Name: Testowanie immunoterapeutyków przeciwnowotworowych w humanizowanym modelu mysim z ludzkimi nowotworami (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-16T13:50:00.000+00:00
Duration: 15 min 24 s
Description: Poznaj generowanie myszy HIS do badań immuno-onkologicznych z ludzkimi nowotworami. Ta metoda umożliwia ocenę immunoterapii w modelu z ludzkim układem odpornościowym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować zarówno Animal Research Facility (OLAR) za opiekę nad naszymi myszami, jak i Flow Cytometry Shared Resource wspieranemu przez Cancer Center Support Grant (P30CA046934) w naszym instytucie za ich ogromną pomoc we wszystkich naszych pracach. Wyrażamy również uznanie zarówno dla Gail Eckhardt, jak i Anny Capasso za naszą inauguracyjną współpracę w zakresie badań nad immunoterapiami ludzkimi PDX w naszym modelu HIS-BRGS. Badanie to było częściowo wspierane przez National Institutes of Health P30CA06934 Cancer Center Support Grant z wykorzystaniem PHISM (Pre-clinical Human Immune System Mouse Models) Shared Resource, RRID: SCR_021990 i Wspólny zasób cytometrii przepływowej, RRID: SCR_022035. Badania te były częściowo wspierane przez NIAID Narodowych Instytutów Zdrowia na podstawie umowy o numerze 75N93020C00058.

