Name: Kontrolowanie frakcji cząstek w mikroporowatych rusztowaniach z wyżarzonymi cząstkami do hodowli komórek 3D (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-28T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Poznaj metodę kontroli frakcji cząstek w mikroporowatych rusztowaniach MAP do hodowli komórek 3D. Technika ta zapewnia powtarzalność właściwości materiałów i odpowiedzi komórkowych w inżynierii tkankowej oraz medycynie regeneracyjnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Narodowym Instytutom Zdrowia, Narodowym Instytutom Zaburzeń Neurologicznych i Udaru Mózgu (1R01NS112940, 1R01NS079691, R01NS094599), oraz Narodowemu Instytutowi Alergii i Chorób Zakaźnych (1R01AI152568). Prace te zostały częściowo wykonane w Duke University Shared Materials Instrumentation Facility (SMIF), członku North Carolina Research Triangle Nanotechnology Network (RTNN), która jest wspierana przez National Science Foundation (numer nagrody ECCS-2025064) w ramach National Nanotechnology Coordinated Infrastructure (NNCI). Autorzy chcieliby podziękować byłemu post-doc laboratorium, dr Lucasowi Schirmerowi, a także Ethanowi Nicklowowi za ich pomoc w generowaniu wydrukowanego w 3D urządzenia do eksperymentów z kulturami komórkowymi.

<ol><li>Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P. O., Di Carlo, D., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+wound+healing+by+injectable+microporous+gel+scaffolds+assembled+from+annealed+building+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Materials%22%5BJournal%5D)">Accelerated wound healing by injectable microporous gel scaffolds assembled from annealed building blocks.</a> Nature Materials. 14 (7), 737-744 (2015).</li>
<li>Daly, A. C., Riley, L., Segura, T., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+microparticles+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Materials%22%5BJournal%5D)">Hydrogel microparticles for biomedical applications.</a> Nature Reviews Materials. 5 (1), 20-43 (2020).</li>
<li>Darling, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click+by+click+Microporous+Annealed+Particle+%28MAP%29+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Click by click Microporous Annealed Particle (MAP) scaffolds.</a> Advanced Healthcare Materials. 9 (10), 1901391(2020).</li>
<li>Truong, N. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+annealed+particle+hydrogel+stiffness%2C+void+space+size%2C+and+adhesion+properties+impact+cell+proliferation%2C+cell+spreading%2C+and+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Microporous annealed particle hydrogel stiffness, void space size, and adhesion properties impact cell proliferation, cell spreading, and gene transfer.</a> Acta Biomaterialia. 94, 160-172 (2020).</li>
<li>Pfaff, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+improved+photoannealing+of+Microporous+Annealed+Particle+%28MAP%29+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Selective and improved photoannealing of Microporous Annealed Particle (MAP) scaffolds.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 7 (2), 422-427 (2021).</li>
<li>Sideris, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+hydrogels+based+on+hyaluronic+acid+building+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Particle hydrogels based on hyaluronic acid building blocks.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 2 (11), 2034-2041 (2016).</li>
<li>Caldwell, A. S., Campbell, G. T., Shekiro, K. M. T., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clickable+microgel+scaffolds+as+platforms+for+3D+cell+encapsulation%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Clickable microgel scaffolds as platforms for 3D cell encapsulation.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (15), 1700254(2017).</li>
<li>Qazi, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+rod-shaped+particles+influence+injectable+granular+hydrogel+properties+and+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Anisotropic rod-shaped particles influence injectable granular hydrogel properties and cell invasion.</a> Advanced Materials. 34 (12), 2109194(2022).</li>
<li>Wilson, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stoichiometric+post+modification+of+hydrogel+microparticles+dictates+neural+stem+cell+fate+in+microporous+annealed+particle+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Stoichiometric post modification of hydrogel microparticles dictates neural stem cell fate in microporous annealed particle scaffolds.</a> Advanced Materials. 34 (33), 2201921(2022).</li>
<li>Muir, V. G., Qazi, T. H., Shan, J., Groll, J., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+microgel+fabrication+technique+on+granular+hydrogel+properties%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Influence of microgel fabrication technique on granular hydrogel properties.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 7 (9), 4269-4281 (2021).</li>
<li>Highley, C. B., Song, K. H., Daly, A. C., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jammed+microgel+inks+for+3D+printing+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Science%22%5BJournal%5D)">Jammed microgel inks for 3D printing applications.</a> Advanced Science. 6 (1), 1801076(2018).</li>
<li>Anderson, A. R., Nicklow, E., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+fraction+as+a+bioactive+cue+in+granular+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Particle fraction as a bioactive cue in granular scaffolds.</a> Acta Biomaterialia. 150, 111-127 (2022).</li>
<li>Pruett, L., Ellis, R., McDermott, M., Roosa, C., Griffin, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+heterogeneous+epidermal+growth+factor+release+from+microporous+annealed+particle+%28MAP%29+hydrogel+for+improved+wound+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Spatially heterogeneous epidermal growth factor release from microporous annealed particle (MAP) hydrogel for improved wound closure.</a> Journal of Materials Chemistry B. 9 (35), 7132-7139 (2021).</li>
<li>Sheikhi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microengineered+emulsion-to-powder+technology+for+the+high-fidelity+preservation+of+molecular%2C+colloidal%2C+and+bulk+properties+of+hydrogel+suspensions%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Polymer+Materials%22%5BJournal%5D)">Microengineered emulsion-to-powder technology for the high-fidelity preservation of molecular, colloidal, and bulk properties of hydrogel suspensions.</a> ACS Applied Polymer Materials. 1 (8), 1935-1941 (2019).</li>
<li>Brower, K., White, A. K., Fordyce, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-step+variable+height+photolithography+for+valved+multilayer+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multi-step variable height photolithography for valved multilayer microfluidic devices.</a> Journal of Visualized Experiments. (119), e55276(2017).</li>
<li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+Magnetic+Resonance+%28NMR%29+Spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+Science+Education+Database.+Organic+Chemistry.+JoVE%22%5BJournal%5D)">Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Spectroscopy.</a> JoVE Science Education Database. Organic Chemistry. JoVE. , Cambridge, MA. (2022).</li>
<li>Roosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+synthesis+of+microgel+building+blocks+for+microporous+annealed+particle+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microfluidic synthesis of microgel building blocks for microporous annealed particle scaffold.</a> Journal of Visualized Experiments. (184), e64119(2022).</li>
<li>Zhang, H., Dicker, K. T., Xu, X., Jia, X., Fox, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interfacial+bioorthogonal+crosslinking%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Letters%22%5BJournal%5D)">Interfacial bioorthogonal crosslinking.</a> ACS Macro Letters. 3 (8), 727-731 (2014).</li>
<li>Welzel, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryogel+micromechanics+unraveled+by+atomic+force+microscopy-based+nanoindentation%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Cryogel micromechanics unraveled by atomic force microscopy-based nanoindentation.</a> Advanced Healthcare Materials. 3 (11), 1849-1853 (2014).</li>
<li>Plieva, F., Huiting, X., Galaev, I. Y., Bergenståhl, B., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroporous+elastic+polyacrylamide+gels+prepared+at+subzero+temperatures%3A+control+of+porous+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Macroporous elastic polyacrylamide gels prepared at subzero temperatures: control of porous structure.</a> Journal of Materials Chemistry. 16 (41), 4065-4073 (2006).</li>
<li>Rommel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+microgel+rods+interlinked+into+soft+macroporous+structures+for+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Science%22%5BJournal%5D)">Functionalized microgel rods interlinked into soft macroporous structures for 3D cell culture.</a> Advanced Science. 9 (10), 2103554(2022).</li>
<li>Kurt, E., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acid+delivery+from+granular+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Nucleic acid delivery from granular hydrogels.</a> Advanced Healthcare Materials. 11 (3), 2101867(2021).</li>
<li>Isaac, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microporous+bio-orthogonally+annealed+particle+hydrogels+for+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Microporous bio-orthogonally annealed particle hydrogels for tissue engineering and regenerative medicine.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 5 (12), 6395-6404 (2019).</li>
<li>Truong, N. F., Lesher-Pérez, S. C., Kurt, E., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathways+governing+polyethylenimine+polyplex+transfection+in+Microporous+Annealed+Particle+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pathways governing polyethylenimine polyplex transfection in Microporous Annealed Particle scaffolds.</a> Bioconjugate Chemistry. 30 (2), 476-486 (2019).</li>
<li>Koh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+in+vivo+delivery+of+stem+cells+using+microporous+annealed+particle+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Enhanced in vivo delivery of stem cells using microporous annealed particle scaffolds.</a> Small. 15 (39), 1903147(2019).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+tissue+formation+through+assembly+of+microgels+containing+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Cartilage tissue formation through assembly of microgels containing mesenchymal stem cells.</a> Acta Biomaterialia. 77, 48-62 (2018).</li>
</ol>

