Name: Generowanie szczurów z niedoczynnością przytarczyc za pomocą przytarczyc wspomaganej nanocząstkami węgla (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 57 s
Description: Poznaj metodę generowania modelu szczura z niedoczynnością przytarczyc przy użyciu nanocząstek węgla. Technika umożliwia precyzyjne usunięcie przytarczyc bez uszkodzenia tarczycy i pozwala badać homeostazę jonów mineralnych oraz skuteczność terapii analogami PTH.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez grant NSFC 81800928, finansowanie badań przez West China School/Hospital of Stomatology Sichuan University (No. RCDWJS2021-1) oraz grant Państwowego Kluczowego Laboratorium Chorób Jamy Ustnej SKLOD-R013.

To badanie zostało zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Państwowym Kluczowym Laboratorium Chorób Jamy Ustnej, Uniwersytet Syczuański. Przed eksperymentem uzyskano pozwolenie od odpowiednich lokalnych agencji. Do niniejszego badania wykorzystano osiem 8-10 tygodniowych samców szczurów Sprague-Dawley (SD) o średniej wadze 200-250 g. Zwierzęta zostały pozyskane ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów). Pokarm i wodę dostarczano ad libitum przez cały okres doświadczalny.
1. Przedoperacyjne przygotowanie do generacji szczurów PTX wspomaganych nanocząstkami węgla
<ol>
	<li>Znieczulenie 8-10-tygodniowych szczurów za pomocą inhalacji izofluranu w ilości 2,0%-2,5%, a następnie wstrzyknięcia dootrzewnowego (i.p.) tribromoetanolu w stężeniu 10 ml / kg masy ciała. Zagwarantować wystarczającą głębokość znieczulenia, badając brak odruchu świetlnego źrenicy. Użyj maści weterynaryjnej na oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia. 
	UWAGA: Szczury w wieku 8-10 tygodni są rozpoznawane jako dorosłe szczury. Jednak ta metoda modelowania może być stosowana u szczurów w wieku 7 dni.</li>
	<li>Przygotuj znieczulone szczury SD do operacji, goląc sierść brzusznej części szyi w pozycji leżącej. Zdezynfekować obszar operacyjny za pomocą wacików powidonowo-jodowych (patrz Tabela Materiałów).</li>
	<li>Przykryj zwierzę obłożeniami chirurgicznymi (patrz Tabela materiałów) i odsłoń obszar operacyjny, dążąc do zminimalizowania zanieczyszczenia mikrobiologicznego.</li>
</ol>
2. Paratyreoidektomia (PTX)
<ol>
	<li>Zacznij od punktu środkowego między dwoma uszami i wytnij 2 cm nacięcie wzdłużnie w kierunku ogona za pomocą skalpela chirurgicznego. Wypreparuj kolejno powięź i warstwę tłuszczową za pomocą ostrych, zakrzywionych, ząbkowanych kleszczy.</li>
	<li>Oddziel mięśnie przytchawicze i odsłoń tchawicę za pomocą stosunkowo kleszczy pod mikroskopem stereoskopowym w powiększeniu 4x-5x.</li>
	<li>Zlokalizuj lewy i prawy płat tarczycy w kształcie motyla z boku tchawicy.</li>
	<li>Wstrzyknąć 1 μl zawiesiny nanocząstek węgla (patrz tabela materiałów) pod błonę tarczycy za pomocą strzykawki o pojemności 10 μl ze igłą ze ściętym skosem 30 G. Po 5 minutach przepłukać obszar operacyjny solą fizjologiczną, aby oczyścić dodatkową zawiesinę nanocząstek węgla pokrywającą błonę tarczycy. 
	UWAGA: Zalecanym punktem wstrzyknięcia jest mezjalna część płata tarczycy, która ma mniej naczyń krwionośnych. Zawiesina nanocząstek węgla jest powszechnie stosowana w chirurgii tarczycy ze względu na jej zdolność do wykrywania węzłów chłonnych. Zabarwienie tarczycy i pozostawienie przytarczyc niezabarwionych ułatwia identyfikację tych ostatnich.</li>
	<li>Sprawdź, czy tarczyca staje się, podczas gdy przytarczyce pozostają niezabarwione w ciągu ~5 minut. Obserwuj podświetlone przytarczyce w zwykłym świetle, używając światła mikroskopu stereoskopowego lub lampy stołowej. 
	UWAGA: Zazwyczaj gryzonie mają dwa przytarczyce w kształcie kropli znajdujące się na lewej i prawej powierzchni tarczycy. Czasami dodatkowe przytarczyce mogą znajdować się dalej.</li>
	<li>Precyzyjnie wytnij niezabarwione przytarczyce za pomocą kleszczy i nożyczek mikrochirurgicznych. Użyj sterylnych wacików do hemostazy lub gąbki żelatynowej w przypadku większego krwawienia.</li>
	<li>Zamknij mięśnie, warstwy tłuszczu i skórę, warstwa po warstwie, przerywanym poziomym szwem materaca za pomocą szwów poliglaktynowych 910 6-0 (patrz Tabela materiałów).</li>
	<li>W przypadku grupy pozorowanej należy wykonać wszystkie etapy przygotowania przedoperacyjnego i PTX z wyjątkiem kroku 2.6. Znieczulij szczury i oddziel tkanki nad tchawicą. Zlokalizuj przytarczyce, ale ich nie usuwaj. Przeprowadź rekonwalescencję pooperacyjną i obserwację razem ze szczurami z grupy PTX.</li>
</ol>
3. Rekonwalescencja pooperacyjna i obserwacja
<ol>
	<li>Po zabiegu należy umieścić szczury na termostatycznym kocu elektrycznym (37 °C), aby utrzymać temperaturę ciała. Chlorowodorek buprenorfiny w dawce 0,01 mg/kg należy wstrzykiwać podskórnie (s.c.) co 12 godzin jako środek przeciwbólowy pooperacyjny. Przenieś szczury do sterylnej klatki, gdy zaczną się poruszać i próbować się czołgać. </li>
	<li>Uważnie obserwuj szczury po operacji przez 2 godziny. Wróć szczury do pomieszczenia hodowlanego, obserwuj je rutynowo i rejestruj ich stan.</li>
	<li>Pobrać 10 μl krwi z żyły ogonowej 7 dni po zabiegu. Zmierz stężenie Ca2+ w surowicy, liczbę Pi w surowicy i PTH w surowicy za pomocą odpowiednich zestawów komercyjnych (patrz tabela materiałów). Udana paratyreoidektomia powoduje zmniejszenie stężenia zjonizowanego Ca2 + poziom 2 SD w surowicy niższe niż u szczurów operowanych pozorami (9,00 mmol/L, n = 16). 
	UWAGA: Do analizy statystycznej użyto oprogramowania statystycznego i do tworzenia wykresów (patrz Spis materiałów). Test t Studenta został wykorzystany do porównania parametrów surowicy i moczu między grupami pozorowanymi i PTX. p < 0,05 uznano za statystycznie istotne. Stężenie Ca2+ i Pi w surowicy i moczu oraz mocznik i kreatyninę w surowicy mierzono za pomocą zestawów komercyjnych zgodnie z instrukcjami producenta (patrz tabela materiałów). Stężenie C-telopeptydu kolagenu typu I i osteokalcyny w surowicy mierzono za pomocą dostępnych na rynku zestawów ELISA (patrz tabela materiałów).</li>
</ol>

