Name: HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Poznaj metodę HPLC z chemicznym odciskiem palca do identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis i wykrywania fałszywych próbek. Protokół ten wspiera badania jakości surowców leczniczych i stanowi wzorzec dla innych materiałów medycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Projekt Administracji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Syczuanie (nr 2020JC0088, nr 2021MS203).

1. Metody chemicznego wykrywania odcisków palców
<ol>
	<li>Warunki chromatograficzne
	<ol>
		<li>Przygotować fazę ruchomą acetonitrylu (A)/wody (B). Ustaw program gradientu w następujący sposób w oprogramowaniu HPLC: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.</li>
		<li>Utrzymuj natężenie przepływu fazy ruchomej na poziomie 1,0 ml/min.</li>
		<li>Rozdzielanie chromatograficzne przeprowadzić na kolumnie C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) utrzymywanej w temperaturze 30 °C.</li>
		<li>Ustawić objętość wstrzykniętego wstrzykiwacza na 10 μl.</li>
		<li>Wykrywanie próbek na długości fali 205 nm. 
		UWAGA: Aby zapoznać się z konkretnymi ustawieniami warunków chromatograficznych, należy zapoznać się z procedurami operacyjnymi oprogramowania roboczego wysokosprawnej chromatografii cieczowej (tabela materiałów).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie roztworu próbki
	<ol>
		<li>Zmielić surowce do jednolitej wielkości cząstek, przepuszczając je przez nylonową siatkę o średnicy wewnętrznej 850 μm ± 29 μm.</li>
		<li>Umieścić 2 g zmielonego surowca (dokładnie zważonego) w kolbie stożkowej o pojemności 50 ml z korkiem i dodać 50 ml metanolu. Umieścić korek na kolbie i stosować ultradźwięki (600 W, 40 kHz) przez 30 minut.</li>
		<li>Następnie schłodzić kolbę do temperatury pokojowej (RT). Ponownie zważyć próbki i uzupełnić początkową masę, zastępując utracony ekstraktant.</li>
		<li>Wlać 4 ml roztworu metanolu zawierającego ekstrakty lecznicze do kolby miarowej o pojemności 10 ml. Dodaj 6 mlH2O, wymieszaj i pozostaw na 10 minut.</li>
		<li>Na koniec przefiltruj supernatant przez membranę filtracyjną 0,45 μm i przełącz go w stan czuwania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Walidacja metod wykrywania odcisków palców
	<ol>
		<li>Przygotować próbkę w sposób opisany powyżej (etap 1.2) i poddać ją analizie HPLC (etap 1.1) sześć razy dziennie. Aby ocenić precyzję, należy obliczyć względne odchylenie standardowe (RSD) względnego czasu retencji i względnych powierzchni pików, jak opisano w kroku 1.3.5.</li>
		<li>Ocenić stabilność roztworu próbki, analizując ten sam roztwór próbki przechowywany w temperaturze pokojowej przez 0, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 godziny, a następnie obliczyć RSD względnego czasu retencji i względnych powierzchni pików, jak opisano w kroku 1.3.5.</li>
		<li>Pobrać sześć powtórzeń tej samej próbki (CMT-4), przygotować roztwór próbki zgodnie z powyższą procedurą (etap 1.2) i wykryć jego odcisk palca w HPLC zgodnie z krokiem 1.1. Obliczyć RSD względnego czasu retencji i względnych powierzchni pików, a następnie ocenić jego powtarzalność zgodnie z opisem w kroku 1.3.5.</li>
		<li>Następnie użyj piku o numerze 10 w <silna klasa="xfig">Rysunek 1B jako pik odniesienia i oblicz RSD względnego czasu retencji i względnej powierzchni piku każdego wspólnego piku, jak opisano w kroku 1.3.5.</li>
		<li>Użyj wzorów wymienionych poniżej, aby obliczyć względny czas retencji i względną powierzchnię piku każdego wspólnego piku: 
		Tre = charakterystyka T/odniesienie T 
		Are = Cecha charakterystyczna/Odniesienie A 
		Gdzie Tre = względny czas retencji, Charakterystyka T= charakterystyczny czas utrzymywania szczytu, Todniesienie = referencyjny czas utrzymania szczytu, Are = względna powierzchnia piku, charakterystyka A= charakterystyczna powierzchnia piku, a Aodniesienie = referencyjna powierzchnia piku. 
UWAGA: Ustalenie odcisków palców tradycyjnej medycyny chińskiej zazwyczaj wymaga wybrania piku chromatograficznego, który jest łatwy do uzyskania i ma wysoką rozdzielczość. Jest on używany jako pik referencyjny do identyfikacji odcisków palców oraz badania ich stabilności i odtwarzalności.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Ustanowienie odcisku palca Chuanmutong i analiza podobieństwa
<ol>
	<li>Należy użyć 10 partii autentycznych próbek i pięciu partii domieszek, takich jak Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. (DC), Clematis peterae Hand.-Mazz. (DE), Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils (XS) i Clematis finetiana Levl. et Vaniot. (SMT) jako próbki do analizy odcisków palców.</li>
	<li>Przygotować roztwory próbek zgodnie z opisem w kroku 1.2. Przeprowadzić analizę odcisków palców wszystkich roztworów próbek za pomocą HPLC zgodnie z warunkami opisanymi w kroku 1.1.</li>
	<li>Zaimportuj odpowiednie dane do systemu oceny podobieństwa chromatograficznych odcisków palców tradycyjnej medycyny chińskiej (SESCF-TCM, wersja 2012). System oznaczy piki o rozsądnej wysokości i dobrej rozdzielczości na chromatogramach wszystkich próbek jako wspólne piki. 
	UWAGA: Oprogramowanie SESCF-TCM można pobrać po rejestracji na stronie internetowej Komisji Farmakopei Chińskiej (http://114.247.108.158:8888/login).
	<ol>
		<li>W oprogramowaniu kliknij przycisk Ustaw widmo referencyjne w menu.</li>
		<li>Następnie w oknie Ustawienia parametrów ustaw Szerokość okna czasowego na 0.5 i wybierz Metodę generowania widma kontrolnego jako Metodę mediany.</li>
		<li>Kliknij opcję Multi-point Calibration (Kalibracja wielopunktowa) w menu głównym, a następnie wybierz opcję Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych) jako Full Spectrum Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych).</li>
		<li>Na koniec kliknij Generuj kontrolę, aby wygenerować referencyjny chromatograficzny odcisk palca autentycznego gatunku Chuanmutong.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zaimportuj czas retencji i obszar piku 10 partii autentycznych próbek Chuanmutong i pięciu partii domieszek do SESCF-TCM w celu analizy. Konkretne operacje są następujące:
	<ol>
		<li>W oprogramowaniu kliknij przycisk Ustaw widmo referencyjne w menu głównym.</li>
		<li>W oknie Ustawienia parametrów ustaw referencyjny chromatograficzny odcisk palca autentycznego gatunku Chuanmutong jako odniesienie, wybierz metodę generowania widma kontrolnego jako metodę mediany i ustaw szerokość okna czasowego na 0,5.</li>
		<li>Kliknij opcję Multi-point Calibration (Kalibracja wielopunktowa) w menu głównym, a następnie wybierz opcję Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych) jako Full Spectrum Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych).</li>
		<li>Na koniec kliknij Oblicz podobieństwo, aby obliczyć podobieństwo na podstawie referencyjnych odcisków palców chromatogramu Chuanmutong. Na koniec oblicz podobieństwo odcisków palców za pomocą Systemu Chromatograficznej Oceny Odcisków Palców Medycyny Chińskiej (wersja 2012). 
		UWAGA: Aby zapoznać się z konkretnymi operacjami, zapoznaj się ze specyfikacją operacyjną systemu chromatograficznej oceny odcisków palców medycyny chińskiej (wersja 2012).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Analiza rozpoznawania wielu wzorców odcisku palca Chuanmutong
<ol>
	<li>Analiza skupień (CA)
	<ol>
		<li>Użyj obszarów pików 12 wspólnych pików w odciskach palców 10 partii autentycznych próbek Chuanmutong i ich pięciu partii domieszek jako zmiennych i wprowadź je do oprogramowania do analizy statystycznej w celu systematycznej analizy skupień (CA).</li>
		<li>Wybierz metodę międzygrupową i użyj współczynnika korelacji Pearsona jako podstawy klasyfikacji do narysowania diagramu analizy skupień Chuanmutong i jego domieszek. Konkretne operacje są następujące:
		<ol>
			<li>W oprogramowaniu do analizy statystycznej kliknij Plik, aby zaimportować dane.</li>
			<li>Kliknij Analiza w menu, a następnie kliknij Grupowanie systemów w Klasyfikacji.</li>
			<li>Wybierz wspólny obszar piku jako zmienną i ustaw liczbę klastrów na cztery.</li>
			<li>Kliknij Metoda, wybierz metodę grupowania jako Połączenie międzygrupowe, wybierz interwał pomiaru jako Korelacja Pearsona, a następnie kliknij OK, aby narysować mapę CA.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza głównych składowych (PCA)
	<ol>
		<li>Zaimportuj względną wspólną powierzchnię pików autentycznych odmian i ich domieszek do oprogramowania analitycznego w celu analizy PCA i użyj mapy wyników PCA do oceny mapy macierzy wyników różnic w próbie. Konkretne operacje są następujące:
		<ol>
			<li>Otwórz oprogramowanie do analizy danych, kliknij Plik w menu i utwórz nowy zwykły projekt. Zaimportuj obszar pików 12 typowych pików w arkuszu kalkulacyjnym (np. w formacie Excel) z systemu HPLC. Następnie kliknij Zakończ, aby zakończyć import danych.</li>
			<li>Kliknij Nowy, aby utworzyć nowy model, aby ustawić typ modelu za pomocą PCA. Kliknij Autodopasowanie i Dodaj, aby dopasować dane, a następnie kliknij Wyniki, aby uzyskać mapę wyników PCA.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ortogonalna analiza częściowej dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-DA)
	<ol>
		<li>Użyj metody ortogonalnej częściowej analizy najmniejszych kwadratów z trybem nadzoru, aby dokładniej przeanalizować względne wspólne piki powierzchni pików autentycznych odmian Chuanmutong i domieszek oraz narysuj mapę wyników klasyfikacji OPLS-DA dla wszystkich próbek. Konkretne operacje są następujące:
		<ol>
			<li>W oprogramowaniu do analizy danych kliknij Plik w menu, aby zaimportować plik i utworzyć nowy zwykły projekt. Zaimportuj obszar pików 12 typowych pików w arkuszu kalkulacyjnym z systemu HPLC, a następnie kliknij Zakończ, aby zakończyć import danych.</li>
			<li>Kliknij Nowy, aby utworzyć nowy model, aby ustawić typ modelu za pomocą PCA. Kliknij Autodopasowanie i Dodaj, aby dopasować dane. Następnie kliknij na Wyniki, aby uzyskać mapę wyników PCA.</li>
			<li>Kliknij Nowy i wybierz Nowy jako Model One, aby ustawić typ modelu za pomocą OPLS-DA.</li>
			<li>Kliknij Skala i ustaw typ za pomocą Par dla wszystkich. Najpierw kliknij Autodopasowanie, a następnie kliknij Wyniki, aby uzyskać mapę wyników OPLS-DA.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>W celu określenia wpływu każdego wspólnego piku w Chuanmutong na jego wyniki klasyfikacji oraz różnicę między autentycznymi materiałami Chuanmutong a powiązanymi domieszkami, należy użyć zmiennej ważność w projekcji (VIP) do analizy.</li>
		<li>Narysuj mapę VIP różnych składników Chuanmutong. Wynikowa mapa adresów VIP służy do oceny wpływu każdej zmiennej na klasyfikację i do odsiewania składników, które w znaczący sposób przyczyniają się do różnic między grupami. Konkretne operacje są następujące:
		<ol>
			<li>W oprogramowaniu do analizy danych kliknij Analizuj w menu i kliknij Permutacje, ustaw liczbę permutacji na 200 i uzyskaj R2 i Q2 mapy wyników OPLS-DA.</li>
			<li>Kliknij VIP i wybierz VIP Predictive, aby uzyskać mapę VIP.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Oznaczanie β-sitosterolu w Chuanmutong metodą HPLC
<ol>
	<li>Warunki chromatograficzne (patrz krok 1.1)
	<ol>
		<li>Przygotuj fazę ruchomą: metanol-woda (97:3).</li>
		<li>Ustawić natężenie przepływu fazy ruchomej na 1,0 ml/min.</li>
		<li>Rozdzielanie chromatograficzne przeprowadzić na kolumnie C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) utrzymywanej w temperaturze 30 °C.</li>
		<li>Ustawić objętość wstrzykniętego wstrzykiwacza na 10 μl.</li>
		<li>Wykryj składnik na długości fali 204 nm.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie roztworu próbki
	<ol>
		<li>Przygotować podstawowy roztwór wzorcowy β-sitosterolu (0,1 mg/ml), rozpuszczając w metanolu dokładnie odważoną ilość odpowiedniego wzorca odniesienia.</li>
		<li>Zmielić próbkę analityczną surowca do uzyskania jednolitej wielkości cząstek, przepuszczając próbkę przez siatkę nylonową o średnicy wewnętrznej 180 μm ± 7,6 μm.</li>
		<li>Umieścić 2 g zmielonego surowca (dokładnie zważonego) w kolbie okrągłodennej i dodać do niej 50 ml chloroformu.</li>
		<li>Podłączyć kolbę do chłodnicy zwrotnej i podgrzewać ją we wrzącej łaźni wodnej (umiarkowane wrzenie) przez 60 minut. Przefiltrować roztwór ekstrakcyjny za pomocą bibuły filtracyjnej o grubości 15-20 μm.</li>
		<li>Odparować filtrat do stanu bliskiego suchości we wrzącej łaźni wodnej (umiarkowane wrzenie) przez około 10 minut.</li>
		<li>Rozpuścić pozostałość i uzupełnić objętość do 5 ml przy użyciu metanolu. Na koniec przepuść supernatant przez membranę filtracyjną 0,45 μm i przełącz go w stan czuwania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Walidacja metody
	<ol>
		<li>Pobrać roztwór podstawowy β-sitosterolu przygotowany w podkroku 4.2.1, rozcieńczyć go 100% metanolem i przygotować roztwory o stężeniach 100 μg/ml, 80 μg/ml, 60 μg/ml, 50 μg/ml, 40 μg/mL, 30 μg/ml i 20 μg/ml.</li>
		<li>Wstrzyknąć próbki w warunkach chromatograficznych opisanych w kroku 4.1 w celu wyznaczenia powierzchni piku, przeprowadzić analizę regresji od powierzchni piku do objętości iniekcji i uzyskać równanie regresji oraz współczynnik korelacji w celu oceny jego liniowości.</li>
		<li>Przygotować próbki w sposób opisany powyżej (etap 4.2) i poddać je analizie HPLC (etap 4.1) sześć razy tego samego dnia. Następnie oblicz RSD powierzchni pików, aby ocenić precyzję.</li>
		<li>Oceń stabilność roztworu próbki, analizując te same roztwory próbek przechowywane w RT przez 0, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 godziny, jak opisano w kroku 4.1. Następnie oblicz RSD powierzchni pików zgodnie z opisem w kroku 1.3.5.</li>
		<li>Zbadać powtarzalność, rozpuszczając tę samą próbkę (CMT-4) w sekstuplikacie, przygotowanym zgodnie z opisem w kroku 4.2, i poddając ją analizie HPLC, jak opisano w kroku 4.1. Następnie oblicz RSD zawartości β-sitosterolu w sześciu próbkach.</li>
		<li>Oceń dokładność metody, stosując metodę dodawania wzorca. W tym celu dodać roztwory referencyjne β-sitosterolu do próbek o stężeniach 80%, 100% i 120% zawartości β-sitosterolu i powtórzyć każdy warunek trzy razy, jak opisano w kroku 4.1. Oceń dokładność metody, obliczając średni odzysk i RSD. 
		UWAGA: Wzór obliczeniowy wskaźnika odzysku (RR) jest następujący: 
		RR % = [(Mt - M0) / Ms] × 100 
		Gdzie Mt = jakość β-sitosterolu po dodaniu wzorca, M0 = jakość roztworu próbki, a Ms = jakość dodanego β-sitosterolu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Oznaczanie zawartości β-sitosterolu w próbkach
	<ol>
		<li>Weź 10 partii autentycznych chińskich materiałów leczniczych i pięć partii powiązanych domieszek, aby przygotować roztwory próbek zgodnie z krokiem 4.2.</li>
		<li>Następnie wstrzyknąć każdy roztwór próbki i roztwór wzorcowy β-sitosterolu w celu określenia powierzchni piku w warunkach opisanych w kroku 4.1 i obliczyć zawartość β-sitosterolu w każdej próbce, stosując metodę jednopunktową wzorca zewnętrznego.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Chen, C. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChen%2C+CR+%22Chinese+Medicine+Specimen+Picture+Book%22">Chinese Medicine Specimen Picture Book</a>. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).</li>