ARA i TS złożyły tymczasowy patent na tę technologię.

Wykazano, że mikroprzepływowa produkcja mikrożeli HA-NB generuje mikrożele o węższym zakresie rozkładu wielkości niż produkcja seryjnaemulsji 3,9. Mikrożele opisane w tym protokole zostały sformułowane przy użyciu rozszczepialnego środka sieciującego MMP (Ac-GCRDGPQGIWGQDRCG-NH2) w celu wsparcia degradacji materiału. Jednak mikrożele HA-NB można również sieciować przy użyciu alternatywnego łącznika di-tiolowego, takiego jak ditiotreitol (DTT), który ni...

Rusztowania z mikroporowatymi cząstkami wyżarzonymi (MAP) to podklasa materiałów ziarnistych, w których bloki budulcowe mikrożelu (μgel) są ze sobą połączone, tworząc masywne, porowate rusztowanie. Dzięki unikalnej mikroarchitekturze tych granulowanych rusztowań, wrodzona porowatość generowana przez pustą przestrzeń między połączonymi sferycznymi mikrożelami wspiera przyspieszoną infiltrację i migrację komórek1. Mikrożelowe elementy budulcowe rusztowań MAP mogą być wytwarzane zarówno z syntetycznych, jak i naturalnych polimerów z modyfikacjami chemicznymi2. Opisane tutaj metody kładą szczególny nacisk na stosowanie mikrożeli składających się ze szkieletu kwasu hialuronowego (HA) zmodyfikowanego funkcjonalnymi uchwytami norbornenu (NB). Funkcjonalny uchwyt NB na polimerze HA wspomaga reakcje chemiczne kliknięcia w celu tworzenia mikrożeli i łączenia ich ze sobą w celu wygenerowania rusztowań MAP3,4. Zastosowano wiele schematów łączenia ze sobą mikrożeli (tj. wyżarzania), takich jak enzymatic1, light-based5,6 i bez dodatków click chemistry3,7 reakcji. W niniejszej pracy opisano chemię kliknięć bez dodatków, wykorzystującą koniugację Dielsa-Aldera na odwrócony popyt elektronowy tetrazyny-norbornenu do łączenia mikrożeli HA-NB.
Aby wytworzyć rusztowania MAP, użytkownicy najpierw generują bloki budulcowe mikrożelu za pomocą odwrotnych emulsji w systemach wsadowych lub w urządzeniach mikroprzepływowych, a także za pomocą natrysku elektrohydrodynamicznego, litografii lub mechanicznej fragmentacji2. Produkcja sferycznych mikrożeli HA-NB została dobrze opisana i wcześniej opisana przy użyciu zarówno emulsji wsadowej2, jak i technik generowania kropel mikroprzepływowych8,9,10,11. W tej pracy sferyczne mikrożele HA-NB zostały wygenerowane na platformie mikroprzepływowej skupiającej przepływ w celu kontrolowania rozmiaru i kształtu, jak opisano wcześniej8,9,10. Po oczyszczeniu mikrożele znajdują się w zawiesinie wodnej i muszą być zagęszczone, aby wywołać stan zakleszczenia. Po zakleszczeniu mikrożele wykazują właściwości rozrzedzające ścinanie, dzięki czemu mogą funkcjonować jako materiały do wstrzykiwań, wypełniające przestrzeń1. Jedną z metod wywołania stanu zakleszczenia jest suszenie mikrożeli poprzez liofilizację lub liofilizację, a następnie ponowne uwodnienie wysuszonego produktu w kontrolowanej objętości12. Alternatywnie, nadmiar buforu można usunąć z zawiesiny mikrożelu poprzez odwirowanie przez sitko lub poprzez ręczne usunięcie buforu z granulki mikrożelu przez aspirację lub przy użyciu materiału absorpcyjnego. Jednak użycie wirowania do suszenia mikrożeli może generować bardzo zmienny zakres frakcji cząstek i frakcji pustych podczas tworzenia rusztowań ziarnistych12. Opisano techniki liofilizacji mikrożeli przy użyciu 70% IPA dla mikrożeli z glikolu polietylenowego (PEG)13, olejów fluorowanych dla mikrożeli żelatynowo-metakryloylowych (GelMa)14 i 70% etanolu dla mikrożeli HA12. Protokół ten przedstawia metody liofilizacji sferycznych mikrożeli HA przy użyciu 70% etanolu, standardowego odczynnika laboratoryjnego, w celu zachowania pierwotnych właściwości mikrożelu podczas procesu suszenia. Liofilizowane mikrożele HA mogą być ważone i ponownie uwodnione z wartościami wagowymi zdefiniowanymi przez użytkownika, aby kontrolować końcowe frakcje cząstek w rusztowaniach MAP12.
Ostatni krok w tworzeniu rusztowania MAP polega na wyżarzaniu mikrożeli w celu stworzenia masywnego, porowatego rusztowania1. Wykorzystując natywne komponenty macierzy zewnątrzkomórkowej i stosując bioortogonalne schematy wyżarzania, rusztowania MAP służą jako biokompatybilna platforma zarówno do hodowli komórkowych in vitro, jak i naprawy tkanek in vivo3. Dzięki tym podejściom, rusztowania MAP mogą być wytwarzane z bloków konstrukcyjnych HA-NB ze zdefiniowanymi przez użytkownika frakcjami cząstek w celu ich zastosowania w zastosowaniach inżynierii tkankowej12. Poniższy protokół opisuje mikroprzepływową produkcję mikrożeli HA-NB, po której następuje liofilizacja i rehydratacja w celu kontrolowania frakcji cząstek w rusztowaniach MAP. Na koniec opisano etapy wyżarzania mikrożeli przy użyciu chemii bioortogonalnej do eksperymentów z hodowlami komórkowymi 3D in vitro.

