Name: Oznaczanie rozpuszczania in vitro składników wieloindeksowych w granulkach Rhodiola w medycynie tybetańskiej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Poznaj metodę oznaczania rozpuszczania in vitro wielu składników aktywnych granulek Rhodiola w ultraczystej wodzie. Technika HPLC pozwala badać krzywe rozpuszczania salidrozydów, kwasu galusowego i etylu galusanu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (2017YFC1703904), Uniwersytet (Chengdu University of TCM) - przedsiębiorstwo (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. LTD) projekt współpracy (1052022040101); Regionalny Projekt Innowacji i Współpracy Departamentu Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (2020YFQ0032); oraz Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy i Transformacyjny Departamentu Nauki i Technologii Qinghai Prowincja (2020-SF-C33).

1. Przygotowanie roztworu
<ol>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy substancji odniesienia: Odważyć oddzielnie 10,6 mg salidrozydu, 5,24 mg kwasu galusowego i 5,21 mg kwasu etylowo-galusowego na elektronicznej wadze analitycznej i dodać je pojedynczo do kolby miarowej o pojemności 5 ml. Następnie dodać metanol klasy HPLC do rozpuszczenia i rozcieńczyć do 5 ml. Na koniec dobrze wstrząsnąć, aby uzyskać roztwór podstawowy substancji odniesienia o stężeniach masowych odpowiednio 2,120 mg/ml, 1,048 mg/ml i 1,042 mg/ml. 
	UWAGA: Roztwór podstawowy substancji odniesienia zawiera 2,120 mg/ml salidrozydu, 1,048 mg/ml kwasu galusowego i 1,042 mg/ml galusanu etylu jako roztwór podstawowy każdego roztworu w następnej krzywej wzorcowej.</li>
	<li>Przygotować roztwór próbki testowej. Ekstrahuj 2,8 g RG (Tabela Materiałów) za pomocą 10 ml metanolu klasy HPLC za pomocą ultradźwiękowej maszyny czyszczącej (moc: 200 W, częstotliwość: 40 kHz) przez 30 minut, a następnie przefiltruj go filtrem 0,22 μm w celu testu adaptacji systemu.</li>
	<li>Przygotować mieszany roztwór wzorcowy zawierający 0,590 mg/ml salidrozydu, 2,030 mg/ml kwasu galusowego i 1,930 mg/ml galusanu etylu. 
	UWAGA: Każdy wzorzec (2,950 mg salidrozydu, 10,150 mg kwasu galusowego i 9,650 mg kwasu etylowo-galusowego) rozpuszcza się w kolbie miarowej o pojemności 5 ml w metanolu klasy HPLC jako pożywce do rozpuszczania.</li>
	<li>Uzyskać teoretyczną zawartość każdego charakterystycznego składnika RG do ekstrakcji wodą ultraczystą.
	<ol>
		<li>Umieścić 2,8 g RG w kolbie stożkowej o pojemności 500 ml, dodać 200 ml ultraczystej wody i ekstrahować ultradźwiękowo (moc: 200 W, częstotliwość: 40 kHz) przez 60 minut. Następnie przefiltruj go filtrem 0,22 μm.</li>
		<li>Oznaczyć zawartość badanego roztworu zgodnie z równaniem liniowym otrzymanym w poniższym doświadczeniu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Warunek chromatograficzny
<ol>
	<li>Ustawić warunki chromatograficzne zgodnie z tabelą 1 dla wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Szczegółowe informacje na temat używanego instrumentu można znaleźć w Tabeli materiałów.</li>
</ol>
3. Test zdolności adaptacyjnych systemu
<ol>
	<li>Zbadaj zależność liniową.
	<ol>
		<li>Rozcieńczyć referencyjne roztwory podstawowe kwasu galusowego i galusanu etylu 5, 10, 25, 50 i 125 razy, a referencyjne roztwory podstawowe salidrozydu 2, 4, 8, 16 i 32 razy, aby otrzymać roztwór o stężeniu gradientowym do narysowania krzywej wzorcowej. 
		UWAGA: Dostosuj współczynnik rozcieńczenia krzywej wzorcowej zgodnie ze wstępnym eksperymentem obróbki próbki. We wstępnym eksperymencie roztwory podstawowe trzech wzorców najpierw rozcieńczono 5, 10, 25, 50 i 125 razy, a następnie wykreślono pierwszą krzywą wzorcową. Jednakże, gdy wykryto stężenie badanej próbki, stwierdzono, że stężenia salidrozydu nie mieściły się w zakresie liniowym tej krzywej standardowej i dlatego stężenia zostały dostosowane tak, aby uwzględnić je w krzywej. Podsumowując, powyższe doświadczenia wstępne posłużyły do wyznaczenia końcowych stężeń rozcieńczeń trzech badanych próbek do kolejnych badań eksperymentalnych.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Badanie precyzyjne: Wstrzyknąć 10 μl zmieszanego roztworu odniesienia do systemu HPLC sześć razy na dobę i uruchomić próbki w tych samych warunkach HPLC, które opisano w kroku 2.1. Rejestruj obszar szczytowy każdego komponentu elementu.</li>
	<li>Eksperymenty z badaniem stabilności: Wstrzyknąć 10 μl przygotowanego roztworu próbki i oznaczyć powierzchnie pików HPLC zgodnie z warunkami chromatograficznymi odpowiednio po 0 h, 6 h, 10 h, 12 h, 14 h, 16 h, 18 h, 20 h i 24 h. 
	UWAGA: Obszary pików są rejestrowane automatycznie przez system HPLC.</li>
	<li>Badanie odtwarzalności: Pobrać sześć próbek z tej samej partii RG w celu przygotowania roztworu próbki badanej zgodnie z metodą opisaną w kroku 1.2. Wstrzyknąć 10 μl każdej próbki do systemu HPLC. Uruchom próbki zgodnie z opisem w kroku 2.1 i określ odtwarzalność. 
	UWAGA: Powtarzalność oceniano poprzez porównanie różnic stężeń między sześcioma próbkami.</li>
	<li>Eksperyment regeneracyjny
	<ol>
		<li>Przygotować sześć porcji tej samej partii RG do roztworu do badania. Następnie dodać około 50% substancji odniesienia każdego składnika wskaźnikowego w roztworze badanym, aby obliczyć stopień odzysku. Uruchom te próbki w systemie HPLC w tych samych warunkach, które opisano w kroku 2.1.</li>
		<li>Oblicz współczynnik odzysku. 
		UWAGA: Stopień odzysku = (C - A) / B x 100, gdzie A to ilość składnika, która ma być mierzona w roztworze badanym, B to ilość dodanej substancji odniesienia, a C to zmierzona wartość roztworu zawierającego substancję odniesienia i próbkę RG. Patrz krok 2.1, aby zapoznać się z warunkami chromatograficznymi do wykonania powyższych kroków (tj. kroki 3.1-3.5).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Test rozpuszczania in vitro
<ol>
	<li>Przeprowadź test rozpuszczania przy użyciu metody łopatkowej drugiej metody reguły ogólnej 0931 z Farmakopei Chińskiej (wydanie 2020)12. 
	UWAGA: Technika i sprzęt do pobierania próbek: Aparat do rozpuszczania leku (Tabela materiałów) jest wyposażony w kubek do rozpuszczania, łopatkę, system kontroli temperatury i system regulacji prędkości. Przed rozpoczęciem eksperymentu rozpuszczania woda jest wstępnie podgrzewana do zadanej temperatury, a następnie ustawiana jest odpowiednia prędkość. Rozpocznij rejestrowanie czasu natychmiast po dodaniu RG.</li>