<li>Xiong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lignans+from+the+stems+of+Clematis+armandii+%28%26%2334%3BChuan-Mu-Tong%26%2334%3B%29+and+their+anti-neuroinflammatory+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Lignans from the stems of Clematis armandii (&#34;Chuan-Mu-Tong&#34;) and their anti-neuroinflammatory activities.</a> Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).</li>
<li>Pan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+lignan+from+the+Chinese+medicinal+plant+Clematis+armandii%2C+inhibits+A431+cell+growth+via+blocking+p70S6%2FS6+kinase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Cancer+Therapies%22%5BJournal%5D)">a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway.</a> Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Pharmacopoeia+of+The+People%27s+Republic+of+China%3A+%28Edition+2020%29%22">Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020)</a>. , The Medicine Science and Technology Press of China. China., Beijing. 38(2020).</li>
<li>Wang, D. G., Guo, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Textual+research+on+the+materia+medica+and+authenticity+of+Clematidis+armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medicine+Research%22%5BJournal%5D)">Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696(2007).</li>
<li>Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+resources+and+exploitation+of+Caulis+Clematidis+Armandii+in+Sichuan%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).</li>
<li>Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+identi%EF%AC%81cation+of+Caulis+Clematidis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Research+and+Practice+on+Chinese+Medicines%22%5BJournal%5D)">Study on the identiﬁcation of Caulis Clematidis Armandii.</a> Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).</li>
<li>Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacognosy+identification+of+Ethnomedicine+Clematis+ranunculoides+Franchet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Guangzhou+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet.</a> Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).</li>
<li>Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+random+amplified+polymorphic+DNA+and+sequence+characterized+amplified+regions+of+Caulis+Clematidis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chengdu+Medical+College%22%5BJournal%5D)">Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii.</a> Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).</li>
<li>Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identification+of+Clematidis+Armandii+Caulis+and+its+adulterants+and+closely+related+species+by+ITS2+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Global+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence.</a> Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).</li>
<li>Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+constituents+and+identification+of+the+caules+of+Clematis+armandii+Franch.and+Clematis+montana+Buch.-Ham%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research+and+Development%22%5BJournal%5D)">Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham.</a> Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).</li>
<li>Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+four+compounds+from+Clematis+Montana%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Liaoning+University+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Studies on four compounds from Clematis Montana.</a> Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).</li>
<li>Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+constituents+from+stems+of+Clematis+armandii%28I%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+uses%2C+phytochemistry%2C+pharmacology%2C+and+toxicology+of+Akebiae+Caulis+and+its+synonyms%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review.</a> Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245(2021).</li>
<li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diuretic+effect+and+material+basis+of+Clematidis+Armandii+Caulis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).</li>
<li>Kuang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+study+of+Caulis+Clematidis+Armandii+and+its+traditionally+used+products+and+counterfeit+species+based+on+efficacy+and+pharmacognosy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+assessment+of+Asarum+heterotropoides+var.+mandshuricum+based+on+HPLC+multi-component+determination+and+multiple+pattern+recognition+method+of+fingerprint%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multi-components+of+Paeoniae+Alba+Radix+based+on+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+and+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).</li>
<li>Li, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+investigation+for+raw+and+processed+products+of+Euodiae+Fructus+based+on+high-performance+liquid+chromatography+fingerprints+and+chemical+pattern+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+%26+Biodiversity%22%5BJournal%5D)">Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition.</a> Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281(2021).</li>
<li>Dong, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+suitable+distribution+areas+of+Kawa+Kimichi+produced+in+Sichuan+province-based+on+remote+sensing+and+GIS-A+case+study+of+Clematis+Armandii%5BTitle%5D)+AND+%22Modernization+of+Traditional+Chinese+Medicine+and+Materia+Medica-World+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii.</a> Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).</li>
<li>Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+histological+identification+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Morphological and histological identification of Chuanmutong.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).</li>
<li>Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+Research+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sichuan+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Quality Research of Chuanmutong.</a> Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).</li>
<li>Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+on+the+Quality+Standard+of+Chuanmutong%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Archives+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Research on the Quality Standard of Chuanmutong.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).</li>
<li>Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+stigmasterol+in+Clematis+armandii+Franch+and+Clematis+montana+Buch-Ham.+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medica+Research%22%5BJournal%5D)">Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).</li>
<li>Qing, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+oleanolic+acid+in+Caulis+clematidis+armandii+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22West+China+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC.</a> West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).</li>
<li>Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+on+oleanolic+acid+in+caulis+clematidis+armandii+by+microwave+assisted+extraction-HPLC%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Anhui+Academy+of+Agricultural+Sciences%22%5BJournal%5D)">Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS.</a> Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Pobieranie próbek do badań jest pierwszym kluczowym krokiem na drodze do skonstruowania rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności chińskich materiałów leczniczych. Dzięki badaniom rynku odkryliśmy, że Sichuan Ya'an, Liangshan i Leshan są głównymi obszarami produkcji dzikich zasobów Chuanmutong. Pokrewne odmiany tego samego rodzaju mają również ten sam rozkład geograficzny 6,20; CC, DC, DE, XS i SMT są często nadużywane jako Chuangmutong<sup ...

