Name: Magnetyczna analiza przepływu podwójnego reportera oparta na kulkach magnetycznych blokady przeciwciał wywołanych szczepionką peptydu PDL1-Vaxx w interakcji PD-1/PD-L1 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Dowiedz się, jak analizować blokowanie interakcji PD-1/PD-L1 za pomocą magnetycznej analizy przepływu z fluorescencyjnymi kulkami w badaniach szczepionki PDL1-Vaxx. Ta metoda umożliwia ocenę aktywności neutralizujących przeciwciał w immunoterapii nowotworowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują Sherry Dunbar PhD, MBA z Luminex Corporation (Austin, TX) za wsparcie badań oraz Matthew Silvermanowi PhD z Biomedical Publishing Solutions (Panama City, FL; mattsilver@yahoo.com) za pomoc naukową i pisarską. Praca ta została wsparta nagrodami dla Pravina T. P. Kaumaya z National Institutes of Health (R21 CA13508 i R01 CA84356) oraz Imugene Ltd z Sydney w Australii (OSU 900600, GR110567 i GR124326).

Flow Analysis of PDL1-Vaxx Antibody Blockade Using Magnetic Fluorescent Beads

<ol><li>Kaumaya, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B-cell+epitope+peptide+cancer+vaccines%3A+a+new+paradigm+for+combination+immunotherapies+with+novel+checkpoint+peptide+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">B-cell epitope peptide cancer vaccines: a new paradigm for combination immunotherapies with novel checkpoint peptide vaccine.</a> Future Oncology. 16 (23), 1767-1791 (2020).</li>
<li>Pandey, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revolutionization+in+cancer+therapeutics+via+targeting+major+immune+checkpoints+PD-1%2C+PD-L1+and+CTLA-4%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Revolutionization in cancer therapeutics via targeting major immune checkpoints PD-1, PD-L1 and CTLA-4.</a> Pharmaceuticals. 15 (3), 335(2022).</li>
<li>Guo, L., Overholser, J., Good, A. J., Ede, N. J., Kaumaya, P. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+studies+of+a+novel+human+PD-1+B-cell+peptide+cancer+vaccine+PD1-Vaxx+from+BALB%2Fc+mice+to+beagle+dogs+and+to+non-human+primates+%28cynomolgus+monkeys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Preclinical studies of a novel human PD-1 B-cell peptide cancer vaccine PD1-Vaxx from BALB/c mice to beagle dogs and to non-human primates (cynomolgus monkeys).</a> Frontiers in Oncology. 12, 826566(2022).</li>
<li>Brahmer, J. R., Hammers, H., Lipson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab%3A+Targeting+PD-1+to+bolster+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">Nivolumab: Targeting PD-1 to bolster antitumor immunity.</a> Future Oncology. 11 (9), 1307-1326 (2015).</li>
<li>Shah, N. J., Kelly, W. J., Liu, S. V., Choquette, K., Spira, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Product+review+on+the+Anti-PD-L1+antibody+atezolizumab%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Product review on the Anti-PD-L1 antibody atezolizumab.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 14 (2), 269-276 (2018).</li>
<li>Postow, M. A., Sidlow, R., Hellmann, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-related+adverse+events+associated+with+immune+checkpoint+blockade%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune-related adverse events associated with immune checkpoint blockade.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (2), 158-168 (2018).</li>
<li>Kaumaya, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+paradigm+shift%3A+Cancer+therapy+with+peptide-based+B-cell+epitopes+and+peptide+immunotherapeutics+targeting+multiple+solid+tumor+types%3A+Emerging+concepts+and+validation+of+combination+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">A paradigm shift: Cancer therapy with peptide-based B-cell epitopes and peptide immunotherapeutics targeting multiple solid tumor types: Emerging concepts and validation of combination immunotherapy.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 11 (6), 1368-1386 (2015).</li>
<li>Guo, L., Kaumaya, P. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+prototype+checkpoint+inhibitor+B-cell+epitope+vaccine+%28PD1-Vaxx%29+en+route+to+human+Phase+1+clinical+trial+in+Australia+and+USA%3A+Exploiting+future+novel+synergistic+vaccine+combinations%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">First prototype checkpoint inhibitor B-cell epitope vaccine (PD1-Vaxx) en route to human Phase 1 clinical trial in Australia and USA: Exploiting future novel synergistic vaccine combinations.</a> British Journal of Cancer. 125 (2), 152-154 (2021).</li>
