important+tool+to+screen+general+toxicity+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples.</a> Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).</li>
<li>Cragg, G. M., Newman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+products%3A+A+continuing+source+of+novel+drug+leads%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29+-+General+Subjects%22%5BJournal%5D)">Natural products: A continuing source of novel drug leads.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1830 (6), 3670-3695 (2013).</li>
<li>Ntungwe, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+toxicity+screening+of+Royleanone+derivatives+using+an+artemia+salina+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Biomedical+and+Biopharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">General toxicity screening of Royleanone derivatives using an artemia salina model.</a> Journal Biomedical and Biopharmaceutical Research. 18 (1), 114(2021).</li>
<li>Seca, A., Plant Pinto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((secondary+metabolites+as+anticancer+agents%3A+Successes+in+clinical+trials+and+therapeutic+application%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">secondary metabolites as anticancer agents: Successes in clinical trials and therapeutic application.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (1), 263(2018).</li>
<li>Calixto, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+natural+products+in+modern+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Anais+da+Academia+Brasileira+de+Ci%C3%AAncias%22%5BJournal%5D)">The role of natural products in modern drug discovery.</a> Anais da Academia Brasileira de Ciências. 91 (3), 1-7 (2019).</li>
<li>Mandrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+zebrafish+chorion+removal+and+single+embryo+placement%3A+optimizing+throughput+of+zebrafish+developmental+toxicity+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">Automated zebrafish chorion removal and single embryo placement: optimizing throughput of zebrafish developmental toxicity screens.</a> Journal of Laboratory Automation. 17 (1), 66-74 (2012).</li>
<li>Zhang, Y., Mu, J., Han, J., Gu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+brine+shrimp+larvae+lethality+microwell+test+method%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Mechanisms+and+Methods%22%5BJournal%5D)">An improved brine shrimp larvae lethality microwell test method.</a> Toxicology Mechanisms and Methods. 22 (1), 23-30 (2012).</li>
<li>Domínguez-Villegas, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((antioxidant+and+cytotoxicity+activities+of+methanolic+extract+and+prenylated+flavanones+isolated+from+leaves+of+eysehardtia+platycarpa%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Communications%22%5BJournal%5D)">antioxidant and cytotoxicity activities of methanolic extract and prenylated flavanones isolated from leaves of eysehardtia platycarpa.</a> Natural Product Communications. 8 (2), 177-180 (2013).</li>
<li>Hamidi, M. R., Jovanova, B., Panovska, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicological+evaluation+of+the+plant+products+using+Brine+Shrimp+%28Artemia+salina+L.%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Macedonian+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Toxicological evaluation of the plant products using Brine Shrimp (Artemia salina L.) model.</a> Macedonian Pharmaceutical Bulletin. 60 (01), 9-18 (2014).</li>
<li>Libralato, G., Prato, E., Migliore, L., Cicero, A. M., Manfra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+toxicity+testing+protocols+and+endpoints+with+Artemia+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Ecological+Indicators%22%5BJournal%5D)">A review of toxicity testing protocols and endpoints with Artemia spp.</a> Ecological Indicators. 69, 35-49 (2016).</li>
<li>Mendes Hacke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxicity+of+cymbopogon+citratus+%28DC%29+Stapf+fractions%2C+essential+oil%2C+citral%2C+and+geraniol+in+human+leukocytes+and+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Cytotoxicity of cymbopogon citratus (DC) Stapf fractions, essential oil, citral, and geraniol in human leukocytes and erythrocytes.</a> Journal of Ethnopharmacology. 291, 115147(2022).</li>
<li>Thangapandi, V., Pushpanathan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+Artemia+salina+and+Artemia+fransiscana+bioassays+for+toxicity+of+Indian+medicinal+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Coastal+Life+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the Artemia salina and Artemia fransiscana bioassays for toxicity of Indian medicinal plants.</a> Journal of Coastal Life Medicine. 2 (6), 453-457 (2014).</li>
<li>Syahmi, A. R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+oral+toxicity+and+brine+shrimp+lethality+of+Elaeis+guineensis+Jacq.%2C+%28Oil+Palm+Leaf%29+methanol+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Acute oral toxicity and brine shrimp lethality of Elaeis guineensis Jacq., (Oil Palm Leaf) methanol extract.</a> Molecules. 15 (11), 8111-8121 (2010).</li>
<li>Sasidharan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+toxicity+impacts+of+Euphorbia+hirta+L+extract+on+behavior%2C+organs+body+weight+index+and+histopathology+of+organs+of+the+mice+and+Artemia+salina%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacognosy+Research%22%5BJournal%5D)">Acute toxicity impacts of Euphorbia hirta L extract on behavior, organs body weight index and histopathology of organs of the mice and Artemia salina.</a> Pharmacognosy Research. 4 (3), 170(2012).</li>
<li>Libralato, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+of+Artemia+spp.+in+nanoecotoxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">The case of Artemia spp. in nanoecotoxicology.</a> Marine Environmental Research. 101, 38-43 (2014).</li>
<li>Okumu, M. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artemia+salina+as+an+animal+model+for+the+preliminary+evaluation+of+snake+venom-induced+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%3A+X%22%5BJournal%5D)">Artemia salina as an animal model for the preliminary evaluation of snake venom-induced toxicity.</a> Toxicon: X. 12, 100082(2021).</li>
