Name: Pierwotna hodowla komórek macierzystych miazgi zębowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 45 s
Description: Poznaj metodę hodowli eksplantowej komórek macierzystych miazgi zębowej w celu izolacji homogennej populacji DPC. Technika ta umożliwia badania regeneracji tkanek i zastosowania w medycynie regeneracyjnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy za wsparcie finansowe dla AK od Departamentu Badań nad Zdrowiem (DHR), ICMR, Rządu Indii (DHR-NRI Grant # R.12015/01/2022-HR). SR otrzymał finansowanie od ICMR, rządu Indii (Grant # 2020-7593/SCR-BMS), a PS otrzymał stypendium od CSIR, rządu Indii. Jesteśmy również wdzięczni Pani Sandhya Tokhi i Pani Bhupinder Kaur za pomoc w zakresie cytometrii przepływowej oraz Central Sophisticated Instrumentation Core (CSIC) oraz PGIMER, Chandigarh za zapewnienie wsparcia infrastrukturalnego.

Establishing the Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

<ol><li>Bhattacharyya, S., Kumar, A., Lal Khanduja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voyage+of+stem+cell+toward+terminal+differentiation%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">The voyage of stem cell toward terminal differentiation: a brief overview.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 44 (6), 463-475 (2012).</li>
<li>Prentice, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adult stem cells.</a> Circulation Research. 124 (6), 837-839 (2019).</li>
<li>Raik, S., Kumar, A., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+cell-free+therapeutic+approach%3A+Role+of+stem+cell+%26%2334%3Bsoup-ernatant%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Insights into cell-free therapeutic approach: Role of stem cell &#34;soup-ernatant&#34.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 65 (2), 104-118 (2018).</li>
<li>Rodriguez-Fuentes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+current+clinical+applications%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells current clinical applications: a systematic review.</a> Archives of Medical Research. 52 (1), 93-101 (2021).</li>
<li>Yamazaki, K., Kawabori, M., Seki, T., Houkin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+of+stem+cell+treatment+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical trials of stem cell treatment for spinal cord injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 3994(2020).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+spectrum+of+secretome+regulates+the+relative+hepatogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow+and+dental+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15015(2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+cues+modulate+the+neurogenic+potential+of+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Secretome cues modulate the neurogenic potential of bone marrow and dental stem cells.</a> Molecular Neurobiology. 54 (6), 4672-4682 (2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+proteins+regulate+comparative+osteogenic+and+adipogenic+potential+in+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Secretome proteins regulate comparative osteogenic and adipogenic potential in bone marrow and dental stem cells.</a> Biochimie. 155, 129-139 (2018).</li>
<li>Kumar, A., Bhattacharyya, S., Rattan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+uncontrolled+freezing+on+biological+characteristics+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Effect of uncontrolled freezing on biological characteristics of human dental pulp stem cells.</a> Cell Tissue Bank. 16 (4), 513-522 (2015).</li>
<li>Raik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-thaw+quality+of+dental+mesenchymal+stromal+cells+after+long-term+cryopreservation+by+uncontrolled+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-thaw quality of dental mesenchymal stromal cells after long-term cryopreservation by uncontrolled freezing.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 191 (2), 728-743 (2020).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Tsutsui, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+advances+to+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Cloning%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: advances to applications.</a> Stem Cells and Cloning. 13, 33-42 (2020).</li>
<li>Huang, G. T. -J., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> Journal of Dental Research. 88 (9), 792-806 (2009).</li>
<li>La Noce, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+state+of+the+art+and+suggestions+for+a+true+translation+of+research+into+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy.</a> Journal of Dentistry. 42 (7), 761-768 (2014).</li>
<li>Xiao, L., Tsutsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+dental+pulp+cells-derived+spheroids+in+serum-free+medium%3A+stem+cells+in+the+core%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of human dental pulp cells-derived spheroids in serum-free medium: stem cells in the core.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2624-2636 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Yun, H., Funderburgh, M. L., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapy+for+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapy for the cornea.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 87, 101011(2022).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26 (3), 638-645 (2008).</li>
<li>Yong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+angiogenic+ability+between+SHED+and+DPSC+in+a+mice+model+with+critical+limb+ischemic%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the angiogenic ability between SHED and DPSC in a mice model with critical limb ischemic.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (4), 861-870 (2022).</li>