<ol><li>Bilezikian, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoparathyroidism+in+the+adult%3A+Epidemiology%2C+diagnosis%2C+pathophysiology%2C+target-organ+involvement%2C+treatment%2C+and+challenges+for+future+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Hypoparathyroidism in the adult: Epidemiology, diagnosis, pathophysiology, target-organ involvement, treatment, and challenges for future research.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (10), 2317-2337 (2011).</li>
<li>Bilezikian, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Hypoparathyroidism.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 105 (6), 1722-1736 (2020).</li>
<li>Underbjerg, L., Sikjaer, T., Mosekilde, L., Rejnmark, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsurgical+hypoparathyroidism-Risk+of+fractures%2C+psychiatric+diseases%2C+cancer%2C+cataract%2C+and+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Postsurgical hypoparathyroidism-Risk of fractures, psychiatric diseases, cancer, cataract, and infections.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 29 (11), 2504-2510 (2014).</li>
<li>Underbjerg, L., Sikjaer, T., Mosekilde, L., Rejnmark, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+nonsurgical+hypoparathyroidism+in+Denmark%3A+A+nationwide+case+finding+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of nonsurgical hypoparathyroidism in Denmark: A nationwide case finding study.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 30 (9), 1738-1744 (2015).</li>
<li>Astor, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+health-related+quality+of+life+in+hypoparathyroidism+in+Norway%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and health-related quality of life in hypoparathyroidism in Norway.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 101 (8), 3045-3053 (2016).</li>
<li>Rodriguez-Ortiz, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+deficiency+reduces+circulating+levels+of+FGF23%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Calcium deficiency reduces circulating levels of FGF23.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 23 (7), 1190-1197 (2012).</li>
<li>Davies, B. M., Gordon, A. H., Mussett, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+plasma+calcium+assay+for+parathyroid+hormone%2C+using+parathyroidectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A plasma calcium assay for parathyroid hormone, using parathyroidectomized rats.</a> The Journal of Physiology. 125 (2), 383-395 (1954).</li>
<li>Clarke, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+diagnosis+of+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and diagnosis of hypoparathyroidism.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 101 (6), 2284-2299 (2016).</li>
<li>Liu, Y., Shan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expert+consensus+on+diagnosis+and+treatment+for+elderly+with+thyroid+diseases+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Medicine%22%5BJournal%5D)">Expert consensus on diagnosis and treatment for elderly with thyroid diseases in China.</a> Aging Medicine. 4 (2), 70-92 (2021).</li>
<li>Sulejmanovic, M., Cickusic, A. J., Salkic, S., Bousbija, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Annual+incidence+of+thyroid+disease+in+patients+who+first+time+visit+department+for+thyroid+diseases+in+Tuzla+Canton%5BTitle%5D)+AND+%22Materia+Socio-Medica%22%5BJournal%5D)">Annual incidence of thyroid disease in patients who first time visit department for thyroid diseases in Tuzla Canton.</a> Materia Socio-Medica. 31 (2), 130-134 (2019).</li>
<li>Liao, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+fibroblast+growth+factor+23+and+biochemical+and+bone+histomorphometric+alterations+in+a+chronic+kidney+disease+rat+model+undergoing+parathyroidectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Relationship between fibroblast growth factor 23 and biochemical and bone histomorphometric alterations in a chronic kidney disease rat model undergoing parathyroidectomy.</a> PloS One. 10 (7), 0133278(2015).</li>
<li>Russell, P. S., Gittes, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+transplants+in+rats%3A+A+comparison+of+their+survival+time+with+that+of+skin+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Parathyroid transplants in rats: A comparison of their survival time with that of skin grafts.</a> The Journal of Experimental Medicine. 109 (6), 571-588 (1959).</li>
<li>Sakai, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+development+in+immobilized+bone+is+suppressed+by+parathyroidectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Osteoclast development in immobilized bone is suppressed by parathyroidectomy in mice.</a> Journal of Bone and Mineral Metabolism. 23 (1), 8-14 (2005).</li>