<li>Rajabi, S., Ramazani, A., Hamidi, M., Naji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artemia+salina+as+a+model+organism+in+toxicity+assessment+of+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22DARU+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Artemia salina as a model organism in toxicity assessment of nanoparticles.</a> DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. 23 (1), 20(2015).</li>
<li>Svensson, B. -M., Mathiasson, L., Mårtensson, L., Bergström, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artemia+salina+as+test+organism+for+assessment+of+acute+toxicity+of+leachate+water+from+landfills%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Monitoring+and+Assessment%22%5BJournal%5D)">Artemia salina as test organism for assessment of acute toxicity of leachate water from landfills.</a> Environmental Monitoring and Assessment. 102 (1), 309-321 (2005).</li>
<li>Banti, C., Hadjikakou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+toxicity+with+brine+shrimp+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of toxicity with brine shrimp assay.</a> Bio-Protocol. 11 (2), 3895(2021).</li>
<li>Pecoraro, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artemia+salina%3A+A+microcrustacean+to+assess+engineered+nanoparticles+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+and+Technique%22%5BJournal%5D)">Artemia salina: A microcrustacean to assess engineered nanoparticles toxicity.</a> Microscopy Research and Technique. 84 (3), 531-536 (2021).</li>
<li>Lillicrap, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+approaches+to+vertebrate+ecotoxicity+tests+in+the+21st+century%3A+A+review+of+developments+over+the+last+2+decades+and+current+status%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Alternative approaches to vertebrate ecotoxicity tests in the 21st century: A review of developments over the last 2 decades and current status.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (11), 2637-2646 (2016).</li>
<li>Ribeiro, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeasts+as+a+model+for+assessing+the+toxicity+of+the+fungicides+Penconazol%2C+Cymoxanil+and+Dichlofulanid%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Yeasts as a model for assessing the toxicity of the fungicides Penconazol, Cymoxanil and Dichlofulanid.</a> Chemosphere. (10), 1637-1642 (2000).</li>
<li>Armour, C. D., Lum, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+drug+to+protein%3A+using+yeast+genetics+for+high-throughput+target+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">From drug to protein: using yeast genetics for high-throughput target discovery.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 9 (1), 20-24 (2005).</li>
<li>Modarresi Chahardehi, A., Arsad, H., Lim, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+successful+animal+model+for+screening+toxicity+of+medicinal+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a successful animal model for screening toxicity of medicinal plants.</a> Plants. 9 (10), 1345(2020).</li>
<li>Fischer, I., Milton, C., Wallace, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+testing+is+evolving%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Research%22%5BJournal%5D)">Toxicity testing is evolving.</a> Toxicology Research. 9 (2), 67-80 (2020).</li>
<li>de Araújo, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+methods+in+toxicity+testing%3A+the+current+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Alternative methods in toxicity testing: the current approach.</a> Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences. 50 (1), 55-62 (2014).</li>
<li>Toussaint, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+method+to+measure+the+sensitivity+of+yeast+cells+to+genotoxic+agents+in+liquid+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+Research%2FGenetic+Toxicology+and+Environmental+Mutagenesis%22%5BJournal%5D)">A high-throughput method to measure the sensitivity of yeast cells to genotoxic agents in liquid cultures.</a> Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis. 606 (1), 92-105 (2006).</li>
<li>Horzmann, K. A., Freeman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+waves%3A+New+developments+in+toxicology+with+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Making waves: New developments in toxicology with the zebrafish.</a> Toxicological Sciences. 163 (1), 5-12 (2018).</li>
<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+An+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: An introduction.</a> Journal of Visualized Experiments. (69), e4196(2012).</li>
<li>Cunliffe, V. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCunliffe%2C+VT+%22Zebrafish%3A+A+Practical+Approach%22">Zebrafish: A Practical Approach</a>. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. , Oxford University Press. (2002).</li>
<li>Sitarek, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+the+biological+activities+of+selected+Abietane+Diterpenes+isolated+from+Plectranthus+spp%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Insight the biological activities of selected Abietane Diterpenes isolated from Plectranthus spp.</a> Biomolecules. 10 (2), 194(2020).</li>
<li>Matias, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+activity+of+Royleanone+Diterpenes+from+Plectranthus+madagascariensis+Benth%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic activity of Royleanone Diterpenes from Plectranthus madagascariensis Benth.</a> ACS Omega. 4 (5), 8094-8103 (2019).</li>
<li>Garcia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Royleanone+derivatives+from+Plectranthus+spp.+as+a+novel+class+of+P-glycoprotein+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Royleanone derivatives from Plectranthus spp. as a novel class of P-glycoprotein inhibitors.</a> Frontiers in Pharmacology. 11, (2020).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktów interesów, finansowych lub innych.