<li>Dakappagari, N. K., Douglas, D. B., Triozzi, P. L., Stevens, V. C., Kaumaya, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+mammary+tumors+with+a+chimeric+HER-2+B-cell+epitope+peptide+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prevention of mammary tumors with a chimeric HER-2 B-cell epitope peptide vaccine.</a> Cancer Research. 60 (14), 3782-3789 (2000).</li>
<li>Dakappagari, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+HER-2%2Fneu+B-cell+epitope+peptide+vaccine+designed+to+incorporate+two+native+disulfide+bonds+enhances+tumor+cell+binding+and+antitumor+activities%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Conformational HER-2/neu B-cell epitope peptide vaccine designed to incorporate two native disulfide bonds enhances tumor cell binding and antitumor activities.</a> The Journal of Biological Chemistry. 280 (1), 54-63 (2005).</li>
<li>Kaumaya, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+active+immunotherapy+with+combination+of+two+chimeric%2C+human+epidermal+growth+factor+receptor+2%2C+B-cell+epitopes+fused+to+a+promiscuous+Tcell+epitope+in+patients+with+metastatic+and%2For+recurrent+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Phase I active immunotherapy with combination of two chimeric, human epidermal growth factor receptor 2, B-cell epitopes fused to a promiscuous Tcell epitope in patients with metastatic and/or recurrent solid tumors.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (31), 5270-5277 (2009).</li>
<li>Bekaii-Saab, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+immunotherapy+trial+with+two+chimeric+HER-2+B-cell+peptide+vaccines+emulsified+in+montanide+ISA+720VG+and+Nor-MDP+adjuvant+in+patients+with+advanced+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Phase I immunotherapy trial with two chimeric HER-2 B-cell peptide vaccines emulsified in montanide ISA 720VG and Nor-MDP adjuvant in patients with advanced solid tumors.</a> Clinical Cancer Research. 25 (12), 3495-3507 (2019).</li>
<li>Kaumaya, P. T. P., Guo, L., Overholser, J., Penichet, M. L., Bekaii-Saab, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+and+antitumor+efficacy+of+a+novel+human+PD-1+B-cell+vaccine+%28PD1-Vaxx%29+and+combination+immunotherapy+with+dual+trastuzumab%2Fpertuzumab-like+HER-2+B-cell+epitope+vaccines+%28B-Vaxx%29+in+a+syngeneic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity and antitumor efficacy of a novel human PD-1 B-cell vaccine (PD1-Vaxx) and combination immunotherapy with dual trastuzumab/pertuzumab-like HER-2 B-cell epitope vaccines (B-Vaxx) in a syngeneic mouse model.</a> Oncoimmunology. 9 (1), 1818437(2020).</li>
<li>Guo, L., Overholser, J., Darby, H., Ede, N. J., Kaumaya, P. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+newly+discovered+PD-L1+B_cell+epitope+peptide+vaccine+%28PDL1-Vaxx%29+exhibits+potent+immune+responses+and+effective+anti-tumor+immunity+in+multiple+syngeneic+mice+models+and+%28synergizes%29+in+combination+with+a+dual+HER-2+B-cell+vaccine+%28B-Vaxx%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">A newly discovered PD-L1 B_cell epitope peptide vaccine (PDL1-Vaxx) exhibits potent immune responses and effective anti-tumor immunity in multiple syngeneic mice models and (synergizes) in combination with a dual HER-2 B-cell vaccine (B-Vaxx).</a> Oncoimmunology. 11 (1), 2127691(2022).</li>
<li>Angeloni, S., Das, S., De Jager, W., Dunbar, S. Luminex Corporation. The xMAP® Cookbook, 5th edition. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://info.luminexcorp.com/en-us/research/download-the-xmap-cookbook?utm_referrr=https%3A%2F%2Fwww.luminexcorp.com%2F">https://info.luminexcorp.com/en-us/research/download-the-xmap-cookbook?utm_referrr=https%3A%2F%2Fwww.luminexcorp.com%2F</a> (2022).</li>
<li>MagPlex® Microspheres Documentation. Product information sheet. Luminex Corporation. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#overview">https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#overview</a> (2014).</li>
<li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreen%2C+MR+%22Estimation+of+cell+number+by+hemocytometry+counting%22">Estimation of cell number by hemocytometry counting</a>. 2019 (11), Cold Spring Harbor Protocols. (2019).</li>
<li>Gibbs, J., Vessels, M., Rothenberg, M. Selecting the Detection System - Colorimetric, Fluorescent, Luminescent Methods for ELISA Assays. Corning Inc. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.corning.com/catalog/cls/documents/application-notes/CLS-DD-AN-458.pdf">https://www.corning.com/catalog/cls/documents/application-notes/CLS-DD-AN-458.pdf</a> (2019).</li>
</ol>

