Name: Chorobowa normemmiczna izolowana perfuzja wątroby u świń (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Poznaj normotermiczną perfuzję maszynową wątroby u świń jako metodę oceny przeszczepów i regeneracji. Model ten umożliwia badanie biologii komórek wątrobowych oraz zwiększenie wykorzystania narządów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować wszystkim studentom wydziału lekarskiego KU Leuven zaangażowanym w te eksperymenty.

Development and Validation of a Porcine Ex Situ Isolated Liver Perfusion Model 

<ol><li>Dunson, J. R., Bakhtiyar, S. S., Joshi, M., Goss, J. A., Rana, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intent-to-treat+survival+in+liver+transplantation+has+not+improved+in+3+decades+due+to+donor+shortage+relative+to+waitlist+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Intent-to-treat survival in liver transplantation has not improved in 3 decades due to donor shortage relative to waitlist growth.</a> Clinical Transplantation. 35 (10), e14433(2021).</li>
<li>Monbaliu, D., Pirenne, J., Talbot, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+transplantation+using+donation+after+cardiac+death+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver transplantation using donation after cardiac death donors.</a> Journal of Hepatology. 56 (2), 474-485 (2012).</li>
<li>Croome, K. P., Taner, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+landscapes+in+DCD+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Transplantation+Reports%22%5BJournal%5D)">The changing landscapes in DCD liver transplantation.</a> Current Transplantation Reports. 7 (3), 194-204 (2020).</li>
<li>Coffey, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+functional+warm+ischemia+time+on+DCD+liver+transplant+recipients%27+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The influence of functional warm ischemia time on DCD liver transplant recipients' outcomes.</a> Clinical Transplantation. 31 (10), (2017).</li>
<li>Meurisse, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcomes+of+liver+transplantations+using+donations+after+circulatory+death%3A+A+single-center+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Outcomes of liver transplantations using donations after circulatory death: A single-center experience.</a> Transplantation Proceedings. 44 (9), 2868-2873 (2012).</li>
<li>Ruck, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+trends+in+utilization+and+outcomes+of+DCD+livers+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Temporal trends in utilization and outcomes of DCD livers in the United States.</a> Transplantation. 106 (3), 543-551 (2022).</li>
<li>Nasralla, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+trial+of+normothermic+preservation+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A randomized trial of normothermic preservation in liver transplantation.</a> Nature. 557 (7703), 50-56 (2018).</li>
<li>Blondeel, J., Monbaliu, D., Gilbo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+liver+preservation%3A+Are+we+still+missing+pieces+of+the+puzzle%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Dynamic liver preservation: Are we still missing pieces of the puzzle.</a> Artificial Organs. 47 (2), 248-259 (2022).</li>
<li>Gilbo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+liver+normothermic+machine+perfusion%3A+Methodological+framework+and+potential+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Direct%22%5BJournal%5D)">Porcine liver normothermic machine perfusion: Methodological framework and potential pitfalls.</a> Transplantation Direct. 8 (1), e1276(2021).</li>
<li>Maione, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+isolated+liver+perfusion+for+the+study+of+ischemia+reperfusion+injury%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Porcine isolated liver perfusion for the study of ischemia reperfusion injury: A systematic review.</a> Transplantation. 102 (7), 1039-1049 (2018).</li>
<li>Gilbo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coagulation+factors+accumulate+during+normothermic+liver+machine+perfusion+regardless+of+donor+type+and+severity+of+ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Coagulation factors accumulate during normothermic liver machine perfusion regardless of donor type and severity of ischemic injury.</a> Transplantation. 106 (3), 510-518 (2021).</li>
<li>Butler, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+extracorporeal+porcine+liver+perfusion+for+72+hr%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Successful extracorporeal porcine liver perfusion for 72 hr.</a> Transplantation. 73 (8), 1212-1218 (2002).</li>
<li>Eshmuminov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+perfusion+machine+preserves+injured+human+livers+for+1+week%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">An integrated perfusion machine preserves injured human livers for 1 week.</a> Nature Biotechnology. 38 (2), 189-198 (2020).</li>
<li>Xu, J., Buchwald, J. E., Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+current+machine+perfusion+therapeutics+for+organ+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Review of current machine perfusion therapeutics for organ preservation.</a> Transplantation. 104 (9), 1792-1803 (2020).</li>
<li>Martins, P. N., Turco, S. D., Gilbo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+therapeutics+during+ex-situ+dynamic+preservation.+a+look+into+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Organ therapeutics during ex-situ dynamic preservation. a look into the future.</a> European Journal of Transplantation. 1, 63-78 (2023).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Tutaj szczegółowo opisaliśmy nasze doświadczenia z NMP wątroby świń. Zaletami tej techniki są wysoka wartość translacyjna i wszechstronność. NMP wątroby świń może być stosowany zarówno w celu zbadania i poszerzenia wiedzy na temat tej ulepszonej techniki konserwacji, jak i alternatywnie, do naśladowania przeszczepu. Ta konfiguracja umożliwia ręczną kontrolę nad każdym aspektem perfuzji, umożliwiając regulację ciśnienia i przepływu zarówno wrotnego, jak i tętniczego na różne sposoby.
Aby jak na...