W ostatnich latach społeczność naukowa zwiększyła swoją uwagę na alternatywne modele badań przesiewowych toksyczności21. Oprócz testu biologicznego śmiertelności A. salina zwykle wykonuje się inne metodologie oceny tolerancji próbki i obejmują one testy biologiczne kręgowców (takich jak gryzonie), bezkręgowców (takich jak danio pręgowany), metody in vitro z wykorzystaniem szczepów lub komórek drożdży oraz metody in silico 22,23,24,25<su...

Produkty naturalne pochodzenia roślinnego, zwierzęcego lub mikrobiologicznego stanowią obszar coraz większego zainteresowania w opracowywaniu nowych cząsteczek bioaktywnych ze względu na ich szeroki zakres działań biologicznych i farmakologicznych1. Jednakże związane z nimi działania niepożądane, oporność na leki lub niewystarczająca specyficzność tych czynników, zwłaszcza w zastosowaniu jako leki przeciwnowotworowe, stanowią główne czynniki, które mogą prowadzić do nieskuteczności leczenia1,2.
W ciągu ostatnich kilku dekad odkryto szereg pochodzących z roślin czynników cytotoksycznych, z których niektóre są stosowane jako leki przeciwnowotworowe1,2,3. W tym kontekście paclitaxel jest opisywany jako jeden z najlepiej znanych i najaktywniejszych chemioterapeutyków pochodzenia naturalnego3,4. Obecnie szacuje się, że ponad 35% wszystkich dostępnych na rynku leków pochodzi z produktów naturalnych lub jest nimi inspirowanych5. Potencjalnie wysoka toksyczność tych związków wymaga uwzględnienia na wszystkich etapach badań, ponieważ różne rodzaje zanieczyszczeń, a nawet metaboliczne składniki samej rośliny, mogą wywoływać efekty toksyczne. Z tego powodu na etapie wstępnym należy przeprowadzić analizy farmakologiczne i toksykologiczne, aby ocenić aktywność biologiczną oraz bezpieczeństwo nowych potencjalnych terapii opartych na roślinach. Do oceny toksyczności nowych próbek bioaktywnych za najlepsze modele badawcze można uznać bezkręgowce. Wiążą się one z minimalnymi wymogami etycznymi i umożliwiają przeprowadzenie wstępnych testów in vitro, co pozwala wyłonić najbardziej obiecujące produkty do kolejnej serii badań na kręgowcach1,6.
Powszechnie znane jako solankowce, A. salina to małe halofilne bezkręgowce należące do rodzaju Artemia (rodzina Artemiidae, rząd Anostraca, podtyp Crustacea; Rysunek 1). W morskich i słonowodnych ekosystemach wodnych solankowce pełnią istotną rolę odżywczą, żywiąc się mikroalgami i stanowiąc składnik zooplanktonu wykorzystywanego do karmienia ryb. Ponadto ich larwy (znane jako nauplii) są szeroko stosowane w ocenie ogólnej toksyczności podczas badań wstępnych1,3,7.
Artemia spp. są szeroko stosowane w badaniach letalności i stanowią również wygodny punkt wyjścia do oceny toksyczności poprzez śledzenie toksyczności potencjalnie bioaktywnych związków na podstawie ich zdolności do zabijania naupliusów hodowanych w laboratorium1,8. Z tego powodu zastosowanie A. salina zyskało uznanie w ogólnych badaniach toksyczności, ponieważ jest to metoda bardzo wydajna i łatwa w użyciu w porównaniu z innymi testami na modelach zwierzęcych9.
Dzięki prostej anatomii, niewielkim rozmiarom i krótkiemu cyklowi życiowemu, ogromną liczbę bezkręgowców można zbadać w ramach jednego eksperymentu. W związku z tym łączą one podatność genetyczną i niskie koszty z możliwością przeprowadzania przesiewów na dużą skalę1. W tym kontekście zastosowanie artemii w ogólnym teście toksyczności wykazuje szereg zalet, takich jak szybki wzrost (od wylęgu do pierwszych wyników potrzeba 28-72 h), efektywność kosztową oraz długi termin przydatności komercyjnych jaj, które można wykorzystywać przez cały rok3,10. Z drugiej strony, ponieważ bezkręgowce posiadają prymitywny układ organów i nie mają adaptacyjnego układu odpornościowego, nie stanowią one idealnego i w pełni niezawodnego modelu dla ludzkich komórek1.
Stanowi ono jednak wstępną metodę oceny ogólnej toksyczności wybranych próbek. Ponieważ jest ono powszechnie stosowane jako test letalności, może dostarczać tymczasowych informacji o toksycznym działaniu potencjalnych czynników przeciwnowotworowych. Często służy ono również do uzyskania informacji zwrotnych na temat ogólnej toksyczności związków wykazujących jakiekolwiek inne działanie biologiczne, w przypadku których kluczowe jest wykazanie jak najniższego wskaźnika śmiertelności wśród krewetek Artemia.
W ramach prowadzonego przez naszą grupę badania różne ekstrakty z gatunków Plectranthus wykazały działanie przeciwutleniające i przeciwdrobnoustrojowe (wyniki nieopublikowane). Równolegle, poprzez oczyszczanie ekstraktów, uzyskano izolowane związki, które następnie poddano modyfikacjom chemicznym. Ekstrakty, czyste związki oraz pochodne semisyntetyczne przetestowano pod kątem ogólnej toksyczności. W tym kontekście niniejsza praca ma na celu przedstawienie przeglądu zastosowania bioanalizy letalności Artemia do oceny ogólnej toksyczności oraz potencjalnej aktywności cytotoksycznej bioaktywnych ekstraktów i izolowanych związków z różnych roślin z rodzaju Plectranthus11.
<img alt="Larwy skorupiaków pod mikroskopem; badania biologii morskiej; skala wskazuje 500 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64472/64472fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Artemia salina pod mikroskopem. Nowo wyklute nauplii A. salina widziane pod mikroskopem (powiększenie 12x). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64472/64472fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>