	<li>Dodać 100 ml ultraczystej wody do pojemnika do rozpuszczania aparatu do rozpuszczania leku i utrzymywać temperaturę na poziomie 37 °C ± 0,5 °C. Ustawić prędkość obrotową na 100 obr./min. 
	UWAGA: Aparat do rozpuszczania jest wyposażony w urządzenie grzewcze, które umożliwia ustawienie temperatury w systemie. Nie stwierdzono istotnej różnicy w szybkości rozpuszczania salidrozydu w wodzie, sztucznym soku żołądkowym (16,4 ml rozcieńczonego kwasu solnego [234 ml stężonego kwasu solnego rozcieńczonego do 1000 ml wodą] z około 800 ml wody i 10 g pepsyny, dobrze wstrząśniętym i rozcieńczonym wodą do 1000 ml) oraz sztucznym sokiem jelitowym (bufor fosforanowy [pH 6,8] zawierający trypsynę)13. Jako podłoże do rozpuszczania wybrano najłatwiej dostępną wodę (ultraczystą).</li>
	<li>Dodać 2,8 g RG do pojemnika do rozpuszczania i natychmiast rozpocząć rejestrowanie czasu rozpuszczenia. Zebrać łącznie 1 ml próbki za pomocą wstrzykiwacza (patrz tabela materiałów) po 1 minutach, 5 minutach, 10 minutach, 20 minutach, 30 minutach i 60 minutach i natychmiast uzupełnić objętość w pojemniku do rozpuszczania roztworem do rozpuszczania o tej samej temperaturze. 
	UWAGA: Probówka do pobierania próbek w kubku do rozpuszczania nie może pobierać małych objętości próbek, dlatego do pobierania próbki służy wtryskiwacz. Próbki muszą być pobierane szybko, aby uniknąć pominięcia określonych punktów czasowych pobierania.</li>
	<li>Pobrane próbki należy natychmiast przefiltrować przez mikroporowatą membranę o wielkości 0,22 μm i pobrać kolejny filtrat. Oznaczyć zawartość każdego składnika w każdym punkcie czasowym za pomocą HPLC (zgodnie z krokiem 2.1) i obliczyć łączne rozpuszczenie.
	<ol>
		<li>Aby obliczyć łączne rozpuszczenie, oblicz rozpuszczenie każdego punktu czasowego (Xn): 
		Xn = A / B x 100, gdzie A to ilość składników zmierzonych w każdym punkcie czasowym, a B to teoretyczna zawartość każdego składnika.</li>
		<li>Następnie oblicz łączne rozpuszczenie (Y): 
		Y = Xn + (X1 + ... + Xn-1) x V2 / V1, gdzie V1 jest całkowitą objętością pożywki do rozpuszczania, a V2 jest objętością substancji rozpuszczonej dodanej po każdym pobraniu próbki. 
		UWAGA: Ze względu na niskie wartości odpowiedzi salidrozydu i kwasu galusowego na chromatogramie, skumulowane rozpuszczenie salidrozydu i galusanu etylu w punkcie czasowym 1 minuty nie zostało wykreślone na krzywej rozpuszczania.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Dopasowanie modelu rozpuszczania
<ol>
	<li>Zaimportuj skumulowane dane dotyczące rozpuszczania w każdym punkcie czasowym do oprogramowania do analizy danych.</li>
	<li>Użyj wtyczki do analizy rozpuszczania leków w oprogramowaniu do analizy danych, aby dopasować równanie GompertzMod, równanie Gompertza, równanie logistyczne i równanie Weibulla14. Im większa wartość R2, tym lepszy jest efekt dopasowania krzywej.
	<ol>
		<li>Uruchom oprogramowanie, wybierz okno Book1, aby przejść do okna Origin Data Editing.</li>
		<li>W pierwszej kolumnie A(X)-Long Name wprowadź czas, zdefiniuj czas jako czas i wprowadź każdy czas określenia rozpuszczania. Dane wejściowe w drugiej kolumnie B(Y)-Długa nazwa, zdefiniuj Dane jako skumulowane rozpuszczenie, wprowadź skumulowany procent rozpuszczenia w każdym czasie oznaczania rozpuszczania.</li>
		<li>Po wprowadzeniu danych należy wybrać kolumny A(X) i B(Y), a następnie wybrać wtyczkę Drug Dissolution Analysis na pasku menu oprogramowania i kliknąć Fit Dissolution Data > Concatenate Fit > OK. Oprogramowanie generuje wyniki dopasowania każdego modelu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Smith, S. C., Zheng, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impending+cardiovascular+pandemic+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Cardiovascular+Quality+and+Outcomes%22%5BJournal%5D)">The impending cardiovascular pandemic in China.</a> Circulation Cardiovascular Quality and Outcomes. 3 (3), 226-227 (2010).</li>
<li>Wang, D., Wang, P., Zhang, R., Xi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+Xuefu+Zhuyu+decoction+combined+with+Western+medicine+for+angina+pectoris+in+coronary+heart+disease%3A+A+protocol+for+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of Xuefu Zhuyu decoction combined with Western medicine for angina pectoris in coronary heart disease: A protocol for systematic review and meta-analysis.</a> Medicine. 99 (50), 23195(2020).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+traditional+Chinese+medicine+in+the+regulation+of+stress+in+treating+coronary+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">The role of traditional Chinese medicine in the regulation of stress in treating coronary heart disease.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 3231424(2019).</li>
<li>Yang, J., Tian, S., Zhao, J., Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+mechanism+of+TCM+formulae+in+the+treatment+of+different+types+of+coronary+heart+disease+by+network+pharmacology+and+machining+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Exploring the mechanism of TCM formulae in the treatment of different types of coronary heart disease by network pharmacology and machining learning.</a> Pharmacological Research. 159, 105034(2020).</li>
<li>Pu, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+Rhodiola+rosea+L.%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of Rhodiola rosea L.: A review.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 121, 109552(2020).</li>
<li>Tao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhodiola+species%3A+A+comprehensive+review+of+traditional+use%2C+phytochemistry%2C+pharmacology%2C+toxicity%2C+and+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Medicinal+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study.</a> Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+biochemical+basis+of+the+meridian+tropism+theory+for+the+qi-invigorating+traditional+Chinese+medicine+herb+Panax+ginseng%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Evidence-Based+Integrative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Exploring the biochemical basis of the meridian tropism theory for the qi-invigorating traditional Chinese medicine herb Panax ginseng.</a> Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 26, 2515690(2021).</li>