Pravin T.P. Kaumaya jest konsultantem Imugene, Ltd.

Celem immunoterapii nowotworów związanych z punktami kontrolnymi jest zakłócenie interakcji między białkami punktów kontrolnych a ich ważnymi ligandami w przeżywalności i progresji guza2. Ta grupa badawcza aktywnie opracowuje nowe szczepionki PD-1 i PD-L1, które wywołują odpowiedź przeciwciał, która jest ukierunkowana i przerywa punkt kontrolny PD-1/PD-L1 3,8,13,14. Wcześniej przeprowadzono dwie wersje testów immunoenzymatycznych (ELISA) w celu oceny wpływu przeciwciał przeciwko peptydowi PDL1 na hamowanie rekombinowanej interakcji PD1 / PD-L114. (1) W pierwszym wariancie rhPD-L1 pokryto płytką do mikromiareczkowania, a następnie płytkę inkubowano z rozcieńczonymi przeciwciałami indukowanymi przez kandydata na szczepionkę anty-PDL1. Hamowanie rekombinowanej interakcji PD-1 / PD-L1 przez przeciwciała oceniono następnie poprzez dodanie biotynylowanego rhPD-1 i ilościowe określenie wiązania z unieruchomionym rhPD-L1 za pomocą koniugatu streptawidyny i peroksydazy chrzanowej i substratu kolorymetrycznego. Zdefiniowaliśmy to jako test blokady bezpośredniej. (2) W drugim wariancie PD-1 pokryto płytką do mikromiareczkowania. Biotynylowany rhPD-L1 był wstępnie inkubowany z każdym z przeciwciał poliklonalnych indukowanych przez kandydata anty-PLD1 w oddzielnych probówkach reakcyjnych. Mieszaniny rhPDL1/anty-PDL1 dodano następnie do studzienek płytkowych zawierających unieruchomiony rhPD-1 i pozostawiono do reakcji. Każdy rhPDL1, który reagował z unieruchomionym rhPD-1 w obecności potencjalnie blokujących przeciwciał indukowanych PDL1-Vaxx, został wykryty z późniejszą inkubacją streptawidyny-HRP i substratu kolorymetrycznego. Zdefiniowaliśmy to jako test blokady odwrotnej.
Odwrotna blokada rekombinowanej interakcji PD-1 / PD-L1 przez przeciwciała anty-peptydowe PDL1 wykazała hamowanie sygnału (tj. blokadę PD-1 / PD-L1) w sposób zależny od stężenia przeciwciał14, podczas gdy podejście do bezpośredniej blokady nie dostarczyło spójnych wyników (nie pokazano). Test podwójnej blokady reporterowej oparty na kulkach został opracowany w celu weryfikacji wyników testu ELISA i zbadania blokady interakcji PD-1 / PD-L1 w fazie płynnej, co eliminuje potencjalne problemy z dostępnością epitopów sterycznych/wiążących związane z unieruchomieniem rekombinowanych białek na dnie studzienek. Analiza mikrosfery była bezpośrednio skorelowana z wynikami blokowania ELISA przy użyciu testu odwrotnej blokady (ryc. 2). Ponadto testy immunologiczne oparte na fluorescencji mogą zapewnić lepszą czułość testu i poszerzony zakres dynamiczny w porównaniu z kolorymetrycznymi testami ELISA18, a ponadto multipleksowany test oparty na kulkach umożliwia jednoczesne wykonywanie dwóch niezależnych testów immunologicznych w ramach jednej reakcji. Sulfo-NHS i EDC stosowane do kowalencyjnego sprzężenia mikrosfer z rhPD-1 mogły prowadzić do różnic w wydajności obserwowanych między testami bezpośredniej blokady i odwróconej blokady oraz obserwowanych różnic w czułości między testami interakcji rekombinowanych PD-1 / PD-L1 na bazie kulek ELISA i Luminex. Uzasadnione są dalsze badania na poziomie chemicznym i molekularnym w celu zbadania możliwych mechanizmów odpowiedzialnych za te różnice.
Zarówno test ELISA14, jak i testy oparte na kulkach wykazują, że przeciwciała anty-PDL1 indukowane przez PDL1-Vaxx mogą hamować tworzenie kompleksu punktów kontrolnych PD1 / PD-L1. PDL1-Vaxx na bazie peptydów skutecznie indukuje przeciwciała anty-PDL1, które mogą blokować interakcję PD-1 / PD-L1. Podejście to może służyć jako nowatorska strategia terapeutyczna w leczeniu raka, co potwierdzają przedkliniczne badania na zwierzętach 3,13,14. Planowane badania kliniczne określą skuteczność PDL1-Vaxx w immunoterapii punktów kontrolnych i kontroli choroby u pacjentów z rakiem.

W komórkach T, B i wewnątrzkomórkowych punktach kontrolnych układu odpornościowego, szlaki sygnałowe regulują aktywność immunologiczną. Niektóre komórki nowotworowe chronią się przed atakiem immunologicznym poprzez stymulację punktów kontrolnych, które hamują funkcje immunologiczne i sprzyjają przeżyciu i proliferacji nowotworu. Immunoterapia onkologiczna poprzez hamowanie punktów kontrolnych wykorzystuje przeciwciała do namierzania i blokowania punktów kontrolnych sygnalizacji, a tym samym przywracania funkcji przeciwnowotworowych układu odpornościowego1,2,3. Wysoce skuteczne terapie przeciwnowotworowe obejmują obecnie przeciwciała monoklonalne niwolumab, który jest ukierunkowany na białko programowanej śmierci 1 (PD-1)4, oraz atezolizumab, który jest ukierunkowany na ligand programowanej śmierci 1 (PD-L1)5. Podejście to wykazało duży sukces kliniczny w leczeniu pacjentów z rakiem. Jednak kliniczna użyteczność obecnych strategii hamowania punktów kontrolnych jest łagodzona przez zdarzenia niepożądane i oporność na leczenie, szczególnie w terapii jednolekowej6. Połączenie immunoterapii i skuteczniejszych strategii terapeutycznych o niższej toksyczności jest pilnie potrzebne w leczeniu raka1,3,6.
W ciągu ostatnich 30 lat, laboratorium dr Kaumaya opracowało peptydowe szczepionki przeciwnowotworowe i środki naśladujące peptydy do terapii raka, z których niektóre są w trakcie trwających badań klinicznych1,2,7,8,9,10,11,12,13,14. Na przykład B-Vaxx z immunoterapią skojarzoną HER-2 wykazał korzyści dla pacjentów w walce z przerzutowymi i/lub nawracającymi guzami litymi w badaniach klinicznych12. Najnowsze szczepionki przeciwnowotworowe laboratorium to PD1-Vaxx2,13 i PDL1-Vaxx14, które wykazały ogromne zalety w badaniach przedklinicznych, zwłaszcza w leczeniu skojarzonym. PD1-Vaxx zakończył badania kliniczne z eskalacją dawki w USA i Australii. PD1-Vaxx zostanie połączony z atezolizumabem w badaniu fazy 1b, które rozpocznie się w maju 2023 r. Niniejszy raport koncentruje się na ocenie zdolności przeciwciał indukowanych przez PDL1-Vaxx do blokowania interakcji PD-1/PD-L1.
Szczepionka przeciwnowotworowa PDL1-Vaxx to nowa szczepionka epitopowa peptydów z komórek B z aminokwasami PD-L1 130-147 połączoną z peptydem fuzji wirusa odry (MVF) za pomocą łącznika peptydów GPSL. Badania przedkliniczne wykazały, że PDL1-Vaxx jest wysoce immunogenny w stymulowaniu produkcji przeciwciał przeciwnowotworowych w różnych modelach zwierzęcych, przedłuża przeżycie i zmniejsza obciążenie nowotworem14. Te przeciwciała wytworzone przeciwko peptydowi PD-L1 mogą skutecznie blokować interakcję PD1/PD-L1, powodując w ten sposób aktywność przeciwnowotworową. W niniejszym raporcie przedstawiono test, który analizuje blokadę tworzenia kompleksu PD1 / PD-L1 przez przeciwciała indukowane PDL1-Vaxx przy użyciu formatu opartego na kulkach magnetycznych z podwójnym odczytem reporterowym na przyrządzie do cytometrii przepływowej.