<table><tbody><tr><td>1 ml strzykawka Luer-Lok sterylna, jednorazowego użytku, poliwęglan</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>5 ml strzykawka Luer-Lok sterylna, jednorazowego użytku, poliwęglan</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 C5 maleimid</td><td>Invitrogen</td><td>A10254</td><td>Do syntezy znakowanej fluorescencyjnie tetrazyny</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A22287</td><td>Do barwienia próbek kultur komórkowych</td></tr><tr><td>Folia aluminiowa</td><td>VWR</td><td>89107-726</td><td></td></tr><tr><td>Dziurkacz do biopsji z tłokiem, 1,0 mm</td><td>Integra Miltex</td><td>69031-01</td><td></td></tr><tr><td>Dziurkacz do biopsji, 4 mm</td><td>Integra Miltex</td><td>33-34</td><td></td></tr><tr><td>igła, 23 G 0,5", niesterylna, z nakrętką</td><td>SAI Infusion Technologies</td><td>B23-50</td><td></td></tr><tr><td>Butelkowy filtr próżniowy, 0,22 &mu; m</td><td>Corning</td><td>CLS430521</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek wapnia</td><td>VWR</td><td>1B1110</td><td>Do buforu do mycia mikrożeli</td></tr><tr><td>Zespoły kapilarno-tłokowe do pipet wyporowych, 1000 &mu; L maksymalna objętość</td><td>Zespoły</td><td></td> kapilarno-tłokowe Rainin 17008609 <td></td></tr><tr><td>do pipet wyporowych, 25 &mu; L maksymalna objętość</td> Zespoły <td></td> kapilarno-tłokowe <td>17008605</td><td></td></tr><tr><td>Rainin do pipet wyporowych, 250 &mu; L maksymalna objętość</td><td>Rainin</td><td>17008608</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka komory do liczenia komórek Countess</td><td>Invitrogen</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL Automatyczny licznik komórek</td><td>Invitrogen</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>Probówka wirówkowa, 15 ml</td><td>CELLTREAT</td><td>667015B</td><td></td></tr><tr><td>Probówka wirówkowa, 50 ml</td><td>CELLTREAT</td><td>229421</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform, klasa ACS, szklana butelka</td><td>Stellar Scientific</td><td>CP-C7304</td><td>Do syntezy znakowanego fluorescencyjnie tetrazyny</td></tr><tr><td>Corona pistoletu plazmowego, BD-10A Generator wysokiej częstotliwości</td><td>ETP</td><td>11011</td><td></td></tr><tr><td>Fiolki CryoTube, polipropylen, gwint wewnętrzny z nakrętką</td><td>Nunc</td><td>368632</td><td></td></tr><tr><td>Mysie komórki mezenchymalne</td><td>D1 ATCC</td><td>CRL-12424</td><td>Przykładowa linia komórkowa do hodowli w żelach MAP</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>Do barwienia próbek kultur komórkowych</td></tr><tr><td>Tlenek deuteru, 99,9% atomu D</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>151882</td><td>Do spektroskopii NMR</td></tr><tr><td>Rurki do dializy, membrana z regenerowanej celulozy, odcięcie masy cząsteczkowej 12-14 kDa</td><td>Spectra/Por</td><td>132703</td><td>Do oczyszczania HA-NB i HA-Tet</td></tr><tr><td>Eter dietylowy</td><td>VWR</td><td>BDH1121-4LPC</td><td>Do syntezy tetrazyny znakowanej fluorescencyjnie</td></tr><tr><td>Dimetyloformamid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>277056</td><td>Do syntezy znakowanego fluorescencyjnie chlorku</td></tr><tr><td>4-(4,6-dimetoksy-1,3,5-triazyno-2-ylo)-4-metylomorfoliniowego tetrazyny (DMTMM)&nbsp;</td><td>TCI-Chemicals</td><td>D2919</td><td>Do modyfikacji HA</td></tr><tr><td>Ditiothreitol (DTT)</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0861</td><td>Niedegradowalny łącznik ditiolu (substytut peptydu rozszczepialnego MMP)</td></tr><tr><td>Zmodyfikowany Eagle's Medium (DMEM) firmy Dulbecco, wysoki poziom glukozy, z 4500 mg / L glukozy, L-glutaminą, pirogronianem sodu i wodorowęglanem sodu, płynny, sterylnie filtrowany, odpowiedni do hodowli komórkowych</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429-500ML</td><td>Dla D1 hodowla komórkowa</td></tr><tr><td>EMS Paraformaldehyd, granulowany</td><td>VWR</td><td>100504-162</td><td>Do wytwarzania 4% absolutu etanolu PFA</td></tr><tr><td>(200 dowodów)</td><td>KOPTEC</td><td>89234-850</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>ATCC</td><td>30-2020</td><td>Do hodowli komórek D1</td></tr><tr><td>Płyta grzewcza</td><td>Kopf Instruments</td> Hemacytometr <td>HP-4M</td><td></td></tr><tr><td>ze szkłem nakrywkowym</td><td>Daigger Scientific</td><td></td><td></td>EF16034F</tr><tr><td>Kwas 2-[4-(2-hydroksyetylo)piperazyno-1-ylo]etanosulfonowy (HEPES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Hialuronian sodu, średnia masa cząsteczkowa 79 kDa, wytwarzany przez bakterie Streptococcus zooepidemicus, klasy farmaceutycznej, zanieczyszczenie mikrobiologiczne < 100 jtk/g, endotoksyny bakteryjne < Do syntezy HA-Tet użyto 0,050 j.m./mg</td><td>Contipro</td><td>N/A</td> o <td>średniej masie cząsteczkowej 79 kDa, ale metody te można dostosować do innych mas cząsteczkowych.