<li>Pang, Y., Liang, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Nordicam+on+hemodynamics+in+rats+with+myocardial+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chinese+Medicinal+Materials%22%5BJournal%5D)">Effect of Nordicam on hemodynamics in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Chinese Medicinal Materials. 36 (2), 276-279 (2013).</li>
<li>Nickerson, B., Kong, A., Gerst, P., Kao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+dissolution+and+disintegration+results+for+an+immediate-release+tablet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Correlation of dissolution and disintegration results for an immediate-release tablet.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 150, 333-340 (2018).</li>
<li>Kambayashi, A., Yomota, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+clinically+relevant+dissolution+specifications+for+oral+solid+dosage+forms+of+weak+acid+drugs+using+an+in+silico+modeling+and+simulation+approach%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exploring clinically relevant dissolution specifications for oral solid dosage forms of weak acid drugs using an in silico modeling and simulation approach.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105728(2021).</li>
<li>Meng, S., Jiang, T. Y., Bu, C. J., Liu, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+progress+on+the+dissolution+of+traditional+Chinese+medicine+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Clinical+Rational+Drug+Use%22%5BJournal%5D)">Research progress on the dissolution of traditional Chinese medicine preparations.</a> Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 8 (32), 180-181 (2015).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Pharmacopoeia+of+the+People%27s+Republic+of+China%22">Pharmacopoeia of the People's Republic of China</a>. 4, Chinese Medical Science and Technology Press. (2020).</li>
<li>Lin, J. Z. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLin%2C+JZ+%22Evaluation+on+Pre-Preparation+of+Rhodiola+Extract%22">Evaluation on Pre-Preparation of Rhodiola Extract</a>. , Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. (2013).</li>
<li>Zhou, Y. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+drug+solubility+Weibull+distribution+parameters+by+Origin+software%5BTitle%5D)+AND+%22Herald+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Calculation of drug solubility Weibull distribution parameters by Origin software.</a> Herald of Medicine. 30 (06), 721-723 (2011).</li>
<li>Hu, C. Q., Pan, R. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+evaluation%2Fprediction+of+bioequivalence+of+solid+oral+preparations+by+dissolution+test%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Progress in evaluation/prediction of bioequivalence of solid oral preparations by dissolution test.</a> Chinese Journal of New Drugs. 23 (01), 44-51 (2014).</li>
<li>Zhang, H., Yu, L. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissolution+testing+for+solid+oral+drug+products%3A+Theoretical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Pharmaceutical+Review%22%5BJournal%5D)">Dissolution testing for solid oral drug products: Theoretical considerations.</a> American Pharmaceutical Review. 7 (5), 26-30 (2004).</li>
<li>Ren, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+strategies+for+the+discovery+and+validation+of+quality-markers+of+traditional+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Analytical strategies for the discovery and validation of quality-markers of traditional Chinese medicine.</a> Phytomedicine. 67, 153165(2020).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+modified+biopharmaceutics+classification+system+absorption+model+for+oral+Traditional+Chinese+Medicine+%28Sanye+Tablet%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of modified biopharmaceutics classification system absorption model for oral Traditional Chinese Medicine (Sanye Tablet).</a> Journal of Ethnopharmacology. 244, 112148(2019).</li>
<li>Song, X. Y., Li, Y. D., Shi, Y. P., Jin, L., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control+of+traditional+Chinese+medicines%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Natural+Medicines%22%5BJournal%5D)">Quality control of traditional Chinese medicines: a review.</a> Chinese Journal of Natural Medicines. 11 (6), 596-607 (2013).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+markers+based+on+biological+activity%3A+A+new+strategy+for+the+quality+control+of+traditional+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Quality markers based on biological activity: A new strategy for the quality control of traditional Chinese medicine.</a> Phytomedicine. 44, 103-108 (2018).</li>
<li>Wei, N. -N., Wang, X., Su, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+of+dissolution+test+methodologies%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Progress of dissolution test methodologies.</a> Chinese Journal of New Drugs. 22 (10), 1119-1124 (2013).</li>
<li>Chi, Z., Azhar, I., Khan, H., Yang, L., Feng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+dissolution+testing+with+high-temporal+resolution+for+both+immediate-release+and+fixed-combination+drug+tablets%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Automatic dissolution testing with high-temporal resolution for both immediate-release and fixed-combination drug tablets.</a> Scientific Reports. 9 (1), 17114(2019).</li>
<li>Haidar, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioequivalence+approaches+for+highly+variable+drugs+and+drug+products%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Test rozpuszczania jest idealną metodą in vitro do symulacji rozpadu i rozpuszczania stałych preparatów doustnych w przewodzie pokarmowym15. Jest to ważny wskaźnik do oceny i kontroli jakości stałych preparatów doustnych. W związku z tym próba rozpuszczania odgrywa zasadniczą rolę w opracowywaniu doustnych preparatów leków stałych16. W szczególności, wraz z rozwojem technologii kontroli jakości tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM), oznaczanie rozpuszczania było sto...