<table><tbody><tr><td>Płytki 24-dołkowe</td><td>Thermo Fisher Scientific, Dania</td><td>174899</td><td>Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 wielotalerzowa</td></tr><tr><td>folia aluminiowa</td><td>Albal-Można</td><td></td> <td>kupić w supermarkecie</td></tr><tr><td>Artemio Set</td><td>JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy</td><td>61066000</td><td>Można kupić w sklepach zoologicznych</td></tr><tr><td>Mikroskop dwuokularowy</td><td>Ceti, Belgia</td><td>  1700.0000</td><td>Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz</td></tr><tr><td>Butelki</td><td></td>-<td>-</td><td>0,5 L Średnica: 5,8 cm; Wysokość: 12 cm</td></tr><tr><td>Cysty krewetek solankowych</td><td>JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy</td><td>3090700</td><td>Można kupić w sklepach zoologicznych</td></tr><tr><td>Sól krewetkowa solankowa</td><td>JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy</td><td>3090600</td><td>Można kupić w sklepach zoologicznych</td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek (DMSO)</td><td>Chemikalia VWR</td><td>CAS: 67-68-5</td><td>  99% czystości</td></tr><tr><td>Końcówki do bliznowania</td><td>Diament</td><td>F171500</td><td>Zakres głośności: 100 - 1000 i mikro; L</td></tr><tr><td>Mikroprobówki Eppendorf</td><td>MARKI</td><td>7,80,546</td><td>Mikroprobówki, PP, 2 mL, BIO-CERT  JAKOŚĆ PCR</td></tr><tr><td>Kolba Erlenmeyera</td><td>VWR chemicals</td><td>4,47,109</td><td>objętość: 100 ml</td></tr><tr><td>Szklana zlewka</td><td>Normax</td><td>3.2111654N</td><td>Objętość: 1000 ml</td></tr><tr><td>Rękawice</td><td>Guantes Luna</td><td>GLSP3-GraphPad</td><td></td></tr> <tr><td>Prism</td><td>GraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPad</td><td></td> <td>Prism wersja 5.00 dla systemu Windows, www.graphpad.com, dostęp 5 lutego 2021 r.; statystyka handlowa oprogramowanie analityczne</td></tr><tr><td>Domowy hodowca A. salina</td><td> -</td><td> -Domowej</td> <td>roboty: dwie plastikowe butelki połączone wężem</td></tr><tr><td>Gorący klej</td><td>Parkside</td><td>PHP500E3</td><td>230 V, 50 Hz, 25 W</td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Heidolph Instruments, Dania </td><td> -</td><td>Jeden sprzęt Heidolph Unimax 1010 i jeden Heidolph Inkubator 1006</td></tr><tr><td>Light</td><td>Roblan</td><td>SKYC3008FE14</td><td>żarówka LED</td></tr><tr><td>Mikropipety</td><td>VWR chemicals</td><td>613-5265</td><td>Zakres głośności: 100 - 1000 &amp;mikro; L</td></tr><tr><td>Dwuchromian potasu (K2Cr2O7)</td><td>VWR chemicals</td><td>CAS: 7778-50-9</td><td>  Pompa o czystości 99%</td></tr><tr><td>ProAir a50</td><td>JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Niemcy</td><td> -</td><td>W zestawie Artemio Set+1</td></tr><tr><td>Rurka gumowa</td> <td>-</td><td></td> <td>średnica zewnętrzna 1,3 cm i średnica wewnętrzna 0,9 cm</td></tr><tr><td>Pręt mieszający</td><td>VWR chemicals</td><td>441-0147</td><td><img alt="Równanie 1" src="/files/ftp_upload/64472/64472eq02.jpg" style="margines: auto; "> 6 mm, 250 mm</td></tr><tr><td>Termometr</td><td>VWR chemicals</td><td>620-0821</td><td>0 - 100 ° Z</td></tr></tbody></table>

