Name: Analogowe badanie przesiewowe fentanylu przy użyciu LC-TIMS-TOF MS/MS (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Poznaj metodę różnicowania izomerów analogów fentanylu przy użyciu LC-TIMS-TOF MS/MS. To podejście łączy cztery ortogonalne techniki identyfikacji, poprawiając dokładność analizy w zwalczaniu epidemii opioidowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autor chciałby podziękować za początkowe wsparcie dr Cesara Ramireza podczas początkowego rozwoju metody.

1. Przygotowanie próbki
<ol>
	<li>Po otrzymaniu zestawu do badań przesiewowych analogu fentanylu należy przechowywać w temperaturze -20 °C. Zawiesić każdą próbkę do końcowego stężenia 400 μg/ml przez dodanie 500 μl czystego metanolu klasy LC/MS.</li>
	<li>Mieszać za pomocą mieszarki płytkowej lub wirownika z prędkością 400 obr./min przez 1 godzinę lub wirować na średnich obrotach przez 15 min. Po ponownym zawieszeniu przechowywać fiolki w temperaturze -20 °C.</li>
	<li>Rozcieńczyć każdy wzorzec do końcowego stężenia 1 ng/ml przy użyciu czystego metanolu klasy LC/MS.</li>
	<li>Grupuj wzorce w grupy, tak aby każda grupa nie zawierała żadnych wzorców izomerycznych. Tabela uzupełniająca 1 zawiera podział 14 grup norm fentanylu.</li>
</ol>
2. Przygotowanie faz ruchomych HPLC
<ol>
	<li>Przygotować ruchomą fazę A (MPA) przy użyciu 5 mM/L mrówczanu amonu (NH4HCO2) wH2Oz 0,05% kwasem mrówkowym (85%).
	<ol>
		<li>Odważyć 0,078 g NH4HCO2, przelać do kolby miarowej o pojemności 250 ml i napełnić wodą do około 2/3rd. Zamieszaj, aby dobrze wymieszać.</li>
		<li>Po całkowitym rozpuszczeniu dodać 0,125 ml kwasu mrówkowego (85%). Napełnij wodą do linii napełniania (250 ml) i wymieszaj.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotować ruchomą fazę B (MPB) przy użyciu 0,05% kwasu mrówkowego w mieszaninie metanolu i acetonitrylu w stosunku 1:1.
	<ol>
		<li>Wlać 125 ml acetonitrylu do kolby miarowej i dodawać metanol, aż dotrze do linii napełniania.</li>
		<li>Zamieszaj, aby dobrze wymieszać. Dodać 0,125 ml 0,05% kwasu mrówkowego do kolby i wymieszać do homogenizacji.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Opracowanie metody HPLC
<ol>
	<li>Otwórz oprogramowanie LC na ekranie głównym. W przykładowej tabeli, znajdującej się na środku okna, utwórz nowy protokół.
	<ol>
		<li>Opisz kolumnę fiolki z lokalizacją próbki. Opisz kolumnę identyfikatora próbki przy użyciu formatu YYYYMMDD_NAME (deskryptor reprezentatywny). Opasić kolumnę objętościową odpowiednią objętością iniekcji (15 μl).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dodaj adnotację do kolumny ścieżki danych z lokalizacją, w której dane zostaną zapisane.</li>
	<li>Dane wejściowe metody HPLC
	<ol>
		<li>Wybierz pozycję Nowy na pasku w przykładowej tabeli znajdującej się na środku ekranu. W obszarze metody separacji wybierz strzałkę listy rozwijanej i kliknij opcję Nowa metoda w wyskakującym okienku.</li>
		<li>Pojawi się nowe okno oznaczone jako metoda separacji, tutaj edytuj czas akwizycji lub metodę systemu struktury kontroli przyrządów (ICF).</li>
		<li>Kliknij dwukrotnie przycisk Edytuj metodę, aby system ICF otworzył wyskakujące okienko do edycji gradientu binarnego, jak pokazano na Rysunek 1.</li>
		<li>Pod zakładką gradientu binarnego wizualna reprezentacja gradientu znajduje się po lewej stronie, a podział gradientu znajduje się po prawej stronie, ustaw znaczniki czasu, natężenie przepływu oraz stężenia MPA i MPB.</li>
		<li>Upewnij się, że czas zatrzymania jest ustawiony na 18 min, natężenie przepływu na 0.400 ml/min, a limit ciśnienia min i max przy 0 psi i 6000 psi.</li>
		<li>Ustaw stężenia znacznika czasu w następujący sposób: 
		Po 0,00 min ustaw stężenie B na 20,0, 
		Po 1,50 min ustaw stężenie B na 25,0,0, 
		Po 3.00 min ustaw stężenie B na 27.0. 
		Po 6.00 min ustaw stężenie B na 27.0. 
		Po 6.50 min ustaw stężenie B na 30.0. 
		O 7.00 min ustaw stężenie B na 95.0. 
		O godz. 16.00 ustaw stężenie B na 95.0. 