W Chinach częstość występowania chorób sercowo-naczyniowych wciąż rośnie, a wskaźniki zachorowalności i śmiertelności z powodu chorób sercowo-naczyniowych zajmują pierwsze miejsce wśród mieszkańców Chin1. Dławica piersiowa choroby niedokrwiennej serca jest spowodowana zwężeniem światła spowodowanym miażdżycą tętnic wieńcowych, co prowadzi do stosunkowo niewystarczającego dopływu krwi wieńcowej oraz niedokrwienia mięśnia sercowego i niedotlenienia2. W ostatnich latach lecznicze działanie tradycyjnej medycyny chińskiej w leczeniu choroby niedokrwiennej serca zostało dostrzeżone przez wielu lekarzy3.
Tradycyjna medycyna chińska odgrywa ważną rolę w łagodzeniu objawów klinicznych i poprawie jakości życia pacjentów4. Granulat Rhodiola (RG) jest ekstrahowany i rafinowany z rośliny leczniczej Rhodiola rosea L. z Wyżyny Tybetańskiej. Głównymi składnikami RG są salidrozyd, rodiosyna i flawonoidy5,6. RG ma działanie uzupełniające Qi7 oraz aktywujące i promujące krążenie krwi w celu złagodzenia bólu. Klinicznie stosuje się go w leczeniu niedrożności klatki piersiowej spowodowanej niedoborem Qi i zastojem krwi, chorobą niedokrwienną serca, dusznicą bolesną8. Samo określenie zawartości nie odzwierciedla w pełni wewnętrznej jakości leków, ponieważ zarówno rozpad, jak i rozpuszczenie in vitro mogą wpływać na biodostępność i skuteczność leków9,10. Metody kontroli rozpuszczania medycyny chińskiej obejmują metodę obrotowego kosza, metodę łopatkową i metodę małego kubka. Wadą metody obracającego się kosza jest to, że tylko zewnętrzna część obracającego się kosza styka się z medium rozpuszczającym podczas obracania, co nie odzwierciedla rzeczywistego zachowania rozpuszczania. Metoda wiosłowa może przezwyciężyć powyższe niedociągnięcia, co czyni ją bardziej odpowiednią niż metoda koszykowa dla niektórych stałych preparatów medycyny chińskiej11. Obecnie nie ma sprawozdania z analizy rozpuszczania RG in vitro. W celu bardziej kompleksowej kontroli jakości RG zbadano rozpuszczanie trzech składników indeksowych (kwasu galusowego, salidrozydu i galusanu etylu) w RG. Niniejsze badanie dostarcza danych do kontroli jakości RG oraz metodologicznego odniesienia do oceny jakości innych preparatów związków etnicznych.