</td></tr><tr><td>Pakiet oprogramowania IMARIS Essentials</td><td>Oxford Instruments</td><td>N/A Oprogramowanie</td><td>do analizy obrazów mikroskopowych</td></tr><tr><td>Pompa infuzyjna, podwójna strzykawka</td><td>Chemyx</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Statyw laboratoryjny z uchwytem laboratoryjnym</td><td>Geyer</td><td>212100</td><td></td></tr><tr><td>Ciekły azot</td><td>Airgas</td><td>NI 180LT22</td><td></td></tr><tr><td>Fosforynian fenylo(2,4,6-trimetylobenzoilo)fosfinianu litu</td><td>TCI-Chemicals</td><td>L0290</td><td></td></tr><tr><td>Liofilizator</td><td>Labconco</td><td>N/A</td><td>Labconco FreeZone 6 plus został wycofany z produkcji, ale do tego protokołu można używać innych liofilizatorów konsolowych klasy laboratoryjnej.</td></tr><tr><td>Metylotetrazyna-PEG4-maleimid</td><td>Kerafast</td><td>FCC210</td><td>Do syntezy znakowanego fluorescencyjnie tetrazyny</td></tr><tr><td>Kwas 2-(4-Morfolino)etan sulfonowy (MES)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP300-100</td><td>Do modyfikacji HA</td></tr><tr><td>Szkło nakrywkowe Micro, 24 x 60 mm nr 1</td><td>VWR</td><td>48393-106</td><td></td></tr><tr><td>Urządzenie mikroprzepływowe SU8 wafel główny</td><td>FlowJem</td><td></td><td>Niestandardowy projekt wykonany we własnym zakresie czysty pokój lub zlecany na zewnątrz</td></tr><tr><td>Olej mineralny, ciężki</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330760</td><td></td></tr><tr><td>MMP-rozszczepialny peptyd sieciujący ditiol (Ac-GCRDGPQGIWGQDRCG-NH2)</td><td>GenScript</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>5-norborneno-2-metyloamina</td><td>TCI-Chemicals</td><td>95-10-3</td><td>Do syntezy HA-NB</td></tr><tr><td>Taśma pakowa</td><td>Scotch</td><td>3M 1426</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>PEG(tiol)2</td><td>JenKem Technology USA</td><td>A4001-1</td><td>Do syntezy znakowanej fluorescencyjnie tetrazyny</td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna, 10 000 jednostek/ml</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Do hodowli komórek D1</td></tr><tr><td>szalka Petriego, polistyren, jednorazowe, Średnica x H=150 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443</td><td>Do mycia HMP</td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS) 1x</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>RainX wodoodporna powłoka szklana</td><td>Grainger</td><td>465D20</td><td>Syntetyczny roztwór hydrofobowy do obróbki urządzeń mikroprzepływowych</td></tr><tr><td>Peptyd RGD (Ac-RGDSPGERCG-NH2)</td><td>GenScript</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Gumki</td><td>Zszywki</td><td>112417</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek sodu</td><td>Chem-Impex</td><td>30070</td><td>Do dializy</td></tr><tr><td>Span 80 do syntezy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1338-43-8</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Elastomer silikonowy</td><td>Mikroskopia elektronowa Science</td><td>4019862</td><td>elastomer polidimetylosiloksanu (PDMS) do wytwarzania urządzeń mikroprzepływowych i urządzeń do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>Filtr strzykawkowy, Whatman Uniflo, 0,2 &mu; m PES, średnica 13 mm</td><td>Cytvia</td><td>09-928-066</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop cyfrowy Tetraview LCD</td><td>Celestron</td><td>44347</td><td></td></tr><tr><td>Sól tetrazynoaminowo-aminowa HCl</td><td>Chem-Impex</td><td>35098</td><td>Do syntezy HA-Tet</td></tr><tr><td>Trietyloamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>471283</td><td>Do syntezy znakowanej fluorescencyjnie tetrazyny</td></tr><tr><td>Tris(2-karboksyetylo)fosfiny (TCEP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>51805-45-9</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97063-864</td><td></td></tr><tr><td>Niebieski roztwór trypanu, 0,4%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna EDTA (0,25%), czerwień fenolowa</td><td>Fisher Scientific</td><td>25-200-056</td><td>Do podnoszenia przylegających komórek do nasion w żelach MAP</td></tr><tr><td>Tygon ND-100-80 Non-DEHP Rurki medyczne, Średnica igły=23, Grubość ścianki=0.020 in, Średnica wewnętrzna = 0.020, Zewnętrzna średnica = 0,060 cala</td> Sterownik systemu utwardzania UV <td>Thomas Scientific</td><td>1204G82</td><td></td></tr><tr><td>, LX500 LED&nbsp;</td><td>OmniCure</td><td>010-00369R</td><td></td></tr><tr><td>Głowica utwardzająca UV, punktowy miernik</td> światła UV <td>LED OmniCure</td><td>N/A</td><td></td></tr> UV<tr><td>, identyfikowalny</td><td>VWR</td><td>61161-386</td><td></td></tr><tr><td>Eksykator próżniowy</td><td>Bel-Art</td><td>08-594-15C</td><td></td></tr><tr><td>Precyzyjny nóż uniwersalny X-Acto serii Z</td><td>XZ3601W</td><td></td> <td>Elmer's</td></tr></tbody></table>