<li>Bi, R., Fan, Y., Luo, E., Yuan, Q., Mannstadt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+techniques+to+create+hypoparathyroid+mice%3A+parathyroidectomy+using+GFP+glands+and+diphtheria-toxin-mediated+parathyroid+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Two techniques to create hypoparathyroid mice: parathyroidectomy using GFP glands and diphtheria-toxin-mediated parathyroid ablation.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55010(2017).</li>
<li>Bi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-+and+GFP-based+mouse+models+of+acquired+hypoparathyroidism+and+treatment+with+a+long-acting+parathyroid+hormone+analog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin- and GFP-based mouse models of acquired hypoparathyroidism and treatment with a long-acting parathyroid hormone analog.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 31 (5), 975-984 (2016).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanoparticles+suspension+injection+for+photothermal+therapy+of+xenografted+human+thyroid+carcinoma+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22MedComm%22%5BJournal%5D)">Carbon nanoparticles suspension injection for photothermal therapy of xenografted human thyroid carcinoma in vivo.</a> MedComm. 1 (2), 202-210 (2020).</li>
<li>Zhang, R. J., Chen, Y. L., Deng, X., Yang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanoparticles+for+thyroidectomy+and+central+lymph+node+dissection+for+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Surgeon%22%5BJournal%5D)">Carbon nanoparticles for thyroidectomy and central lymph node dissection for thyroid cancer.</a> The American Surgeon. , (2022).</li>
<li>Long, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+carbon+nanoparticle+lymphatic+tracer+protected+parathyroid+glands+during+radical+thyroidectomy+for+papillary+thyroid+non-microcarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Innovation%22%5BJournal%5D)">A carbon nanoparticle lymphatic tracer protected parathyroid glands during radical thyroidectomy for papillary thyroid non-microcarcinoma.</a> Surgical Innovation. 24 (1), 29-34 (2017).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+long-term+universal+salt+iodization+on+thyroid+disorders%3A+Epidemiological+evidence+from+31+provinces+of+mainland+China%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of long-term universal salt iodization on thyroid disorders: Epidemiological evidence from 31 provinces of mainland China.</a> Thyroid. 30 (4), 568-579 (2020).</li>
<li>Powers, J., Joy, K., Ruscio, A., Lagast, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+incidence+of+hypoparathyroidism+in+the+United+States+using+a+large+claims+database%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Prevalence and incidence of hypoparathyroidism in the United States using a large claims database.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 28 (12), 2570-2576 (2013).</li>
<li>Zihao, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+allogeneic+parathyroid+cell+transplantation+in+rats+with+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Gland+Surgery%22%5BJournal%5D)">Promotion of allogeneic parathyroid cell transplantation in rats with hypoparathyroidism.</a> Gland Surgery. 10 (12), 3403-3414 (2021).</li>
<li>Goncu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+microencapsulated+parathyroid+cells+as+a+potential+treatment+for+autoimmune-related+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of microencapsulated parathyroid cells as a potential treatment for autoimmune-related hypoparathyroidism.</a> Experimental and Clinical Transplantation. , (2021).</li>
<li>Jung, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+a+physiologic+hypoparathyroidism+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Standardization of a physiologic hypoparathyroidism animal model.</a> PLoS One. 11 (10), 0163911(2016).</li>
<li>Chen, W., Lv, Y., Xie, R., Xu, D., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+lymphatic+mapping+to+recognize+and+protect+parathyroid+in+thyroid+carcinoma+surgery+by+using+carbon+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Otorhinolaryngology%2C+Head%2C+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Application of lymphatic mapping to recognize and protect parathyroid in thyroid carcinoma surgery by using carbon nanoparticles.</a> Journal of Clinical Otorhinolaryngology, Head, and Neck Surgery. 28 (24), 1918-1920 (1924).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Doniesienia epidemiologiczne wskazują, że wykrywalność chorób tarczycy znacznie wzrosła, a liczba wykonywanych operacji z tym związanych odpowiednio wzrosła19,20. Częstość występowania pooperacyjnej niedoczynności przytarczyc wynosi około 7,6%8,21, podczas gdy zwiększona zachorowalność na nabytą niedoczynność przytarczyc spowodowała, że ta rzadka choroba zyskała większą uwagę badaczy. Dlatego szczególnie ...