<table><tbody><tr><td>Bufor aktywacyjny buffers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>: 0,1 M NaH2PO4, pH 6,2</td><td>milipore/Sigma</td><td>S3139</td><td></td></tr> Test <tr><td>testowy/bufor myjący: PBS-TBN (1x PBS, pH 7,4 + 0,1% BSA + 0,05% (v/v) Tween-20; 0,05% NaN3)</td><td>Millipore/Sigma</td><td>P3563 (PBS+Tween20), A7888 (albumina surowicy bydlęcej), S8032 (azydek sodu)</td><td></td></tr><tr><td>Bufor sprzęgający: 50 mM kwas 2-morfolinoetanosulfonowy (MES), pH 5,0</td><td>MiliporeSigma&nbsp;</td><td>M2933</td><td></td></tr><tr><td>Coupling Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-etylo-3-[3-dimetyloaminopropylo]karbodimidowy chlorowodorek (EDC)</td><td>ThermoFisher Scientific (Waltham, MA)</td><td>77149</td><td></td></tr><tr><td>xMAP Zestaw sprzęgający przeciwciała (w razie potrzeby), zawiera:</td><td>Luminex Corp.&nbsp; (Austin, Teksas)</td><td>40-50016</td><td></td></tr><tr><td>EDC, 10 mg&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>rozwiązanie sNHS, 250 i mikro; L</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bufor aktywacyjny/sprzęgający: 0,1 M Kwas 2-morfolinoetanosulfonowy (MES), pH 6,0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bufor do płukania: 1x PBS, pH 7,4 + 0,1% BSA + 0,05% (v/v) Tween-20; 0,05% NaN3 (PBS-TBN)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-NHS (N-hydroksysulfosukcynimid)</td><td>ThermoFisher Scientific (Waltham, MA)</td><td>24510</td><td></td></tr><tr><td>Instrumentation and Ancillary Lab Supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>xMAP INTELLIFLEX (instrument z podwójnym reporterem)</td><td>Luminex Corp.&nbsp; (Austin, Teksas)</td><td>INTELLIFLEX-DRSE-RUO</td><td></td></tr><tr><td>Okrągłodenna 96-dołkowa płytka o niskim poziomie wiązania białek</td><td>ThermoFisher Scientific (Waltham, MA)</td><td>07-200-761</td><td></td></tr><tr><td>Magnetyczny separator płytkowy Luminex (lub porównywalny)&nbsp;</td><td>Luminex Corp.&nbsp; (Austin, Teksas)</td><td>CN-0269-01</td><td></td></tr><tr><td>Magnetyczny separator rurowy Luminex (lub porównywalny)</td><td>Luminex Corp.&nbsp; (Austin, Teksas)</td><td>CN-0288-01</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosfery MagPlex (magnetyczne, fluorescencyjne, 6,5- i mikro; Koraliki o średnicy m)</td><td>Luminex Corp.&nbsp; (Austin, Teksas)</td><td>MC-1**** (różni się w zależności od etykiety kulki)</td><td></td></tr><tr><td>Probówki do mikrowirówek białkowych LoBind</td><td>ThermoFisher Scientific (Waltham, MA)</td><td>022431081</td><td></td></tr><tr><td>peptydy, przeciwciała i Odczynniki do wykrywania</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atezolizumab (humanizowane przeciwciało monoklonalne anty-PDL1 IgG1), kontrola pozytywna</td><td>Genentech/Roche (San Francisco, CA)</td><td>n/a (leki na receptę)</td><td></td></tr><tr><td>Biotynylowany rekombinowany ludzki PDL1&nbsp;</td><td>Sino Biological (Wayne, PA)</td><td>10084-H49H-B</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421-kongugowany osioł anty-ludzki IgG</td><td>Jackson Immunoresearch Laboratories Inc. (Westgrove, PA)</td><td>709-675-149</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421-kongugowany osioł anty-królik IgG</td><td>Jackson Immunoresearch Laboratories Inc. (Westgrove, PA)</td><td>711-675-152</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinowany ludzki PD-1 (oznaczony polihistydyną)</td><td>Acro Biosystems (Newark, Niemcy)</td><td>PD1-H5256&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>R-fikoerytryna sprzężona ze streptawidyną (SAPE)</td><td>Agilent (Santa Clara, CA)</td><td>PJRS34-1</td><td></td></tr><tr><td>Trastuzumab (Herceptin, humanizowane przeciwciało monoklonalne anty-HER2), kontrola negatywna</td><td>Genentech/Roche (San Francisco, CA)</td><td>n/a (leki na receptę)</td><td></td></tr></tbody></table>

magnetyczna analiza przepływu podwójnego reportera oparta na kulkach magnetycznych blokady przeciwciał wywołanych szczepionką peptydu pdl1-vaxx w interakcji pd-1/pd-l1

Magnetic Fluorescent Bead-Based Dual-Reporter Flow Analysis of PDL1-Vaxx Peptide Vaccine-Induced Antibody Blockade of the PD-1/PD-L1 Interaction

