Name: Ulepszona technika wykrywania trimetyloaminy w medycynie pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas w przestrzeni czołowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-10T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 19 s
Description: Poznaj ulepszoną metodę wykrywania trimetyloaminy w lekach pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową spektrometrią mas. Protokół obejmuje przygotowanie próbek Pheretima, Periplaneta americana i Hirudo oraz walidację analityczną.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (82173991) oraz Sichuan Science and Technology Program (2022YFS0442).

Zobacz Tabelę 1, aby uzyskać informacje na temat materiałów leczniczych Pheretima, Periplaneta americana i Hirudo. Zostały one zidentyfikowane przez prof. Xu Runchuna z Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu jako wysuszone ciała Pheretima aspergillum (E. Perrier), Periplaneta americana L. i Whitmania pigra Whitman.
1. Pobieranie próbek
<ol>
	<li>Rozdrobnić Pheretima, Periplaneta americana i Hirudo za pomocą młynka do ziół (patrz Tabela Materiałów), przesiać proszek leczniczy przez standardowe sita do leków nr 2 (otwór sita: 0,8 mm) i nr 4 (otwór sita: 0,25 mm) i zebrać proszek między dwoma sitami, aby uzyskać wymaganą próbkę proszku. 
	UWAGA: Pheretima po rozdrobnieniu jest puszysta, więc jej proszek nie musi być przesiewany.</li>
	<li>Pobrać 1 g proszku (z dokładnością do 0,001 g) do plastikowej probówki wirówkowej o pojemności 50 ml, dodać 20 ml 5% roztworu kwasu trichlorooctowego (TCA) (patrz tabela materiałów) i homogenizować w temperaturze 1,000 rmin-1 przez 1 minutę za pomocą wysokoobrotowego homogenizatora dyspersyjnego.</li>
	<li>Po homogenizacji odwirować przy 1,717 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej, dodać trochę chłonnej bawełny do szklanego lejka i przefiltrować supernatant do kolby miarowej o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Powtórzyć powyższy proces ekstrakcji dwukrotnie z 15 ml i 10 ml 5% roztworu TCA. Połączyć filtrat i rozcieńczyć go do 50 ml 5% roztworem TCA.</li>
</ol>
2. Przygotowanie odczynnika
<ol>
	<li>Przygotować 20% roztwór wodorotlenku sodu: odważyć 20 g wodorotlenku sodu i użyć wody dejonizowanej do utrwalenia objętości w kolbie miarowej o pojemności 100 ml.</li>
	<li>Przygotować 5% roztwór TCA: zważyć 25 g TCA i użyć wody dejonizowanej do ustalenia objętości w kolbie miarowej o pojemności 500 ml.</li>
</ol>
3. Przygotowanie roztworu podstawowego wzorca TMA
<ol>
	<li>Przygotować wzorcowy roztwór podstawowy TMA: zważyć 0,0162 g próbki wzorcowej chlorowodorku TMA, rozpuścić ją w 5% roztworze TCA i ustalić objętość do 100 ml, równą stężeniu 100 μg/ml wzorcowego roztworu podstawowego TMA. Przechowywać w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Przygotuj roztwór wzorcowy TMA: weź pewną objętość wzorcowego roztworu podstawowego TMA i rozcieńczaj go krok po kroku 5% roztworem TCA do stężeń 0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/mL, 5 μg/ml i 10 μg/ml roztworu wzorcowego TMA.</li>
</ol>
4. Przetwarzanie przestrzeni nad próbką
<ol>
	<li>Dokładnie odważyć 2 ml roztworu wodorotlenku sodu i 0,5 g stałej parafiny (temperatura topnienia: 58-60 °C) w fiolce o pojemności 20 ml (patrz tabela materiałów).</li>