test biologiczny śmiertelności przy użyciu artemia salina l.

Lethality Bioassay Using Artemia salina L.

Produkty naturalne były używane od czasów starożytnych do produkcji leków. W dzisiejszych czasach istnieje wiele leków chemioterapeutycznych pozyskiwanych z naturalnych źródeł i stosowanych przeciwko wielu chorobom. Niestety, większość z tych związków często wykazuje toksyczność ogólnoustrojową i działania niepożądane. Aby lepiej ocenić tolerancję wybranych potencjalnie bioaktywnych próbek, krewetka solankowa (Artemia salina) jest zwykle stosowana jako model w badaniach śmiertelności. Test A. salina opiera się na zdolności badanych związków bioaktywnych do zabijania mikroskorupiaków w stadium larwalnym (nauplii). Metoda ta stanowi dogodny punkt wyjścia do badań cytotoksyczności, a także do ogólnych badań przesiewowych toksyczności produktów syntetycznych, półsyntetycznych i naturalnych. Można go uznać za prosty, szybki i tani test w porównaniu z wieloma innymi testami (komórki in vitro lub szczepy drożdży, danio pręgowany, gryzonie) ogólnie odpowiednie do wyżej wymienionych celów; Co więcej, można go łatwo wykonać nawet bez specjalnego szkolenia. Ogólnie rzecz biorąc, test A. salina stanowi użyteczne narzędzie do wstępnej oceny toksyczności wybranych związków i biosterowanego frakcjonowania ekstraktów produktów naturalnych.

Ogólną toksyczność niektórych produktów naturalnych, badanych niedawno przez naszą grupę, oceniono za pomocą testu letalności z użyciem krewetek solankowych. Przebadano cztery ekstrakty z rodzaju Plectranthus (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus oraz Pe- P. ecklonii), znane z działania antyoksydacyjnego (wyniki nieopublikowane). Dodatkowo zbadano dwa związki naturalne (1 i 2) otrzymane z Plectranthus spp. oraz trzy pochodne półsyntetyczne (3, 4, 5; ...