Hamowanie receptorów punktów kontrolnych (PD-1, PD-L1 i CTLA-4) za pomocą przeciwciał monoklonalnych wykazało ogromne korzyści w badaniach klinicznych w leczeniu pacjentów z rakiem i stało się podstawowym podejściem w nowoczesnej immunoterapii nowotworów. Jednak tylko podgrupa pacjentów reaguje na immunoterapię przeciwciałami monoklonalnymi w punkcie kontrolnym. Dlatego pilne jest opracowanie nowych strategii terapeutycznych przeciwko nowotworom. Opracowano nową szczepionkę przeciwnowotworową PDL1 (ligand programowanej śmierci 1) z peptydów peptydowych komórek B, zawierającą aminokwasy 130-147 połączone z peptydem MVF ("rozwiązłym" białkiem fuzyjnym wirusa odry z komórek T) za pomocą łącznika GPSL. Badania przedkliniczne wykazały, że ta szczepionka PDL1 (PDL1-Vaxx) skutecznie stymuluje wysoce immunogenne przeciwciała u zwierząt. Zwierzęta zaszczepione PDL1-Vaxx wykazują zmniejszone obciążenie guzem i wydłużone wskaźniki przeżycia w różnych modelach raka zwierzęcego. Mechanizmy działania wskazują, że przeciwciała wywołane szczepionką hamują proliferację komórek nowotworowych, indukują apoptozę i blokują interakcję PD-1/PD-L1. W tym manuskrypcie przedstawiono test oparty na kulkach magnetycznych, który wykorzystuje system analizy przepływu z podwójnym reporterem do oceny interakcji PD-1 / PD-L1 i jej blokady przez przeciwciała anty-PDL1 podniesione przeciwko PDL1-Vaxx.

Test ten pozwolił na precyzyjne określenie stopnia hamowania oddziaływania PD-1/PD-L1 przez cztery unikalne przeciwciała poliklonalne, wygenerowane przeciwko peptydom szczepionkowym rhPD-L1, które są badane jako potencjalne środki terapeutyczne w leczeniu nowotworów. Schemat tego testu przedstawiono na Rysunku 1. Ilość biotynylidowanego rhPD-L1, który związał się z kuleczkami sprzężonymi z rhPD-1, oraz hamowanie tego wiązania przez cztery kandydackie przeciwciała indukowane przez PLD1-Vaxx, zmierzono w Kanale Reporterowym 1 przy użyciu odczynnika detekcyjnego streptawidyna-PE, który bezpośrednio wiązał rhPD-L1 (Rysunek 2).
Wszystkie cztery poliklonalne przeciwciała anty-PDL1-peptydowe zablokowały interakcję rhPD-L1 z PD-1 unieruchomionym na mikrokulkach w różnym stopniu. Procent hamowania przez poszczególne przeciwciała anty-PDL1 peptydowe wynosił od 48% do 74% przy maksymalnym przebadanym stężeniu 1 000 µg/mL. Pozytywne kontrolne przeciwciało monoklonalne atezolizumab osiągnęło 92% blokady interakcji PD-1/PD-L1 przy maksymalnym przebadanym stężeniu14 4 µg/mL (Rysunek 2). Wszystkie eksperymentalne przeciwciała PDL1-Vaxx wykazały zależne od stężenia hamowanie wiązania rhPD-L1 z kulkami sprzężonymi z rhPD-1 w porównaniu z trastuzumabem, przeciwciałem kontrolnym negatywnym, którego nie oczekiwano, że będzie wchodzić w interakcje z systemem PD-1/PD-L1.
<img alt="Wykres hamowania PD-1/PD-L1, stężenie przeciwciał względem hamowania, analiza danych dotyczących skuteczności przeciwciał." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65467/65467fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figure 2"> 
Rysunek 2: Blokowanie interakcji rhPD-L1 z rhPD-1 sprzężonym z kulkami magnetycznymi przez przeciwciała przeciwko peptydowi PDL1, wykazane za pomocą nowego immunoanalizy opartej na fluorescencyjnych kulkach. Rekombinowane ludzkie PD-1 sprzężono z mikrosferami magnetycznymi, a następnie kulki inkubowano z biotinylowanym rhPD-L1, który został wcześniej inkubowany z różnymi przeciwciałami przeciwko peptydowi PDL1. Do związania biotyny i tym samym oceny względnej ilości rhPD-L1 dostępnego do związania z PD-1 użyto odczynnika detekcyjnego streptawidyna-fikoerytryna. Przeciwciała poliklonalne otrzymane u królików przeciwko peptydowym szczepionkom PDL1 (anti-PDL1[36], anti-PDL1[50], anti-PDL1[95] i anti-PDL1[130]) przebadano pod kątem aktywności hamującej, co wykazało blokowanie interakcji rekombinowanych PD-1/PD-L1 na poziomie 48%-74% przy najwyższym badanym stężeniu. Atezolizumab (inny monoklonalny przeciwciało anty-PDL1) posłużył jako kontrola pozytywna. Niezwiązane komercyjne przeciwciało monoklonalne trastuzumab (anty-HER2) posłużyło jako kontrola negatywna. Rysunek został zaadaptowany z pracy Guo i wsp.14. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65467/65467fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Wykres wiązania przeciwciała anty-PDL1 w funkcji stężenia, przedstawiający odpowiedź MFI w porównaniu z kontrolą." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65467/65467fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Porównanie wiązania różnych przeciwciał indukowanych przez PDL1-Vaxx do kompleksu rhPD-L1 z kuleczkami magnetycznymi powlekanymi rhPD1. Do porównania wiązania różnych króliczych poliklonalnych przeciwciał anty-peptyd PDL1 do rhPD-L1 poprzez kuleczki powlekane rhPD-1 użyto wtórnego przeciwciała detekcyjnego sprzężonego z Brilliant Violet 421. Sygnał niebieskiej fluorescencji BV421 zarejestrowano w kanale raportującym 2 urządzenia z podwójnym raportowaniem; sygnał ten koreluje z względną wydajnością wiązania eksperymentalnych przeciwciał anty-peptyd PDL1. Jako kontrolę negatywną zastosowano trastuzumab (anty-HER2), przeciwciało monoklonalne celujące w inny punkt kontrolny niż PD-1/PD-L1. MFI oznacza średnią medianową intensywność fluorescencji kuleczek, którą mierzono w dwóch powtórzeniach w studzienkach reakcyjnych dla każdego wariantu. Rysunek został zaadaptowany z pracy Guo i wsp.14. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65467/65467fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
Względne zdolności czterech eksperymentalnych kandydatów na przeciwciała indukowane przez PDL1-Vaxx do wiązania rhPD-L1 porównano przy użyciu oddzielnego systemu detekcji (anty-IgG królicze sprzężone z BV421), który oceniano na drugim kanale reporterowym instrumentu. Wyniki te wykazały, że wszystkie cztery poliklonalne przeciwciała anty-peptyd PDL1 wiązały rhPD-L1 w sposób zależny od stężenia14 (Rysunek 3). Przeciwciało anty-PDL1(130) wykazało najwyższy sygnał wiązania rhPDL1 spośród czterech kandydatów na przeciwciała indukowane przez PDL1-Vaxx.