kontrolowanie frakcji cząstek w mikroporowatych rusztowaniach z wyżarzonymi cząstkami do hodowli komórek 3d

Controlling Particle Fraction in Microporous Annealed Particle Scaffolds for 3D Cell Culture

Mikrożele są budulcem rusztowań z mikroporowatymi cząstkami wyżarzonymi (MAP), które służą jako platforma zarówno do hodowli komórkowych in vitro, jak i naprawy tkanek in vivo. W tych ziarnistych rusztowaniach wrodzona porowatość generowana przez pustą przestrzeń między mikrożelami umożliwia infiltrację i migrację komórek. Kontrolowanie frakcji pustek i frakcji cząstek ma kluczowe znaczenie dla projektowania rusztowań MAP, ponieważ porowatość jest bioaktywną wskazówką dla komórek. Sferyczne mikrożele mogą być generowane na urządzeniu mikroprzepływowym w celu kontrolowania rozmiaru i kształtu, a następnie liofilizowane przy użyciu metod zapobiegających pękaniu sieci polimerowej. Po ponownym nawodnieniu liofilizowane mikrożele prowadzą do kontrolowanych frakcji cząstek w rusztowaniach MAP. Wdrożenie tych metod liofilizacji mikrożeli doprowadziło do powtarzalnych badań wykazujących wpływ frakcji cząstek na dyfuzję makrocząsteczek i rozprzestrzenianie się komórek. Poniższy protokół obejmie wytwarzanie, liofilizację i rehydratację mikrożeli do kontrolowania frakcji cząstek w rusztowaniach MAP, a także wyżarzanie mikrożeli poprzez bioortogonalne sieciowanie do hodowli komórek 3D in vitro.

