Model ucha myszy do oceny alergicznego kontaktowego zapalenia skóry
24 marca 2023
Tutaj opisujemy metody wywoływania alergicznego kontaktowego zapalenia skóry w uszach myszy za pomocą 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenu (DNFB) i jak ocenić nasilenie alergicznego kontaktowego zapalenia skóry.
Model ten może być wykorzystywany nie tylko do badania patogenezy ACD, ale ma również zastosowanie w przedklinicznej ewolucji nowych metod terapeutycznych, co ma istotne znaczenie. Jest to stabilny i wydajny model zwierzęcy z wieloma zaletami, takimi jak krótki okres eksperymentu, łatwa obsługa, oczywiste objawy i wysoki wskaźnik sukcesu. Nasz protokół eksperymentalny jest bardzo szczegółowy i łatwy w obsłudze.
Upewnij się, że postępujesz zgodnie z każdym krokiem protokołu. Przed rozpoczęciem modelowania należy zaaklimatyzować myszy do środowiska przez tydzień ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody. W dniu modelowania, używając lampy ultrafioletowej i 75% alkoholu, oczyść i zdezynfekuj otoczenie i blaty.
Nałóż wodę z mydłem na brzuch myszy za pomocą bawełnianego wacika i ogol obszar w kierunku wzrostu włosów za pomocą ostrza lub golarki. Zważ mysz i porównaj zmiany wagi w każdej grupie. Przed wykonaniem stymulacji uczulającej brzuch należy upewnić się, że wszelkie drobne urazy skóry brzucha myszy spowodowane goleniem są w pełni wyleczone.
Przygotuj 0,5% roztwór DNFB i rozcieńcz go mieszaniną acetonu i oliwy z oliwek w stosunku 4 do 1. Za pomocą pistoletu do pipet przedmuchaj i wymieszaj 20 razy, aby dokładnie wymieszać roztwór DNFB. Nałóż 25 mikrolitrów 0,5% roztworu DNFB na środek obszaru golenia brzucha za pomocą pipetera i lekko rozprowadź gładką stroną końcówki pipety, aby równomiernie ją rozprowadzić.
Po 30 sekundach stymulacji DNFB umieść mysz w pustej klatce bez ściółki, aby zapobiec ścieraniu się roztworu DNFB przez mysz. Gdy roztwór całkowicie wyschnie, umieść mysz z powrotem w oryginalnej klatce ze swobodnym dostępem do jedzenia i wody. W celu stymulacji uwrażliwienia na ucho zorientuj ciało myszy i ustaw zewnętrzną granicę małżowiny usznej skierowaną w dół, aby zapobiec przedostawaniu się roztworu do kanału słuchowego podczas stymulacji DNFB.
W dniach 4 i 10 za pomocą pipetera nanieść powoli i równomiernie 20 mikrolitrów nośnika lub 0,2% roztworu DNFB na wewnętrzną powierzchnię lewej małżowiny usznej i delikatnie rozprowadzić roztwór gładką stroną pipety. Prawe ucho należy pozostawić nieleczone. Poczekaj, aż roztwór DNFB wyschnie i umieść mysz z powrotem w klatce.
Po stymulacji uwrażliwienia jamy brzusznej i uszu myszy waż się co dwa dni, począwszy od pierwszego dnia. Porównaj wagę każdej myszy z dniem zerowym i oceń wpływ ACD na masę ciała myszy w miarę zmian wagi. Rób zdjęcia uszu myszy w wysokiej rozdzielczości, aby rejestrować objawy kliniczne ACD co dwa dni, począwszy od pierwszego dnia.
Za pomocą suwmiarki z noniuszem mierz grubość małżowiny usznej o tej samej porze każdego dnia, aby uzyskać dokładne wyniki. Zatrzymaj suwmiarki z noniuszem przed dalszym zaciskaniem do wewnątrz, gdy występuje niewielka blokada, aby zapobiec uszkodzeniu tkanek ucha myszy. Utrzymuj stałą pozycję i zapisuj dane dla obu uszu.
Zapisz średnią z trzech danych i oceń obrzęk ucha w mikrometrach. Aby ocenić stopień obrzęku zapalnego w 11 dniu, przygotuj 0,5% roztwór barwnika Evans Blue i rozcieńcz go PBS. Aby unieruchomić mysz za pomocą stabilizatora, otwórz pokrywę, przytrzymaj ogon myszy, ustaw głowę myszy w stronę stabilizatora i pozwól myszy instynktownie wspiąć się na stabilizator.