<li>Zhang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+transplantation+in+a+rat+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell transplantation in a rat model of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 16 (5), 893-898 (2021).</li>
<li>Kabir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imperative+role+of+dental+pulp+stem+cells+in+regenerative+therapies%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nigerian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Imperative role of dental pulp stem cells in regenerative therapies: a systematic review.</a> Nigerian Journal of Surgery. 20 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cell+secretome+ameliorates+d-galactose+induced+accelerated+aging+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cell secretome ameliorates d-galactose induced accelerated aging in rat model.</a> Cell Biochemistry and Function. 40 (5), 535-545 (2022).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+therapeutic+benefits+of+factors+derived+from+dental+pulp+stem+cells+for+mouse+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multifaceted therapeutic benefits of factors derived from dental pulp stem cells for mouse liver fibrosis.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (10), 1416-1424 (2016).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regeneration+by+human+dental+pulp+stem+cells+using+a+helioxanthin+derivative+and+cell-sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">regeneration by human dental pulp stem cells using a helioxanthin derivative and cell-sheet technology.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 24(2018).</li>
<li>Ferrua, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+has+dental+pulp+stem+cells+isolation+been+conducted%3F+A+scoping+review%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">How has dental pulp stem cells isolation been conducted? A scoping review.</a> Brazilian Oral Research. 31, e87(2017).</li>
<li>Pilbauerova, N., Soukup, T., Suchankova Kleplova, T., Suchanek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+isolation%2C+amplification+and+characterization+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Biologica%22%5BJournal%5D)">Enzymatic isolation, amplification and characterization of dental pulp stem cells.</a> Folia Biologica. 65 (3), 124-133 (2019).</li>
<li>Tatullo, M., Marrelli, M., Shakesheff, K. M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+function%2C+isolation+and+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: function, isolation and applications in regenerative medicine.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 9 (11), 1205-1216 (2015).</li>
<li>Hilkens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isolation+methodology+on+stem+cell+properties+and+multilineage+differentiation+potential+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells.</a> Cell and Tissue Research. 353 (1), 65-78 (2013).</li>
<li>Hendijani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant+culture%3A+An+advantageous+method+for+isolation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues.</a> Cell Proliferation. 50 (2), e12334(2017).</li>
<li>Aryal Ac, S., Islam, M. S., Samsudin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+effect+of+a+time+delay+on+the+characteristics+and+survival+of+dental+pulp+stem+cells+from+extracted+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the effect of a time delay on the characteristics and survival of dental pulp stem cells from extracted teeth.</a> Archives of Oral Biology. 119, 104896(2020).</li>
<li>Langenbach, F., Handschel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dexamethasone%2C+ascorbic+acid+and+%CE%B2-glycerophosphate+on+the+osteogenic+differentiation+of+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of dexamethasone, ascorbic acid and β-glycerophosphate on the osteogenic differentiation of stem cells in vitro.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4, 117(2013).</li>
<li>Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+differentiation+of+purified%2C+culture-expanded+human+mesenchymal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 64 (2), 295-312 (1997).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+alizarin+red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization of the alizarin red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Coe, C. L., Lubach, G. R., Schneider, M. L., Dierschke, D. J., Ershler, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+rearing+conditions+alter+immune+responses+in+the+developing+infant+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early rearing conditions alter immune responses in the developing infant primate.</a> Pediatrics. 90, 505-509 (1992).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcified Tissue International. 88 (2), 130-141 (2011).</li>
<li>Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+dental+pulp+stem+cells+differentiate+toward+functionally+active+neurons+under+appropriate+environmental+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues.</a> Stem Cells. 26 (7), 1787-1795 (2008).</li>
<li>Kim, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic%2Fcementoblastic+and+neural+differentiation+of+dental+stem+cells+and+their+applications+to+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic/cementoblastic and neural differentiation of dental stem cells and their applications to tissue engineering and regenerative medicine.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 235-244 (2012).</li>
<li>Ge, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+C+terminus+of+CaV1.2+channels+plays+a+crucial+role+in+the+neural+differentiation+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distal C terminus of CaV1.2 channels plays a crucial role in the neural differentiation of dental pulp stem cells.</a> PLoS One. 8 (11), e81332(2013).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak finansowego lub niefinansowego konfliktu interesów.