<table><tbody><tr><td>Kolumna chromatograficzna</td><td>ZORBAX Eclipse   </td><td>XDB-C18</td><td>4,6 mm x 250 mm, 5 i mikro; m</td></tr><tr><td>Tester rozpuszczania leków</td><td>Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd.</td><td>RCZ-6B3</td><td></td></tr><tr><td>Elektroniczna waga analityczna</td><td>Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd.</td><td>FA1004</td><td></td></tr><tr><td>Galusan etylu (HPLC, ≥ 98%)</td><td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>DSTDM006301</tr><tr><td>Oprogramowanie do rysowania funkcji</td><td>OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA</td><td>2022</td><td></td></tr><tr><td>Kwas galusowy (HPLC, ≥ 98%)</td><td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>DSTDM000802</tr><tr><td>Wysokosprawna chromatografia cieczowa</td><td>Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.</td><td>Agilent 1260 Nieskończoność <img alt="Równanie 1" src="/files/ftp_upload/64670/64670eq01.jpg" style="margines: auto; "></td><td></td></tr> <tr><td>Metanol klasy HPLC</td><td>Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>216565</tr><tr><td>Wtryskiwacz</td><td>Chengdu Xinjin Shifeng Aparatura medyczna i Instrument Co., Sp. z o.o.</td>Filtr miliporowy <td>0,7 (22 G)</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd</td><td>φ 13 0,22 Granulat Nylon66</td><td></td></tr><tr><td>Rhodiola</td><td>Tybet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>210501</tr><tr><td>Salidrozyd (HPLC, ≥ 98%)</td><td>Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd.</td><td>DST200425-037</td><td></td></tr><tr><td>Ultra czysta woda systemowa</td><td>Merck Millipore Ltd.</td><td>Milli-Q</td><td></td></tr><tr><td>Ultradźwiękowa maszyna czyszcząca</td><td>Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd</td><td>SB-8200 DTS</td><td></td></tr></tbody></table>