Celem tego protokołu jest zademonstrowanie przygotowania rusztowań z mikroporowatymi cząstkami wyżarzonymi (MAP) z bio-ortogonalnym schematem sieciowania, jak również kontrolowanych frakcji cząstek do hodowli komórek 3D. Po pierwsze, kwas hialuronowy zmodyfikowano za pomocą grup wisiorków norbornenu, które miały być stosowane zarówno w tworzeniu mikrożeli, jak i łączeniu w celu utworzenia rusztowań MAP. Korzystając z tych metod, około 31% powtarzających się jednostek HA zostało z powodzeniem zmodyfikowanych za pomocą fun...

Minimalizacja zmienności frakcji cząstek w granulowanych rusztowaniach ułatwia powtarzalne eksperymenty. W pracy opisano metody generowania rusztowań ziarnistych o kontrolowanych frakcjach cząstek do zastosowań w inżynierii tkankowej in vitro.

Kontrolowanie frakcji cząstek w mikroporowatych rusztowaniach z wyżarzonymi cząstkami do hodowli komórek 3D

Microgels are the building blocks of microporous annealed particle (MAP) scaffolds, which serve as a platform for both in vitro cell culture and in vivo ...

Materiały ziarniste, takie jak rusztowania MAP, to porowate materiały iniekcyjne wykonane z połączonych ze sobą mikrocząstek hydrożelu. Kontrolowanie frakcji cząstek ma kluczowe znaczenie dla właściwości materiału i odpowiedzi komórkowych. Zmienne frakcje cząstek w rusztowaniach MAP skutkują szeregiem właściwości rusztowania i odpowiedzi komórek, ale ta technika pozwala użytkownikom zdefiniować końcową frakcję cząstek w tworzonych przez nich rusztowaniach MAP.Rusztowania MAP mogą być używane do wspomagania naprawy i regeneracji złożonych ran, a także do dostarczania leków. Na przykład frakcja cząstek wpływa na szybkość i stopień infiltracji i regeneracji komórek. Metoda ta może być stosowana we wszystkich klasach hydrożeli ziarnistych.Teraz, gdy możemy tworzyć rusztowania MAP z frakcjami cząstek kontrolowanymi przez użytkownika, możemy odtwarzalnie badać bioaktywność tych materiałów i badać unikalne reakcje komórek, takie jak uwięzienie. Konfiguracja generacji mikrożelu mikroprzepływowego wymaga czasu i cierpliwości podczas nauki technik. Najlepiej jest mieć przygotowanych i gotowych wiele urządzeń na wypadek problemów z konfiguracją.Zacznij od mikroprzepływowej produkcji kwasu hialuronowego (HA) i mikrożeli Norbornenu (NB). Przed wysuszeniem mikrożeli należy zważyć kriogeniczną probówkę z nakrętką. Następnie w sterylnym kapturze przenieś umyte i oczyszczone mikrożele do kriobezpiecznej probówki z nakrętką za pomocą pipety wyporowej.Dodaj 70% etanolu do oczyszczonych mikrożeli i dobrze wymieszaj. Odwirować probówkę przez pięć minut przy 5 000 g. Odessać supernatant i dodać 70% etanolu.Dobrze wymieszaj i inkubuj przez noc w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Następnego dnia krótko odwirować, aby upewnić się, że mikrożele znajdują się na dnie probówki. Dodaj ciekły azot do pojemnika kriogenicznego i umieść tubkę z mikrożelami do błyskawicznego zamrożenia.Po pięciu do 10 minutach wyjmij tubkę z mikrożelami za pomocą kleszczyków. Szybko zdejmij nakrętkę i przykryj probówkę chusteczką laboratoryjną. Zabezpiecz tkankę gumką recepturką i przenieś ją do pojemnika lub komory liofilizacji.Załaduj próbkę do liofilizatora zgodnie z instrukcjami producenta i liofilizuj w temperaturze 0,066 Torr i minus 63 stopni Celsjusza. Zważyć liofilizowane mikrożele z probówki przed przechowywaniem ich w temperaturze pokojowej. Zmieszać polidimetylosiloksan lub elastomer PDMS ze środkiem utwardzającym w stosunku 10 do jednego masowo.Wlać mieszaninę PDMS do dużej plastikowej szalki Petriego i odgazowywać w eksykatorze przez 30 minut lub do momentu, gdy wszystkie pęcherzyki znikną. Gdy wszystkie bąbelki znikną, ostrożnie umieść wydrukowaną w 3D formę w PDMS, aby zminimalizować tworzenie się nowych pęcherzyków. Wstaw do piekarnika nagrzanego do 60 stopni Celsjusza na dwie godziny, aby utwardził PDMS.Po utwardzeniu użyj noża lub żyletki, aby delikatnie obrysować obwód urządzenia do hodowli i ostrożnie usuń pleśń. Użyj czteromilimetrowego stempla do biopsji, aby usunąć wszelkie PDMS z dna studzienek. Przytnij urządzenia tak, aby pasowały do szklanego szkiełka nakrywkowego.Użyj taśmy, aby usunąć kurz ze spodu urządzenia do hodowli. Umieść czystą szklaną szkiełko nakrywkowe i urządzenie do hodowli