Przeszczep wątroby jest jedynym ostatecznym sposobem leczenia schyłkowej niewydolności wątroby; Jednak jego powodzenie jest ograniczone przez utrzymującą się nierównowagę między pacjentami na liście oczekujących a dostępnością potencjalnych narządów dawców1. Aby zwiększyć pulę dawców, w ciągu ostatniej dekady stopniowo rozszerzano kryteria dawców, w tym starszy wiek dawcy, stłuszczenie wątroby i dawstwo po śmierci krążeniowej (DCD)2,3. Podczas zabiegu DCD wątroba niezmiennie cierpi na okres ciepłego niedokrwienia między odstawieniem terapii podtrzymującej życie, oświadczeniem o zgonie a chłodzeniem i konserwacją in situ, pogarszając uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne (IRI)4. W rezultacie, wątroby DCD są związane ze zwiększoną częstością występowania wczesnej dysfunkcji przeszczepu allogenicznego i powikłań żółciowych 5,6.
W przypadku tych wątrob dawców wysokiego ryzyka konwencjonalne przechowywanie w niskiej temperaturze nie zapewnia wystarczającej ochrony przed IRI. W związku z tym alternatywne strategie konserwacji, takie jak normotermiczna perfuzja maszynowa (NMP), zyskały znaczną popularność. Podczas normotermicznej perfuzji maszynowej wątroba jest podłączona ex situ do izolowanego obwodu i perfundowana natlenionym i wzbogaconym w składniki odżywcze perfuzatem w temperaturze ciała. Badania kliniczne sugerują, że NMP zmniejsza uszkodzenie komórek wątroby, co znajduje odzwierciedlenie w zmniejszonym szczytowym uwalnianiu aminotransferaz i wczesnej dysfunkcji przeszczepu allogenicznego7. Jednak niewiele wiadomo na temat biologii komórek wątroby podczas NMP8.
Modele zwierzęce odegrały kluczową rolę w ewolucji przeszczepu wątroby. W przeciwieństwie do modeli gryzoni, świnia jest uważana za osobę o wyższej wartości translacyjnej, ponieważ wątroba świni jest anatomicznie i fizjologicznie zbliżona do ludzkiej, o podobnej wielkości narządów i składzie żółciowym. Niemniej jednak modele przeszczepu wątroby świń są pracochłonne, trudne do standaryzacji i wiążą się ze znacznie wyższymi kosztami finansowymi.
NMP wątroby świń może być używany do różnych celów. Może być stosowany do naśladowania przeszczepu ex situ przy użyciu perfuzatu na bazie krwi pełnej, w celu zachowania wątroby dawcy w środowisku ochronnym z perfugatem na bazie czerwonych krwinek zubożonych w leukocyty, w celu oceny potencjalnych biomarkerów przewidujących czynność wątroby ex situ przed przeszczepem lub jako platforma do badania terapii regeneracyjnej 9,10,11.
Przyjęcie modeli NMP wątroby świń jest trudne, a aspekty techniczne związane z chirurgią i perfuzją są prawie nieopisane. W naszym laboratorium badawczym przyjęliśmy konfigurację NMP pierwotnie opisaną przez Butlera i wsp.12 w celu opracowania i walidacji 24-godzinnego modelu perfuzji wątroby izolowanej ex situ świni, który można wykorzystać zarówno do zachowania przeszczepu wątroby do przeszczepu, jak i do naśladowania przeszczepu. Tutaj opisujemy protokół krok po kroku; Ramy metodologiczne i potencjalne pułapki zostały opublikowane w innym miejscu9.