	<li>Umieścić fiolkę z przestrzenią nad głową w piekarniku nagrzanym do 70 °C na około 30 minut. Stała parafina całkowicie się topi.</li>
	<li>Wyjmij go i pozwól mu ostygnąć do temperatury pokojowej, aby parafina zastygła. Zestalona parafina uszczelni wodorotlenek sodu.</li>
	<li>Weź 2 ml każdego roztworu do ekstrakcji próbki i umieść go na warstwie parafiny, naciśnij nakrętkę i zamknij.</li>
	<li>Umieścić szczelnie zapieczętowaną fiolkę z przestrzenią nad głową na maszynie (patrz Tabela materiałów) w celu pomiaru.</li>
</ol>
5. Ustawienie warunków analizy HS-GC-MS/MS
<ol>
	<li>Patrz Tabela 2, aby zapoznać się z warunkami przestrzeni nad głową i warunkami GC-MS.</li>
	<li>Informacje o jonach znajdują się w Tabeli 3.</li>
</ol>
6. Standardowy rysunek krzywej
<ol>
	<li>Zapoznaj się z przetwarzaniem przestrzeni nad powierzchnią próbki w krokach 4.1-4.3, aby przygotować fiolkę z przestrzenią nad głową zawierającą ług i warstwę uszczelniającą parafinę.</li>
	<li>Odessać 2 ml roztworu wzorcowego TMA o stężeniu 0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 5 μg/ml i 10 μg/ml roztworu wzorcowego TMA do fiolki o pojemności 20 ml, zamknąć nakrętkę i zmierzyć na maszynie.</li>
</ol>
7. Test precyzji
<ol>
	<li>Zapoznaj się z przetwarzaniem przestrzeni nad powierzchnią próbki w krokach 4.1-4.3 w celu przygotowania fiolki z przestrzenią nad głową zawierającej ług i warstwę uszczelniającą parafinę.</li>
	<li>Odessać 2 ml 0,1 μg/ml roztworu wzorcowego TMA do fiolki o pojemności 20 ml z przestrzenią nad roztworem i zamknąć nakrętkę. Przeprowadzić sześć równoległych testów w maszynie zgodnie z instrukcjami producenta (patrz Tabela materiałów).</li>
</ol>
8. Eksperyment z szybkością odzysku
<ol>
	<li>Weźmy partię Pheretima, Periplaneta Americana i Hirudo (S02, S05, S07; Tabela 1) jako leki reprezentatywne dla eksperymentu dotyczącego wskaźnika odzysku.</li>
	<li>Pobrać kilka partii próbki proszku (S02, S05, S07) i piec je w piecu w temperaturze 50 °C przez 72 godziny, aż nie zostanie wykryty TMA.</li>
	<li>Zapoznaj się z metodą przygotowania próbki w sekcjach 4-6, aby wykryć zawartość TMA w pieczonym proszku leczniczym.</li>
	<li>Weź 1 g upieczonego proszku (z dokładnością do 0,001 g), umieść go w plastikowej probówce wirówkowej o pojemności 50 ml i dodaj 50 μl roztworu wzorcowego TMA. 
	UWAGA: Stężenie roztworu wzorcowego TMA wynosi 100 μg/ml, 1000 μg/ml i 10000 μg/ml.</li>
	<li>Dodać 20 ml 5% roztworu TCA i homogenizować w temperaturze 1000 obr./min-1 przez 1 min.</li>
	<li>Po homogenizacji odwirować przy 1717 x g przez 5 minut, dodać trochę chłonnego bawełniaka do szklanego lejka i przefiltrować supernatant do kolby miarowej o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Powtórzyć powyższy proces ekstrakcji dwukrotnie z 15 ml i 10 ml 5% roztworu TCA; połączyć filtrat i rozcieńczyć go do 50 ml 5% roztworem TCA.</li>
</ol>
9. Wyznaczanie granic wykrywalności (LOD) i kwantyfikacji (LOQ)
<ol>
	<li>Określić LOD na podstawie odpowiedniego stężenia, gdy stosunek sygnału do szumu (S/N) = 3.</li>
	<li>Określić granicę oznaczalności przez odpowiednie stężenie, gdy S/N = 10.</li>
</ol>
10. Oznaczanie zawartości próbki TMA
<ol>
	<li>Weź około 1 g drobnego proszku odpowiednio Pheretima, Periplaneta americana i Hirudo, wyekstrahuj próbkę zgodnie z powyższą metodą i oznacz ją na maszynie.</li>
</ol>

Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace GC-MS

<ol><li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Material+basis+of+stench+of+animal+medicine%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Material basis of stench of animal medicine: a review.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).</li>
<li>Deng, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+on+formation+and+taste-masking+technology+of+stench+of+animal+medicines%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).</li>
<li>Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+populations+and+the+volatilome+associated+to+meat+spoilage%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage.</a> Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).</li>
<li>Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contaminants+of+poultry+meat%3A+sources%2C+species%2C+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics.</a> Microorganisms. 5 (3), 50(2017).</li>
<li>Baliño-Zuazo, L., Barranco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+liquid+chromatography-mass+spectrometric+method+for+the+simultaneous+determination+of+trimethylamine%2C+dimethylamine+and+methylamine+in+fishery+products%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products.</a> Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-efficient+trimethylamine+gas+sensor+based+on+Au+nanoparticles+sensitized+WO3+nanosheets+for+rapid+assessment+of+seafood+freshness%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness.</a> Food Chemistry. 392, 133318(2022).</li>
<li>Bota, G. M., Harrington, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+detection+of+trimethylamine+in+meat+food+products+using+ion+mobility+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry.</a> Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).</li>
<li>Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivatization-free+determination+of+short-chain+volatile+amines+in+human+plasma+and+urine+by+headspace+gas+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Laboratory+Analysis%22%5BJournal%5D)">Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062(2020).</li>
<li>Mitsubayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimethylamine+biosensor+with+flavin-containing+monooxygenase+type+3+%28FMO3%29+for+fish-freshness+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%26+Actuators+B%3A+Chemical%22%5BJournal%5D)">Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis.</a> Sensors & Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).</li>
<li>National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22GB+5009.+179-2016%22">GB 5009. 179-2016</a>. , 12(2016).</li>
<li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+material+basis+and+processing+principle+of+fishy+smell+of+Pheretima+aspergillum+by+electronic+nose+and+HS-GC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Experimental+Traditional+Medical+Formulae%22%5BJournal%5D)">Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).</li>
<li>Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+on+changes+of+volatile+components+in+Gecko+before+and+after+processing+by+HS-SPME-GC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Experimental+Traditional+Medical+Formulae%22%5BJournal%5D)">Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).</li>
<li>Yoshiharu, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYoshiharu%2C+I+%22Odor+olfactory+measurement%22">Odor olfactory measurement</a>. , Japan Association on Odor Environment. Tokyo. (2004).</li>
<li>Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+sulfur+dioxide+residues+in+sulfur+fumigated+Chinese+herbs+with+headspace+gas+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Leki pochodzenia zwierzęcego pochodzą z całego ciała, narządów lub tkanek, produktów fizjologicznych lub patologicznych, wydalin lub wydzielin oraz produktów przetworzonych pochodzenia zwierzęcego. TMA jest ważnym źródłem rybiego zapachu w lekach pochodzenia zwierzęcego; Jest to typowa substancja o nieprzyjemnym zapachu o bardzo niskim progu węchowym (0,000032 × 10-6 V/V) i silnym rybim zapachu13. Obecnie powszechnie stosowana metoda HS-GC-MS nie jest w stanie stabilnie i dokładnie wykr...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated from:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
Haozhou Huang2 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin3 
Xiaoming Bao4 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
JiaBao Liao2 
Haozhou Huang3 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin4 
Xiaoming Bao5 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd 
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Shimadzu (China) Co., Ltd

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated.

Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Leczenie chorób ludzkich za pomocą produktów pochodzących z części zwierząt i/lub ich produktów ubocznych (określanych tutaj jako leki pochodzenia zwierzęcego) cieszy się coraz większą uwagą. Odgrywają ważną rolę w leczeniu raka, chorób układu krążenia, marskości wątroby, zapalenia wymienia i innych chorób, z zaletami silnego działania, małych dawek oraz znaczącej i specyficznej skuteczności klinicznej. Jednak leki pochodzenia zwierzęcego mają na ogół wyraźny rybi zapach, który znacznie wpływa na przestrzeganie zaleceń przez pacjentów i jest szczególnie niekorzystny dla dzieci1,2. Rybi zapach pochodzi głównie z białek, aminokwasów, tłuszczów i innych substancji zawartych w leku, które są rozkładane przez utlenianie kwasów tłuszczowych, degradację aminokwasów i inne sposoby wytwarzania różnych substancji o rybim zapachu2,3,4. Wśród nich trimetyloamina (TMA) jest lotnym gazem o rybim zapachu, który powszechnie występuje w gnijącej lub zgniłej żywności pochodzenia zwierzęcego5.
Do tej pory chromatografia gazowa (GC), chromatografia cieczowa (LC), chromatografia jonowa, spektrofotometria, chromatografia cieczowa ze spektrometrią mas (LC-MS) oraz metody sensoryczne były powszechnie używane do wykrywania TMA w środowisku, żywności i moczu6,7,8,9. Ze względu na niskie zanieczyszczenie kolumny GC i systemu iniekcyjnego, a także wysoką czułość, odtwarzalność i niską granicę wykrywalności (0,1-1 mg/kg), do analizy żywności i biologicznej preferowano metodę chromatografii gazowej ze spektrometrią mas w przestrzeni nadpowierzchniowej (HS-GC-MS)8. Obecnie tylko Chiny ustanowiły krajowy standard TMA w żywności, a HS-GC-MS jest pierwszą metodą w standardzie GB5009.179-201610. Dlatego powyższa metoda HS-GC-MS została wybrana do wykrywania TMA w medycynie pochodzenia zwierzęcego. Na wczesnym etapie nasza grupa badawcza odkryła, że standard wykrywania HS-GC-MS TMA w żywności może wykryć rybi zapach w kilku lekach pochodzenia zwierzęcego. W połączeniu z wynikami badań11,12, można udowodnić, że TMA jest powszechną kluczową substancją o rybim zapachu w lekach pochodzenia zwierzęcego. Stwierdzono jednak, że odtwarzalność wyników eksperymentalnych była słaba i występowały problemy, takie jak ucieczka TMA i słaba stabilność, których nie można było zweryfikować za pomocą metodologii. Może to wynikać z faktu, że ług został wstrzyknięty do fiolki z przestrzenią nad głową, a szybka reakcja kwasowo-zasadowa doprowadziła do wzrostu ciśnienia w fiolce, a tym samym TMA uciekło z porów iniekcji, uniemożliwiając stabilne i dokładne wykrycie TMA. W związku z tym w ramach tego badania zaproponowano ulepszoną metodę wykrywania metodą chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas (HS-GC-MS/MS) w celu rozwiązania tych problemów.
Protokół poprawia wstępną obróbkę próbki poprzez separację reagentów kwasowo-zasadowych w procesie wstępnej obróbki za pomocą stałej parafiny, dobrego materiału zmiennofazowego ciało stałe-ciecz. Ponieważ parafina powoli skraplała się wraz ze wzrostem temperatury pieca termostatycznego, TMA był również powoli uwalniany w szczelnie zamkniętej fiolce z przestrzenią nad głową, unikając wzrostu ciśnienia spowodowanego gwałtowną i szybką reakcją kwasowo-zasadową oraz zapewniając stabilne i dokładne wykrywanie TMA. Co więcej, wstrzykiwanie przestrzeni nad powierzchnią w połączeniu z trybami monitorowania wielu reakcji (MRM)) w GC-MS/MS skutecznie stłumiło zakłócenia chemiczne matrycy i zapewniło wiarygodność wyników. Wyniki walidacji metodologicznej dowiodły, że liniowość, precyzja testu i współczynnik odzysku ulepszonej metody wykrywania mogą spełnić wymagania, zapewniając dobrą odtwarzalność i wysoką czułość.