Ta praca ma na celu ocenę i przegląd procedury biologicznego testu śmiertelności Artemia salina, również identyfikowanej jako test śmiertelności krewetek solankowych. Ta prosta i tania metoda dostarcza informacji na temat ogólnej toksyczności (traktowanej jako wstępna ocena toksyczności) próbek, a mianowicie produktów naturalnych.

Test biologiczny śmiertelności przy użyciu Artemia salina L.

Natural products have been used since ancient times to produce medicines. Nowadays, there are plenty of chemotherapeutic drugs obtained from natural ...

Protokół ten jest bardzo przydatnym narzędziem do wstępnej ogólnej oceny toksyczności na różnych typach próbek, takich jak ekstrakty, frakcje i związki z różnych źródeł naturalnych lub syntetycznych. Główną zaletą naszego protokołu jest to, że jest bardzo łatwy i tani oraz może być stosowany na wielu próbkach jednocześnie. Co więcej, ręcznie robiony sprzęt poprawia niezawodność witryny.Na tym etapie techniki przeprowadzamy badania przesiewowe w celu wybrania próbek na podstawie ich wstępnego profilu toksyczności ogólnej, które zostaną poddane dalszym specyficznym testom, takim jak ekspansywne linie komórkowe lub nawet testy in vivo. Metoda ta jest wykorzystywana głównie w dziedzinie chemii leków i innych produktów do badań przesiewowych próbek biotycznych. Nasz protokół może być również stosowany do innych rodzajów próbek, takich jak nanosystemy.Występując po raz pierwszy, zachowaj cierpliwość, ponieważ wymaga to doskonałych umiejętności obserwacji i dużej uwagi poświęconej wszystkim parametrom zgłaszanym przez Marcię Filipe i Verę Isca, doktoranci z naszego laboratorium pomogą zademonstrować tę procedurę. Zacznij od umieszczenia pojemnika w kształcie lejka w czarnym wsporniku i obrócenia lejka w odpowiednim kierunku, aby zobaczyć znak poziomu i kran. Aby wykonać ręcznie robiony sprzęt do migracji, wytnij górną część dwóch plastikowych butelek o pojemności 0,5 litra, aby uzyskać ostateczną wysokość 12 centymetrów.Utwórz otwór o średnicy 1,5 centymetra z jednej strony i siedem centymetrów od dna każdej butelki i włóż 13-centymetrową gumową rurkę między dwa otwory. Uszczelnij otwory gorącym klejem i pozostaw do wyschnięcia na 15 minut. Połóż butelki na płaskiej powierzchni i napełnij je wodą, aby sprawdzić, czy nie ma wycieków.Dodaj 28 gramów soli do 800 mililitrów wody z kranu, aby przygotować sztuczny roztwór soli lub solę solankową z krewetek w stężeniu 35 gramów na litr. Wymieszaj go z mieszadłem, aż cała sól dokładnie się rozpuści. Aby przygotować próbki, należy rozpuścić odpowiednią ilość każdego ekstraktu i związku dimetylosulfotlenku lub DMSO w końcowym stężeniu 10 miligramów na mililitr.Następnie rozcieńczyć 10 mikrolitrów każdej próbki w nowej mikroprobówce wirówkowej, używając 990 mikrolitrów sztucznego roztworu soli fizjologicznej, aby uzyskać końcowe stężenie 0,1 miligrama na mililitr. Pod wyciągiem w kolbie Erlenmeyera przygotować roztwór dichromianu potasu w wodzie destylowanej o stężeniu jednego miligrama na mililitr. Napełnij naczynie wylęgowe pożywką do oznaczenia 500 mililitrów i dodaj jedną łyżkę lub około 0,5 grama cyst krewetek solankowych do roztworu soli.Zamknij pojemnik. Umieść lampę skierowaną bezpośrednio w stronę urządzenia i włącz ją. Podłącz system dostarczania powietrza do złącza umieszczonego na górze urządzenia i włącz pompę.Cysty krewetek solankowych wylęgają się w sztucznym roztworze