<table><tbody><tr><td>Pompa strzykawkowa Alaris GH Plus</td><td>BD Care Fusion</td><td>80023 UN 01-G</td><td></td></tr><tr><td>Urządzenie anestezjologiczne</td><td>Dr&auml; Ger</td><td>Titus</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik tętniczy Cavafix Certo</td><td>Braun, Melsungen, Niemcy</td><td>BRAU4152557</td><td></td></tr><tr><td>Analizator parametrów krytycznych</td><td>Radiometer</td><td>ABL815 powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Glukonian wapnia 10%</td><td>Braun, Melsungen, Niemcy</td><td>570/13596667/1214</td><td></td></tr><tr><td>Kapnograf</td><td>Dr&auml; Ger</td><td>Scio powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Oszczędzanie komórek</td><td>Firma Medtronic</td><td>Automatyczny rejestr</td><td></td></tr><tr><td>Pompa odśrodkowa Biomedicus</td><td>Firma Medtronic</td><td>85315 WERSJA 3.0</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka Rotina 420R Hettich</td><td>Firma VWR</td><td>521-1156</td><td></td></tr><tr><td>Wykonany na zamówienie obwód perfuzyjny</td><td>Firma Medtronic</td><td>M323901C</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowy zestaw oszczędzacza komórek</td><td>Firma Medtronic</td><td>ATLS24</td><td></td></tr><tr><td>DLP Kaniula żylna jednostopniowa, prosta 20F</td><td>Firma Medtronic</td><td>66120</td><td></td></tr><tr><td>Epoprostenol</td><td>GlaxoSmithKline Belgium, Wavre, Belgia</td><td>Flolan powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Fentanyl-Janssen 0,05 mg/ml</td><td>Janssen</td><td>HK-08700 powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Czujnik przepływu BioPro TT</td><td>Em-Tec</td><td>12271</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd 4%</td><td>Firma VWR</td><td>VWRK4078.9005</td><td></td></tr><tr><td>Zamrażarka -80 &deg; C</td><td>Naukowy Nowy Brunszwik</td><td>U570-86</td><td></td></tr><tr><td>Lodówka</td><td>Liebherr powiedział:</td><td>KUBEK 3513</td><td></td></tr><tr><td>Geloplazma</td><td>Fresenius-Kabi, Bad Homburg, Niemcy</td><td>Swobodny flex</td><td></td></tr><tr><td>Chłodnica nagrzewnicy</td><td>St&ouml; ckert-Shiley, grupa Sorin</td><td>16-02-1950</td><td></td></tr><tr><td>Heparyna 5000 j.m./ml</td><td>Leo Pharma, Ballerup, Dania</td><td>HeparynaLew</td><td></td></tr><tr><td>Kaniula tętnicy wątrobowej</td><td>Firma Medtronic</td><td>BIO-MEDICUS 12F</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór do konserwacji narządów IGL-1</td><td>Instytut Georges'a Lopeza</td><td>IGL-1/1000/D</td><td></td></tr><tr><td>Analizator parametrów krytycznych krwi in-line</td><td>TERUMO</td><td>Kalibrator 3MCDI 540/CDI 500</td><td></td></tr><tr><td>Insulina 200 j.m. Actrapid</td><td>Novo Nordisk, Dagsvaerd, Dania</td><td>MEDI-00018</td><td></td></tr><tr><td>Izofluran 1000 mg/g Para wziewna</td><td>Chanelle Pharma</td><td>Iso-Vet</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik dożylny BD Insyte-W 20 G</td><td>BD</td><td>381334</td><td></td></tr><tr><td>Zbiornik ciekłego azotu</td><td>Izoterma KGW</td><td>S22 powiedział:</td><td></td></tr><tr><td>Mersilene 250CM M3 USP2/0 ligapak bez igły</td><td>JNJ medyczny</td><td>Zobacz materiał F4503</td><td></td></tr><tr><td>Mersilene 250CM M3.5 USP0 ligapak bez igieł</td><td>JNJ medyczny</td><td>Zobacz materiał F4504</td><td></td></tr><tr><td>Mersilene 5X70CM M3.5 USP0 bez igieł</td><td>JNJ medyczny</td><td>EH6935H</td><td></td></tr><tr><td>Mersilene 6X45CM M3 USP2/0 bezigłowy</td><td>JNJ medyczny</td><td>EH6734H</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipety 1000 i mikro; L</td><td>Socorex powiedział:</td><td>82,51,000</td><td></td></tr><tr><td>Monitoring</td><td>Simens</td><td>Zobacz materiał SC 8000</td><td></td></tr><tr><td>Plazmalit Viaflo</td><td>Baxter</td><td>Plazmalit Viaflo</td><td></td></tr><tr><td>Żyła wrotna kaniula</td><td>USPOKOJONE LABORATORIA</td><td>18F RV-40018</td><td></td></tr><tr><td>Czujnik ciśnienia</td><td>St&ouml; ckert-Shiley, grupa Sorin</td><td>22-06-2000</td><td></td></tr><tr><td>Regulator ciśnienia serwo</td><td>Firma Medtronic</td><td>Zobacz materiał BM 9505-2</td><td></td></tr><tr><td>Prolen 4-0</td><td>JNJ medyczny</td><td>EH7151H</td><td></td></tr><tr><td>Pompa rolkowa</td><td>Stulecie Cobe Stany Zjednoczone</td><td>468048-000 REV C</td><td></td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu 8,4%</td><td>Braun, Melsungen, Niemcy</td><td>362 2339</td><td></td></tr><tr><td>Taulocholan sodu</td><td>Sigma Aldrich, Burlington, Stany Zjednoczone</td><td>86339</td><td></td></tr><tr><td>Skalpel chirurgiczny nr 24</td><td>Swann Morton</td><td>0211</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik żylny, 3-świetlny; 12FR</td><td>STRZAŁA</td><td>AK-12123-F</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl Vio 250CM M2 USP3/0 gigapak bezigłowy</td><td>JNJ medyczny</td><td>V1205G</td><td></td></tr><tr><td>Ksylazyna 2%</td><td>VMD Hodowla zwierząt gospodarskich Farmacja</td><td>XYL-M 2%</td><td></td></tr><tr><td>Zinacef Cefuroksym 750 mg tabletki powlekane</td><td>GlaxoSmithKline Belgium, Wavre, Belgia</td><td>NDC 0173-0353-32</td><td></td></tr><tr><td>Zoletil 100 powiedział:</td><td>Wirus Virbac</td><td>Zoletil 100 powiedział:</td><td></td></tr></tbody></table>