Parathormon (PTH) jest wydzielany przez przytarczyce. Jest głównym modulatorem równowagi wapniowej, utrzymuje metabolizm fosforanów i uczestniczy w obrocie kostnym1,2. Niedoczynność przytarczyc (HypoPT) objawia się zmniejszonym wydzielaniem lub funkcjonalną utratą PTH. Jest to rzadkie zaburzenie endokrynologiczne, z częstością występowania około 9-37 na 100 000 osobolat3,4,5. HypoPT charakteryzuje się zmniejszonym poziomem PTH i wapnia w surowicy, któremu towarzyszy zwiększony poziom fosforu w surowicy6,7. HypoPT jest klasyfikowany na podstawie jego przyczyny: nabyta niedoczynność przytarczyc (AHypoPT) lub idiopatyczna niedoczynność przytarczyc (IHypoPT)8. AHypoPT jest częściej spotykany w praktyce klinicznej; około 75% przypadków AHypoPT jest spowodowanych resekcją lub przypadkowym uszkodzeniem przytarczyc podczas operacji tarczycy lub innych operacji głowy i szyi. Inne przyczyny to radioterapia i chemioterapia nowotworów głowy i szyi oraz toksyczność leków1,8. Ulepszone metody diagnostyczne i wzrost badań przesiewowych w kierunku chorób związanych z tarczycą zwiększyły liczbę operacji chirurgicznych tarczycy. Doprowadziło to do odpowiedniego wzrostu liczby powiązanych powikłań przytarczyc9,10.
Łatwo znane modele zwierzęce o stabilnych cechach są potrzebne do lepszego zbadania AHypoPT i sprawdzenia skuteczności terapeutycznej nowych metod leczenia. Paratyreoidektomia (PTX) wykonywana na szczurach i myszach została opisana w poprzednich badaniach6,11; Jednak ze względu na niezwykle mały rozmiar przytarczyc i zmienność ich anatomicznego rozmieszczenia, wskaźnik sukcesu jest w praktyce stosunkowo niski. Tak więc tyreo-przytarczyce (TPTX) (tj. całkowite usunięcie tarczycy i przytarczyc) jest zwykle wykonywana w celu zapewnienia resekcji przytarczyc12. Jednak wynikający z tego niski poziom tyroksyny może komplikować badania z tym modelem zwierzęcym13. Modele HypoPT ustanowione innymi metodami, takimi jak stymulacja leków i edycja genów, nie mogą prawidłowo reprezentować najczęstszej patogenezy AHypoPT. Nasza grupa wcześniej używała modeli myszy z nokautem do oznaczania przytarczyc i umożliwienia usunięcia przytarczyc bez uszkadzania tarczycy i otaczających jej struktur anatomicznych14,15. Jednak ta metoda wykorzystuje transgeniczne modele myszy, które wymagają dłuższego czasu rozwoju ze względu na wymagania dotyczące krycia i hodowli.
Dlatego naszym celem było stworzenie łatwego do wygenerowania modelu AHypoPT. W tym badaniu opisano szczurzy model PTX przy użyciu znakowania nanocząstek węgla. Zawiesina nanocząsteczek węgla o stężeniu 50 mg/ml, która jest powszechnie stosowana w chirurgii tarczycy, równomiernie rozprowadza się w tarczycy po miejscowym wstrzyknięciu16. Gruczoły tarczycy stają się czarne, ale przytarczyce pozostają niezabarwione17, co wyraźnie odróżnia przytarczyce od gruczołów tarczycy i umożliwia wykonanie PTX bez wpływu na tarczycę. Ta metoda jest odpowiednia dla szczurów w różnym wieku. Wstrzyknięcie zawiesiny nanocząstek węgla jest bezpieczne i ma znikomy wpływ na funkcjonowanie tarczycy18. Model szczurzy PTX znakowany nanocząstkami węgla wygenerowany w tym badaniu wykazał znaczące fenotypy hipokalcemii i hiperfosfatemii podczas 4-tygodniowego okresu obserwacji. Tak więc ten model AHypoPT jest łatwy do ustalenia i ma powtarzalny fenotyp.