na płycie grzejnej w temperaturze 135 stopni Celsjusza na 15 minut, aby usunąć wilgoć. W dygestorium użyj pistoletu do plazmy koronowej wysoko na szkiełku nakrywkowym i dolnej stronie urządzenia przez 30 sekund.Następnie szybko połącz ze sobą obrabiane powierzchnie. Delikatnie dociśnij, aby zapewnić dobre uszczelnienie między urządzeniem do hodowli a szklanym szkiełkiem nakrywkowym. Umieść urządzenie w piekarniku o temperaturze 60 stopni Celsjusza na noc, aby zabezpieczyć połączenie.Następnego dnia należy przelać urządzenie w autoklawie w celu sterylizacji przed użyciem in vitro. Następnie należy przygotować mikroporowate cząstki wyżarzane lub elementy rusztowania MAP w oparciu o pożądaną frakcję cząstek do hodowli komórkowej w rusztowaniach MAP. Zważ liofilizowane mikrożele, aby określić masę mikrożeli.Następnie rozpuść mikrożele w 84% końcowej objętości MAP pożywki komórkowej w oparciu o wybrany procent wagowy MAP. Pozwól mikrożelom pęcznieć przez 20 minut. Rozpuść kwas hialuronowy lub HA-tetrazynę i pożywkę komórkową w 16% końcowej objętości MAP.Gdy komórki osiągną pożądane zbieganie, podnieś i policz komórki. Przenieś 10 000 komórek na mikrolitr MAP do nowej probówki. Odwirować komórki i odessać supernatant z osadu bez zasysania komórek.Dodaj mikrożele i środek sieciujący do osadu za pomocą pipety wyporowej. Dobrze wymieszaj i wysiew 10 mikrolitrów na dołek. Pipetować okrężnymi ruchami, aby równomiernie rozprowadzić mieszaninę w studzience.Pozwól mikrożelom wyżarzać się w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 25 minut przed dodaniem pożywki komórkowej w celu napełnienia studzienek. Utrzymuj kultury 3D w temperaturze 37 stopni Celsjusza i zmieniaj pożywkę w razie potrzeby. Aby uniknąć zasysania rusztowania, ustabilizuj końcówkę pipety wzdłuż grzbietu górnej studzienki.W żądanych punktach czasowych utrwal próbki, zastępując pożywkę 50 mikrolitrami 4% paraformaldehydu na studzienkę przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Przemyć próbki trzykrotnie 50 mikrolitrami PBS lub preferowanego buforu i przystąpić do immunofluorescencji lub barwienia fluorescencyjnego przy użyciu 50 mikrolitrów na studzienkę jako objętość roboczą. Wykazano, że urządzenia mikroprzepływowe z obszarem skupiającym przepływ wytwarzają mikrożele HA-NB o średnicy 50 lub 100 mikronów.Pożywka do liofilizacji mikrożeli została zoptymalizowana w celu zminimalizowania tworzenia się kriożelu przy użyciu 70% etanolu. Jednak inne media, takie jak alkohol izopropylowy, woda i acetonitryl, mogą być używane zamiennie w celu ułatwienia tworzenia kriożelu. Aby ułatwić bioortogonalne wzajemne łączenie mikrożeli HA-NB, zsyntetyzowano liniowy środek sieciujący HA-tetrazynę.Spektroskopia protonowego NMR wykazuje udaną modyfikację 11% jednostek powtórzeń HA z tetrazynową grupą wiszącą. Wysuszony liofilizowany produkt mikrożelowy został ponownie uwodniony specjalnymi objętościami i wyżarzony w celu uzyskania różnych procentów wagowych preparatów mikrożeli w rusztowaniach MAP. Te procenty wagowe mikrożeli w rusztowaniach MAP odpowiadały unikalnym frakcjom cząstek.Hodowla komórkowa w rusztowaniach MAP jest pokazana tutaj. Komórki w hodowli 3D na rusztowaniach MAP utrwalono w piątym dniu, wybarwiono i zobrazowano pod mikroskopem konfokalnym. Pojedyncze warstwy Z wykazują różnice we wzroście komórek i rusztowaniach zawierających różny procent wagowy MAP.Wybierz odpowiednio pożywki do liofilizacji w zależności od tego, czy chcesz kriobele, czy nie. Nie pomijaj etapów inkubacji, aby mikrożele miały wystarczająco dużo czasu na pęcznienie w pożywce. Standardowe techniki, takie jak mikroskopia, cytometria przepływowa, sekwencjonowanie RNA i inne, mogą być stosowane do oceny odpowiedzi komórek w tych ziarnistych materiałach o określonej porowatości.

controlling-particle-fraction-microporous-annealed-particle-scaffolds

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Przedstawiamy dwa procesy mikrofabrykacji porowatych polimerowych chipów do trójwymiarowej hodowli komórek. Pierwszy z nich to tłoczenie na gorąco w połączeniu z procesem spawania oparami rozpuszczalnika. Drugi wykorzystuje niedawno opracowany proces mikrotermoformowania w połączeniu z technologią śladów jonowych, co prowadzi do znacznego uproszczenia produkcji.