Chuanmutong, suchy Caulis of Clematis armandii Franch. lub Clematis montana.-Ham., to tradycyjna medycyna chińska powszechnie stosowana w klinikach1,2,3. Stosuje się go w leczeniu problemów z oddawaniem moczu, obrzęków, owrzodzeń na języku i ustach, zmniejszonego wydzielania mleka, sztywności stawów i bólu mięśni spowodowanego wilgotnym ciepłem4. Chuanmutong zawsze był pozyskiwany z dzikich odmian, dystrybuowanych głównie w południowo-zachodnich Chinach, zwłaszcza w Syczuanie, gdzie można znaleźć najlepszą jakość5,6. Trudno jest odróżnić autentyczne odmiany od ich blisko spokrewnionych domieszek ze względu na ich podobne cechy7,8,9,10. Standard jakości Chuanmutong w wydaniu Farmakopei Chińskiej z 2020 r. określa jedynie właściwości, identyfikację mikroskopową i identyfikację cienkowarstwową bez określenia zawartości, co nie może skutecznie zidentyfikować domieszek, a zatem wiąże się z potencjalnym ryzykiem. Co więcej, istnieje niewiele doniesień porównujących i identyfikujących Chuanmutong i pokrewne rośliny. W związku z tym metoda kontroli jakości w celu zapewnienia autentyczności Chuanmutong jest warta dalszych badań.
Składniki chemiczne Chuanmutong składają się głównie z pentacyklicznych triterpenoidów typu oleanan i ich glikozydów, flawonoidów i kwasów organicznych11,12,13,14. Wśród nich kwas oleanolowy, β-sitosterol, stigmasterol i ergosterol mają działanie moczopędne o różnym natężeniu, które mogą być potencjalnymi substancjami farmakodynamicznymi promującymi diurezę i łagodzącymi strangurię15,16. Chemiczne odciski palców uzyskuje się poprzez oddzielenie i wykrycie wielu składników chemicznych zawartych w próbkach za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), chromatografii gazowej (GC) itp. Przyjęcie odpowiednich metod analizy statystycznej w celu analizy cech Chuanmutong może określić ogólną kontrolę jakości i naukową identyfikację tradycyjnej medycyny chińskiej17,18,19.
W tym badaniu zebrano 10 partii autentycznych odmian Chuanmutong i pięć partii domieszek. Ich jakość porównano i przeanalizowano metodą odcisków palców HPLC połączoną z rozpoznawaniem wielu wzorców, w tym analizą skupień (CA), analizą głównych składowych (PCA), ortogonalną analizą częściowej dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-CA) oraz oznaczaniem zawartości składnika farmakodynamicznego. Protokół ten ustanawia metodę identyfikacji autentycznych odmian o wysokiej specyficzności, nową strategię naukowej identyfikacji autentycznych odmian i domieszek w chińskich materiałach leczniczych.