chorobowa normemmiczna izolowana perfuzja wątroby u świń

Porcine Normothermic Isolated Liver Perfusion

Modele świńskie normotermicznej perfuzji maszynowej ex situ wątroby (NMP) są coraz częściej wykorzystywane w badaniach transplantacyjnych. W przeciwieństwie do gryzoni, wątroby świń są anatomicznie i fizjologicznie zbliżone do ludzi, mają podobną wielkość narządów i skład żółciowy. NMP zachowuje przeszczep wątroby w warunkach zbliżonych do fizjologicznych poprzez recyrkulację ciepłego, natlenionego i wzbogaconego w składniki odżywcze perfuzatu na bazie czerwonych krwinek przez układ naczyniowy wątroby. NMP może być stosowany do badania uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego, zachowania wątroby ex situ przed przeszczepem, oceny funkcji wątroby przed implantacją oraz zapewnienia platformy do naprawy i regeneracji narządów. Alternatywnie, NMP z perfuzatem na bazie krwi pełnej może być stosowany do naśladowania przeszczepu. Niemniej jednak model ten jest pracochłonny, wymagający technicznie i wiąże się z wysokimi kosztami finansowymi.
W tym modelu NMP świń używamy ciepłych wątrob z uszkodzeniem niedokrwiennym (co odpowiada dawstwu po śmierci krążeniowej). Najpierw inicjowane jest znieczulenie ogólne z wentylacją mechaniczną, a następnie indukcja ciepłego niedokrwienia poprzez zaciśnięcie aorty piersiowej na 60 minut. Kaniule wprowadzone do aorty brzusznej i żyły wrotnej umożliwiają wypłukanie wątroby zimnym roztworem konserwującym. Wypłukaną krew przepłukuje się środkiem oszczędzającym komórki w celu uzyskania skoncentrowanych czerwonych krwinek. Po hepatektomii kaniule są wprowadzane do żyły wrotnej, tętnicy wątrobowej i żyły głównej podwątrobowej i podłączane do zamkniętego obwodu perfuzyjnego zaszczepionego ekspanderem osocza i czerwonymi krwinkami. W obwodzie znajduje się natleniacz z pustych włókien i sprzężony z wymiennikiem ciepła w celu utrzymania pO2 na poziomie 70-100 mmHg w temperaturze 38 °C. NMP uzyskuje się poprzez ciągły przepływ bezpośrednio przez tętnicę i przez zbiornik żylny przez żyłę wrotną. Przepływy, ciśnienia i wartości gazometrii krwi są stale monitorowane. Aby ocenić uszkodzenie wątroby, pobiera się próbki perfuzatu i tkanek w określonych punktach czasowych; Żółć pobierana jest za pomocą kaniuli w wspólnym przewodzie żółciowym.

Przedstawiony protokół perfuzji wykorzystuje samoregulację przepływu krwi w wątrobie w celu osiągnięcia stabilnych warunków hemodynamicznych przez okres do 24 godzin i symulacji fizjologicznego rozkładu przepływu krwi w żyle wrotnej i tętnicy wątrobowej. Rysunek 1 przedstawia schematyczny przegląd obwodu perfuzji. Rycina 2A przedstawia spójny rozkład przepływu krwi, przy czym żyła wrotna i tętnica wątrobowa odpowiadają odpowiednio za około 75% i 25% całkowitego ...

Opisany tutaj świński model normotermicznej perfuzji maszynowej wątroby (NMP) może być z powodzeniem wykorzystany do badania NMP jako strategii zachowania, narzędzia do oceny żywotności i platformy do naprawy narządów. Ma wysoką wartość translacyjną, jednak jest trudny technicznie i pracochłonny.

Chorobowa normemmiczna izolowana perfuzja wątroby u świń

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine ...