<table><tbody><tr><td>Wirówka</td><td>Beckman Coulter Trading (Chiny) Co.</td><td>SSC-2-0213</td><td></td></tr><tr><td>Młynek do chińskiej medycyny ziołowej</td><td>Zhejiang Yongkang Xi'an Fabryka sprzętu i farmaceutyków</td><td>HX-200K</td><td></td></tr><tr><td>Piec konwekcyjny</td><td>Sanyo Electric Co., Ltd</td><td>MOV-112F</td><td></td></tr><tr><td>Decapper do aluminiowych nasadek 20 mm</td><td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td><td>V1750004</td><td></td></tr><tr><td>Waga elektroniczna</td><td>Shimadzu Corporation Japan</td><td></td><td></td>AUW220D</tr><tr><td>Chromatografia gazowa Spektrometria mas</td><td>Shimadzu Corporation Japan</td><td>TQ-8050 NX</td><td></td></tr><tr><td>Fiolka z przestrzenią nad powierzchnią</td><td>Technologie laboratoryjne ANPEL (Szanghaj) Inc</td><td></td> Homogenizator 25760200 <td></td></tr><tr><td></td><td>Fabryka biaomo w Szanghaju</td><td>FJ200-SH</td><td></td></tr><tr><td>Wstępnie zmontowana nasadka</td><td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td><td>L4150050</td><td></td></tr><tr><td>Próbka sito</td><td>Fabryka sit Zhenxing</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>SH-lotna amina</td><td>Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd</td><td>227-3626-01</td><td></td></tr><tr><td>Wodorotlenek sodu</td><td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td><td>2022101401</td><td></td></tr><tr><td>Stały wosk parafinowy</td><td>Szanghaj Hualing Fabryka aparatów Kangfu</td><td>20221112</td><td></td></tr><tr><td>Kwas trichlorooctowy</td><td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td><td></td><td></td>2022102001</tr><tr><td>Chlorowodorek trimetyloaminy</td><td>Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd</td><td>AF22022108</td><td></td></tr><tr><td>System ultraczystej wody</td><td>Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd</td><td>UPR-11-5T</td><td></td></tr></tbody></table>

ulepszona technika wykrywania trimetyloaminy w medycynie pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas w przestrzeni czołowej

An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Leki pochodzenia zwierzęcego mają charakterystyczne cechy i znaczące efekty lecznicze, ale większość z nich ma wyraźny rybi zapach, co skutkuje słabym przestrzeganiem zaleceń przez pacjentów klinicznych. Trimetyloamina (TMA) jest jednym z kluczowych składników rybiego zapachu w medycynie pochodzenia zwierzęcego. Trudno jest dokładnie zidentyfikować TMA przy użyciu istniejącej metody wykrywania ze względu na zwiększone ciśnienie w fiolce z przestrzenią nad głową spowodowane szybką reakcją kwasowo-zasadową po dodaniu ługu, co powoduje ucieczkę TMA z fiolki z przestrzenią nad głową, hamując postęp badań nad rybim zapachem medycyny pochodzenia zwierzęcego. W tym badaniu zaproponowaliśmy metodę kontrolowanej detekcji, która wprowadziła warstwę parafiny jako warstwę izolacyjną między kwasem a ługiem. Szybkość produkcji TMA można skutecznie kontrolować poprzez powolne upłynnianie warstwy parafiny poprzez termostatyczne ogrzewanie pieca. Metoda ta wykazała zadowalającą liniowość, precyzyjne eksperymenty i odzyski z dobrą odtwarzalnością i wysoką czułością. Zapewniła wsparcie techniczne w zakresie dezodoryzacji leków pochodzenia zwierzęcego.