<table><tbody><tr><td>Kwas octowy</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny</td><td>2017381038</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitryl</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; Trading Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>WXBD5243V</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Sitosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chiny</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Kolumna C18</td><td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>Welch Ultimate LP</td><td></td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>19020103</td><td>CMT-1</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>200701</td><td>CMT-2</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>200701</td><td>CMT-3</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>200901</td><td>CMT-4</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>210701</td><td>CMT-5</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>210401</td><td>CMT-6</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>200901</td><td>CMT-7</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>201201</td><td>CMT-8</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>201001</td><td>CMT-9</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny</td><td>210501</td><td>CMT-10</td></tr><tr><td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td><td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, Chiny&nbsp;</td><td>-</td><td>CC</td></tr><tr><td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td><td>Wioska Heilin, gmina Qiliping, powiat Hongya, Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>-</td><td>DC</td></tr><tr><td>Clematis peterae Ręka.-Mazz.</td><td>Wioska Huangmu, gmina Huangmu, powiat Hanyuan, Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>-</td><td>DE</td></tr><tr><td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td><td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, Chiny&nbsp;</td><td>-</td><td>XS</td></tr><tr><td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td><td>Wioska Wannian, gmina Huangwan, powiat Emei, Syczuan, Chiny&nbsp;</td><td>-</td><td>SMT</td></tr><tr><td>Waga elektroniczna</td><td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Szanghaj,&nbsp; Chiny&nbsp;</td><td>FA1204</td><td></td></tr><tr><td>Ergosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Chiny</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny</td><td>2021112602</td><td></td></tr><tr><td>Octan etylu</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny</td><td>2017042043</td><td></td></tr><tr><td>Kwas mrówkowy</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny</td><td>2016062901</td><td></td></tr><tr><td>Wysokosprawna chromatografia cieczowa</td><td>Agilent, USA.</td><td>1260</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS Statistics wersja 26.0</td><td></td> <td>International Business Machines Corporation, USA-Metanol</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; Trading Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>WXBD6409V</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny</td><td>202010302</td><td></td></tr><tr><td>alkohol n-butylowy</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny</td><td>2020071047</td><td></td></tr><tr><td>Eter naftowy</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny</td><td>2020090125</td><td></td></tr><tr><td>Kwas fosforowy</td><td>Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny</td><td>20200110</td><td></td></tr><tr><td>SESCF-TCM wersja 2012</td><td>Komisja Farmakopei Narodowej, Chiny-http://114.247.108.158:8888/login</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Stigmasterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chiny</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Trichlorometan</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Szanghaj, Chiny</td><td>20200214</td><td></td></tr><tr><td>Umetrics Wersja SIMCA 14.1.0.2047</td><td>Umetrics, Szwecja-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Maszyna do wody ultraczystej</td><td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Syczuan, Chiny</td><td>UPH-II-10T</td><td></td></tr><tr><td>Myjka ultradźwiękowa</td><td>Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, Chiny</td><td>KH3200E</td><td></td></tr></tbody></table>