Komórki macierzyste mają nadzieję na wyleczenie wielu chorób ze względu na ich plastyczność, wytrzymałość, właściwości immunomodulujące, mechanizmy parakrynne i skuteczność naprowadzania. Tkanka miazgi zęba jest uważana za najsilniejsze i najcenniejsze źródło komórek macierzystych, o wyjątkowej plastyczności i zdolności regeneracyjnych. Tutaj demonstrujemy izolację DPSC, wykorzystując szeroko przyjętą metodę hodowli eksplantatów, w której komórki migrują z kawałków tkanki miazgi lub eksplantatów, aby wyrosnąć na jednorod...

Dorosłe komórki macierzyste stały się potężnym narzędziem terapeutycznym dla terapii ukierunkowanych na komórki ze względu na ich plastyczność, mechanizmy parakrynne i właściwości immunomodulacyjne1,2,3. Zachęcające dane z badań przedklinicznych opartych na komórkach macierzystych zainspirowały naukowców do pracy nad translacją z laboratorium na łóżko. Rodzaj komórek macierzystych stosowanych w terapii komórkami macierzystymi odgrywa znaczącą rolę w pomyślnych wynikach. W badaniach przedklinicznych i klinicznych najczęściej zgłaszanym źródłem mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) pozostaje szpik kostny4,5. Jednak głównymi wadami stosowania komórek macierzystych pochodzących ze szpiku kostnego (BMSC) są ich rzadka populacja, wysoce inwazyjne procedury izolacji i ich ograniczona zdolność do ekspansji. W związku z tym poszukuje się alternatywnych źródeł MSC. W związku z tym tkanki zębowe, ze względu na ich łatwość dostępu, ogromną plastyczność, wysoki potencjał regeneracyjny i wysoką zdolność proliferacji, zostały obecnie uznane za bogate i potencjalne alternatywne źródło komórek macierzystych6,7,8,9,10.
Komórki macierzyste miazgi zębowej (DPSC) były pierwszym typem komórek macierzystych zęba, które zostały wyizolowane i scharakteryzowane przez Gronthos w 2000 roku11. DPSC przyciągnęły uwagę w zastosowaniach inżynierii tkankowej ze względu na ich wysoki wskaźnik proliferacji, znaczny potencjał różnicowania, łatwość dostępu przy łatwej hodowli i, co najważniejsze, ich zdolność do uzyskania z odrzuconego zęba bez żadnych obaw etycznych12. Ograniczenia stwarzane przez inne źródła komórek macierzystych, takie jak BMSC i komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej (ADSC), w ich izolacji i niewystarczających zdolnościach do samoodnawiania są obchodzone przez DPSCs13. Ludzkie DPSC można uzyskać z ludzkich zębów mlecznych, zębów stałych, zębów mądrości, złuszczonych zębów mlecznych (SHED) i brodawek wierzchołkowych. Co więcej, DPSC mogą być również izolowane od zębów nadliczbowych, które są zazwyczaj odrzucane14. DPSC wyrażają markery związane z grzebieniem nerwowym i mają potencjał do różnicowania się w komórki neuronalne zarówno in vitro, jak i in vivo15. Oprócz swojego potencjału neurogennego, DPSC mogą różnicować się w inne linie komórkowe, takie jak osteogenne, chondrogenne, adipogenne, wątrobowe i miogenne, po spełnieniu określonych warunków różnicowania13. Tak więc te multipotencjalne komórki mają ogromny potencjał w terapii komórkowej i mogą być wykorzystywane do regeneracji różnych tkanek. Badania wykazały również potencjalną rolę DPSC w rekonstrukcji rogówki 16, naprawie zawału mięśnia sercowego17 oraz ich potencjalnej roli terapeutycznej w chorobach takich jak niedokrwienie kończyn18, choroba Alzheimera 19, Parkinson's 20 i aging21. Dlatego komórki macierzyste pochodzące z tkanek zębowych mogą być wykorzystywane nie tylko do regeneracji zębów, ale także do naprawy i regeneracji narządów niebędących narządami zębowymi, takich jak oczy16, hearts17, livers22, bones23 itd.
Istnieją dwie szczególne metody izolacji populacji MSC od tkanki miazgi - trawienie enzymatyczne i hodowla eksplantatów24,25. Pomyślne założenie kultur pierwotnych bez znaczącej różnicy w ilości i właściwościach DPSC zostało zgłoszone przez obie te metody26. W tym badaniu skupiliśmy się na izolacji DPSC metodą eksplantatyczną 27, ponieważ ta metoda generuje DPSC bez zanieczyszczenia komórek krwiotwórczych i śródbłonka, w porównaniu z trawieniem enzymatycznym, które może prowadzić do zanieczyszczenia fibroblastami28.