Inhibitory punktów kontrolnych są ważnymi celami w opracowywaniu terapii do walki z rakiem. Raport ten przedstawia nową szczepionkę przeciwnowotworową opartą na peptydzie PDL1, PDL1-Vaxx, która indukuje neutralizującą produkcję przeciwciał poliklonalnych, które blokują tworzenie kompleksu PD-1 / PDL1. Praca ta szczegółowo opisuje również rozwój i testowanie testu opartego na koralikach fluorescencyjnych do analizy tej aktywności.

Magnetyczna analiza przepływu podwójnego reportera oparta na kulkach magnetycznych blokady przeciwciał wywołanych szczepionką peptydu PDL1-Vaxx w interakcji PD-1/PD-L1

The inhibition of checkpoint receptors (PD-1, PD-L1, and CTLA-4) with monoclonal antibodies has shown great benefit in clinical trials for treating cancer ...

Nasz projekt kierowany przez profesora Pravina Kaumaya koncentruje się na opracowaniu szczepionek heptapeptydowych z komórek B, które mogą być stosowane w celu wzmocnienia układu odpornościowego w celu lepszej walki z rakiem. Uważamy, że szczepionki peptydowe ukierunkowane na immunologiczne punkty kontrolne mogą być nawet łączone z innymi terapiami w celu poprawy wyników leczenia pacjentów. Chcieliśmy przetestować zdolność blokowania naszych przeciwciał anty PD-L1 w tradycyjnym teście mikrokulek, w którym ludzkie rekombinowane białko PD-L1 było związane z kulkami MagPlex.Odkryliśmy, że po związaniu PD-L1 z kulkami, miały one niską zdolność wiązania liganda PD-1. Uniemożliwiło nam to skorzystanie z tej drogi blokowania testów. Gdy wiązanie białka z kulkami hamuje wiązanie z ligandem lub przeciwciałami, możliwe jest wstępne traktowanie testowymi przeciwciałami w roztworze, a następnie dodanie kulek pokrytych ligandem do docelowej mieszaniny blokerów.Ich wzajemne oddziaływanie może być badane. Może to być inna ścieżka do badania tej samej interakcji wiązania cel-ligand. Opracowaliśmy szczepionki przeciwnowotworowe B-Vaxx, PD1-Vaxx, PDL1-Vaxx i CTLA4-Vaxx.Szczepionki te są ukierunkowane na HER2, a kilka markerów immunologicznych punktów kontrolnych jest zaangażowanych w różne formy raka. B-Vaxx i PD1-Vaxx są w trakcie trwających badań klinicznych w Australii i USA. Mamy nadzieję, że nasze szczepionki przeciwko punktom kontrolnym układu odpornościowego przyniosą korzyści większej liczbie pacjentów. W poprzednich eksperymentach mikrosferycznych odkryliśmy, że PD-1 dobrze oddziaływał ze swoim ligandem PD-L1.Dlatego przeprojektowaliśmy protokół, wstępnie wiążąc przeciwciała peptydowe anty PD-L1 z biotynylowanym białkiem PD-L1 przed dodaniem kulek MagPlex oznaczonych PD-1. Pozwoliło nam to przetestować nasze przeciwciała pod kątem ich zdolności do blokowania interakcji PD-1-PD-L1. Będziemy nadal koncentrować się na immunoterapiach skojarzonych.Pokonajmy oporność na leczenie. Chcemy również zbadać skuteczniejsze terapie skojarzone, które lepiej hamują wzrost guza, zapobiegają przerzutom i przedłużają przeżywalność pacjentów. Zacznij od przygotowania roztworów podstawowych wszystkich przeciwciał w dawce 2 000 mikrogramów na mililitr.Następnie, dla każdego przeciwciała, oznaczyć probówki z rozcieńczalnikiem ich odpowiednimi stężeniami, w tym nazwą przeciwciała. Należy również dołączyć ślepą probówkę dla każdego przeciwciała jako kontrolę tylko dla nośnika PBS-TBN. Następnie dodaj 75 mikrolitrów PBS-TBN do wszystkich probówek do rozcieńczania przeciwciał oznaczonych jako 500 mikrogramów na mililitr i mniej, w tym do probówek kontrolnych tylko dla nośnika.Dla każdego przeciwciała należy odpipetować 150 mikrolitrów roztworu podstawowego do probówki oznaczonej jako 1 000 mikrogramów na mililitr. Aby utworzyć pełną serię rozcieńczeń dla każdego przeciwciała, należy przenieść 75 mikrolitrów z probówki o objętości 1 000 mikrogramów na mililitr do kolejnego niższego rozcieńczenia w serii. Następnie zamknąć nowo ukończoną probówkę rozcieńczającą i na krótko ją przemieszać.Następnie dodaj 25 mikrolitrów rozcieńczonych przeciwciał do wyznaczonych dołków 96-dołkowej płytki mikromiareczkowej, a następnie dodaj 25 mikrolitrów biotynylowanego rekombinowanego ludzkiego PD-L1 do każdej studzienki reakcyjnej. Przykryć płytkę do mikromiareczkowania folią lub plastikową uszczelką samoprzylepną i inkubować w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę, wytrząsając na wytrząsarce orbitalnej z prędkością 600 obr./min. Następnie rozcieńczyć rekombinowane ludzkie kulki sprzężone PD-1 do stężenia 50 000 kulek na mililitr za pomocą PBS-TBN.Wyjąć 96-dołkową płytkę reakcyjną