<ol><li>Chulpanova, D. S., Kitaeva, K. V., Rutland, C. S., Rizvanov, A. A., Solovyeva, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+tumor+models+for+advanced+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Mouse tumor models for advanced cancer immunotherapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4118(2020).</li>
<li>Olson, B., Li, Y., Lin, Y., Liu, E. T., Patnaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+cancer+immunotherapy+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Mouse models for cancer immunotherapy research.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1358-1365 (2018).</li>
<li>Marin-Jimenez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+cancer+immunotherapy+in+a+human+immune+system+mouse+model%3A+correlating+treatment+responses+to+human+chimerism%2C+therapeutic+variables+and+immune+cell+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Testing cancer immunotherapy in a human immune system mouse model: correlating treatment responses to human chimerism, therapeutic variables and immune cell phenotypes.</a> Frontiers in Immunology. 12, 607282(2021).</li>
<li>Yin, L., Wang, X. J., Chen, D. X., Liu, X. N., Wang, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+model%3A+a+review+on+preclinical+applications+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse model: a review on preclinical applications for cancer immunotherapy.</a> American Journal of Cancer Research. 10 (12), 4568-4584 (2020).</li>
<li>Cogels, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+as+a+valuable+pre-clinical+model+for+cancer+immunotherapy+research%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Humanized mice as a valuable pre-clinical model for cancer immunotherapy research.</a> Frontiers in Oncology. 11, 784947(2021).</li>
<li>Jin, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+humanized+mouse+with+patient-derived+xenografts+for+cancer+immunotherapy+studies%3A+A+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Development of humanized mouse with patient-derived xenografts for cancer immunotherapy studies: A comprehensive review.</a> Cancer Science. 112 (7), 2592-2606 (2021).</li>
<li>Capasso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+immune+responses+to+anti-PD-1+mono+and+combination+immunotherapy+in+hematopoietic+humanized+mice+implanted+with+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Characterization of immune responses to anti-PD-1 mono and combination immunotherapy in hematopoietic humanized mice implanted with tumor xenografts.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 7 (1), 37(2019).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+in+studying+efficacy+and+mechanisms+of+PD-1-targeted+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Humanized mice in studying efficacy and mechanisms of PD-1-targeted cancer immunotherapy.</a> The FASEB Journal. 32 (3), 1537-1549 (2018).</li>
<li>Yong, K. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+as+a+tool+to+predict+immunotoxicity+of+human+biologics%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse as a tool to predict immunotoxicity of human biologics.</a> Frontiers in Immunology. 11, 553362(2020).</li>
<li>Shen, H. W., Jiang, X. L., Gonzalez, F. J., Yu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+transgenic+mouse+models+for+drug+metabolism+and+pharmacokinetic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Humanized transgenic mouse models for drug metabolism and pharmacokinetic research.</a> Current Drug Metabolism. 12 (10), 997-1006 (2011).</li>
<li>Bosma, G. C., Custer, R. P., Bosma, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+severe+combined+immunodeficiency+mutation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A severe combined immunodeficiency mutation in the mouse.</a> Nature. 301 (5900), 527-530 (1983).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+in+innate+and+adaptive+immunologic+function+in+NOD%2FLtSz-scid+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice.</a> The Journal of Immunology. 154 (1), 180-191 (1995).</li>
<li>Legrand, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+CD47%2Fsignal+regulatory+protein+alpha+%28SIRP%28alpha%29%29+interaction+is+required+for+optimal+human+T-+and+natural+killer-+%28NK%29+cell+homeostasis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Functional CD47/signal regulatory protein alpha (SIRP(alpha)) interaction is required for optimal human T- and natural killer- (NK) cell homeostasis in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 108 (32), 13224-13229 (2011).</li>
<li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD%2FSCID%2FIL2+receptor+%7Bgamma%7D+chain%28null%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD%2FSCID%2Fgamma%28c%29%28null%29+mouse%3A+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD%2FLtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> The Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li>
<li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+human+adaptive+immune+system+in+cord+blood+cell-transplanted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Development of a human adaptive immune system in cord blood cell-transplanted mice.</a> Science. 304 (5667), 104-107 (2004).</li>
<li>Theocharides, A. P., Rongvaux, A., Fritsch, K., Flavell, R. A., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+hemato-lymphoid+system+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Humanized hemato-lymphoid system mice.</a> Haematologica. 101 (1), 5-19 (2016).</li>
<li>Goldman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+human+cell+engraftment+in+mice+deficient+in+RAG2+and+the+common+cytokine+receptor+gamma+chain%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Enhanced human cell engraftment in mice deficient in RAG2 and the common cytokine receptor gamma chain.</a> British Journal of Haematology. 103 (2), 335-342 (1998).</li>
<li>Stripecke, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations%2C+challenges%2C+and+minimal+information+for+standardization+of+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Innovations, challenges, and minimal information for standardization of humanized mice.</a> EMBO Molecular Medicine. 12 (7), (2020).</li>
<li>Allen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+immune+system+mouse+models%3A+progress%2C+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized immune system mouse models: progress, challenges and opportunities.</a> Nature Immunology. 20 (7), 770-774 (2019).</li>
<li>Gammelgaard, O. L., Terp, M. G., Preiss, B., Ditzel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cancer+evolution+in+the+context+of+a+human+immune+system+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Human cancer evolution in the context of a human immune system in mice.</a> Molecular Oncology. 12 (10), 1797-1810 (2018).</li>
<li>Rios-Doria, J., Stevens, C., Maddage, C., Lasky, K., Koblish, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+cancer+xenografts+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Characterization of human cancer xenografts in humanized mice.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 8 (1), 000416(2020).</li>
<li>Gombash Lampe, S. E., Kaspar, B. K., Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+injections+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intravenous injections in neonatal mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52037(2014).</li>
<li>Lang, J., Weiss, N., Freed, B. M., Torres, R. M., Pelanda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+hematopoietic+humanized+mice+in+the+newborn+BALB%2Fc-Rag2null+Il2r%CE%B3null+mouse+model%3A+a+multivariable+optimization+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Generation of hematopoietic humanized mice in the newborn BALB/c-Rag2null Il2rγnull mouse model: a multivariable optimization approach.</a> Clinical Immunology. 140 (1), 102-116 (2011).</li>
<li>Laskowski, T. J., Hazen, A. L., Collazo, R. S., Haviland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rigor+and+reproducibility+of+cytometry+practices+for+immuno-oncology%3A+a+multifaceted+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Rigor and reproducibility of cytometry practices for immuno-oncology: a multifaceted challenge.</a> Cytometry Part A. 97 (2), 116-125 (2020).</li>
<li>Bagby, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+maintenance+of+a+preclinical+patient+derived+tumor+xenograft+model+for+the+investigation+of+novel+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Development and maintenance of a preclinical patient derived tumor xenograft model for the investigation of novel anti-cancer therapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54393(2016).</li>
<li>Laajala, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+design+and+analysis+of+preclinical+intervention+studies+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optimized design and analysis of preclinical intervention studies in vivo.</a> Scientific Reports. 6, 30723(2016).</li>
<li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors%3A+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996(2020).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RX-5902%2C+a+novel+beta-catenin+modulator%2C+potentiates+the+efficacy+of+immune+checkpoint+inhibitors+in+preclinical+models+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">RX-5902, a novel beta-catenin modulator, potentiates the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical models of triple-negative breast cancer.</a> BMC Cancer. 20 (1), 1063(2020).</li>
<li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+adrenocortical+cancer+humanized+mouse+model+to+characterize+anti-PD1+effects+on+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Development of an adrenocortical cancer humanized mouse model to characterize anti-PD1 effects on tumor microenvironment.</a> The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 105 (1), 26-42 (2020).</li>
<li>Lang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+lymphocyte+reconstitution+in+a+humanized+mouse+model+reveal+a+requirement+of+T+cells+for+human+B+cell+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Studies of lymphocyte reconstitution in a humanized mouse model reveal a requirement of T cells for human B cell maturation.</a> The Journal of Immunology. 190 (5), 2090-2101 (2013).</li>
<li>Katano, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD-Rag2null+IL-2R%CE%B3null+mice%3A+an+alternative+to+NOG+mice+for+generation+of+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animalas%22%5BJournal%5D)">NOD-Rag2null IL-2Rγnull mice: an alternative to NOG mice for generation of humanized mice.</a> Experimental Animalas. 63 (3), 321-330 (2014).</li>
<li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+for+establishing+humanized+mouse+models+to+study+human+immunity%3A+analysis+of+human+hematopoietic+stem+cell+engraftment+in+three+immunodeficient+strains+of+mice+bearing+the+IL2r%CE%B3%28null%29+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Parameters for establishing humanized mouse models to study human immunity: analysis of human hematopoietic stem cell engraftment in three immunodeficient strains of mice bearing the IL2rγ(null) mutation.</a> Clinical Immunology. 135 (1), 84-98 (2010).</li>
<li>Hasgur, S., Aryee, K. E., Shultz, L. D., Greiner, D. L., Brehm, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+immunodeficient+mice+bearing+human+immune+systems+by+the+engraftment+of+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation of immunodeficient mice bearing human immune systems by the engraftment of hematopoietic stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1438, 67-78 (2016).</li>
<li>Andre, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+human+CD34%2B+stem+cell-engrafted+nonobese+diabetic%2FSCID%2FIL-2R%CE%B3null+mice+show+impaired+CD8%2B+T+cell+maintenance+and+a+functional+arrest+of+immature+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Long-term human CD34+ stem cell-engrafted nonobese diabetic/SCID/IL-2Rγnull mice show impaired CD8+ T cell maintenance and a functional arrest of immature NK cells.</a> The Journal of Immunology. 185 (5), 2710-2720 (2010).</li>
<li>Wunderlich, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+multilineage+human+hematopoietic+reconstitution+and+function+in+NSGS+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Improved multilineage human hematopoietic reconstitution and function in NSGS mice.</a> PLoS One. 13 (12), 0209034(2018).</li>
<li>Lee, J., Brehm, M. A., Greiner, D., Shultz, L. D., Kornfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engrafted+human+cells+generate+adaptive+immune+responses+to+Mycobacterium+bovis+BCG+infection+in+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunology%22%5BJournal%5D)">Engrafted human cells generate adaptive immune responses to Mycobacterium bovis BCG infection in humanized mice.</a> BMC Immunology. 14, 53(2013).</li>
<li>Masse-Ranson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+thymopoiesis+and+improved+T-cell+responses+in+HLA-A2%2F-DR2+transgenic+BRGS-based+human+immune+system+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accelerated thymopoiesis and improved T-cell responses in HLA-A2/-DR2 transgenic BRGS-based human immune system mice.</a> European Journal of Immunology. 49 (6), 954-965 (2019).</li>
<li>Oswald, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+infiltration+pattern+in+non-small+cell+lung+cancer+PDX+models+is+a+model+immanent+feature+and+correlates+with+a+distinct+molecular+and+phenotypic+make-up%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+for+Immunotherapy+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune cell infiltration pattern in non-small cell lung cancer PDX models is a model immanent feature and correlates with a distinct molecular and phenotypic make-up.</a> Journal for Immunotherapy of Cancer. 10 (4), 004412(2022).</li>
</ol>