<table><tbody><tr><td>0,9% roztwór chlorku sodu</td><td>Kelun Co. Sichuan, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 i mikro; L 30G NanoFil Strzykawka</td><td>WPI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 poliglaktyna 910 szew z igłą</td><td>Ethicon, Inc</td><td>J510G</td><td></td></tr><tr><td>Test Liqui LiquiColor</td><td>wapnia EKF</td><td>0155-225</td><td>Do analizy Ca2+</td></tr><tr><td>Zawiesina nanocząstek węgla do wstrzykiwań</td><td>Lummy, Chongqing, Chiny</td><td>H20073246</td><td>1 ml: 50 mg</td></tr><tr><td>kreatyniny (Cr) Zestaw do oznaczania (oksydaza sarkozynowa)</td><td>Jiancheng, Nanjing, Chiny</td><td>C011-2-1</td><td>Do analizy kreatyniny</td></tr><tr><td>Jednorazowy skalpel</td><td>Shinva, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze biologiczne</td><td>Dumstar Shinva, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro nożyczki sprężynowe do preparowania</td><td>Shinva, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MicroVue Szczur nienaruszony PTH ELISA</td><td>Immunotopics</td><td>30-2531</td><td>Do pomiaru PTH w surowicy</td></tr> <tr><td>szczuraUchwyt igły</td><td>Shinva, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Test fosforu i liki-UV</td><td>EKF</td><td>0830-125</td><td>Do analizy liczby Pi</td></tr><tr><td>Gaza warstwowa</td><td>Weian Co. Henan, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Powidon-jod</td><td>Yongan Co.Ltd farmaceutyczny. Chengdu, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 9.0 (oprogramowanie do statystyk i wykresów)</td><td>GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA</td><td></td><td>https://www.graphpad.com/scientific-software/prism/</td></tr> <tr><td>Szczurzy C-telopeptyd kolagenu typu I (CTX-I) Zestaw ELISA</td><td>CUSABIO, Wuhan, Chiny</td><td>CSB-E12776r</td><td>Do analizy CTX-I</td></tr><tr><td>Zestaw ELISA Osteokalcyna / Białko Gla Kości (OT / BGP)</td><td>CUSABIO, Wuhan, Chiny</td><td>CSB-E05129r</td><td>Do analizy osteokalcyny</td></tr><tr><td>Bezpieczne żyletki z pojedynczą krawędzią</td><td>American Safety Razor Company</td><td>66-0089</td><td></td></tr><tr><td>Szczury</td><td></td><td></td> Sprague-Dawley <td>w wieku od 8 do 10 tygodni</td></tr><tr><td>Serwety chirurgiczne</td><td>Liangyou Co. Sichuan, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania mocznika</td><td>Jiancheng, Nanjing, Chiny</td><td>C013-2-1</td><td>Do analizy mocznika</td></tr></tbody></table>