Przykryj pokrywkę. Spraw, aby ogonek myszy wyszedł z otworu w pokrywie i wyreguluj długość utrwalacza, aby odsłonić cały ogon myszy. Kilkakrotnie przetrzyj ogon wacikiem nasączonym alkoholem lub namocz go w ciepłej wodzie na 30 sekund i delikatnie uszczypnij korzeń ogona, aby go wypełnić, i rozszerz żyły po obu stronach.
Powoli wstrzyknąć roztwór Evans Blue Dye do żyły ogonowej myszy za pomocą igły insulinowej o średnicy 1 mm pod wpływem naświetlania zimnego źródła światła. Poczekaj 15 minut, aby zrobić zdjęcia uszu myszy. Uszy myszy z grupy DNFB wykazywały wyraźne objawy kliniczne porównywalne z ACD, przy czym wrażliwe obszary wykazywały typowe objawy zaczerwienienia, suchości, erozji i wysięku.
Jednak podawanie do ucha czystej wody lub kontroli rozpuszczalnika nie wywołało żadnych objawów podobnych do grupy DNFB. W grupie DNFB, w porównaniu z nieleczonym prawym uchem, grubość lewego ucha znacznie wzrosła po stymulacji DNFB. Nie stwierdzono istotnych różnic w grupie kontrolnej i grupie pojazdów.
Lewe ucho myszy z grupy DNFB zmieniło kolor na ciemnoniebieski po wstrzyknięciu barwnika Evans Blue, który wizualnie różnił się od prawego ucha. Lewe i prawe ucho myszy w grupach kontrolnych i nośnikach były mniej więcej tego samego koloru. Przyrost masy ciała myszy został nieco spowolniony przez DNFB, czyli prostą stymulację pojazdu, ale nie spowodował znaczącej utraty wagi.
Powtarzająca się stymulacja DNFB w uchu myszy powodowała powiększenie śledziony i wzrost wskaźnika śledziony. Natomiast indeks śledziony myszy w grupie nośnej nie zmienił się znacząco. Upewnij się, że roztwór DINFB jest całkowicie wymieszany i równomiernie nałożony na ucho myszy bez wpływu do kanału słuchowego.
To jest klucz do sukcesu w modelingu.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
W niniejszym artykule opisano metody indukowania alergicznego kontaktowego zapalenia skóry (ACD) w uszach myszy przy użyciu 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenu (DNFB). Przedstawiono również sposób oceny stopnia nasilenia ACD.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Immunologia
- Dermatologia
Wstęp
- Alergijne kontaktowe zapalenie skóry jest powszechną chorobą skóry.
- Modele mysie są niezbędne do badania patogenezy ACD.
- Zrozumienie ACD może prowadzić do opracowania nowych metod terapeutycznych.
- Niniejszy model zapewnia stabilne i wydajne podejście do prowadzenia badań.
Cel badania
- Zbadanie patogenezy alergicznego kontaktowego zapalenia skóry.
- Ocena skuteczności nowych metod terapeutycznych.
- Przedstawienie szczegółowego protokołu indukcji ACD u myszy.
Zastosowane metody
- Indukcja ACD przy użyciu 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenu (DNFB).
- Aklimatyzacja myszy do środowiska przez jeden tydzień.
- Dezynfekcja środowiska przed modelowaniem.
- Ocena nasilenia ACD na podstawie obserwowalnych objawów.
Główne wyniki
- Model wykazuje wysoką skuteczność indukcji ACD.
- Po indukcji obserwuje się wyraźne objawy.
- Protokół jest łatwy do przeprowadzenia i powtarzalny.
- Stanowi on cenne narzędzie w badaniach przedklinicznych.
Wnioski
- Ten model jest skuteczny w badaniu patogenezy ACD.
- Może on ułatwić opracowanie nowych metod leczenia.
- Przestrzeganie protokołu zapewnia wiarygodne wyniki.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Solidne modele zwierzęce dla alergicznego zapalenia skóry kontaktowego (ACD) są niezbędne do ograniczania ryzyka we wczesnych etapach odkrywania nowych leków dermatologicznych oraz umożliwiają przedkliniczną ocenę innowacyjnych terapii. Model ucha mysiego indukowany DNFB zapewnia powtarzalny i mierzalny system do badania patogenezy ACD oraz oceny skuteczności interwencji. Standaryzowane protokoły i ilościowe punkty końcowe zwiększają wiarygodność predykcyjną i ułatwiają porównywalność między badaniami w ramach portfeli badawczo-rozwojowych w dermatologii.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia analizę mechanistyczną zapalenia skóry o podłożu immunologicznym, istotnego dla ACD.