W ciągu ostatnich 6 lat, wykorzystując naszą wiedzę zarówno w dziedzinie immunologii, jak i humanizacji myszy, nasz zespół badawczy opracował bardzo potrzebny model przedkliniczny do testowania immunoterapii na różnych nowotworach ludzkich 3,7,30,31. Protokół ten kładzie nacisk na uwzględnienie zmienności modelu, ze szczególnym uwzględnieniem populacji ludzkich limfocytów T skoncentrowanych na ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated from:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)
to:
Jordi M. Lanis1 
Matthew S. Lewis1 
Hannah Strassburger1 
Kristina Larsen1 
Stacey M. Bagby2 
Adrian T. A. Dominguez2 
Juan A. Mar&#237;n-Jim&#233;nez3 
Roberta Pelanda1 
Todd M. Pitts2 
Julie Lang1 
1Department of Immunology and Microbiology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
2Division of Oncology, School of Medicine, University of Colorado Denver Anschutz Medical Campus 
3Department of Medical Oncology, Catalan Institute of Oncology (ICO-L&#8217;Hospitalet)

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/64606">Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Modele raka myszy są ważne dla ustalenia podstawowych mechanizmów wzrostu guza i ucieczki immunologicznej. Jednak badania nad leczeniem raka na modelach mysich przyniosły skończoną translację do kliniki ze względu na ograniczone modele syngeniczne i różnice specyficzne dla gatunku1,2. Pojawienie się terapii immunologicznych jako dominującego podejścia do kontroli nowotworów ponownie podkreśliło potrzebę stworzenia modelu in vivo z funkcjonalnym ludzkim układem odpornościowym. Postępy u myszy z ludzkim układem odpornościowym (myszy HIS) w ciągu ostatniej dekady umożliwiły badanie immunoonkologii in vivo w wielu różnych typach nowotworów i środkach immunoterapeutycznych3,4,5,6. Ludzkie modele nowotworów, w tym ksenoprzeszczepy pochodzące od linii komórkowych i pacjentów (odpowiednio CDX i PDX), rosną dobrze u myszy HIS i w większości przypadków są prawie identyczne z ich wzrostem u gospodarza z niedoborem odporności, który nie ma ludzkiego wszczepienia krwiotwórczego7,8. Opierając się na tym kluczowym odkryciu, naukowcy wykorzystali mysi model HIS do badania immunoterapii u ludzi, w tym terapii skojarzonych mających na celu zmianę mikrośrodowiska guza (TME) w celu zmniejszenia immunosupresji, a tym samym zwiększenia ukierunkowanego immunologicznie zabijania guza. Te modele przedkliniczne pomagają rozwiązać problemy związane z heterogenicznością nowotworów u ludzi, a także mogą przewidywać powodzenie leczenia, a także monitorować toksyczność leków związanych z odpornością9,10.
Produkcja modelu myszy z ludzkim układem odpornościowym poprzez wprowadzenie ludzkich hematopoetycznych komórek macierzystych wymaga mysz z niedoborem odporności, która nie odrzuci ksenoprzeszczepu. Obecne mysie modele HIS pochodzą ze szczepów myszy z niedoborem odporności, które zostały zgłoszone ponad 30 lat temu. Pierwszym opisanym szczepem myszy z niedoborem odporności były myszy SCID, które nie miały limfocytów T i B11, a następnie hybrydowy NOD-SCID z polimorfizmem SIRPα odpowiedzialnym za tolerancję makrofagów myszy na komórki ludzkie, ze względu na zwiększone wiązanie allelu NOD SIRPα z ludzką cząsteczką CD4712,13. Na początku 2000 roku delecja wspólnego łańcucha gamma receptora IL-2 (IL-2Rγc) zarówno w szczepach BALB/c, jak i NOD z niedoborem odporności była przełomem dla ulepszonego wszczepienia człowieka, ze względu na delecje genetyczne uniemożliwiające rozwój komórek NK gospodarza14,15,16,17. Alternatywne modele, takie jak myszy BRG i NRG, osiągają niedobór limfocytów T i B poprzez delecję genu Rag1 lub Rag2, wymaganego do rearanżacji genów receptora komórek T i B, a tym samym dojrzewania i przeżycia limfocytów18,19. Użyta w tym artykule mysz BRGS (BALB/c -Rag2nullIl2RγCnullSirpαNOD) łączy niedobór łańcucha IL-2Rγ i allel NOD SIRPα na tle Rag2-/-, w wyniku czego mysz z wysokim niedoborem odporności bez komórek T, B lub NK, ale z wystarczającą energią i zdrowiem, aby umożliwić długotrwałe wszczepienie trwające ponad 30 tygodni13.
myszy HIS mogą być generowane na wiele sposobów, przy czym wstrzyknięcie PBMC przez człowieka jest najbardziej bezpośrednią metodą15,18,20. Jednak myszy te mają wyraźną ekspansję aktywowanych ludzkich limfocytów T, co powoduje chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD) w wieku 12 tygodni, co uniemożliwia długotrwałe badania. Alternatywnie, ludzkie hematopoetyczne komórki macierzyste z krwi pępowinowej (CB), szpiku kostnego i wątroby płodu mogą być również wykorzystywane do wszczepienia i produkcji ludzkiego układu odpornościowego de novo. W tym systemie hematopoetyczne komórki macierzyste wytwarzają wieloliniowy ludzki układ odpornościowy z generacją T, B i wrodzonych komórek odpornościowych, które są co ważniejsze tolerancyjne wobec mysiego gospodarza, w porównaniu z myszami PBMC, które rozwijają głównie limfocyty T. W związku z tym GVHD jest nieobecny lub znacznie opóźniony, a badania można rozszerzyć na myszy w wieku do 10 miesięcy. CB zapewnia łatwe, dostępne i nieinwazyjne źródło ludzkich hematopoetycznych komórek macierzystych CD34+, które ułatwia wszczepienie wielu myszy HIS z genetycznie identycznym układem odpornościowym17,18,20,21. W ciągu ostatnich kilku lat mysie modele HIS były szeroko wykorzystywane do badania immunoterapii i TME3,4,5,6. Pomimo rozwoju układu odpornościowego pochodzenia ludzkiego u tych myszy, ludzkie guzy ksenoprzeszczepu rosną w podobnym tempie w porównaniu z myszami kontrolnymi z niedoborem odporności i pozwalają na złożoną interakcję między komórkami rakowymi a komórkami odpornościowymi, co jest ważne dla utrzymania mikrośrodowiska wszczepionego PDX3,7,8. Protokół ten został wykorzystany do przeprowadzenia ponad 50 badań testujących leczenie myszy HIS-BRGS z PDX i CDX. Ważnym wnioskiem jest to, że ludzkie nowotwory u myszy HIS zachowują swoje unikalne TME, zgodnie z definicją molekularną oceny guza w stosunku do początkowej próbki pacjenta i charakterystyki nacieku immunologicznego3,22,23. Nasza grupa koncentruje się na dogłębnej ocenie HIS zarówno w narządach odpornościowych, jak i w guzie za pomocą wieloparametrowej cytometrii przepływowej. W niniejszym artykule opisujemy protokół humanizacji myszy BRGS, oceny chimeryzmu, implantacji ludzkich guzów, pomiarów wzrostu guza, podawania leczenia raka oraz analizy komórek HIS za pomocą cytometrii przepływowej.