generowanie szczurów z niedoczynnością przytarczyc za pomocą przytarczyc wspomaganej nanocząstkami węgla

Generation of Hypoparathyroid Rats via Carbon-Nanoparticle-Assisted Parathyroidectomy

Niedoczynność przytarczyc (HypoPT) jest rzadką chorobą obejmującą przytarczyce, która charakteryzuje się zmniejszonym wydzielaniem lub siłą działania parathormonu (PTH), co prowadzi do wysokiego poziomu fosforu w surowicy i niskiego poziomu wapnia w surowicy. HypoPT najczęściej wynika z przypadkowego uszkodzenia gruczołów lub ich usunięcia podczas operacji tarczycy lub innej operacji przedniej części szyi. Chirurgia przytarczyc/tarczycy stała się bardziej powszechna w ostatnich latach, wraz ze wzrostem występowania HypoPT jako powikłania pooperacyjnego. Istnieje pilna potrzeba stworzenia modelu zwierzęcego HypoPT, aby lepiej zrozumieć mechanizmy leżące u podstaw wpływu HypoPT na homeostazę jonów mineralnych i zweryfikować skuteczność terapeutyczną nowych metod leczenia. W tym przypadku opisano technikę tworzenia nabytego HypoPT u samców szczurów poprzez wykonanie paratyreoidektomii (PTX) przy użyciu nanocząstek węgla. Model szczurzy jest bardzo obiecujący w porównaniu z mysimi modelami niedoczynności przytarczyc. Co ważne, ludzki region wiązania receptora PTH ma 84,2% podobieństwo sekwencji do sekwencji szczura, co jest wyższe niż 73,7% podobieństwo dzielone u myszy. Co więcej, wpływ estrogenu, który może wpływać na szlak sygnałowy receptora PTH/PTHrP, nie został w pełni zbadany u samców szczurów. Nanocząstki węgla to znaczniki limfatyczne, które barwią węzły chłonne tarczycy na czarno, nie wpływając na ich funkcję, ale nie barwią przytarczyc, co ułatwia ich identyfikację i usunięcie. W tym badaniu poziomy PTH w surowicy były niewykrywalne po PTX, co skutkowało znaczną hipokalcemią i hiperfosfatemią. W ten sposób stan kliniczny pooperacyjnego HypoPT może być niezwykle reprezentowany w modelu szczurzym. PTX wspomagany nanocząstkami węgla może zatem służyć jako niezwykle skuteczny i łatwy do wdrożenia model do badania patogenezy, leczenia i rokowania HypoPT.