Schematy zasady wstępnego przetwarzania i przebiegu niniejszego protokołu przedstawiono odpowiednio na Rysunku 1 i Rysunku 2. Czas retencji TMA wynosił 2,3 min, przy ostrym kształcie piku i braku zakłóceń ze strony innych zanieczyszczeń (Rysunek 3). Po pomiarze zakresu liniowego roztworu wzorcowego TMA o stężeniu 0,1-10 µg/mL, z koncentracją TMA na osi absycy i powierzchnią piku na osi ordynaty, wykreślono krzywą wzorcową. Otrzymane...

Tutaj opisana jest metoda chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas (HS-GC-MS/MS) odpowiednia do oznaczania trimetyloaminy (TMA) w lekach pochodzenia zwierzęcego. Protokół obejmuje wstępną obróbkę próbki, obróbkę w przestrzeni nad głową, warunki analizy, walidację metodologiczną oraz oznaczanie TMA w lekach pochodzenia zwierzęcego.

Ulepszona technika wykrywania trimetyloaminy w medycynie pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas w przestrzeni czołowej

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the ...

Zakresem naszych badań jest podstawa materialna i zmienność zapachu ryb w medycynie zwierząt. Protokół ten zapewnia prostą metodę leczenia wstępnego i dokładne wykrywanie trimetyloaminy w lekach dla zwierząt. Proste metody obróbki wstępnej i obwody programatora masy masowej HS GC tego protokołu wymagają dalszej optymalizacji, a przed nami jeszcze wiele pracy.Nasz protokół przyjmuje wielozadaniowy tryb monitorowania masy GC w połączeniu z unikalną prostą obróbką wstępną, która jest nie tylko pierwszą obróbką wstępną do analizy trimetyloaminy, ale także pierwszym trybem analitycznym, który można zastosować. Na początek zmiażdż materiały lecznicze, Pheretima Periplaneta americana i Hirudo za pomocą młynka do ziół. Przesiać proszek leczniczy przez standardowe sita do leków numer dwa i numer cztery, zebrać proszek między dwoma sitami, aby uzyskać wymaganą próbkę proszku.Weź jeden gram proszku do 50-mililitrowej plastikowej probówki wirówkowej. Dodać 20 mililitrów 5% roztworu kwasu trichlorooctowego i homogenizować przy 1 000 obr./min przez jedną minutę za pomocą wysokoobrotowego homogenizatora dyspersyjnego. Po homogenizacji odwirować homogenat o stężeniu 1,717 G przez pięć minut w temperaturze pokojowej.I przefiltrować supernatant przez chłonny lejek ze szkła zanurzonego w bawełnie do 50-mililitrowej kolby miarowej. Po dwukrotnym powtórzeniu procesu ekstrakcji 15 i 10 mililitrami 5% roztworu kwasu trichlorooctowego, połączyć filtraty i uzupełnić objętość do 50 mililitrów 5% roztworem kwasu trichlorooctowego. Następnie dokładnie dodaj dwa mililitry roztworu wodorotlenku sodu i 0,5 grama stałej parafiny w 20-mililitrowych fiolkach z przestrzenią nad głową.Następnie wstawiamy je do piekarnika nagrzanego do 70 stopni Celsjusza na około 30 minut. Wyjmij fiolki i pozwól im ostygnąć do temperatury pokojowej, aby parafina zastygła. Aby przetworzyć przestrzeń nad próbką, dodaj dwa mililitry każdego roztworu do ekstrakcji próbki do zestalonych fiolek zawierających parafinę.Nałożyć nakrętkę i zamknąć fiolkę. Umieść zapieczętowane fiolki z przestrzenią nad głową na GCMS w celu pomiaru. Aby uzyskać krzywą wzorcową, należy zassać serię dwóch mililitrów roztworu wzorcowego trimetyloaminy na wierzchu zestalonej warstwy parafiny.Umieść zapieczętowane fiolki z przestrzenią nad głową na maszynie w celu pomiaru trimetyloaminy. Aby wykonać test precyzji, odessać dwa mililitry 0,1 mikrograma na mililitr wzorcowego roztworu trimetyloaminy na wierzchu zestalonej warstwy parafiny. Wykonaj sześć równoległych testów w maszynie zgodnie z instrukcjami producenta.W eksperymencie dotyczącym współczynnika odzysku należy upiec kilka partii próbki w proszku w piecu, aż w GCMS nie zostanie wykryta trietyloamina, jak wykazano wcześniej. Następnie weź każdy gram pieczonego w piekarniku i drobnego proszku do oddzielnych 50-mililitrowych plastikowych probówek wirówkowych. Dodać 50 mikrolitrów wzorcowego roztworu trimetyloaminy do wszystkich probówek i ekstrahować 5% roztworem kwasu trichlorooctowego, jak wykazano wcześniej.Stwierdzono, że czas retencji trimetyloaminy wynosi 2,3 minuty. Ostry szczyt i brak zakłóceń ze strony innych zanieczyszczeń. Próbki Pheretima, Periplaneta americana i Hirudo poddane testom odzysku z dodatkiem przez suszenie w celu redukcji trietyloaminy w ziołach wykazały średnie wskaźniki odzysku wynoszące odpowiednio 84,49, 94,66 i 85,67%.Trietyloaminę wykryto w dziewięciu partiach ziół, w stężeniach od 13,23 do 271,63 miligramów na kilogram.