Mikrofabrykacja rusztowań w skali chipa do trójwymiarowej hodowli komórek

Biokompatybilne nanoczujniki zol-żel reagujące na pH mogą być wbudowane w elektrowirowane rusztowania z poli(kwasu mlekowo-ko-glikolowego) (PLGA). Wyprodukowane rusztowania samoraportujące mogą być wykorzystywane do monitorowania warunków mikrośrodowiskowych in situ podczas hodowli komórek na rusztowaniu. Jest to korzystne, ponieważ konstrukt komórkowy 3D może być monitorowany w czasie rzeczywistym bez zakłócania eksperymentu.

Rusztowania samoraportujące do trójwymiarowej hodowli komórkowej

Ten artykuł opisuje szereg ustawień do wysiewu ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych na materiały, w tym przypadku przędze elektroprzędzone, które nie pokrywają podstawy standardowych płytek dołków hodowlanych, aby zmaksymalizować i określić ilościowo liczbę komórek, które początkowo się przyczepiają, w porównaniu do znanej gęstości wysiewu.

Optymalizacja mocowania ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych do przędz elektroprzędzonych z poli(ε-kaprolaktonu)

Postępy w technologiach biomateriałów umożliwiają rozwój trójwymiarowych konstruktów wielokomórkowych. Opracowaliśmy protokoły elektroprzędzenia w celu wytworzenia trzech pojedynczych rusztowań do hodowli głównych komórek strukturalnych dróg oddechowych, aby zapewnić model 3D in vitro ściany oskrzelików dróg oddechowych.

Dostosowanie procesu elektroprzędzenia w celu zapewnienia trzech unikalnych środowisk dla trójwarstwowego modelu ściany dróg oddechowych in vitro

Tutaj prezentujemy protokół uzyskiwania systemów hodowli 3D w samoorganizujących się rusztowaniach peptydowych, aby promować różnicowanie odróżnicowanych ludzkich chondrocytów stawowych w tkankę podobną do chrząstki.

Hodowla komórek ssaków w trójwymiarowych rusztowaniach peptydowych

Przedstawiamy procedurę kontrolowania początkowego kształtu klastra komórkowego w trójwymiarowej matrycy zewnątrzkomórkowej w celu uzyskania powtarzalnego formowania wzoru. Sześcienne urządzenie zawierające dwa różne hydrożele jest wykorzystywane do uzyskania wielokierunkowego obrazowania w celu tworzenia wzoru tkankowego.

Wstępna kontrola klastrów komórkowych 3D w hybrydowym urządzeniu do tworzenia sześcianów żelowych w celu tworzenia powtarzalnych wzorów

Mikrożelowe pręty z komplementarnymi grupami reaktywnymi są produkowane za pomocą mikrofluidyki z możliwością łączenia się w roztworze wodnym. Anizometryczne mikrożele zacinają się i łączą w stabilne konstrukcje z większymi porami w porównaniu z systemami sferycznymi. Mikrożele modyfikowane za pomocą GRGDS-PC tworzą makroporowate konstrukcje 3D, które można wykorzystać do hodowli komórkowych.

Połączone makroporowate rusztowania 3D z prętów mikrożelowych

Ten protokół opisuje zestaw metod syntezy mikrożelowych bloków budulcowych dla mikroporowatych rusztowań z wyżarzonymi cząstkami, które mogą być używane do różnych zastosowań medycyny regeneracyjnej.

Synteza mikroprzepływowa mikrożelowych bloków budulcowych do rusztowania cząstek wyżarzonych mikroporowato

Niniejsza praca szczegółowo opisuje przygotowanie trójwymiarowych (3D) rusztowań fibrynowych do hodowli i różnicowania pluripotencjalnych komórek macierzystych. Takie rusztowania mogą być wykorzystywane do badania wpływu różnych związków biologicznych na zachowanie komórek macierzystych, a także modyfikowane w celu włączenia systemów dostarczania leków.

Przygotowanie trójwymiarowych rusztowań fibrynowych do zastosowań w hodowli komórek macierzystych

Prędkość obrazowania mikrocząstek (μPIV) służy do wizualizacji sparowanych obrazów mikrocząstek zasianych w przepływie krwi, które są skorelowane krzyżowo, aby uzyskać dokładny profil prędkości.  Na podstawie tych pomiarów można uzyskać szybkość ścinania, prędkość maksymalną, kształt profilu prędkości i natężenie przepływu, z których każdy ma zastosowania kliniczne.

Obrazowa prędkość mikrocząstek do pomiarów profilu prędkości mikroprzepływów krwi

Poznaj metodę kontroli frakcji cząstek w mikroporowatych rusztowaniach MAP do hodowli komórek 3D. Technika ta zapewnia powtarzalność właściwości materiałów i odpowiedzi komórkowych w inżynierii tkankowej oraz medycynie regeneracyjnej.

Kontrolowanie frakcji cząstek w mikroporowatych rusztowaniach z wyżarzonymi cząstkami do hodowli komórek 3D

Przeglądaj więcej filmów