hplc w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności clematidis armandii caulis

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

Metoda identyfikacji chińskich materiałów leczniczych i związanych z nimi domieszek została skonstruowana na przykładzie Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, powszechnie stosowana tradycyjna medycyna chińska). Dziesięć partii oryginalnych odmian Chuanmutong i pięć partii pokrewnych domieszek przeanalizowano i porównano w oparciu o odciski palców z wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) w połączeniu z chemometrią, w tym analizą skupień (CA), analizą głównych składowych (PCA) i ortogonalną częściową analizą dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-DA). Ponadto oznaczono zawartość β-sitosterolu. Ustalono kontrolny chemiczny odcisk palca Chuanmutong i zidentyfikowano 12 wspólnych pików. Podobieństwo między odciskiem palca 10 partii oryginalnych odmian Chuanmutong a kontrolnym odciskiem palca wynosiło 0,910-0,989, podczas gdy podobieństwo pięciu partii domieszek wynosiło tylko 0,133-0,720. Opierając się na wspólnych pikach na chromatogramie, 15 partii próbek sklasyfikowano na trzech poziomach zawartości przez PCA i zagregowano w cztery kategorie według CA, uzyskując wyraźne rozróżnienie między autentycznym Chuanmutong a domieszkami Chuanmutong. Ponadto w ramach projektu OPLS-DA znaleziono siedem zróżnicowanych składników, które mogą skutecznie zidentyfikować autentyczny Chuanmutong i domieszki Chuanmutong. Zawartość β-sitosterolu w 10 partiach oryginalnych odmian Chuanmutong wynosiła 97,53-161,56 μg/g, podczas gdy zawartość β-sitosterolu w pięciu partiach domieszek była bardzo zróżnicowana, wśród których zawartość β-sitosterolu w Clematis peterae Hand.-Mazz. i Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. była znacznie niższa niż w przypadku autentycznych odmian Chuanmutong. Zawartość składników indeksu HPLC i metoda rozpoznawania wielu wzorców chemicznych odcisków palców opracowana w tym badaniu zapewniają nową strategię skutecznej identyfikacji autentycznych chińskich materiałów leczniczych i powiązanych domieszek.

Odcisk chromatograficzny Chuanmutong i analiza podobieństwa (SA) 
Wartości RSD dla względnego czasu retencji w badaniach precyzji, powtarzalności i stabilności wyniosły odpowiednio poniżej 0,46%, 1,65% i 0,53%; wartości RSD dla względnego pola powierzchni piku wyniosły odpowiednio poniżej 4,23%, 3,56% i 3,96%. Jak pokazano na Rysunkach 1A,B, w odciskach HPLC 10 autentycznych próbek Chuanmutong zidentyfikowano 12 wyraźnych wspólnych pików (od piku 1 do pik...

Tutaj prezentujemy protokół do ustanowienia wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), połączonej z chemicznym rozpoznawaniem wielu wzorów odcisków palców, który zapewnia nową strategię skutecznej identyfikacji prawdziwych odmian Clematidis Armandii Caulis i jego domieszek.

HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

https://cloudfront.jove.com/CDNSource/teasers/64690.jpg

Protokół ten może zapewnić nową strategię skutecznej identyfikacji oryginalnych materiałów Clematidis armandii caulis i jego domieszek. Metoda ta może być stosowana w badaniach nad jakością materiałów leczniczych i stanowi odniesienie do badania standardów jakości innych chińskich materiałów leczniczych. Aby rozpocząć przygotowanie próbki, zmiel surowiec do jednolitej wielkości cząstek, przepuszczając je przez nylonową siatkę o odpowiedniej średnicy wewnętrznej.Transfer dokładnie zważył dwa gramy zmielonego surowca do zakorkowanej 50-mililitrowej kolby stożkowej przed dodaniem 50 mililitrów metanolu do kolby. Umieścić korek na kolbie w ultradźwiękach podgrzanych do 600 watów i 40 kiloherców przez 30 minut. Pod koniec inkubacji przecedzić roztwór ekstraktu leczniczego przez bibułę filtracyjną.Po odcedzeniu przenieść cztery mililitry roztworu metanolu zawierającego ekstrakty lecznicze do kolby miarowej o pojemności 10 mililitrów. Następnie dodaj do niego sześć mililitrów wody i wymieszaj roztwór. Pozostaw roztwór na 10 minut, aby się uspokoił.Do analizy próbek metodą HPLC. Zacznij od przygotowania faz ruchomych i ustaw program gradientu HPLC zgodnie z opisem w manuskrypcie. Przefiltrować próbkę przez mikroporowatą membranę filtracyjną o grubości 0,45 mikrona i poddać ją analizie HPLC.Dla każdej próbki należy wykonywać analizę sześć razy dziennie. Aby ocenić stabilność roztworu próbki, należy przeanalizować ten sam roztwór próbki przechowywany w temperaturze pokojowej przez 0, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 godziny po przygotowaniu. Pobrać sześć powtórzeń tej samej próbki i wykryć jej odcisk palca w HPLC.Zaimportuj odpowiednie dane do oprogramowania o nazwie System Oceny Podobieństwa Chromatograficznych Odcisków Palców Tradycyjnej Medycyny Chińskiej lub SESCF TCM w wersji 2012. Zaimportuj czas retencji i obszar piku dla wszystkich 10 partii autentycznych próbek Chuanmutong, a także pięciu partii domieszek do SESCF TCM w celu analizy. W menu głównym kliknij ustaw widmo referencyjne i przejdź do okna ustawień parametrów, aby ustawić referencyjny chromatograficzny odcisk palca autentycznego gatunku Chuanmutong jako odniesienie.Następnie ustaw metodę generowania widma kontrolnego jako metodę mediany o szerokości okna czasowego 0,5. Następnie kliknij kalibrację wielopunktową w menu głównym, wybierz szczyty, a następnie wybierz opcję dopasowania pików jako zaznaczone szczyty. Na koniec kliknij przycisk Oblicz podobieństwo, aby przeprowadzić analizę podobieństwa próbek na podstawie odcisków palców chromatogramu referencyjnego Chuanmutong.Aby przeprowadzić systemową analizę skupień, otwórz odpowiednie oprogramowanie do analizy statystycznej i kliknij plik, aby zaimportować do oprogramowania dane z 10 partii autentycznych próbek i pięciu partii domieszek. W menu, na karcie Klasyfikacja kliknij Analiza i grupowanie systemów. Jako zmienne należy wybrać wspólne obszary pików 10 partii próbek autentycznych i pięciu partii domieszek.Ustaw liczbę klastrów na cztery. Następnie kliknij Metoda, aby wybrać Metodę klastrowania jako połączenie międzygrupowe. Wybierz interwał pomiaru jako korelację Pearsona i użyj zakładki OK, aby narysować mapę analizy skupień.W przypadku analizy głównych składowych lub PCA otwórz oprogramowanie do analizy danych. Kliknij plik w menu i utwórz nowy zwykły projekt. Zaimportuj obszar pików 12 typowych pików w arkuszu kalkulacyjnym Excel lub podobnym z systemu HPLC.Naciśnij przycisk Zakończ, aby zakończyć import danych. Aby ustawić typ modelu za pomocą PCA, kliknij Nowy, aby utworzyć nowy model, a następnie dopasuj dane za pomocą zakładek autodopasowania i dodawania. Przejdź do wyników, aby uzyskać mapę wyników PCA.Korzystanie z ortogonalnej analizy częściowej dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLSDA). Wygeneruj mapę wyników PCA, jak pokazano wcześniej. Ustaw typ modelu za pomocą OPLSDA, klikając Nowy i Nowy Jako model jeden Przed przejściem do skalowania w wyborze par dla wszystkich, a następnie naciśnij AutoFit w wynikach, aby wygenerować mapę wyników OPLSDA.Aby oszacować znaczenie i projekcję zmiennej, przejdź do menu oprogramowania do analizy danych i przejdź do Analizuj, a następnie ustaw liczbę na 200 w obszarze na mutacje. Uzyskaj wartości R kwadrat i Q kwadrat z wyniku OPLSDA i kliknij VIP i VIP predykcyjny, aby uzyskać mapę VIP. Odciski palców HPLC 10 autentycznych próbek Chuanmutong wykazały 12 odrębnych wspólnych pików, z których były stosunkowo duże i dobrze rozdzielone.Pik numer 10 został wykorzystany jako pik referencyjny do oszacowania względnych czasów retencji pików spoczynkowych. Autentyczne próbki wykazywały stopień podobieństwa bardzo zbliżony do jednego, co sugeruje wysokie podobieństwo w dobrej konsystencji. Jednak stopień podobieństwa między pięcioma partiami domieszek a kontrolnym Chuanmutong był dość niski.Zaobserwowano, że odciski palców HPLC pięciu domieszek różnią się od autentycznych próbek, głównie w regionie, w którym czas retencji wynosił od 28 do 55 minut. PCA wykazało oczywiste podobieństwo między autentycznymi odmianami i ich odmienność od domieszek, z wyjątkiem domieszki CC. Podobne wyniki uzyskano również z analizy skupień, gdy odległość klasyfikacji wynosiła 20. Macierz wyników wygenerowana przez OPLSDA nie wykazała przecięcia między punktami próbkowania autentycznych próbek a domieszkami.Ponownie, domieszkujący CC bardziej przypominał autentyczne odmiany niż inne domieszki. Zgodnie z mapą VIP, piki o wartościach większych niż jeden zostały zidentyfikowane jako główne składniki markera powodujące różnicę między próbkami autentycznymi a domieszkami. Zawartość beta-sitosterolu, aktywnego składnika znajdującego się w Chuanmutong, została wykryta we wszystkich pięciu partiach domieszek, ale zawartość była bardzo zróżnicowana.Protokół ten ustanawia różne metody analizy, aby odzwierciedlić wszystkie informacje o materiałach leczniczych pod wieloma kątami i dookoła, aby oszacować autentyczność materiałów leczniczych Chuanmutong.