an-improved-technique-for-trimethylamine-detection-animal-derived

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Opisujemy protokół metody do analizy pochodnych octanu aldonitrylu glukozaminy i kwasu muraminowego ekstrahowanych z gleby za pomocą chromatografii gazowej (GC). W celu wyjaśnienia mechanizmu chemicznego przedstawiamy również strategię potwierdzenia struktury pochodnej oraz fragmentów jonowych powstających podczas jonizacji elektronowej.

Wykrywanie za pomocą GC pochodnych octowych aldonionitryli glukozaminy i kwasu muraminowego w celu oznaczenia pozostałości mikrobiologicznych w glebie

Opisano dwie metody przypisywania sygnałów magnetycznego rezonansu jądrowego α- i ε-dimetyloaminy redukcyjnie 13C-metylowanej N-końcowej lizyny. Jedna metoda wykorzystuje selektywność reakcji metylacji redukcyjnej wywołanej pH, a druga wykorzystuje aminopeptydazę do selektywnego usuwania N-końcowej lizyny.

Metody identyfikacji rezonansów NMR 13C-dimetylo-N-końcowej aminy na redukcyjnie metylowanych białkach

Czas reakcji transferu protonów w locie Spektrometria mas umożliwia bardzo czułą, szybką i nieinwazyjną analizę lotnych związków organicznych. Aby pokazać jej potencjał, podajemy trzy przykłady: fermentację mlekową jogurtu (monitorowanie bioprocesów on-line), różne genotypy jabłek (badania przesiewowe na dużą skalę) oraz przestrzeń zanosową po wypiciu kawy (analiza przestrzeni nosowej).

PTR-ToF-MS w połączeniu ze zautomatyzowanym systemem pobierania próbek i dostosowaną analizą danych do badań żywności: monitorowanie bioprocesów, badania przesiewowe i analiza przestrzeni nosowej

Przedstawiamy protokół identyfikacji i ilościowego określania składników w mieszaninach gatunków o podobnych białkach. Spektrometria mas wykrywa peptydy w celu identyfikacji i podaje względną ocenę ilościową za pomocą stosunków powierzchni pików. Jako narzędzie do wykrywania oszustw, metoda ta może wykryć 1% koniny w wołowinie.