- Wspiera walidację funkcjonalną potencjalnych celów w kontrolowanym systemie odzwierciedlającym przebieg choroby.
- Ułatwia biologiczną redukcję ryzyka poprzez dostarczanie jasnych i mierzalnych odczytów fenotypowych.
- Zwiększa wiarygodność prognostyczną w przypadku późniejszego testowania hipotez terapeutycznych.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Zapewnia zwalidowaną platformę in vivo do oceny związków przeciwzapalnych lub immunomodulujących.
- Dostarcza standaryzowane, powtarzalne punkty końcowe, takie jak grubość małżowiny usznej oraz wysięk barwnika Evans Blue.
- Umożliwia ilościową ocenę skuteczności związków w skalowalnym modelu o wysokim wskaźniku sukcesu.
- Wspiera przygotowanie testów do niezawodnego przesiewania związków i identyfikacji wiodących kandydatów.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Jest zgodne z patofizjologią istotną dla choroby w celu poszukiwania biomarkerów translacyjnych.
- Zapewnia ciągłość od wczesnej fazy odkrywania po przedkliniczną walidację interwencji dermatologicznych.
- Dostarcza danych skorygowanych o ryzyko, które pomagają w podejmowaniu decyzji o rozwoju kandydowanych terapii.
- Oferuje predykcyjne ograniczanie ryzyka dla portfeli dermatologicznych w późnych fazach badań.
Integracja potoku i przepływu pracy
Ten model uszkodzenia ucha myszy indukowanego DNFB wpisuje się w ciąg procesów od odkrywania leku do badań przedklinicznych w dermatologii, wspierając zarówno walidację celu, jak i procesy optymalizacji wiodących związków.
- Biologia odkrywcza: Umożliwia testowanie hipotez i wyjaśnianie mechanizmów odpowiedzi immunologicznych związanych z ACD.
- Przesiewanie: Zapewnia powtarzalne, ilościowe punkty końcowe do oceny związków i standaryzacji testów.
- Analityka: Dostarcza mierzalne wyniki, takie jak grubość ucha, zmiana masy ciała i ekstrawasacja barwnika, w celu przeprowadzenia rzetelnego porównania statystycznego.
- Badania translacyjne: Łączy wczesne odkrycia mechanistyczne z przedklinicznymi danymi dotyczącymi skuteczności w kontekście istotnym dla danej choroby.
- Wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje zestandaryzowaną, wielokrotnego użytku platformę dla bieżących inicjatyw badawczo-rozwojowych w dziedzinie dermatologii.
Wpływ operacyjny i organizacyjny
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną w badaniach nad ACD.
- Wartość operacyjna: Sprzyja standaryzacji, powtarzalności i skalowalności w różnych badaniach.
- Wartość strategiczna: Umożliwia podejmowanie świadomych decyzji go/no-go oraz efektywne zarządzanie kapitałem w ramach portfolio.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację skorygowaną o ryzyko oraz rozwój zasobów z zakresu dermatologii.
Uwagi dotyczące implementacji
- Wymaga doświadczenia w obchodzeniu się ze zwierzętami, ocenie dermatologicznej oraz technikach pomiarów ilościowych.
- Wymaga dostępu do instrumentarium, takiego jak suwmiarki i systemy obrazowania do analizy końcowej.
- Wymaga ścisłego przestrzegania protokołu i standaryzacji między zespołami w celu zapewnienia powtarzalności.
- Możliwy do zastosowania dla różnych klas związków, jednak ograniczony do mechanizmów istotnych dla ACD.
- Potencjalne ograniczenia obejmują specyficzność modelu dla kontaktowego zapalenia skóry, a nie dla innych patologii skóry.
Najczęściej zadawane pytania dotyczące biofarmacji
Chapters in this video
0:04
Introduction
0:55
Animal Preparation
1:35
Abdominal Sensitization Stimulation
2:46
Ear Sensitization Stimulation
3:38
Recording Mouse Weight and Allergic Contact Dermatitis (ACD) Symptoms
4:16
Measurement of the Auricle Thickness
4:50
Evaluation of the Degree of Inflammatory Swelling
5:59
Results: Evaluating the Severity of Allergic Contact Dermatitis
7:32
Conclusion
