Nieinwazyjne wkraplanie lipopolisacharydu dotchawiczego u myszy

Nasz protokół proponuje nową, nieinwazyjną metodę dostarczania LPS z tchawicy do płuc, bardziej precyzyjnie. Osoby, które próbują tej metody po raz pierwszy, powinny włożyć wiele wysiłku w znalezienie pozycji tchawicy. Aby przygotować platformę do intubacji, przełóż sznurek przez dwa otwory i przywiąż jego końce do małych występów w górnej części pionu.

Następnie przymocuj dwie gumki do każdego końca spinacza i przyklej je do tylnej części pionu. Na koniec przymocuj pion do podstawy pod kątem 90 stopni. Zamontuj kaniulę na wstrzykiwaczu kaniuli i włącz światło wstrzykiwacza.

Następnie zdezynfekuj małe kleszcze chirurgiczne i pipetę Pasteura przy użyciu 70% alkoholu. Aby przygotować roztwór badanego związku, dodać trzy miligramy lipopolisacharydu lub LPS do jednego mililitra o pH 7,2 PBS. Następnie rozpuść 10 miligramów pentobarbitalu sodu w jednym mililitrze zwykłej soli fizjologicznej i przefiltruj roztwór za pomocą filtra strzykawkowego o średnicy 0,45 mikrometra.

Umieść znieczuloną mysz na platformie intubacyjnej. Następnie przymocuj górne przednie zęby sznurkiem, a dwie przednie stopy gumkami. Za pomocą pęsety wyciągnij język i przytrzymaj go.

Powoli popchnij kaniulę wzdłuż ust do nagłośni żuchwy. Zlokalizuj tchawicę ze światłem wstrzykiwacza kaniuli i powoli włóż do niej kaniulę. Następnie wyjmij wstrzykiwacz intubacyjny, pozostawiając kaniulę w środku.

Włóż pipetę Pasteura do złącza kaniuli i naciśnij głowicę. Po udanej intubacji dotchawiczej, za pomocą mikrostrzykawki z płaską główką, wkraść przygotowany roztwór LPS w dawce trzech miligramów na kilogram przez kaniulę. Po zakończeniu wyjmij mikrostrzykawkę i kaniulę.

Wyjmij mysz z platformy intubacyjnej i umieść ją w osobnej klatce, aby mogła dojść do siebie. Obserwuj stan oddechowy myszy, dopóki nie wyzdrowieje i nie odzyska przytomności. Po 12 godzinach od wkroplenia tchawicy LPS oceniono ekspresję cytokiny zapalnej TNF-alfa oraz stosunek masy suchej do mokrej masy płuc i porównano je z innymi metodami wkraplania.

Poziomy TNF-alfa w surowicy w grupie nieinwazyjnej intubacji ustno-gardłowej były znacznie zwiększone w porównaniu z grupą kontrolną ślepej próby. Stosunek masy płuc suchych do mokrych również uległ zwiększeniu, osiągając ten sam poziom, co w grupie intubacji chirurgicznej tchawicy. Ważne jest, aby nie zarysować tchawicy w procesie znajdowania lokalizacji tchawicy.

Technika ta może być również wykorzystana do dostarczania innych leków, które muszą dotrzeć do płuc w sposób nieinwazyjny.