<table><tbody><tr><td>Strzykawka 1 ml z igłami</td><td>McKesson</td><td>1031815</td><td></td></tr><tr><td>probówka 15 ml</td><td>Grenier Bio-One</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>2-merkaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>50 ml</td><td>probówki Grenier Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>AutoMACS Pro Separator</td><td>Miltenyi</td><td>130-092-545</td><td></td></tr><tr><td>BD Golgi Stop Inhibitor transportu białek z monenzyna</td><td>BD Bioscience</td><td>BDB563792</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1600100</td><td></td></tr><tr><td>Cell Stim</td><td>Cocktail Life Technologies</td><td>509305</td><td></td></tr><tr><td>Chill 15 Rack</td><td>Miltenyi</td><td>130-092-952</td><td></td></tr><tr><td>Pipety szklane z bawełnianą zatyczką</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-8B</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex Ekstrakt z membrany podstawnej</td><td>R&;D Systemy</td><td>363200502</td><td></td></tr><tr><td>Cytek Aurora</td><td>Cytek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma</td><td>9003-98-9</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience FoxP3/Zestaw do barwienia czynnika transkrypcyjnego</td><td>Invitrogen</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>Embrionalne komórki macierzyste FCS</td><td>Gibco</td><td>10439001</td><td></td></tr><tr><td>probówki Eppendorf; objętość 1,5 ml</td><td>Grenier Bio-One</td><td>616201</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Benchmark</td><td>100-106 500mL</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll Hypaque</td><td>GE Healthcare</td><td>45001752</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze - drobne</td><td>Roboz Surgical&nbsp;</td><td>RS5045</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze normalne</td><td>Dumont</td><td>RS4919</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd</td><td>Fisher</td><td>F75P1GAL</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka z matowego szkła</td><td>Corning</td><td>1255310</td><td></td></tr><tr><td>Gentlemacs C-Tubes</td><td>Miltenyi&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>Dysocjator GentleMACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>pipety szklane</td><td>DWK Nauki Przyrodnicze</td><td>63A53</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>HBSS z Ca i Mg</td><td>Sigma</td><td>55037C</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Corning</td><td>MT25060CI</td><td></td></tr><tr><td>IgG standard</td><td>Sigma</td><td>I2511</td><td></td></tr><tr><td>IgM standard</td><td>Sigma</td><td>401108</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440053</td><td></td></tr><tr><td>Liberase DL</td><td>Roche</td><td>5466202001</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Fixable Blue</td><td>Thermo</td><td>L23105</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Gibco</td><td>1140050</td><td></td></tr><tr><td>mysz anty-ludzka IgG-AP</td><td>Southern Biotech</td><td>JDC-10</td><td></td></tr><tr><td>mysz anty-ludzka IgG-nienabeled</td><td>Southern Biotech</td><td>H2</td><td></td></tr><tr><td>mysz anty-ludzka IgM-AP</td><td>Southern Biotech</td><td>UHB</td><td></td></tr><tr><td>mysz anty-ludzka IgM-nieoznakowana</td><td>Southern Biotech</td><td>SA-DA4</td><td></td></tr><tr><td>MultiRad 350</td><td>Precision X-Ray</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>45000-446</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Szalki Petriego</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>Podłoże p-nitrofenylowe</td><td>Thermo</td><td>34045</td><td></td></tr><tr><td>PRISM</td><td>Graphpad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rec Hu FLT3L</td><td>R& Systemy D</td><td>308-FK-005/CF</td><td></td></tr><tr><td>Rec Hu IL6</td><td>R& Systemy D</td><td>206-IL-010/CF</td><td></td></tr><tr><td>Rec Hu SCF</td><td>R& Systemy D</td><td>255SC010</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Corning</td><td>45000-39</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma</td><td>8047-15-2</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>McKesson</td><td>862945</td><td></td></tr><tr><td>Pipety serologiczne 25 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>1367811</td><td></td></tr><tr><td>Sterylny filtr</td><td>Nalgene</td><td>567-0020</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna woda</td> <td>molekularnaSigma</td><td>7732-18-5</td><td></td></tr><tr><td>Analizator komórek Yeti</td><td>Bio-Rad</td><td>12004279</td><td></td></tr><tr><td>Zombie Green</td><td>biolegend</td><td>423112</td><td></td></tr></tbody></table>