<table><tbody><tr><td>6-dołkowa płytka do hodowli komórkowych</td><td>Costar</td><td>3516</td><td>Do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Zestaw do barwienia chondrocytów Alcian Blue Stain EZstain, HiMedia</td><td>CCK029</td><td></td><td></td></tr><tr><td>barwnik alizarynowy czerwony S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TMS-008</td><td>Barwnik osteogenny</td></tr><tr><td>Koktajl antybiotykowy</td><td>Himedia</td><td>A002-5X50ML</td><td>Aby zapobiec zanieczyszczeniu kultur</td></tr><tr><td>Kwas askorbinowy</td><td>Himedia</td><td>TC094-25G</td><td>Suplement do indukcji chondrogennej</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Do indukcji neuronalnej</td></tr><tr><td>bFGF (podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów)</td> <td>Gibco</td><td>PHG0024</td><td>Do indukcji neuronalnej</td></tr><tr><td>CD 105</td><td>BD-Pharmingen</td><td>560839</td><td></td></tr><tr><td>CD 35</td><td>Biolegend</td><td>343604</td><td></td></tr><tr><td>CD 45</td><td>Biolegend</td><td>304006</td><td></td></tr><tr><td>CD 73</td><td>Biolegend</td><td>344016</td><td></td></tr><tr><td>CD 90</td><td>Biolegend</td><td>328107</td><td>Charakterystyka</td></tr><tr><td>chlorku cetylopirydyniowego (CPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104006</td><td>Do ekstrakcji czerwieni alizaryny</td></tr><tr><td>21-fosforan disodowy deksametazon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1159-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem Dulbecco</td><td>Himedia</td><td>TS1006-5L</td><td>Do mycia</td></tr><tr><td>EGF (Epidermal Growth Factor)</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td>Do indukcji wątrobowej i nerwowej&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikroskop EVOS LED</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>For&nbsp; obrazowanie fluorescencyjne</td></tr><tr><td>EZ barw Zestaw do barwienia chondrocytów</td><td>Himedia</td><td>CCK029-1KT</td><td>Zestaw do barwienia chondro</td></tr><tr><td>FACS Cytometr przepływowy Canto</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Dla komórki charakterystyka</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu Gibco</td><td>16000044</td><td>Do hodowli pierwotnej</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>Do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>suplement G5</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td>Do indukcji neuronów</td></tr><tr><td>HGF (czynnik wzrostu hepatocytów)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>H1404</td><td>Do indukcji wątroby</td></tr><tr><td>HLA-DR</td><td>Biolegend</td><td>307605</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Ludzki TGF-&beta; 3</td><td>Peprotech</td><td>#100-36E-10U</td><td></td></tr><tr><td>Premiks insuliny-transferyny-kwasu selenowego</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td>Do indukcji wątroby</td></tr><tr><td>Premiks ITS</td><td>Corning</td><td>354350</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania wychwytu LDL</td><td>Abcam</td><td>ab133127</td><td>Do charakterystyki wątroby</td></tr><tr><td>Niski poziom glukozy DMEM</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td>Do indukcji</td></tr> <tr><td>wątrobyPrzeciwciało MAP2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4403</td><td>Do charakterystyki neuronalnej</td></tr><tr><td>Suplement N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Do indukcji neuronów</td></tr><tr><td>Neuronowe podłoże podstawowe</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>Do indukcji neuronalnej</td></tr><tr><td>Przeciwciało NFM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>Do charakterystyki neuronalnej</td></tr><tr><td>Mikroskop Nikon Elipse TS100</td><td>Nikon</td><td></td><td>Dla&nbsp; obrazowanie fluorescencyjne</td></tr><tr><td>Olej Red O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01391-250Ml</td><td>Barwnik adipogenny</td></tr><tr><td>Onkostatyna M</td><td>R& D Systems</td><td>295-OM-010/CF</td><td>Do indukcji wątroby</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Tarson</td><td>460090-90MM</td><td>Do cięcia tkanek</td></tr><tr><td>Fosforan potasu jednozasadowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15655-100G</td><td>Indukcja osteogenna</td></tr><tr><td>Propan-2-ol</td><td>Thermo Fisher</td><td>Q13827</td><td>Do ekstrakcji oleju Red O</td></tr><tr><td>Roztwór pirogronianu sodu</td><td>Sigma life sciences</td><td>S8636-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>Do pasażowania komórek</td></tr><tr><td>Bibuła filtracyjna Whatman</td><td>Bibuła filtracyjna</td> <td>Merck</td><td>WHA1001325</td></tr> i <tr><td>alfa - Minimum Essential Media (&alpha;-MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0643-10X 1L</td><td>Pożywka do hodowli pierwotnej</td></tr> <tr><td>i beta;-glicerofosforan sól disodowa hydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422-50G</td><td></td></tr></tbody></table>

