7 września 2022
Minimalnie inwazyjne techniki i proste urządzenie laboratoryjne poprawiają odtwarzalność modelu uszkodzenia rdzenia kręgowego, zmniejszając uszkodzenia operacyjne u zwierząt doświadczalnych i umożliwiając utrzymanie anatomicznej morfologii. Metoda ta jest opłacalna, ponieważ wiarygodne wyniki i powtarzalna procedura ułatwiają badanie mechanizmów naprawy choroby.
Techniki minimalnie inwazyjne redukują prądy niestabilności, spowodowane nadmiernymi uszkodzeniami fizycznymi. Hodowla w celu precyzyjnej analizy mikrośrodowiska rdzenia kręgowego. Technika ta łączy klasyczną zasadę odstawienia Alana z procedurą operacji z dokładnością w celu ustalenia powtarzalnego modelu uszkodzenia rdzenia kręgowego.
Głównym celem tego protokołu jest zapoznanie się z budową anatomiczną. Co jest łatwiejsze do naśladowania nawet dla drugiego roku, takiego jak ja. Procedurę zademonstruje Xiangchuang Fan A postgraduate ze szpitala Qilu, Zhongze Yuan i Zimeng Yang.
Oboje są studentami Cheeloo College of Medicine na Uniwersytecie Shandong. Aby rozpocząć, należy zmontować platformę z chirurgicznym stołem operacyjnym nad stabilizatorem t-bral i końcówką impaktora. Umieść końcówkę, która pozwala na dokładne zlokalizowanie rdzenia kręgowego w rękawie.
Wybierz odpowiednie masy spadków masy ciała do eksperymentu, które wynoszą 1,3, 2,0 i 2,7 grama odpowiednio dla grupy łagodnej, umiarkowanej i ciężkiej. Podłącz kołek do ciągnięcia w otwory w kropli ciężaru. Zamontuj spadek ciężaru do górnej części tulei za pomocą kołka pociągowego umieszczonego w rowku na ramieniu XYZ, tak aby po zakończeniu ustalania ciężarek został zwolniony w celu uderzenia w końcówkę udaru.
W związku z tym pod mikroskopem obserwuje się przewrót rdzenia kręgowego i zmiany w rdzeniu kręgowym. Połóż mysz w pozycji leżącej w wyznaczonej części stołu operacyjnego. Zbadaj 13. żebro po jednej stronie od części kostnej, pod mikroskopem operacyjnym.
Zbadaj wyrostek kolczysty w linii środkowej, lekko dotykając obszaru kąta żebrowo-rdzeniowego, a następnie w kierunku rostralnego, aby zlokalizować przestrzeń międzykolcową między 12. a 13. kręgiem piersiowym. Zbadaj przestrzeń międzykolcową między 9. a 10. kręgiem piersiowym od przestrzeni 12. i 13. kręgu piersiowego do strony rostralnej. Wypreparuj mięsień przykręgosłupowy wzdłuż wyrostka kolczystego T9 do przednich i tylnych stawów międzywyrostkowych po obu stronach za pomocą mikronożyczek.
Wycofaj mięśnie przykręgosłupowe za pomocą mikro retraktorów i oczyść tkankę miękką na blaszce oraz w przestrzeni międzykolcowej od T8 do T9 i od T9 do T10 za pomocą mikronożyczek. Aby wykonać laminektomię T9, zaciśnij wyrostek kolczysty T9 za pomocą kleszczy mikrochirurgicznych. Lekko uniesione do góry włóż mikronożyczki równolegle, wzdłuż prawej grzbietowej bocznej strony blaszki.
Unikając uszkodzenia rdzenia kręgowego i odetnij blaszkę mikronożyczkami. Powtórz po lewej stronie, a rdzeń kręgowy może zostać odsłonięty. Przed zamocowaniem kręgu poluzuj uniwersalne ramię i powoli zaciskaj stawy międzywyrostkowe od 9 do 10 po obu stronach kręgu za pomocą mikrokleszczyków do komarów stabilizatora kręgów.
Dokręć na mikro kleszczach do komarów, a kręg zostanie w ten sposób ustabilizowany. Dostosuj rdzeń kręgowy do płaszczyzny poziomej. Dokręć ramię uniwersalne, a kręg zostanie zamocowany.