testowanie immunoterapeutyków przeciwnowotworowych w humanizowanym modelu mysim z ludzkimi nowotworami

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Odwrócenie immunosupresyjnego charakteru mikrośrodowiska guza jest kluczowe dla skutecznego leczenia nowotworów za pomocą leków immunoterapeutycznych. Mysie modele raka są bardzo ograniczone pod względem różnorodności i cierpią z powodu słabego przełożenia na praktykę kliniczną. Aby służyć jako bardziej fizjologiczny model przedkliniczny dla badań nad immunoterapią, protokół ten został opracowany w celu oceny leczenia ludzkich nowotworów u myszy odtworzonej z ludzkim układem odpornościowym. Ten unikalny protokół demonstruje rozwój ludzkiego układu odpornościowego (HIS, "humanizowany") myszy, po którym następuje implantacja ludzkiego guza, ksenoprzeszczepu pochodzącego z linii komórkowej (CDX) lub ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta (PDX). Myszy HIS są generowane przez wstrzyknięcie ludzkich hematopoetycznych komórek macierzystych CD34 + wyizolowanych z krwi pępowinowej noworodkom BRGS (BALB / c Rag2-/- IL2RγC-/- NODSIRPα) o wysokim niedoborze odporności, które są również zdolne do zaakceptowania guza ksenogenicznego. Podkreślono znaczenie kinetyki i charakterystyki rozwoju ludzkiego układu odpornościowego i implantacji nowotworu. Na koniec opisano dogłębną ocenę mikrośrodowiska guza za pomocą cytometrii przepływowej. W licznych badaniach z wykorzystaniem tego protokołu stwierdzono, że mikrośrodowisko guza poszczególnych guzów jest rekapitulowane u myszy HIS-PDX; "Gorące" guzy wykazują dużą infiltrację immunologiczną, podczas gdy "zimne" guzy nie. Model ten służy jako poligon doświadczalny dla immunoterapii skojarzonych dla szerokiego zakresu nowotworów u ludzi i stanowi ważne narzędzie w dążeniu do medycyny spersonalizowanej.

Zgodnie z protokołem guza podskórnego i harmonogramem eksperymentalnym (Rysunek 1), badano wzrost guza oraz odpowiedź immunologiczną na terapię skojarzoną z zastosowaniem celowanego inhibitora kinazy tyrozynowej (TKI) i niwolumabu w dwóch różnych modelach PDX raka jelita grubego (CRC) pochodzenia ludzkiego. Leki TKI były badane u gospodarzy z niedoborem odporności w celu oceny wyłącznie wzrostu guza29. Niniejszy model umożliwił badanie zmian w odpowiedzi immunologiczn...

Ten protokół opisuje generowanie myszy z ludzkim układem odpornościowym (HIS) do badań immunoonkologicznych. Przedstawiono instrukcje i rozważania dotyczące stosowania tego modelu do testowania ludzkich immunoterapeutyków na ludzkich nowotworach wszczepionych w tym modelu z naciskiem na scharakteryzowanie odpowiedzi ludzkiego układu odpornościowego na guz.

Testowanie immunoterapeutyków przeciwnowotworowych w humanizowanym modelu mysim z ludzkimi nowotworami