oznaczanie rozpuszczania in vitro składników wieloindeksowych w granulkach rhodiola w medycynie tybetańskiej

An In Vitro Dissolution Determination of Multi-Index Components in Tibetan Medicine Rhodiola Granules

Skład granulek (RG) medycyny tybetańskiej jest złożony, a ogólna jakość RG jest trudna do określenia. W związku z tym ustalenie metody oznaczania wieloskładnikowego rozpuszczenia RG in vitro ma ogromne znaczenie dla kontroli jakości. W tym badaniu wykorzystano drugą metodę łopatkową czwartej ogólnej reguły 0931 z Farmakopei Chińskiej (wydanie 2020), zgodną z aparaturą 2 Farmakopei Stanów Zjednoczonych (USP). Aparat do rozpuszczania ustawiono na prędkość obrotową 100 obr./min z ultraczystą wodą jako medium do rozpuszczania. W każdym punkcie czasowym pobrano próbkę o objętości 1 ml. Ponadto skumulowane rozpuszczenie kwasu galusowego, salidrozydu i kwasu etylowo-galusowego w RG w różnych punktach czasowych określono za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Na koniec narysowano krzywe rozpuszczania, a krzywe dopasowano do równań GompertzMod, Gompertz, Logistic i Weibulla. Wyniki wykazały, że skumulowane rozpuszczenie kwasu galusowego w RG wynosiło ponad 80% po 1 minucie, skumulowane rozpuszczenie salidrozydu i kwasu etylowo-galusowego wynosiło ponad 65% po 5 minutach, a skumulowane rozpuszczenie każdego składnika wskaźnika zmniejszało się po 30 minutach. Dopasowanie krzywej wykazało, że równanie GompertzMod było najlepiej dopasowanym modelem dla każdego składnika indeksu RG. Podsumowując, metoda badania rozpuszczania opisana w tym protokole jest prosta, dokładna i niezawodna. Może scharakteryzować zachowanie rozpuszczania składników wskaźnikowych w RG in vitro, co stanowi metodologiczne odniesienie do kontroli jakości RG i oceny jakości innych związków etnicznych.

W niniejszym badaniu precyzja, stabilność, powtarzalność oraz odzysk próbek RG mieściły się w zakresie metodycznym określonym w chińskiej farmakopei (Farmakopea Chińska, tom 4, 2020)12, co wskazuje na wykonalność tej metody. Po wielokrotnej optymalizacji ustalono, że zastosowany w badaniu gradient elucji zapewnił dobrą rozdzielczość (Rysunek 1) dla trzech komponentów wskaźnikowych w RG. Trzy komponenty wskaźnikowe w RG wykazały dobrą liniowość w określonym zakresie st...

Tutaj testujemy rozpuszczanie granulek Rhodiola (RG) in vitro, rysujemy krzywe rozpuszczania salidrozydu, kwasu galusowego i galusanu etylu w ultraczystej wodzie i dopasowujemy krzywe do różnych modeli matematycznych. Protokół ten zawiera informacje i wytyczne dotyczące badań biorównoważności in vivo i korelacji in vivo-in vitro RG.

Oznaczanie rozpuszczania in vitro składników wieloindeksowych w granulkach Rhodiola w medycynie tybetańskiej

The composition of the Tibetan medicine Rhodiola granules (RG) is complex, and the overall quality of RG is difficult to determine. Therefore, ...