Lokalizację i liczbę przytarczyc zaobserwowano początkowo u szczurów przy użyciu mikroskopu sekcyjnego. Przed wstrzyknięciem nanocząsteczek węgla tarczyca miała półprzezroczysty czerwony kolor, a przytarczyce były pod mikroskopem niemal nierozpoznawalne (Rycyna 1A). Po wstrzyknięciu nanocząsteczek tarczyca została zabarwiona na czarno, podczas gdy przytarczyce pozostały niezabarwione (Rycina 1B). Ostrożna sekcja jasnych przytarczyc pozwoliła pozostawić tarczycę ...

Zwierzęcy model nabytej niedoczynności przytarczyc (HypoPT) jest kluczowy dla zrozumienia, jak HypoPT wpływa na homeostazę jonów mineralnych i do weryfikacji skuteczności nowych metod leczenia. W tym miejscu przedstawiono technikę generowania modelu szczura nabytej niedoczynności przytarczyc (AHypoPT) za pomocą paratyreoidektomii (PTX) przy użyciu nanocząstek węgla.

Generowanie szczurów z niedoczynnością przytarczyc za pomocą przytarczyc wspomaganej nanocząstkami węgla

Hypoparathyroidism (HypoPT) is a rare disease involving the parathyroid glands that is characterized by a reduced secretion or potency of the parathyroid ...

Ogólnym celem tego protokołu jest wygenerowanie szczurzego modelu nabytej niedoczynności przytarczyc, który jest łatwy do ustalenia, stabilny charakter i nieszkodliwy dla tarczycy. Główną zaletą tego modelu jest precyzyjne usuwanie przytarczyc za pomocą nanocząstek węgla. Mamy nadzieję, że model pomoże odpowiedzieć na kilka pytań z zakresu niedoczynności przytarczyc.Na przykład przedoperacyjne stosowanie wapnia i witaminy D w celu zmniejszenia ryzyka hipokalcemii po tyreoidektomii. Metoda ta może dostarczyć informacji na temat tego, w jaki sposób analogi PTH wpływają na obrót kostny i jak analogi PTH wpływają na organizm przy długotrwałym stosowaniu. Ci, którzy stosują tę technikę po raz pierwszy, mogą mieć trudności z mikromanipulacją pod mikroskopem stereoskopowym.Pomocne może być trochę praktyki pod mikroskopem stereoskopowym. Na początek umieść znieczulonego szczura w pozycji leżącej na plecach i ogol futro w brzusznej okolicy szyi. Po wykonaniu nacięcia zgodnie z opisem w rękopisie zlokalizuj płaty tarczycy.Za pomocą strzykawki o pojemności 10 mikrolitrów wyposażonej w igłę skośną o rozmiarze 30 wstrzyknij jeden mikrolitr zawiesiny nanocząstek węgla do mezjalnej części błony t

generation-hypoparathyroid-rats-via-carbon-nanoparticle-assisted

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ludzkie okołonaczyniowe komórki macierzyste (PSCs) stanowią nową klasę komórek macierzystych do regeneracji tkanek szkieletowych, podobnie jak mezenchymalne komórki macierzyste (MSCs). PSCs można wyizolować za pomocą FACS (sortowania komórek aktywowanego fluorescencją) z tkanki tłuszczowej pobranej podczas standardowych procedur liposukcji, a następnie połączyć z rusztowaniem osteoindukcyjnym w celu uzyskania formowania kości in vivo.

Zastosowanie ludzkich peryvaskularnych komórek macierzystych w regeneracji kości

Geny mogą być manipulowane podczas rozwoju kory mózgowej lub hipokampa szczura za pomocą elektroporacji in utero (IUE) w E16, aby umożliwić szybkie i ukierunkowane modyfikacje połączeń neuronalnych do późniejszych badań zachowania lub neuropatologii u dorosłych zwierząt. Poporodowe obrazowanie in vivo w celu kontroli powodzenia IUE wykonuje się za pomocą bioluminescencji aktywacji kotransfekowanej lucyferazy.

Wytwarzanie miejscowo transgenicznych szczurów za pomocą elektroporacji in utero i badań przesiewowych bioluminescencji in vivo

Opisujemy produkcję skompresowanych granulek hormonów, jak również podskórne chirurgiczne wszczepianie implantów myszom. Strategia ta może być połączona ze wzrostem ksenoprzeszczepów komórkowych i tkankowych pod torebką nerkową nagich myszy w celu oceny kancerogenezy hormonalnej i regulacji łagodnego wzrostu prostaty.