pierwotna hodowla komórek macierzystych miazgi zębowej

Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

Ludzka miazga zębowa stanowi obiecujący multipotencjalny rezerwuar komórek macierzystych z wybitnymi kompetencjami regeneracyjnymi, które można pobrać z usuniętego zęba. Ekto-mezenchymalne pochodzenie komórek macierzystych miazgi zębowej (DPSC) wywodzące się z grzebienia nerwowego nadaje wysoki stopień plastyczności, który zawdzięcza wieloaspektowym korzyściom w naprawie i regeneracji tkanek. Istnieje wiele praktycznych sposobów pozyskiwania, utrzymywania i namnażania dorosłych komórek macierzystych, które są badane pod kątem ich zastosowania w medycynie regeneracyjnej. W niniejszej pracy wykazano ustanowienie pierwotnej hodowli mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki zęba metodą hodowli eksplantatów. Wyizolowane komórki miały kształt wrzeciona i przylegały do plastikowej powierzchni płytki hodowlanej. Charakterystyka fenotypowa tych komórek macierzystych wykazała pozytywną ekspresję zalecanych przez Międzynarodowe Towarzystwo Terapii Komórkowej (ISCT) markerów powierzchni komórek dla MSC, takich jak CD90, CD73 i CD105. Ponadto, znikoma ekspresja markerów krwiotwórczych (CD45) i śródbłonka (CD34) oraz mniejsza niż 2% ekspresja markerów HLA-DR potwierdziły jednorodność i czystość kultur DPSC. Dalej zilustrowaliśmy ich wielomoc w oparciu o różnicowanie do linii adipogennych, osteogennych i chondrogennych. Skłoniliśmy również te komórki do różnicowania się w komórki podobne do wątroby i neuronów, dodając odpowiednie pożywki stymulacyjne. Ten zoptymalizowany protokół pomoże w hodowli wysoce rozszerzalnej populacji mezenchymalnych komórek macierzystych, które zostaną wykorzystane w laboratorium lub do badań przedklinicznych. Podobne protokoły można włączyć do konfiguracji klinicznych w celu praktykowania leczenia opartego na DPSC.

W niniejszym materiale opisujemy, w jaki sposób badacze mogą ustanowić czystą hodowlę DPSCs poprzez metodę eksplantacji6,7,8,9,10 oraz indukować ich różnicowanie w kierunku wielu linii komórkowych, aby potwierdzić czystość hodowli do dalszych zastosowań.
Utworzyliśmy kulturę pierwotną DPSC z niewielkich fragmentów miazgi wy...

Ten artykuł zawiera przewodnik krok po kroku, jak założyć pierwotną hodowlę komórek macierzystych miazgi zębowej przy użyciu metody hodowli eksplantatów i charakterystykę tych komórek w oparciu o wytyczne ICSCRT. Komórki wyizolowane za pomocą tego protokołu można uznać za mezenchymalne komórki macierzyste do dalszych zastosowań.

Pierwotna hodowla komórek macierzystych miazgi zębowej

The human dental pulp represents a promising multipotent stem cell reservoir with pre-eminent regenerative competence that can be harvested from an ...