Pomiar in vitro jest odpowiednim środkiem do kontroli rozpuszczania roztworów stałego preparatu medycyny chińskiej, które uwzględniają skutki rozpadu leku, zachowanie podczas rozpuszczania i zawartość substancji czynnej. Wykrywanie składnika wieloindeksowego może lepiej odzwierciedlać neutralny wpływ i różnicę rozpuszczania różnych składników. Procedurę zademonstruje Quinyun Du, niezwykły student z mojego laboratorium.Na początek należy przygotować roztwór podstawowy substancji odniesienia, ważąc oddzielnie 10,6 miligrama salidrocydu, 5,24 miligrama kwasu galusowego i 5,21 miligrama kwasu etylowo-galusowego na elektronicznej wadze analitycznej. Następnie dodaj je pojedynczo do pięciomililitrowej kolby miarowej. Następnie dodaj metanol klasy HPLC do rozpuszczenia i rozcieńczyć do pięciu mililitrów.I na koniec dobrze wstrząsnąć, aby uzyskać roztwór podstawowy substancji referencyjnej o stężeniach masowych odpowiednio 2,120, 1,048 i 1,042 miligrama na mililitr. Aby przygotować roztwór próbki testowej, wyekstrahuj 2,8 grama granulek różeńca górskiego z 10 mililitrami metanolu klasy HPLC, używając ultradźwiękowej maszyny czyszczącej przez 30 minut. Następnie przefiltruj go filtrem 0,22 mikrometra w celu przeprowadzenia testu zdolności adaptacyjnych systemu.Następnie przygotuj mieszany roztwór referencyjny, który zawiera 0,590 miligrama na mililitr salidrocydu, 2,030 miligrama na mililitr kwasu galusowego i 1,930 miligrama na mililitr galusanu etylu. Aby uzyskać teoretyczną zawartość każdego charakterystycznego składnika granulek różeńca górskiego, należy umieścić 2,8 grama granulatu różeńca górskiego w kolbie stożkowej o pojemności 500 mililitrów. Dodaj 200 mililitrów ultraczystej wody i ekstrahuj ultradźwiękowo przez 60 minut.Następnie przefiltruj go filtrem 0,22 mikrometra. Po ustaleniu zawartości roztworu badanego należy ustalić warunki chromatograficzne dla wysokosprawnej chromatografii cieczowej zgodnie z opisem w manuskrypcie. Aby zbadać zależność liniową, należy rozcieńczyć referencyjne roztwory podstawowe kwasu galusowego i galusanu etylu oraz referencyjne roztwory podstawowe salidrocydu, aby otrzymać roztwór o stężeniu gradientowym do narysowania krzywej wzorcowej.Następnie wstrzyknąć 10 mikrolitrów zmieszanego roztworu referencyjnego do systemu HPLC sześć razy dziennie i uruchomić próbki w tych samych warunkach HPLC, jednocześnie rejestrując obszar piku każdego składnika cechy. Następnie wstrzyknąć 10 mikrolitrów przygotowanego roztworu próbki i oznaczyć powierzchnie pików HPLC zgodnie z warunkami chromatograficznymi w różnych odstępach czasu. Pobrać sześć próbek z tej samej partii granulek różeńca górskiego, aby przygotować roztwór próbki testowej, jak pokazano wcześniej, i wstrzyknąć 10 mikrolitrów każdej próbki do systemu HPLC.Uruchom próbki, jak pokazano wcześniej, aby określić odtwarzalność. Po przygotowaniu sześciu porcji tej samej partii granulatu różeńca górskiego do roztworu testowego, dodać około 50% substratu referencyjnego każdego składnika wskaźnikowego. Uruchom te próbki w systemie HPLC, jak pokazano wcześniej, aby obliczyć współczynnik odzysku zgodnie z opisem w manuskrypcie.Aby przeprowadzić test rozpuszczania, dodaj 100 mililitrów ultraczystej wody do kubka do rozpuszczania aparatu do rozpuszczania leku i utrzymuj temperaturę 37 stopni Celsjusza z prędkością obrotową 100 obr./min. Następnie dodaj 2,8 grama granulatu różeńca górskiego do kubka do rozpuszczania i natychmiast zacznij rejestrować czas rozpuszczania. Zebrać łącznie jeden mililitr próbki za pomocą wtryskiwacza w różnych odstępach czasu i natychmiast uzupełnić objętość w pojemniku do rozpuszczania pożywką do rozpuszczania o tej samej temperaturze.Natychmiast napełnij pobrane próbki przez mikroporowatą membranę o grubości 0,22 mikrometra i pobierz kolejny filtrat. Po określeniu zawartości każdego składnika, w każdym punkcie czasowym za pomocą HPLC, oblicz rozpuszczenie każdego punktu czasowego i łączne rozpuszczenie zgodnie z opisem w manuskrypcie. Otrzymano chromatogram próbki i roztwór odniesienia.Trzy różne piki odpowiadające kwasowi galusowemu, salidrocydowi i galusanowi etylu pokazują, że gradient elucji miał dobrą rozdzielczość dla trzech składników indeksu w granulkach różeńca górskiego. Krzywe rozpuszczania każdego składnika pokazują, że łączne rozpuszczenie kwasu galusowego wyniosło ponad 80% po jednej minucie. Natomiast w przypadku salidrocydu i kwasu etylowo-galusowego było to ponad 65% po pięciu minutach.Jednak skumulowane rozpuszczenie każdego składnika indeksu zmniejszyło się po 30 minutach. Dostosowując kwestię rozcieńczenia krzywej wzorcowej, zgodnie ze wstępnym eksperymentem obróbki próbki, próbki muszą być pobierane szybko, aby uniknąć pominięcia specjalnego punktu czasowego.

an-vitro-dissolution-determination-multi-index-components-tibetan

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Tutaj przedstawiono analizę porównawczą surowych i przetworzonych próbek kłącza Cyperi (CR) za pomocą ultra-wysokosprawnej chromatografii cieczowej i tandemowej spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-MS/MS) u szczurów z pierwotnym bolesnym miesiączkowaniem. Zmiany w stężeniach metabolitów i składników próbki we krwi badano między szczurami leczonymi CR i CR przetwarzanymi octem (CRV).