Zakres naszych badań polega na poprawie zachowania przeszczepów wątroby wysokiego ryzyka poprzez pogłębienie naszej wiedzy na temat normotermicznej perfuzji maszynowej lub NMP, która umożliwia regenerację przeszczepu, ocenę przed przeszczepem i stanowi platformę dla terapii regeneracyjnej. Ostatnie badania kliniczne sugerują, że normotermiczna perfuzja maszynowa zmniejsza uszkodzenie komórek wątroby, podczas gdy ocena przeszczepu może zwiększyć wskaźniki wykorzystania narządów. Jednak niewiele wiadomo na temat biologii komórek wątroby podczas NMP.Modele zwierzęce odegrały kluczową rolę w ewolucji przeszczepu wątroby. W naszym laboratorium opracowaliśmy walidacyjny model perfuzji wątroby izolowanej od świń, który można zastosować do badania NMP jako strategii konserwacji, a także do naśladowania przeszczepu. Główną zaletą naszego modelu jest wysoka wartość translacyjna w porównaniu do modeli gryzoni.Dodatkowo nasza konfiguracja pozwala badaczom dostosować wszystkie indywidualne ustawienia, aby mieć pełną kontrolę nad perfuzją. Nasze własne badania koncentrowały się na wpływie składu perfuzatu i zakresu uszkodzenia na wrodzoną odpowiedź immunologiczną przeszczepów wątroby podczas normotermicznej perfuzji maszynowej. W przyszłości chcemy zbadać NMP jako platformę terapii regeneracyjnej, na przykład poprzez podawanie czynników parakrynnych komórek macierzystych.Zacznij od wprowadzenia cewnika o rozmiarze 22 do żyły usznej uspokojonej świni. Podłącz cewnik do zaworu trójdrogowego i wywołaj znieczulenie, rozpoczynając dożylną kroplówkę z osoczem i litem w ilości 40 mililitrów na godzinę. Wykonaj siedmiocentymetrowe nacięcie od bocznej lewej strony górnej części mostka do mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego.Po umieszczeniu retraktora ortostatycznego zlokalizuj żyłę pozaszyjną i wypreparuj ją, podwiązując dowolne boczne gałęzie. Umieść dwie ligatury 2-0 wokół żyły szyjnej zewnętrznej i zwiąż ligaturę czaszki. Rozciąć żyłę ogonową do zawiązanej ligatury i wprowadzić 12 francuskich cewników żylnych.Po odsłonięciu i powtórzeniu podwiązania na tętnicy szyjnej, doogonowo wprowadzić linię tętniczą do tętnicy szyjnej i ustabilizować za pomocą ligatury 2-0. Wykonaj nacięcie wzdłuż linii środkowej od mieczykowatej kości do kości łonowej. Przeciąć więzadło pępowinowe i umieścić retraktor brzuszny.Pociągnij jelita w lewo na boki i czaszkę, aby uwidocznić aortę i żyłę główną. Teraz wypreparuj wolne trzy centymetry aorty czaszkowej do rozwidlenia biodrowego i umieść dwie ligatury wokół aorty. Wypreparuj żyłę główną na tym samym poziomie co aorta i umieść wokół niej dwie ligatury.Zaczynając od bocznej strony więzadła żołądkowo-dwunastniczego, rozetnij wspólny przewód żółciowy i opocz go pętlą naczynia. Usuń duży węzeł chłonny po bocznej stronie żyły wrotnej i przeciąć gałąź od żołądka do trzustki, aby uwolnić żyłę. Otaczaj żyłę wrotną pętlą naczyniową po stronie wątroby i ligaturą po stronie trzustki.Cofnij żyłę wrotną na boki, upewniając się, że nie jest zamknięta. Zlokalizuj wspólną tętnicę