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

Protokół ten określa generację myszy z ludzkim układem odpornościowym lub HIS do przedklinicznych badań immunoonkologicznych. Modele raka myszy mają ograniczoną różnorodność i słabo przekładają się na praktykę kliniczną. Technika ta służy jako model przedkliniczny dla badań immunoterapii poprzez ocenę leczenia nowotworów u ludzi u myszy z ludzkim układem odpornościowym.Humanizowany model myszy może być wykorzystany do badania wielu aspektów ludzkiej immunologii, w tym odpowiedzi na wiele infekcji lub nowotworów ludzkiego układu odpornościowego. Uzyskanie wiarygodnego i solidnego źródła krwi pępowinowej i utrzymanie zdrowia kolonii myszy z niedoborem odporności może być wyzwaniem. Niezbędna jest wiedza specjalistyczna w zakresie cytometrii przepływowej i analizy immunologicznej.Procedurę zademonstruje Kristina Larsen, specjalistka ds. usług badawczych z mojego laboratorium. Na początek ponownie zawieś CD34-dodatni osad komórkowy wyizolowany z krwi pępowinowej w 300 mikrolitrach bufora magnetycznego separatora komórek na jeden razy 10 do ósmych komórek. Dodaj 100 mikrolitrów odczynnika blokującego FCR na jeden razy 10 do ósmych komórek, a następnie 100 mikrolitrów CD34-dodatnich kulek magnetycznych na jeden razy 10 do ósmych komórek i inkubuj w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez 30 minut.Następnie dodaj pięć mililitrów bufora separatora magnetycznego na jeden raz 10 do ósmych komórek i wiruj z prędkością 360 g przez 10 minut w czterech stopniach Celsjusza. Powtórzyć etap płukania i ponownie zawiesić osad w 500 mikrolitrach na 100 milionów komórek bufora magnetycznego separatora komórek w 15-mililitrowej stożkowej probówce oznaczonej jako niefrakcjonowana. Oznacz dwie kolejne 15-mililitrowe probówki CD34-ujemne i CD34-dodatnie Umieść trzy probówki na stojaku chłodzącym.Oddziel komórki za pomocą dwukolumnowego programu selekcji pozytywnej na automatycznym magnetycznym separatorze komórek w komorze bezpieczeństwa biologicznego. Następnie, w celu ekspansji i zamrożenia ludzkich komórek macierzystych CD34-dodatnich, przygotuj krew pępowinową lub pożywkę CB, jak opisano w manuskrypcie, i przepuść przez filtr 0,22 mikrona. Ponownie zawiesić komórki CD34-dodatnie w temperaturze 100 000 na mililitr pożywki CB i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza.W trzecim dniu dodać do kolby równą objętość pożywki CB bez cytokin. Piątego dnia zbierz rozszerzone komórki CD34-dodatnie. Odpipetować zawiesinę komórek w górę iw dół i zebrać w stożkowej probówce o pojemności 50 mililitrów.Dodać tyle podłoża CB, aby pokryć dno kolby. Za pomocą skrobaka do komórek zeskrobać całe dno kolby. Zbierz wszystkie podłoża do tej samej 50-mililitrowej probówki i odwiruj.Ponownie zawiesić komórki w dwóch mililitrach pożywki CB i odwirować. Zassać pożywkę do osadu i ponownie zawiesić osad w podłożu zamrażającym. Następnie rozpocznij przygotowanie komórek CD34-dodatnich trzy godziny po napromieniowaniu szczeniąt.Podgrzej 10 mililitrów pożywki CB w 50-mililitrowej tubce. Pobrać jedną fiolkę z ekspandowanymi i zamrożonymi komórkami CD34-dodatnimi in vitro na każde cztery do sześciu szczeniąt do wstrzyknięcia. Szybko rozmrozić w temperaturze od 50 do 55 stopni Celsjusza, aż będzie widoczna tylko niewielka ilość lodu, a następnie dodaj komórki do podgrzanej pożywki CB.Użyj jednego mililitra pożywki do przepłukania każdej fiolki i wiruj komórki w temperaturze 360 g przez 12 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Ostrożnie zassać pożywkę. Ponownie zawiesić osad w dwóch mililitrach pożywki CB i policzyć komórki.Ponownie odwirować komórki, odessać pożywkę i ponownie zawiesić osad w 100 mikrolitrach sterylnego PBS na n plus jedno młode do wstrzyknięcia, co daje 250 000 do 450 000 komórek CD34-dodatnich na mysz. W celu izolacji PBMC od krwi myszy wymieszaj heparynę krwi, delikatnie pipetując w górę iw dół, a następnie powoli nakładaj na 500 mikrolitrów gradientu gęstości 1,077 grama na mililitr, uważając, aby nie zakłócić interfejsu. Odwirować probówkę o masie 1,220 g przez 20 minut w temperaturze pokojowej bez przerw.Usuń jak najwięcej komórek z kożucha za pomocą pipety o pojemności 200 mikrolitrów i dodaj do nowej 1,5-mililitrowej probówki zawierającej 750 mikrolitrów pożywki do pożywki. Wirować przy 360 g przez 11 minut. Zassać pożywkę do 50 mikrolitrów i ponownie zawiesić granulat w 750 mikrolitrach pożywki do zbioru.Uzyskać dane dla 100 mikrolitrów każdej próbki na cytometrze przepływowym. Następnie zaimportuj plik fcs do oprogramowania do edycji danych przepływu i zastosuj bramkę wielokątną do wykresu FSC-A i SSC-A. Zmień osie na FSC-A lub FSC-H i zabramuj komórki na przekątnej liniowej, z wyłączeniem dubletów wystających z linii.Zaznacz te komórki i zmień osie na hCD45 i mCD45. Zastosuj bramkę wielokątną do populacji hCD45-dodatniej i zastosuj nazwę człowiek. Zastosuj bramkę wielokątną do populacji mCD45-dodatniej i zastosuj nazwę mysz.Utwórz statystykę zliczania dla populacji ludzi i myszy. Następnie wybierz populację ludzką i zmień osie na CD19 i CD3. Zastosuj bramkę wielokątną do komórek CD19-dodatnich i nazwij je komórkami B.Zastosuj bramkę wielokątną do populacji CD3-dodatniej i nazwij ją limfocytami T. Następnie zastosuj bramkę wielokątną do populacji podwójnie ujemnej i nadaj jej nazwę non-TB. Wybierz populację limfocytów T i zmień osie na CD4 i CD3.Zastosuj