Analiza surowych i przetworzonych próbek kłącza Cyperi przy użyciu chromatografii cieczowej i tandemowej spektrometrii mas u szczurów z pierwotnym bolesnym miesiączkowaniem

Ten artykuł omawia proces używany do formułowania i przygotowywania Taohong Siwu, tradycyjnej medycyny chińskiej, w postaci tabletki do sporządzania zawiesiny doustnej. Przeprowadziliśmy eksperymenty jednoczynnikowe i ortogonalne, aby przesiać substancje pomocnicze na receptę, zoptymalizować proces recepturowania i wyprodukować dyspersyjne tabletki Taohong Siwu.

Tworzenie dyspersyjnych tabletek Taohong Siwu

Tutaj opisujemy ogólny protokół i projekt, który może być zastosowany do identyfikacji śladowych ilości i drobnych składników w złożonych preparatach produktów naturalnych (matrycach) w medycynie tybetańskiej.

Standaryzowana identyfikacja struktury związku w medycynie tybetańskiej za pomocą spektrometrii mas z pułapką jonową i wieloetapowej analizy fragmentacji

W tym protokole, technologia przetwarzania oleju baraniego w Epimedii folium (EF) została zoptymalizowana poprzez zastosowanie eksperymentalnej metodologii projektowania i odpowiedzi Box-Behnken, a wpływ prymitywnego i zoptymalizowanego EF ekstrahowanego wodą na rozwój embrionalny danio pręgowanego został wstępnie zbadany.

Optymalizacja technologii przetwarzania oleju baraniego Epimedii folium i badanie jego wpływu na rozwój embrionalny danio pręgowanego

Tutaj opisujemy identyfikację Rhodiola Crenulata na podstawie siedliska, morfologii rośliny, właściwości leczniczych, cech mikroskopowych i chromatografii cienkowarstwowej.

Zbieranie w terenie i rutynowa identyfikacja laboratoryjna Rhodiola crenulata

To badanie wykorzystuje dwuwymiarową, wysokowydajną technologię chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (2D-HPLC-MS) w połączeniu z sieciami molekularnymi, aby odkryć skomplikowany skład chemiczny tybetańskiej rośliny leczniczej Aconitum pendulum Busch (APB). W artykule przedstawiono szczegółowy protokół systematycznego badania i identyfikacji złożonych składników chemicznych leków ziołowych.

Technologia 2D-HPLC-MS połączona z siecią molekularną do identyfikacji składników w medycynie tybetańskiej Tojad wahadłowy

Przedstawiamy sposób przygotowania modelu niedokrwienia/reperfuzji in vitro oraz metodę oceny wpływu terapii komórkami macierzystymi na komórki serca po niedokrwieniu.

Transplantacja komórek macierzystych w modelu symulowanego niedokrwienia/reperfuzji in vitro

Protokół do określania względnej aktywności antyapoptotycznej mAb anty-TNFα przy użyciu mechanizmu neutralizacji z komórkami WEHI 164 jest przedstawiony tutaj. Protokół ten jest przydatny do porównywania siły neutralizacji różnych cząsteczek o tej samej funkcjonalności biologicznej.

Oznaczanie względnej siły działania przeciwciała monoklonalnego anty-TNF (mAb) przez neutralizację TNF przy użyciu metody bioanalitycznej in vitro

Celem tego protokołu jest zademonstrowanie przygotowania, hodowli, leczenia i barwienia immunologicznego eksplantatów ślimakowych u noworodków myszy. Technika ta może być wykorzystana jako narzędzie przesiewowe in vitro w badaniach słuchu.

Technika eksplantatu ślimakowego u noworodków jako narzędzie przesiewowe in vitro w badaniach słuchu

Terapia fotodynamiczna (PDT) to procedura medyczna, która polega na inkubacji egzogennie zastosowanego fotouczulacza (PS), a następnie fotoaktywacji światłem widzialnym w celu wywołania apoptozy. Przedstawiamy protokół PDT in vitro przeznaczony do symulacji PDT, który może być wykorzystany do badania różnic w inkubacji PS i parametrach leczenia światłem.

Podejście in vitro do terapii fotodynamicznej

Poznaj metodę oznaczania rozpuszczania in vitro wielu składników aktywnych granulek Rhodiola w ultraczystej wodzie. Technika HPLC pozwala badać krzywe rozpuszczania salidrozydów, kwasu galusowego i etylu galusanu.

Oznaczanie rozpuszczania in vitro składników wieloindeksowych w granulkach Rhodiola w medycynie tybetańskiej

Przeglądaj więcej filmów