wątrobową i opocz ją pętlą naczynia. Wszystkie struktury wnękowe są teraz zidentyfikowane.Cofnij przełyk na prawą stronę, odsłaniając aortę piersiową. Po podaniu świni 500 jednostek na kilogram heparyny, zawiąż więzadło ogonowe wokół aorty, a następnie włóż 20 francuskiej kaniuli do aorty i utrwalij. Naśladuj DCD, zaciskając aortę piersiową przez około 60 minut, aby wywołać ciepłe niedokrwienie.Po przepłukaniu kaniuli aortalnej lodowatym płynem konserwującym, miejscowo umieść błoto pośniegowe na brzuchu, aby go schłodzić. Po zakończeniu płukania usuń kaniulę aortalną, zawiąż ligaturę wokół żyły wrotnej, kaniuluj i umocuj kaniulę w żyle wrotnej za pomocą pętli naczynia. Przepłucz wątrobę dwoma litrami lodowatego płynu konserwującego przez żyłę wrotną.Następnie odsłoń żyłę podwątrobową główną, cofając jelita w lewo. Wypreparuj żyłę główną z zaotrzewnowej i oddziel ją czaszkowo od żył nerkowych. Teraz przeprowadź sekcję wspólnej tętnicy wątrobowej aż do tętnicy trzewnej i aorty.Następnie podziel tętnicę żołądkowo-dwunastniczą i wytnij tętnicę trzewną za pomocą plastra aorty. Po wycięciu żyły głównej nadwątrobowej i wszelkich innych pozostałych przyczepów, usuń uwolnioną wątrobę i zważ ją. Kankatulować żyłę wrotną ważonej wątroby za pomocą 25 francuskiej kaniuli i zabezpieczyć ją ligaturami.Następnie kanuluj tętnicę wątrobową za pomocą 14 francuskiej wzmocnionej kaniuli i utrwalij. Kankanulować i utrwalać żyłę główną podwątrobową. Kankaniuluj przewód żółciowy i utrwalaj za pomocą sznurka do torebki.Odwietrz kaniulę wrotną i przetestuj szczelność, przepłukując żyłę wrotną 250 mililitrami ekspandera zimnej plazmy. Umieścić wyciętą wątrobę wieprzową w pojemniku. Następnie podłącz kaniule do odpowiednich rurek dopływowych i odpływowych za pomocą trójnika.Zamontuj kurki trójdrożne na trójniku i podłącz je do przewodów ciśnieniowych. Umieść kaniulę przewodu żółciowego w pojemniku pod olejem mineralnym i rozpocznij perfuzję. Żyła wrotna przyczynia się do około 75% całkowitego przepływu krwi w wątrobie, podczas gdy tętnica wątrobowa przyczynia się do 25% całkowitego przepływu wątroby.Obserwowano stabilny wewnątrzwątrobowy opór naczyniowy, przy czym żyła wrotna wykazywała mniejszy opór w stosunku do tętnicy wątrobowej. Stabilna i spójna perfuzja prowadziła do stałego poziomu uwalniania aminotransferazy asparaginianowej w ciągu sześciu do 12 godzin. Perfuzyjne pH było samoregulowane i utrzymywane w normalnych zakresach przez wątrobę.Zaobserwowano, że mleczan perfuzatu został usunięty po godzinie od rozpoczęcia perfuzji, a wydzielanie żółci utrzymywało się przez 24 godziny. Niewłaściwe umieszczenie kaniuli w żyle głównej lewej doprowadziło do upośledzenia odpływu, powodując podwojenie oporu żyły wrotnej, co doprowadziło do zmniejszenia przepływu krwi w żyle wrotnej i kompensacyjnego wzrostu przepływu tętnicy wątrobowej. Niedrożność odpływu była również związana z krwotokiem wewnątrzwątrobowym i martwicą komórek wątroby, na co wskazuje zwiększone stężenie aminotransferazy asparaginianowej w perfuzacie.