mikromiareczkowania z wytrząsarki i zdjąć uszczelkę płytki samoprzylepnej. Dodaj 50 mikrolitrów rekombinowanej ludzkiej mieszaniny sprzężonych kulek PD-1 do każdej studzienki. Szczelnie zamknąć płytkę i inkubować przez godzinę w ciemności w temperaturze pokojowej na wytrząsarce orbitalnej ustawionej na 600 obr./min.Po inkubacji ostrożnie usunąć uszczelkę z płytki samoprzylepnej. Następnie umieść płytkę na magnetycznym separatorze płytkowym na dwie minuty, aby unieruchomić koraliki. Upewnij się, że magnes i płytka do mikromiareczkowania są dobrze połączone.Odwrócić płytkę i ostrożnie wyrzucić supernatant. Aby zmyć nadmiar odczynników reakcyjnych z kulek, wyjmij płytkę mikromiareczkowania z magnetycznego separatora płytkowego i dodaj 150 mikrolitrów PBS-TBN do każdej studzienki. Po usunięciu uszczelniacza i unieruchomieniu kulek, jak pokazano, upewnić się, że magnes i płytka mikromiareczkowania są zabezpieczone i wylać supernatant.Teraz dodaj 100 mikrolitrów roztworu roboczego SAPE do każdej studzienki reakcyjnej i ponownie zawieś kulki przez pipetowanie. Uszczelnij płytkę i inkubuj ją przez godzinę w temperaturze pokojowej w ciemności, a następnie ostrożnie usuń samoprzylepny uszczelniacz do płytek. Po unieruchomieniu kulek oraz zabezpieczeniu magnesu i płytki należy delikatnie zrzucić supernatant, odwracając płytkę.Aby zmyć nadmiar SAPE z kulek, wyjmij płytkę do mikromiareczkowania z uchwytu płytki magnetycznej i dodaj 150 mikrolitrów PBS-TBN do każdej studzienki w celu ponownego zawieszenia kulek. Następnie unieruchamiaj kulki, umieszczając płytkę mikromiareczkowania na magnetycznym separatorze płytkowym na dwie minuty. Po upewnieniu się, że magnes i płytka mikromiareczkowania są zabezpieczone, odwróć płytkę i usuń supernatant.Następnie dodaj 100 mikrolitrów rozcieńczonej fioletu brylantowego 421 sprzężonej anty-ludzkiej lub anty-króliczej immunoglobuliny G do odpowiednich studzienek. Zamknąć płytkę i inkubować przez godzinę w ciemności w temperaturze pokojowej. Następnie unieruchamić koraliki i usunąć samoprzylepny uszczelniacz do płytek.Upewnij się, że magnes i płytka do mikromiareczkowania są zabezpieczone i zrzuć supernatant. Umyj nadmiar przeciwciał wtórnych z kulek, dodając 150 mikrolitrów PBS-TBN do każdej studzienki w celu ponownego zawieszenia kulek. Następnie umieść płytkę do mikromiareczkowania na magnetycznym separatorze płytkowym na dwie minuty, aby unieruchomić kulki.Upewnij się, że magnes i płytka mikromiareczkowania są bezpiecznie połączone, a następnie odwróć płytkę i zrzuć supernatant. Po usunięciu czwartego i ostatniego buforu do płukania wyjmij płytkę do mikromiareczkowania z magnetycznego separatora płytkowego. Za pomocą pipety ponownie zawiesić kulki w 100 mikrolitrach PBS-TBN na studzienkę.Na koniec, aby określić medianę intensywności fluorescencji każdej reakcji, odczytaj tabliczkę w systemie analizy przepływu z podwójnym reporterem z objętością aspiracji ustawioną na 50 mikrolitrów, minimalną liczbą kulek do 100 kulek, ustawieniem limitu czasu na 40 sekund, zakresem bramkowania na 7 000 do 17 000 i trybem pracy na podwójnym reporterze. Wszystkie cztery poliklonalne przeciwciała peptydowe anty-PD-L1 blokowały rekombinowaną ludzką interakcję PD-L1 z PD-1. Procent inhibicji różnych przeciwciał peptydowych anty PD-L1 wahał się od 48% do 74% przy maksymalnym badanym stężeniu 1000 mikrogramów na mililitr.Przeciwciało monoklonalne kontroli pozytywnej atezolizumab osiągnęło 92% blokadę interakcji PD-1-PD-L1 przy maksymalnym badanym stężeniu czterech mikrogramów na mililitr. Analiza porównawcza wiązania indukowanych PDL1-Vaxx przeciwciał kandydujących do rekombinowanego ludzkiego PD-L1 wykazała, że wszystkie cztery poliklonalne przeciwciała peptydowe anty PD-L1 wiążą się z rekombinowanym ludzkim PD-L1 w sposób zależny od stężenia. Przeciwciało anty-PDL1 (130) wykazało najwyższy sygnał wiązania RH PD-L1 spośród czterech kandydatów na przeciwciała indukowane PDL1-Vaxx.

magnetic-fluorescent-bead-based-dual-reporter-flow-analysis-pdl1-vaxx

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

W tym filmie demonstrujemy technikę przeprowadzania ko-immunoprecypitacji oznaczonych przez GFP dzikich i zmutowanych białek PD-1 za pomocą koralików pokrytych przeciwciałami anty-GFP. Białka PD-1-GFP związane z kulkami są inkubowane z białkami SHP2, które oddziałują z PD-1, umożliwiając identyfikację określonych motywów strukturalnych w PD-1, które odgrywają kluczową rolę w interakcji SHP2.