bramkę wielokątną do populacji CD4-dodatniej i nazwij ją CD4-dodatnią. Zastosuj bramkę wielokątną do populacji CD4-ujemnej i nadaj jej nazwę CD8. Wybierz populację inną niż gruźlica i zmień osie na CD56 i szpikową.Zastosuj bramkę wielokątną do całkowitej populacji CD56-dodatniej i nazwij ją komórkami NK. Następnie zastosuj bramkę wielokątną do populacji CD56-ujemnej i mieloidalnej i nazwij ją mieloidalną. Utwórz tabelę ze statystykami procentowymi i liczbowymi wszystkich populacji, a następnie wyeksportuj ją do arkusza kalkulacyjnego.Oblicz procentowy chimeryzm hCD45 za pomocą wskazanego wzoru. Po wyhodowaniu komórek nowotworowych u myszy i podaniu leczenia farmakologicznego, należy pobrać tkanki. Umieść mysz na piankowej desce do wycinki z kołkami, aby utrzymać ją na miejscu, a ręce i nogi wyprostować pod kątem 45 stopni.Wykonaj nacięcie na środku tułowia, zaczynając w pobliżu miednicy i rozciągając się do podbródka. Pociągnij skórę do krawędzi i przytrzymaj ją na miejscu za pomocą szpilek. Usuń węzły chłonne za pomocą cienkich kleszczy w kolejności pachowej, szyjnej, krezkowej, pachwinowej i rozworu przełykowego.Umieść węzły chłonne po jednej stronie szkiełka z matowego szkła na szalce Petriego w ośmiu mililitrach pożywki do zbioru. Trzymając szkiełka pod prostopadłymi kątami z matowymi krawędziami do wewnątrz, delikatnie dociśnij tkanki, aż zawartość komórkowa zostanie uwolniona. Przepłucz szkiełko kilka razy, rozsuwając je i złączając razem, aby uwolnić maksymalną liczbę komórek.Zbierz komórki za pomocą pięciocalowej szklanej pipety i przefiltruj je przez dziewięciocalową pipetę z bawełnianą zatyczką do oznaczonej stożkowej probówki o pojemności 15 mililitrów. Następnie wydobądź guz z otwartego boku, przytrzymując guz kleszczami, jednocześnie powoli tnąc brzegi guza nożyczkami preparacyjnymi. Zważ guz i usuń 1/4 guza w celu przetwarzania RNA i immunohistochemii.Umieść pozostałe 3/4 guza w sześciocentymetrowym naczyniu i zmiel go na milimetrowe kawałki za pomocą ostrza skalpela. Przenieś kawałki guza do rurki dysocjacyjnej. Następnie opłucz naczynie niekompletnym podłożem TIL i dodaj je do probówki.Dodaj preparat kolagenazy i dysocjuj tkankę za pomocą dysocjacji mechanicznej w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut do jednej godziny. Przełóż zawiesinę przez filtr 100 mikronów do stożkowej rurki o pojemności 50 mililitrów i przepłucz filtr 10 mililitrami kompletnego podłoża TIL. Odwirować i ponownie zawiesić osad w wystarczającej ilości podłoża do zbioru z DNazą, aby zawiesina komórek mogła łatwo przejść przez końcówkę pipety P1000 i zarejestrować objętość do dalszej analizy.W PDX CRC 307P leczenie skojarzone spowolniło wzrost guza, co określono na podstawie objętości wzrostu guza w czasie, masy guza i specyficznego tempa wzrostu. PDX CRC 307M testowany na innej kohorcie myszy był mniej dotknięty tym samym leczeniem skojarzonym u myszy HIS BRGS. Opierając się na ogólnym chimeryzmie ludzkim hCD45-dodatnim i ludzkim hCD3-dodatnim komórek T we krwi przed implantacją guza, oba parametry wzrosły w obwodowym układzie odpornościowym i TIL w połączeniu z leczonymi myszami z CRC 307P, ale nie w modelu CRC 307M.Badanie ludzkich limfocytów T ujawniło więcej aktywowanych limfocytów T w guzach CRC 307P, ale nie limfę od myszy leczonych skojarzono. Ponadto było więcej komórek T CD8-dodatnich pamięci efektorowej i mniej limfocytów T TIM-3-dodatnich w skojarzonych guzach CRC 307P. Natomiast w modelu CRC 307M różnica ta nie została zauważona.Ponadto nie zaobserwowano zmian w częstości występowania populacji cytotoksycznych komórek T wśród myszy leczonych skojarzonie, chociaż wyższe cytotoksyczne limfocyty T obserwowano u myszy nieleczonych. Leczenie skojarzone nie wpłynęło na częstość występowania limfocytów Treg ani w narządach limfatycznych CRC 307P, ani w guzach, chociaż dane dotyczące CRC 307M wykazały tendencję do zmniejszania się limfocytów Treg. Zmiany immunologiczne w komórkach nowotworowych zostały podwyższone za pomocą cytometrii przepływowej.Zwiększoną ekspresję MHC klasy I i klasy II zaobserwowano na komórkach nowotworowych CRC 307P wyciętych z myszy HIS BRGS leczonych skojarzonie. W modelu CRC 307M to samo leczenie farmakologiczne indukowało ekspresję HLA klasy II na komórkach nowotworowych. Podobnie, leczenie skojarzone spowodowało zwiększoną ekspresję PD-L1 na komórkach nowotworowych CRC 307P z dodatnim wynikiem EpCAM.Na koniec zbadano korelacje odpowiedzi immunologicznej ze wzrostem guza. Zwiększona liczba limfocytów T CD4-dodatnich wykazała istotną korelację z mniejszym wzrostem guza, a dokładniej z HLA-DR-dodatnimi aktywowanymi limfocytami T w skojarzonych myszach HIS. Sterylna technika podczas izolowania komórek CD34-dodatnich, ponieważ myszy mają skrajny niedobór odporności.Wynikający z tego chimeryzm jest zmienny w obrębie dawców krwi pępowinowej i między nimi, a limfocyty T mają największą zmienność. Można wykonywać nieograniczone kombinacje immunoterapii, a także badania kinetyczne mechanistyczne i dawkowanie leków, na przykład delecję limfocytów T CD8 w celu potwierdzenia ich roli. Co ważne, można również badać toksyczność związaną z lekami.W ramach projektu stworzono bardziej odpowiedni i dostępny model przedkliniczny do testowania immunoterapii stosowanych u ludzi w celu ich zastosowania w praktyce klinicznej. Obecnie prowadzonych jest kilka badań klinicznych opartych na tych danych.