porcine-normothermic-isolated-liver-perfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Opisano technikę izolacji fibroblastów wrotnych z wątroby szczura. Wątroby poddano perfuzji oraz trawieniu in situ kolagenazą, a następnie trawieniu ex vivo zawiesiny wątrobowej i selekcji komórek pod względem wielkości. Metoda ta pozwala na uzyskanie czystej populacji fibroblastów wrotnych bez konieczności pasażowania w hodowli.

Izolacja fibroblastów wrotnych szczura poprzez perfuzję wątroby in situ

Badanie fizjologii organów zwierzęcych można uzyskać, przeprowadzając eksperymentalny system perfuzji ex vivo. Dodanie nerki świni, jako narządu homeostatycznego, do naszego wcześniej opracowanego modelu perfuzji wątroby ex vivo, może być głównym krokiem w kierunku osiągnięcia lepszego środowiska fizjologicznego.

Etapy autologicznego eksperymentu ex vivo z perfuzją wątroby i nerek świni

Przeszczepy marginalne, takie jak stłuszczone wątroby, przeszczepy od starszych dawców lub wątroby pobrane po śmierci sercowej (DCD) źle znoszą tradycyjne, zimne przechowywanie statyczne. Opracowaliśmy nowatorski model subnormotermicznej perfuzji wątroby ex vivo w celu zachowania, oceny i naprawy brzeżnych przeszczepów wątroby przed przeszczepem.