soli pod wpływem intensywnego napowietrzania, ciągłego oświetlenia i stabilnej temperatury. Po 24 do 48 godzinach, gdy jaja się wyklują, wyłącz pompę powietrza i poczekaj, aż naupliusy zostaną oddzielone od pustych pojemników na jajka. Aby oddzielić niewyklute jaja od żywych naupliiów, otwórz kran wylotowy na dole i wylej zawartość lejka do jednego z pojemników ręcznie robionego pojemnika na sprzęt migracyjny.Upewnij się, że roztwór zawierający nauplia i resztki niewyklutych jaj znajduje się poniżej poziomu probówki. Umieść sprzęt w inkubatorze na cztery godziny, a następnie do drugiego pojemnika dodaj pozostały roztwór soli powyżej wysokości probówki. Przykryj pojemnik naupliami i pozostałościami niewyklutych jaj za pomocą folii aluminiowej i umieść lampę na drugim pojemniku z samym roztworem soli.Krewetki solankowe zostaną przyciągnięte przez światło i będą migrować z jednego pojemnika do drugiego, co doprowadzi do skutecznego oddzielenia jaj od żywej artemii. Z pojemnika do zbioru zebrać 900 mikrolitrów roztworu soli fizjologicznej zawierającego od 10 do 15 naupliów i umieścić roztwór w jednym dołku na 24-dołkowej płytce. Wszystkie próbki są badane w poczwórnych odstępach.Dodać 100 mikrolitrów każdej kontroli ujemnej. Kontrola pozytywna, sztuczny roztwór soli i każda z próbek do studzienek i inkubować płytkę pod oświetleniem przez 24 godziny. Po 24 godzinach zarejestruj liczbę martwych larw w każdej studzience pod mikroskopem lornetkowym przy 12-krotnym powiększeniu.Dodać 100 mikrolitrów roztworu dichromianu potasu, aby wywołać śmierć pozostałych żywych larw i odczekać sześć godzin. Policz całkowitą martwą larwę w każdym dołku pod mikroskopem i określ wskaźnik śmiertelności zgodnie z równaniem pokazanym na ekranie. Wykonaj wszystkie testy w trzech egzemplarzach i oblicz odchylenia standardowe.Na koniec wyraź wyniki jako średnią z trzech niezależnych eksperymentów, z których każdy ma wewnętrzne poczwórne duplikaty plus minus odchylenia standardowe. Na rysunku przedstawiono strukturę wybranych związków wyekstrahowanych z gatunków Plectranthus i otrzymanych w drodze półsyntezy. Na tym zdjęciu pokazano nowo wyklute nauplia Artemia Salina, widziane pod mikroskopem.Ten obraz graficzny przedstawia śmiertelność Artemia Salina po 24 godzinach ekspozycji na cztery ekstrakty metanolowe z gatunku Plectranthus na poziomie 0,1 miligrama na mililitr. Wszystkie ekstrakty były akceptowalne pod względem ogólnej toksyczności przy użyciu tego testu. Tutaj sól odpowiada roztworowi soli lub ślepej próbie.Jako kontrolę pozytywną zastosowano dichromian potasu, a jako kontrolę ujemną DMSO. Wszystkie badane ekstrakty wykazały bardzo zachęcające wyniki z bardzo niskimi wartościami procentowymi śmiertelności porównywalnymi do tych zarejestrowanych dla ślepej próby i kontroli ujemnej. Śmiertelność Artemia Salina po 24 godzinach ekspozycji na pięć czystych związków w dawce 0,1 miligrama na mililitr przedstawiono na tym rysunku.Z tych danych jasno wynika, że tylko pięć wykazuje minimalną toksyczność przy użyciu tego testu Należy pamiętać w szczególności o trzech krokach, wylęganiu, migracji i zbieraniu. W związku z tym mamy oddzielone inne krewetki i liczby do pracy. Wstępne miejsce to prosty i tani model toksyczności kanału w porównaniu z innymi miejscami, takimi jak hodowla komórkowa lub danio pręgowany.Co więcej, można następnie wykorzystać droższe miejsca cytotoksyczności.

