Model nawrotu glejaka po resekcji do badań terapeutycznych hydrożelu

Nawrót guza jest główną przyczyną niepowodzenia schematu chirurgicznej resekcji GBM. Nasz protokół zapewnia unikalny model nawrotu GBM do skutecznych badań nad leczeniem miejscowym nawrotu, po badaniach. Technika ta zapewnia wygodną i wykonalną metodę konstruowania modelu nawrotu GBM po resekcji i może być stosowana w różnych badaniach nad nawrotem GBM.

Zacznij od przygotowania zwierzęcia. Wytnij skórę głowy myszy około jednego centymetra wzdłuż linii środkowej na prawym czole nożyczkami okulistycznymi. Dostrój aparat stereotaktyczny tak, aby upewnić się, że szew w jodełkę i przedni punkt ciemiączka znajdują się na tym samym poziomie.

Za pomocą bawełnianego wacika zanurzonego w fiolecie genianowym zaznacz punkt w odległości jednego milimetra do przodu, 1,8 milimetra w prawo i trzy milimetry w dół od przedniego ciemiączka. Wywierć punkt za pomocą mini-wiertła czaszkowego o średnicy jednego milimetra. Utwórz por o średnicy około jednego milimetra i głębokości jednego milimetra.

Usuń wysięk płynu mózgowo-rdzeniowego za pomocą sterylnego bawełnianego wacika. Następnie odessać pięć mikrolitrów zawiesiny komórek nowotworowych za pomocą mikrostrzykawki. Wyrównać końcówkę igły mikrostrzykawki pionowo z otworem do wiercenia czaszki i wkładać, aż końcówka igły wejdzie w płaszczyznę czaszki na trzy milimetry.

Następnie cofnij igłę o 0,5 milimetra. Otworzyć mikrostrzykawkę i wstrzykiwać roztwór z prędkością jednego mikrolitra na minutę. Zachować igłę przez 10 minut po wstrzyknięciu.

Następnie powoli wyjmować mikrostrzykawkę i uciskać miejsce wstrzyknięcia sterylnym, suchym wacikiem. Zszyj skórę głowy niewchłanialnym szwem chirurgicznym 10-0 i zdezynfekuj nacięcie. Monitoruj stan zdrowia zwierzęcia i trzymaj je w ciepłych warunkach.

Po obudzeniu myszy przenieś ją z powrotem do klatki mieszkaniowej. 10 dni po łożyskowaniu guza wykryj przeszczepiony guz. W tym celu wstrzyknij myszowi dootrzewnowo fluoresceinę potasu, a 11 sekund później zobrazuj mysz za pomocą systemu obrazowania bioluminescencyjnego in vivo.

Oddziel tkankę skóry głowy od czaszki i sprawdź otwór wywiercony do budowy ortotopowego wewnątrzczaszkowego modelu GBM. Jeśli otwór się zagoił, zidentyfikuj otwór za pomocą aparatu stereotaktycznego i wywierć otwór, jak pokazano wcześniej. Zwiększ całą średnicę do pięciu milimetrów za pomocą wiertła do czaszki i usuń wysiękowy płyn mózgowo-rdzeniowy za pomocą sterylnego bawełnianego wacika.

Ustaw ostrość mikroskop na główce myszy i dostosuj ustawienia, aby upewnić się, że wiercony otwór znajduje się w środku pola widzenia. Wytnij opony mózgowe mikronożyczkami. Następnie usuń część tkanki nowotworowej za pomocą mikrokirety i mikroskalpela pod mikroskopem.

Należy zatamować krwawienie jałową gazą i przemyć wstrzyknięcie sterylnym roztworem soli fizjologicznej. Za pomocą jednomililitrowej strzykawki wstrzyknąć 10 mikrolitrów dostępnego w handlu hydrożelu do jamy resekcyjnej. Korzystając z tego protokołu, komórki GBM wszczepiono do mózgu myszy, a wzrost guza przetestowano za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego in vivo w 10 dniu.

Resekcję i wstrzyknięcie hydrożelu wykonano w 11 dobie. Wielkość guzów w modelu nawrotu GBM po resekcji była istotnie mniejsza niż w ortotopowym wewnątrzczaszkowym modelu GBM. Monitorowanie resztkowego wzrostu guza w 25 dniu wykazało nawrót guzów.

Barwienie H&E potwierdziło, że model nawrotu GBM po resekcji został pomyślnie skonstruowany i że resztkowe guzy znacznie powróciły po resekcji. Najważniejszą rzeczą, o której należy pamiętać w tej procedurze, jest przecięcie opon mózgowych i usunięcie części tkanki nowotworowej pod mikroskopem.