testing-cancer-immunotherapeutics-humanized-mouse-model-bearing-human

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

W niniejszym opracowaniu opisano generowanie i charakterystykę limfocytów T specyficznych dla nowotworu z wykorzystaniem myszy humanizowanych. Tkanka grasicy człowieka oraz genetycznie zmodyfikowane ludzkie komórki macierzyste krwi są przeszczepiane myszom z niedoborem odporności. Prowadzi to do rekonstrukcji zmodyfikowanego ludzkiego układu odpornościowego, co umożliwia badanie odpowiedzi immunologicznej przeciwnowotworowej in vivo.

Wykorzystanie humanizowanych myszy BLT jako modelu nowotworowego w genoterapii opartej na komórkach macierzystych

Ten film demonstruje test do generowania humanizowanego modelu myszy ksenoprzeszczepu. Myszom z obniżoną odpornością wstrzykuje się cyklofosfamid, aby spowodować wyczerpanie komórek odpornościowych. Komórki nowotworowe pochodzące od pacjenta zmieszane z ludzkimi komórkami jednojądrzastymi krwi obwodowej (PBMC) w hydrożelu są wstrzykiwane podskórnie myszy, tworząc guz z naciekającymi limfocytami T.

Technika generowania ludzkiego, humanizowanego modelu myszy ksenoprzeszczepu wszczepionego w PBMC

Ten film demonstruje test szczepienia nowotworów na bazie komórek. Mysz, której śródskórnie wstrzyknięto komórki czerniaka B16-F10 w celu powstania guza, jest szczepiona komórkami B16-F10 wydzielającymi cytokinę Flt3L w pobliżu rozwiniętego guza. Wydzielany Flt3L ze szczepionki wspomaga dojrzewanie i proliferację komórek dendrytycznych, które następnie prezentują antygeny nowotworowe limfocytom T w węzłach chłonnych, wywołując ukierunkowaną przeciwnowotworową odpowiedź immunologiczną.

Implantacja guza i wstrzyknięcie szczepionki przeciwnowotworowej w modelu mysim

Model raka pęcherza moczowego wywołanego N-butylo-N-(4-hydroksybutylo)nitrozoaminą został opracowany u transgenicznych myszy ludzkich mucyny 1 (MUC1) w celu przetestowania immunoterapii ukierunkowanej na MUC1.  Po podaniu szczepionki peptydowej ukierunkowanej na MUC1 potwierdzono odpowiedź cytotoksycznych limfocytów T na MUC1 poprzez pomiar poziomu cytokin w surowicy i aktywności specyficznej dla limfocytów T.

Indukcja inwazyjnego raka przejściowokomórkowego pęcherza moczowego u nienaruszonych immunologicznie ludzkich myszy transgenicznych MUC1: model rozwoju immunoterapii

Ten protokół opisuje powstawanie mysich ortotopowych guzów pęcherza moczowego u samic myszy C57BL/6J oraz monitorowanie wzrostu guza.

Mysi ortotopowy model guza pęcherza moczowego i system wykrywania guzów

Opisujemy ludzką komórkę jednojądrzastą krwi obwodowej (PBMC) — humanizowany model myszy ksenoprzeszczepu do translacyjnych badań immunoonkologicznych. Protokół ten może służyć jako ogólna wskazówka do ustanawiania i charakteryzowania podobnych modeli oceny terapii I-O.

Humanizowany model ksenoprzeszczepu z ludzkimi komórkami jednojądrzastymi krwi obwodowej (PBMC) do badań immunoonkologicznych translacyjnych (I-O)

Opisane tutaj są trzy eksperymentalne podejścia do badania dynamiki infekcji HIV u humanizowanych myszy. Pierwsza z nich pozwala na badanie przewlekłych zdarzeń infekcyjnych, podczas gdy dwie ostatnie pozwalają na badanie ostrych zdarzeń po pierwotnym zakażeniu lub reaktywacji wirusa.

Przewlekłe, ostre i reaktywowane zakażenie wirusem HIV w humanizowanych modelach myszy z niedoborem odporności

Tutaj prezentujemy protokół przeszczepu guza do charakterystyki limfocytów naciekanych nowotworem w modelu guza myszy w intruzie naturalnym i pochodzącym z obwodu limfocytach. Specyficzne śledzenie napływu komórek odpornościowych pochodzących od biorcy za pomocą cytometrii przepływowej ujawnia dynamikę zmian fenotypowych i funkcjonalnych tych komórek podczas przeciwnowotworowych odpowiedzi immunologicznych.

Przeszczep guza w celu oceny dynamiki limfocytów T CD8 + naciekających nowotwór u myszy

Tutaj opisujemy protokół, w którym model ksenoprzeszczepu uzyskany od pacjenta z ostrą białaczką limfoblastyczną jest używany jako strategia oceny i monitorowania toksyczności związanej z receptorem chimerycznego antygenu T ukierunkowanym na CD19.

Ocena toksyczności związanej z chimerycznym receptorem antygenowym limfocytów T przy użyciu mysiego modelu ksenoprzeszczepu pobranego od pacjenta z ostrą białaczką limfoblastyczną

Procedura ortotopowego wszczepienia komórek raka trzustki z ekspresją białka zielonej fluorescencji (PANC-1 GFP) do trzustki myszy Balb-c Ola Hsd-Fox1nu w celu oceny progresji guza i przerzutów jest przedstawiona tutaj.

Fluorescencyjny ortotopowy model raka trzustki u myszy

Poznaj generowanie myszy HIS do badań immuno-onkologicznych z ludzkimi nowotworami. Ta metoda umożliwia ocenę immunoterapii w modelu z ludzkim układem odpornościowym.

Testowanie immunoterapeutyków przeciwnowotworowych w humanizowanym modelu mysim z ludzkimi nowotworami

Przeglądaj więcej filmów