Oznaczanie gatunków i oznaczanie ilościowe w mieszaninach z zastosowaniem spektrometrii mas MRM peptydów stosowanych do weryfikacji autentyczności mięsa

Ten protokół opisuje eksperymentalną procedurę ilościowego i kompleksowego badania metabolizmu wielu źródeł składników odżywczych. Ten przepływ pracy, oparty na połączeniu eksperymentów ze znacznikami izotopowymi i procedury analitycznej, pozwala na określenie losu spożywanych składników odżywczych i pochodzenia metabolicznego cząsteczek syntetyzowanych przez mikroorganizmy.

Przebieg pracy oparty na połączeniu eksperymentów ze znacznikami izotopowymi w celu zbadania metabolizmu mikrobiologicznego wielu źródeł składników odżywczych

Opracowaliśmy skuteczną metodologię pobierania próbek i analizy sygnałów zapachowych, aby zrozumieć, jak mogą być one wykorzystywane w komunikacji zwierząt. W szczególności stosujemy mikroekstrakcję do fazy stałej w połączeniu z chromatografią gazową ze spektrometrią mas do analizy lotnych składników zapachów zwierzęcych i oznaczeń zapachowych.

Pobieranie próbek i analiza sygnałów zapachowych zwierząt

Całkowita waporyzacja Mikroekstrakcja w fazie stałej (TV-SPME) całkowicie odparowuje płynną próbkę, podczas gdy anality są sorbowane na włókno SPME. Pozwala to na podział analitu tylko na parę rozpuszczalnika i powłokę z włókna SPME.

Chromatografia gazowa-spektrometria mas w połączeniu z całkowitą odparowywaniem Mikroekstrakcja do fazy stałej jako narzędzie kryminalistyczne

Tutaj opisujemy ogólny protokół i projekt, który może być zastosowany do identyfikacji śladowych ilości i drobnych składników w złożonych preparatach produktów naturalnych (matrycach) w medycynie tybetańskiej.

Standaryzowana identyfikacja struktury związku w medycynie tybetańskiej za pomocą spektrometrii mas z pułapką jonową i wieloetapowej analizy fragmentacji

Opisujemy ogólny protokół, który integruje analizę spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości i dokowanie molekularne w badaniach tradycyjnej medycyny chińskiej.

Tandemowa spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości do badania składników chemicznych Gynura bicolor DC

Prezentujemy metodę szybkiej spektrometrii mas (MS)/spektrometrii mas (MS) opartej na adnotacji i klasyfikacji alkaloidów tropanowych, przydatną zarówno do wstępnej dereplikacji próbek zawierających tropan jak i odkrywania nowych alkaloidów do izolacji.

Zastosowania tandemowej spektrometrii mas chromatografii cieczowej w badaniach nad produktami naturalnymi: alkaloidy tropanowe jako studium przypadku

Niniejsze badanie opracowało metodę chromatografii cieczowej wysokiej rozdzielczości połączoną ze spektrometrią mas z potrójnym kwarcykiem (HPLC-QQQ-MS) w celu identyfikacji i ilościowego określania alkaloidów tropanowych (hioscyjamina, anizodamina, skopolamina) w Anisodus tanguticus. Metoda ta okazała się szybką, dokładną i niezawodną dla analizy wysokowydajnej roślin leczniczych.

Skuteczną i szybką metodę HPLC-QQQ-MS do ilościowego oznaczania alkaloidów tropanowych w roślinach leczniczych

Poznaj ulepszoną metodę wykrywania trimetyloaminy w lekach pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową spektrometrią mas. Protokół obejmuje przygotowanie próbek Pheretima, Periplaneta americana i Hirudo oraz walidację analityczną.

Ulepszona technika wykrywania trimetyloaminy w medycynie pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas w przestrzeni czołowej (Wideo) | JoVE Journal

Ulepszona technika wykrywania trimetyloaminy w medycynie pochodzenia zwierzęcego za pomocą chromatografii gazowej z tandemową kwadrupolową spektrometrią mas w przestrzeni czołowej

Przeglądaj więcej filmów