lethality-bioassay-using-artemia-salina-l

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Niniejsza praca dotyczy opracowania i standaryzacji wartościowego protokołu metodycznego służącego do określania długoterminowej (14-dniowej) toksyczności letalnej substancji chemicznych, ścieków przemysłowych lub komunalnych oraz ciekłych próbek środowiskowych wobec słonawodnego skorupiaka Artemia franciscana.

Długoterminowy test toksyczności letalnej z wykorzystaniem skorupiaka Artemia franciscana

Stadia embrionalne są najbardziej podatne na ksenobiotyki. Chociaż toksyczność chemiczna zależy od zasolenia, nie istnieje żadna metoda badania zależności toksyczności dla organizmów wodnych od zasolenia. W tym miejscu opisujemy nową i wysokoprzepustową metodę określania zależności toksyczności zasolenia dla zarodków wodnych.

Test toksyczności nanokoloidów srebra zależny od zasolenia przy użyciu jaj Medaka

Związki zaburzające funkcjonowanie układu hormonalnego (EDC) stanowią poważne zagrożenie dla środowiska wodnego. Miejskie oczyszczalnie ścieków w znacznym stopniu przyczyniają się do estrogenowej siły działania wód powierzchniowych. Przedstawiona w artykule metodologia pozwala na ocenę skuteczności i przydatności procesów oczyszczania ścieków w odniesieniu do usuwania EDC.

Wykorzystanie zestawu metod chemicznych i ekotoksykologicznych do oceny skuteczności procesów oczyszczania ścieków w celu usunięcia siły działania estrogenów

Ta praca opisuje nowy protokół oceny ekotoksyczności zanieczyszczeń, w tym pojawiających się zanieczyszczeń, takich jak nanomateriały, przy użyciu morskiej bakterii Vibrio anguillarum. Metoda ta pozwala na określenie LC50, czyli śmiertelności, stężenia, które powoduje 50% spadek zdolności hodowli bakterii, po 6 godzinach ekspozycji.

Metoda ekotoksykologiczna z bakteriami morskimi Vibrio anguillarum do oceny ostrej toksyczności zanieczyszczeń środowiska

W tej pracy opisujemy ostry, przewlekły i wielopokoleniowy test biologiczny, aby zbadać wpływ pojedynczych i połączonych stresorów na turkusową karpię Nothobranchius furzeri. Protokół ten ma na celu badanie cech historii życia (śmiertelność, wzrost, płodność, waga) i krytycznego maksimum termicznego.

Protokół badania ostrej i przewlekłej ekotoksyczności turkusowej Killifish Nothobranchius furzeri

W tym protokole pokazujemy, jak hodować dorosłe osobniki Astyanax mexicanus, hodować larwy i przeprowadzać immunohistochemię na rybach po larwie, aby porównać fenotypy morfotypów powierzchniowych i jaskiniowych.

Hodowla meksykańskiego Tetra Astyanax mexicanus w celu analizy fenotypów postlarwalnych i immunohistochemii całego wierzchowca

Zarodki danio pręgowanego są używane do oceny toksyczności związków chemicznych. Rozwijają się zewnętrznie i są wrażliwe na chemikalia, co pozwala na wykrycie subtelnych zmian fenotypowych. Eksperyment wymaga jedynie niewielkiej ilości związku, który jest bezpośrednio dodawany do płytki zawierającej zarodki, dzięki czemu system testowy jest wydajny i opłacalny.

Szybka ocena toksyczności związków chemicznych z wykorzystaniem zarodków danio pręgowanego

Ten protokół przedstawia powszechnie stosowane testy cytotoksyczności (testy Alamar Blue [AB], CFDA-AM, Neutral Red i MTT) dostosowane do oceny cytotoksyczności w liniach komórkowych zarodka danio pręgowanego (ZEM2S) i wątroby (ZFL) na 96-dołkowych płytkach.

Testy cytotoksyczności z liniami komórkowymi danio pręgowanego

Opisujemy przebieg pracy systemu badań przesiewowych i analizę danych do oceny toksyczności związków chemicznych na podstawie reakcji na wibracje zarodka danio pręgowanego. System rejestruje ruchy zarodków danio pręgowanego po wystawieniu na bodziec wibracyjny i pozwala na zintegrowaną ocenę ogólnej toksyczności/śmiertelności i toksyczności nerwowo-mięśniowej.

Ocena toksyczności substancji chemicznych za pomocą systemu badań przesiewowych reakcji na drgania danio pręgowanego

Artykuł proponuje nowatorską metodę in vitro do szybkiej i czułej oceny toksyczności i ekotoksyczności zanieczyszczeń, w oparciu o ruchliwość hemocytów Mytilus galloprovincialis. Metoda ta ma na celu przyczynienie się do opracowania bardziej etycznych i czułych badań narażenia toksykologicznego i ekotoksykologicznego.

Test toksykologiczny i ekotoksykologiczny oparty na ruchliwości hemocytów omułka (Mytilus galloprovincialis)

Poznaj biotest śmiertelności Artemia salina do oceny ogólnej toksyczności ekstraktów, frakcji i związków. Ta prosta i ekonomiczna metoda umożliwia przesiewowe badanie próbek przed dalszymi testami.

Test biologiczny śmiertelności przy użyciu Artemia salina L.

Przeglądaj więcej filmów