Technika subnormotermicznej perfuzji wątroby ex vivo do przechowywania, oceny i naprawy brzeżnych przeszczepów wątroby

Opisujemy metodę perfuzji ex vivo ludzkich przeszczepów wątroby w temperaturze subnormotermicznej (21 °C).

Funkcjonalne zachowanie i regeneracja wątroby człowieka za pomocą subnormotermicznej perfuzji maszynowej

Istnieje znaczny niedobór dawców wątroby, a kryteria dla dawców wątroby zostały rozszerzone. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) został opracowany w celu oceny i modyfikacji funkcji narządów. Badanie to demonstruje szczurzy model NEVLP i testuje zdolność pegylowanej katalazy do łagodzenia uszkodzeń wątroby.

Mały zwierzęcy model normacyjnej perfuzji wątroby ex vivo

Ten protokół szczegółowo opisuje użycie specjalnego cewnika dożylnego, standaryzowanego sterylnego jednorazowego wężyka, kontroli temperatury uzupełnionej monitorowaniem w czasie rzeczywistym, oraz systemu alarmowego dla dwuetapowej procedury perfuzji kolagenazy w celu poprawy spójności żywotności, wydajności i funkcjonalności izolowanych pierwotnych hepatocytów szczurów.

Izolacja pierwotnych hepatocytów szczura z wieloparametrową kontrolą perfuzji

W tym protokole opisany jest model ortotopowego przeszczepu wątroby u świń po statycznym przechowywaniu narządów dawcy w chłodni przez 20 godzin bez użycia bypassu żylno-żylnego podczas wszczepienia. Podejście to wykorzystuje uproszczoną technikę chirurgiczną z minimalizacją fazy bezwątrobowej oraz zaawansowanym zarządzaniem objętością i wazopresorem.

Przeszczepienie wątroby świni bez bypassu żylno-żylnego jako model dawcy o rozszerzonych kryteriach

Dla mysich wątrob stworzono normotermiczny system perfuzji wątroby ex vivo (NEVLP). System ten wymaga doświadczenia w mikrochirurgii, ale pozwala na uzyskanie powtarzalnych wyników perfuzji. Możliwość wykorzystania wątroby myszy ułatwia badanie szlaków molekularnych w celu identyfikacji nowych dodatków perfuzatu i umożliwia przeprowadzanie eksperymentów skoncentrowanych na naprawie narządów.

Normothermiczna perfuzja płuc ex vivo w wątrobie u myszy

Ten protokół przedstawia metodologię tworzenia modelu świń wykorzystującego zmienną perfuzję maszynową (MP) w celu zachowania wątroby dawcy, a następnie ortotopowego przeszczepu wątroby (OLTx). Ma on na celu zwiększenie wskaźnika powodzenia OLTx przy użyciu dawstwa wątroby po śmierci krążeniowej (DCD) i ustanowienie stabilnego modelu.

Zachowanie wątroby od dawców świń po śmierci krążeniowej (DCD) metodą perfuzji i ortotopowego przeszczepu wątroby

W tym miejscu przedstawiamy protokół dla otwartego, modyfikowalnego normotermicznego systemu perfuzji ex vivo , zaprojektowanego w celu przezwyciężenia wysokich kosztów i ograniczonej elastyczności istniejących platform, umożliwiając bardziej dostępne, opłacalne i iteracyjne wykorzystanie w przedklinicznych badaniach biomedycznych.

System perfuzji normamicznej o otwartym kodzie źródłowym przeznaczony dla naukowców

Poznaj normotermiczną perfuzję maszynową wątroby u świń jako metodę oceny przeszczepów i regeneracji. Model ten umożliwia badanie biologii komórek wątrobowych oraz zwiększenie wykorzystania narządów.

Chorobowa normemmiczna izolowana perfuzja wątroby u świń

Przeglądaj więcej filmów