Badamy potencjał DPC w zastosowaniach komórkowych i bezkomórkowych w modelach chorób, jednocześnie badając mechanizmy komórkowe i molekularne zaangażowane w regenerację tkanek. Ponadto badamy rolę czynników bezpieczeństwa pochodzących z komórek macierzystych w kontrolowaniu losu komórek macierzystych i promowaniu regeneracji tkanek. Obecnie koncentrujemy się na wykorzystaniu technik hodowli 3D w celu głębszego zrozumienia mechanizmów molekularnych, zmian genetycznych i epigenetycznych związanych z regeneracją tkanek.Wykorzystujemy zaawansowane techniki, takie jak sekwencjonowanie nowej generacji, sekwencjonowanie RNA i sekwencjonowanie chipów, aby odkryć domeny regulacyjne rządzące różnymi procesami komórkowymi. Stosując metody eksplantacji do izolacji DPC, można skutecznie zebrać jednorodną populację komórek macierzystych, wolną od innych komórek, takich jak śródbłonek i perycyty. Te typy komórek pozostają w hodowli komórkowej, gdy DPC są ustalane przy użyciu procedur enzymatycznych.Nasze badania z wykorzystaniem DPC jako modelu komórkowego do barwienia leków i regeneracji tkanek mogą opracować nowatorskie terapie, rozwinąć medycynę spersonalizowaną i mieć daleko idące implikacje w medycynie regeneracyjnej, w tym rekonstrukcję twarzoczaszki i nieocenioną regenerację kości po ekstrakcji zębów. Obecnie badamy, w jaki sposób DPC mogą być wykorzystywane do rozwiązywania problemów z wadami kości, takimi jak ubytki kości długich i kalwarii. Ponadto badamy potencjalne implikacje terapeutyczne wydzielanych cząsteczek pochodzących z DPC w różnych modelach chorobowych, w tym neuroregeneracji i glukagonu.Na początek przepłucz usunięty ząb sterylnym roztworem soli fizjologicznej, aby usunąć krew. Ostrożnie przetnij ząb wzdłuż na dwie części za pomocą frezu szczelinowego z węglika spiekanego, jednocześnie nawadniając sterylną solą fizjologiczną. Następnie przetransportuj ząb i jego nienaruszoną miazgę w sterylnej pożywce alfa MEM na lodzie do laboratorium hodowli komórek i tkanek, a następnie umieść pobraną próbkę zęba na sterylnej szalce Petriego do hodowli i dokładnie spłucz trzy do czterech razy sterylnym PBS.Za pomocą ostrej koparki i kleszczy ostrożnie usuń tkankę miazgi jamowej i dokładnie wyczyść ją sterylnym PBS, aby usunąć ślady krwi. Teraz podziel powierzchnię naczynia na cztery części, umieszczając od jednego do dwóch mililitrów sterylnego PBS w każdej części. Umieść próbkę tkanki miazgi w jednym miejscu i pokrój ją na małe kawałki za pomocą ostrza chirurgicznego.Przenieś kawałki tkanki, podnosząc je do kolejnych obszarów za pomocą PBS. W międzyczasie dodaj około 0,8 do jednego mililitra alfa MEM zawierającego aminokwasy endogenne z 10% FBS i koktajl antybiotykowy na sześciodołkowej płytce i przesuń go, aby równomiernie rozprowadzić podłoże. Przedstawiono różne etapy rozwoju hodowli pierwotnej komórek macierzystych miazgi zęba.Zaokrąglone komórki pęcherzykowe z tkanki zęba zaobserwowano w drugim dniu wysiewu. Podobną do bałaganu sieć komórek wychodzących z tkanki zaobserwowano czwartego dnia. Jednak do 13 dnia liczba komórek, które wyłoniły się z eksplantatów, wzrosła, a pod koniec drugiego tygodnia większość eksplantatów została otoczona wieloma przylegającymi komórkami o wrzecionowatej morfologii.

primary-culture-of-dental-pulp-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opisana metoda obejmuje izolację i charakterystykę ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych miazgi zęba (hDPSCs) z wykorzystaniem dysocjacji enzymatycznej miazgi (DPSC-ED) lub bezpośredniego wypływu komórek macierzystych z eksplantów tkanki miazgi (DPSC-OG). Następnie przeprowadzono porównawczą różnicowanie obu typów hDPSCs w odontoblasty in vitro.