Ksenograf torebki nerkowej i podskórna implantacja osadu w celu oceny kancerogenezy gruczołu krokowego i łagodnego przerostu gruczołu krokowego

Myszy z nabytą niedoczynnością przytarczyc byłyby przydatne do badania nowych terapii lekowych na niedoczynność przytarczyc. Zademonstrowano dwie procedury tworzenia takich myszy.  Mysz GFP-PTX jest generowana przez chirurgiczną paratyreoidektomię pod kontrolą zielonych fluoryzujących przytarczyc.  Drugie, niechirurgiczne podejście opiera się na specyficznej dla przytarczyc ekspresji receptora toksyny błoniczej.

Dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów GFP i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej

Ten protokół opisuje wytwarzanie systemu hodowli komórek, który umożliwia wysiewanie komórek macierzystych na przewodzącym rusztowaniu polimerowym do stymulacji elektrycznej in vitro, a następnie implantację in vivo rusztowania z komórek macierzystych przy użyciu techniki minimalnie inwazyjnej.

Rusztowanie przewodzące prąd elektryczny do modulacji i dostarczania komórek macierzystych

Obecny protokół opisuje model uwalniania peptydu związanego z genem kalcytoniny (CGRP) ex vivo oraz strategię ilościowego określania wpływu środków farmakologicznych na ilość CGRP uwalnianego z układu trójdzielno-naczyniowego u gryzoni.

Ex vivo Uwalnianie peptydu związanego z genem kalcytoniny z układu trójdzielno-naczyniowego u gryzoni

Bezpieczne zastosowanie nowo opracowanych urządzeń do chirurgii chirurgicznej tarczycy/przytarczyc przyciąga uwagę chirurgów. Eksperymentalne modele zwierzęce pozwalają uniknąć niepotrzebnych prób i błędów w chirurgii ludzkiej. Niniejszy raport ma na celu zademonstrowanie metod elektrofizjologicznych i termograficznych do oceny parametrów bezpieczeństwa SED w chirurgii tarczycy/przytarczyc.

Badanie parametrów bezpieczeństwa elektrofizjologicznego i termograficznego urządzeń energetycznych podczas operacji tarczycy i przytarczyc w modelu świniowym

Do tej pory rozwój metod identyfikacji przytarczyc (PG) jest ograniczony przez brak modeli zwierzęcych w badaniach przedklinicznych. W tym miejscu tworzymy prosty i skuteczny model szczura do śródoperacyjnego obrazowania PG i oceniamy jego skuteczność, wykorzystując nanocząstki tlenku żelaza jako nowy środek kontrastowy PG.

Opracowanie prostego i skutecznego modelu szczura do śródoperacyjnego obrazowania przytarczyc

Ten protokół przedstawia szybką i nieśmiercionośną metodę pozyskiwania przytarczyc od świń. Procedura składa się z trzech głównych etapów: preparatyki świńskiej w znieczuleniu, jednostronnego pobrania grasicy oraz identyfikacji ex vivo i ekstrakcji przytarczyc wewnątrz grasicy.

Pobieranie przytarczyc od żywych świń dawców i identyfikacja ex vivo

Ten manuskrypt wprowadza ustandaryzowany protokół dla nefrektomii 5/6 poprzez ostrą bipolektomię poprzez laparotomię w linii środkowej na modelu szczurzym, mający na celu wywołanie stanu niewydolności nerek poprzez redukcję miąższu nerki z dużą precyzją metodyczną i niskim ryzykiem błędu technicznego.

5/6 Nefrektomia przy użyciu ostrej bipolektomii przez laparotomię w linii środkowej u szczurów

Poznaj metodę generowania modelu szczura z niedoczynnością przytarczyc przy użyciu nanocząstek węgla. Technika umożliwia precyzyjne usunięcie przytarczyc bez uszkodzenia tarczycy i pozwala badać homeostazę jonów mineralnych oraz skuteczność terapii analogami PTH.

Generowanie szczurów z niedoczynnością przytarczyc za pomocą przytarczyc wspomaganej nanocząstkami węgla

Przeglądaj więcej filmów