Po odsłonięciu rdzenia kręgowego na poziomie T9 i zamocowaniu kręgu, wyceluj w rdzeń kręgowy za końcówkę wewnątrz rękawa pod mikroskopem operacyjnym. Po zlokalizowaniu przestrzeni międzykolcowej od T12 do T13 należy opuścić tuleję do momentu, aż koniec impaktora będzie zgodny ze znakiem na oknie obserwacyjnym i zostanie osiągnięta określona wysokość 22 milimetrów. Wyciągnij zawleczkę, aby zwolnić ciężar.
Zdejmij impaktor po zakończeniu stłuczenia i obserwuj stopień uszkodzenia rdzenia kręgowego pod mikroskopem operacyjnym. W grupie łagodnej zmianę koloru jasnoczerwonego można zaobserwować w grupie umiarkowanej. Wzrok po urazie staje się ciemnoczerwony w ciągu trzech do czterech sekund i być może można zaobserwować eminencję.
W grupie ciężkiej ciemnoczerwone objawy mogą pojawić się natychmiast i objawia się wyraźna wyniosłość opony twardej, ale opona twarda jest nadal w spójnym kształcie. Obszar zmiany stopniowo znacznie się zwiększał od grupy łagodnej do ciężkiej w pierwszym dniu po urazie. Tymczasem ciągłość istoty białej po obu stronach rdzenia kręgowego była lepsza w grupie łagodnej.
Z obserwowalnymi małymi okrągłymi wakuolami, które są charakterystyczne dla obrzęku śródmiąższowego. W grupie umiarkowanej istota biała wykazywała słabą ciągłość, a struktura brzusznej istoty białej nie była uporządkowana. W grupie ciężkiej brzuszna istota biała wykazywała poważniejsze rozerwanie, a w centrum urazu pojawił się duży obszar jamy.
Dodatkowo otaczająca tkanka wykazywała wyraźne wypełnienie czerwonych krwinek, a czerwone krwinki w pobliżu kanału centralnego zebrały się w paski. Nakładające się na siebie astrocyty tworzące blizny były widoczne w centrum wszystkich trzech grup urazów. Wraz z długością obszaru urazu, zwiększając się wraz z ciężkością urazu, podczas gdy średnica blizny zmniejszała się.
Sugeruje to obecność przykurczu bliznowatego, który może prowadzić do zmniejszenia średnicy rdzenia kręgowego. Usunięcie tkanek miękkich przed i za blaszką w jak największym stopniu ułatwia rozluźnienie blaszki i zapobiega uszkodzeniom rdzenia kręgowego podczas równoległego cięcia. Obecna technika zapewnia model zwierzęcy, który jest prosty, powtarzalny i mniej inwazyjny.
Pourazowe uszkodzenie rdzenia kręgowego, zwłaszcza uraz stłuczenia.
Niniejsze badanie przedstawia nowatorską, małoinwazyjną technikę tworzenia powtarzalnego modelu uszkodzenia rdzenia kręgowego, która skutecznie ogranicza uszkodzenia operacyjne i pozwala na zachowanie morfologii anatomicznej u zwierząt doświadczalnych. Metoda ta zwiększa wiarygodność wyników, ułatwiając tym samym badania nad mechanizmami naprawy w przebiegu choroby.
Mało inwazyjne modele stłuczeniowego urazu rdzenia kręgowego u myszy odpowiadają na krytyczną potrzebę powtarzalności i spójności anatomicznej w przedklinicznych badaniach nad neurotraumą. Poprzez ograniczenie zmienności proceduralnej i uszkodzeń tkanek, podejście to zwiększa pewność prognostyczną w późniejszym screeningu terapeutycznym i badaniach mechanistycznych. Powtarzalność modelu oraz ilościowe stopniowanie urazu wspierają rzetelną walidację celów terapeutycznych i ciągłość translacyjną w procesach odkrywania leków oddziałujących na OUN.
Ten małoinwazyjny model SCI znajduje zastosowanie na etapie pomiędzy wczesnym odkrywaniem a walidacją przedkliniczną, umożliwiając prowadzenie badań opartych na hipotezach oraz screening związków w odtwarzalnych, ilościowych ramach badawczych.