Test immunoprecypitacyjny do badania interakcji receptorów enzymatycznych w transfekowanych komórkach

Analiza cytometryczna cytometrii dwucząsteczkowej komplementacji fluorescencji dostarcza wysokoprzepustową metodę ilościową do badania interakcji białko-białko. Metodologia ta może być stosowana do mapowania miejsc wiązania białek oraz do badań przesiewowych czynników regulujących interakcję białko-białko.

Analiza cytometryczna cytometrii dwucząsteczkowej komplementacji fluorescencji: wysokoprzepustowa metoda ilościowa do badania interakcji białko-białko

Opisujemy obrazowanie całego zwierzęcia i techniki oparte na cytometrii przepływowej do monitorowania ekspansji limfocytów T CD8+ specyficznych dla antygenu w odpowiedzi na immunizację nanocząstkami w mysim modelu szczepienia.

Obrazowanie całych zwierząt i techniki cytometrii przepływowej do analizy odpowiedzi limfocytów T CD8 + specyficznych dla antygenu po szczepieniu nanocząstkami

Tutaj prezentujemy protokół koimmunoprecypitacji i test aktywności enzymatycznej na koraliku, aby jednocześnie badać udział specyficznych domen białkowych receptorów błony komórkowej zarówno w rekrutacji enzymów, jak i ich aktywności.

Test koimmunoprecypitacji do badania funkcjonalnych interakcji między receptorami i enzymami

Opracowaliśmy prosty test cytometrii przepływowej do oceny wiązania przeciwciał blokujących PD-1 z limfocytami T, wymagający jedynie kropli krwi obwodowej od pacjentów z rakiem.

Monitorowanie przeciwciał blokujących PD-1 związanych z limfocytami T pochodzącymi z kropli krwi obwodowej

System analizy przepływu dla testów multipleksowych opartych na koralikach, który zapewnia odczyt z dwoma reporterami, został wykorzystany do opracowania multipleksowych testów serologicznych i neutralizacji przeciwciał, które mogą jednocześnie mierzyć neutralizujące przeciwciała IgG i IgM dla SARS-CoV-2.

Szybki, multipleksowy test neutralizacji IgG i IgM SARS-CoV-2 z podwójnym reporterem dla multipleksowanego systemu analizy przepływu opartego na kulkach

Ten protokół opisuje test blokady dla inhibitorów PD-1/PD-L1 przy użyciu technologii powierzchniowego rezonansu plazmonowego. Wykorzystuje dwuetapową strategię unieruchomienia i dostosowany system buforowy do dokładnego pomiaru jednostek reakcji, ułatwiając ocenę wskaźników blokady dla związków lub leków biologicznych. Dodatkowo wspomaga wysokoprzepustową identyfikację inhibitorów PD-1/PD-L1.

Identyfikacja inhibitorów PD-1/PD-L1 za pomocą technologii powierzchniowego rezonansu plazmonowego

Selektywnie znakowane fluorescencyjne pochodne GnRH-I, -II i -III są niezawodnymi narzędziami do śledzenia i ilościowego określania ich absorpcji komórkowej. Niniejszy manuskrypt przedstawia eksperymenty mające na celu wizualizację, ilościowe określenie i porównanie efektywności wychwytu tych koniugatów GnRH w różnych liniach komórkowych.

In vitro Obrazowanie i kwantyfikacja skuteczności celowania w lek znakowanych fluorescencyjnie analogów GnRH

Rezonans paramagnetyczny elektronów o niskim polu (pasmo L, 1,2 GHz) przy użyciu rozpuszczalnych sond nitroksylowych i trytylowych jest demonstrowany do oceny fizjologicznie ważnych parametrów w mikrośrodowisku guza w mysich modelach raka piersi.

In vivo (in vivo) Ocena EPR pH, pO2, stanu redoks oraz stężeń fosforanów i glutationu w mikrośrodowisku guza

Uzyskanie wysokiej jakości genomowego DNA z tkanek nowotworowych jest niezbędnym pierwszym krokiem do analizy zmian genetycznych za pomocą sekwencjonowania nowej generacji. W tym artykule przedstawiamy prostą i szybką metodę wzbogacania komórek nowotworowych i uzyskiwania nienaruszonego DNA z próbek cytologicznych odcisku dotykowego.

Prosta i szybka metoda uzyskiwania wysokiej jakości DNA guza z próbek kliniczno-patologicznych za pomocą cytologii odcisku dotykowego

Dowiedz się, jak analizować blokowanie interakcji PD-1/PD-L1 za pomocą magnetycznej analizy przepływu z fluorescencyjnymi kulkami w badaniach szczepionki PDL1-Vaxx. Ta metoda umożliwia ocenę aktywności neutralizujących przeciwciał w immunoterapii nowotworowej.

Magnetyczna analiza przepływu podwójnego reportera oparta na kulkach magnetycznych blokady przeciwciał wywołanych szczepionką peptydu PDL1-Vaxx w interakcji PD-1/PD-L1 (Wideo) | JoVE Journal

Magnetyczna analiza przepływu podwójnego reportera oparta na kulkach magnetycznych blokady przeciwciał wywołanych szczepionką peptydu PDL1-Vaxx w interakcji PD-1/PD-L1

Przeglądaj więcej filmów