Izolacja, charakterystyka i różnicowanie porównawcze ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych miazgi zębowej pochodzących z zębów trwałych z wykorzystaniem dwóch różnych metod

Udostępniamy protokoły oceny mezenchymalnych komórek macierzystych wyizolowanych z miazgi zębowej i interakcji komórek raka prostaty w oparciu o bezpośrednie i pośrednie metody wspólnej hodowli. Membrany Condition Medium i trans-well są odpowiednie do analizy pośredniej aktywności parakrynnej. Wysiewanie różnie barwionych komórek razem jest odpowiednim modelem bezpośredniej interakcji komórka-komórka.

Izolacja mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki miazgi i współhodowla z komórkami nowotworowymi w celu zbadania ich interakcji

Tutaj prezentujemy protokół izolacji i propagacji ludzkich komórek macierzystych miazgi zębowej w celu oceny ekspresji białka prionowego podczas procesu różnicowania neuronów.

Izolacja, propagacja i ekspresja białek prionowych podczas różnicowania neuronalnego ludzkich komórek macierzystych miazgi zębowej

Ten protokół kładzie nacisk na ekstrakcję, hodowlę i zachowanie multipotencjalnych komórek macierzystych z miazgi zębowej poprzez trawienie enzymatyczne. Dodatkowo wykazano ich potencjał do różnicowania się w osteoblasty, adipocyty i chondrocyty, podkreślając znaczenie precyzji i spójności w tym procesie.

Izolacja, hodowla i charakterystyka komórek macierzystych miazgi zębowej z ludzkich zębów mlecznych i stałych

Niniejszy protokół demonstruje sposób hodowli zdrowych, niezróżnicowanych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (ES).

Hodowla i utrzymanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych

Pierwotne hepatocyty stanowią cenne narzędzie do oceny funkcji biochemicznych, molekularnych i metabolicznych w fizjologicznie istotnym systemie eksperymentalnym. Opisujemy niezawodny protokół perfuzji wątroby szczura in situ, który pozwala na konsekwentne uzyskiwanie żywotnych hepatocytów w ilości do 1,0 × 108 komórek na preparat, przy żywotności komórek w zakresie 88 ~ 96%.

Izolacja i hodowla pierwotna komórek wątroby szczura

Opisana jest prosta metoda indukcji przejścia nabłonkowego do mezenchymalnego (EMT) w różnych typach komórek.  Uwzględniono metody analizy komórek w stanach EMT za pomocą immunocytochemii.

Indukcja i analiza przejścia nabłonkowego do mezenchymalnego

W tej publikacji opisujemy szybką i wygodną procedurę izolacji i hodowli pierwotnych komórek groniastych trzustki z mysiej trzustki. Metoda ta stanowi cenne podejście do badania fizjologii świeżych, pierwotnych, normalnych/nieprzekształconych zewnątrzwydzielniczych komórek trzustki.

Izolacja i hodowla pierwotnych komórek groniastych trzustki myszy

Tutaj szczegółowo opisujemy metodę hodowli zarazków zębów w wycinkach żuchwy za pomocą rozdrabniacza tkanek. Metoda ta pozwala na unikalny dostęp do zęba podczas rozwoju, zapewniając doskonałą możliwość manipulacji i śledzenia linii, niedostępną przy użyciu bardziej tradycyjnych metod hodowli.

Metoda hodowli Slice do śledzenia rozwoju zarodków zębów w hodowli eksplantatów

Izolacja i hodowla czystej populacji spokojnych komórek satelitarnych, populacji komórek macierzystych mięśni, jest niezbędna do zrozumienia biologii i regeneracji komórek macierzystych mięśni, a także przeszczepu komórek macierzystych do terapii dystrofii mięśniowej i innych chorób zwyrodnieniowych.

Izolacja, hodowla i przeszczep satelitarnych komórek mięśniowych

Poznaj metodę hodowli eksplantowej komórek macierzystych miazgi zębowej w celu izolacji homogennej populacji DPC. Technika ta umożliwia badania regeneracji tkanek i zastosowania w medycynie regeneracyjnej.

Pierwotna hodowla komórek macierzystych miazgi zębowej

Przeglądaj więcej filmów