hplc-coupled-with-chemical-fingerprinting-for-multi-pattern

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Nieukierunkowana metabolomika dostarcza hipotezy generującej migawkę profilu metabolicznego.  Protokół ten zademonstruje ekstrakcję i analizę metabolitów z komórek, surowicy lub tkanki.  Szereg metabolitów jest badany za pomocą ekstrakcji ciecz-faza cieczowa, ultraprzepływowej chromatografii cieczowej/spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS) w połączeniu z oprogramowaniem do analizy różnicowej.

Nieukierunkowana metabolomika ze źródeł biologicznych przy użyciu ultrasprawnej chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS)

Tutaj prezentujemy protokół działania i dostrajania kolumn chromatografii przepływowej z równoległymi segmentami, aby umożliwić detekcję multipleksowaną.

Dostrajanie kolumny przepływu z równoległymi segmentami i włączanie detekcji multipleksowej

Przedstawiono metodę identyfikacji gatunków materiału botanicznego poprzez bezpośrednią analizę w czasie rzeczywistym - spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości i wielowymiarowa analiza statystyczna.

Szybka, wysokoprzepustowa identyfikacja gatunków materiału botanicznego za pomocą bezpośredniej analizy w czasie rzeczywistym Spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości

Tutaj prezentujemy protokół sekwencyjnej celowanej kwantyfikacji i nieukierunkowanej analizy związków fluorowanych w wodzie za pomocą spektrometrii mas. Metodologia ta zapewnia ilościowe poziomy znanych związków fluorochemicznych i identyfikuje nieznane substancje chemiczne w powiązanych próbkach wraz z półilościowymi oszacowaniami ich obfitości.

Identyfikacja per- i polifluorowanych związków chemicznych za pomocą połączonego przepływu pracy spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości z ukierunkowanymi i nieukierunkowanymi badaniami przesiewowymi

Prezentowany tutaj jest protokół do terenowej identyfikacji Matricaria chamomilla za pomocą przenośnego systemu qPCR. Ten łatwy do wykonania protokół jest idealny jako metoda potwierdzania tożsamości gatunku botanicznego w miejscach, w których dostęp do sprzętu laboratoryjnego i wiedzy specjalistycznej jest ograniczony, takich jak gospodarstwa rolne i magazyny.

Identyfikacja terenowa Matricaria chamomilla za pomocą przenośnego systemu qPCR

Ten protokół prezentuje podejście do odcisku palca i eksploracji wielowymiarowych danych zebranych przez wszechstronną dwuwymiarową chromatografię gazową sprzężoną ze spektrometrią mas. Dedykowane algorytmy rozpoznawania wzorców (dopasowywanie szablonów) są stosowane do badania informacji chemicznych zaszyfrowanych we frakcji lotnej oliwy z oliwek z pierwszego tłoczenia (tj. lotatylomie).

Chromatograficzne odciski palców poprzez dopasowanie szablonu do danych zebranych za pomocą kompleksowej dwuwymiarowej chromatografii gazowej

Produkty naturalne stanowią obiecujące punkty wyjścia dla rozwoju nowych leków i środków terapeutycznych. Jednak ze względu na dużą różnorodność chemiczną znalezienie nowych związków terapeutycznych z roślin jest trudnym i czasochłonnym zadaniem. Opisujemy uproszczone podejście do identyfikacji cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i antybiofilmu z ekstraktów i frakcji roślinnych.

Systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów

Szybka multidyscyplinarna strategia wczesnego wykrywania zakwitów sinic i związanych z nimi cyjanotoksyn jest opisana tutaj. Pozwala na wykrycie cyjanobakterii i pokrewnych sinic w próbkach wody oraz w matrycach organicznych, takich jak próbki małży, w ciągu 24 godzin.

Wczesne wykrywanie zakwitów sinic i związanych z nimi cyjanotoksyn przy użyciu strategii szybkiego wykrywania

Przedstawiono procedurę przygotowania porowatych hybrydowych mediów separacyjnych składających się z makroporowatego monolitu polimerowego wewnętrznie pokrytego mikroporowatym polimerem koordynacyjnym o dużej powierzchni.

Otrzymywanie wysokoporowatych koordynacyjnych powłok polimerowych na makroporowatych monolitach polimerowych w celu zwiększonego wzbogacenia fosfopeptydów

Przedstawiono operacyjnie prostą  procedurę syntezy orto-trifluorometoksylowanych pochodnych aniliny poprzez dwuetapową sekwencję O-trifluorometylacji N-arylo-N-hydroksyacetamidu, po której następuje termicznie indukowana wewnątrzcząsteczkowa migracjaOCF 3.

Protokół syntezy orto-trifluorometoksylowanych pochodnych aniliny

Poznaj metodę HPLC z chemicznym odciskiem palca do identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis i wykrywania fałszywych próbek. Protokół ten wspiera badania jakości surowców leczniczych i stanowi wzorzec dla innych materiałów medycznych.

HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis (Wideo) | JoVE Journal

HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis

Przeglądaj więcej filmów