		O 16.50 min ustaw stężenie B na 20.0.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Inicjalizacja HPLC
<ol>
	<li>W sekcji kolumny HPLC należy umieścić kolumnę LC (monolityczna kolumna C18 HPLC 100 mm x 4,6 mm) i osłony kolumn (kolumna ochronna 5 mm x 4,6 mm). Zwróć uwagę na minimalne i maksymalne ciśnienie w kolumnie.</li>
	<li>Uruchom próbkę ślepej próby (ten sam roztwór buforowy), aby sprawdzić, czy nie ma wycieków i utworzyć linię bazową. Szukaj wycieków. Nieszczelności można było zaobserwować na podstawie wahań ciśnienia w kolumnie. Jeśli występują nieszczelności, określ, skąd mogą pochodzić, i dokręć połączenia.</li>
	<li>Uruchom próbną ślepą próbę (ten sam roztwór buforowy) przy użyciu żądanego programu LC, aby wstępnie kondycjonować kolumnę.</li>
</ol>
5. Rozwój metody TIMSTOF MS/MS
<ol>
	<li>Otwórz aplikację timsControl. Po lewej stronie okna znajdują się ustawienia MS i TIMS.
	<ol>
		<li>W ustawieniach MS ustaw początek i koniec skanowania odpowiednio na 50 m/z i 1800 m/z. Wybierz tryb dodatni dla polaryzacji jonów i wybierz równoległą akumulację-fragmentację szeregową dla trybu skanowania.</li>
		<li>W ustawieniach TIMS ustaw tryb na niestandardowy, początek 1/K0 na 0,40 Vs/cm2, koniec 1/K0 na 1,85 Vs/cm2, czas narastania ustawiony na 150,0 ms i uśrednianie MS ustawione na 1.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>W dolnym zaznaczeniu kart w obszarze Źródło wykonaj następujące zmiany w dwóch polach ustawień.
	<ol>
		<li>W źródle ustaw przesunięcie płyty końcowej na 500 V, kapilarnę na 4500 V, nebulizator na 3,0 bar, suchy gaz na 10,0 l/min i suchą temperaturę na 200 °C.</li>
		<li>W ustawieniach pompy strzykawkowej upewnij się, że strzykawka ma pojemność Hamiltona 1 ml, jest włączona aktywność, a natężenie przepływu jest ustawione na 80,0 μl/h.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Na karcie Dostrajanie wykonaj następujące zmiany na kartach ustawień Ogólne, Przetwarzanie i TIMS.
	<ol>
		<li>Na karcie ustawień ogólnych skonfiguruj następujące sekcje: transfer, komórka kolizji, kwadrupol, ostrość przed TOF i wykrywanie.
		<ol>
			<li>W ustawieniach transferu ustaw ugięcie 1 delta na 70,0 V, lejek 1 RF na 341,0 Vpp, energię CID na 0,0 eV, lejek 2 RF na 300,0 Vpp, wielobiegunowy RF na 300,0 Vpp.</li>
			<li>W ustawieniach komórki zderzeniowej upewnij się, że energia zderzenia jest ustawiona na 6.0 eV, a RF kolizji na 1200.0 Vpp.</li>
			<li>W ustawieniach kwadrupola upewnij się, że energia jonów jest ustawiona na 6.0 eV, a niska masa na 250.00 m/z.</li>
			<li>W ustawieniach ostrości przed TOF ustaw czas transferu na 75.0 μs i pamięć impulsów wstępnych na 5.0 μs.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Na karcie ustawień przetwarzania skonfiguruj następujące sekcje: wykrywanie pików widm masowych i wykrywanie pików mobilności.
		<ol>
			<li>W ustawieniach pików widm mas odznacz sumę intensywności (obszar) i ustaw próg bezwzględny na 667.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Na karcie TIMS skonfiguruj następujące sekcje: przesunięcia, kontrola zmian jonowych i parametry zaawansowane.
		<ol>
			<li>W ustawieniach offsetów ustaw Δt1 do -20,0 V, Δt2 do -100,0 V, Δt3 do 40,0 V, Δt4 do 80,0 V, Δt5 do 0,0 V, Δt6 do 120,0 i ogniwo zderzeniowe do 250,0 V.</li>
			<li>W ustawieniach kontroli ładunków jonowych kliknij pole, aby włączyć i ustawić docelową intensywność na 5.00 M.</li>
			<li>W parametrach zaawansowanych włącz akumulację zamka do zakresu mobilności.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Na karcie MS/MS ustaw tryb skanowania na równoległą akumulację-fragmentację szeregową i skonfiguruj następujące sekcje: jony prekursorowe, planowanie, aktywne wykluczenie, ustawienia energii zderzenia, ustawienia szerokości izolacji i krokowanie TIMS.
	<ol>
		<li>Pod jonami prekursorowymi ustaw liczbę równoległych ramp akumulacji szeregowej fragmentacji na 8, ładunek minimalny na 1 i ładunek maksymalny na 5.</li>
		<li>W obszarze Ustawienia planowania włącz powtórzenia prekursora. W obszarze aktywnego wykluczenia zaznacz pole wyboru, aby włączyć i ustaw zwolnienie na 0,40 min po.</li>
		<li>Nie zmieniaj ustawień energii zderzenia i ustawień szerokości izolacji. Kliknij pole kroku TIMS, aby włączyć.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. Mobilność i wzorcowanie masy
<ol>
	<li>Wykonaj kalibrację zarówno dla domen m/z, jak i mobilności. W ustawieniach kalibracji m/z wybierz jeden z wstępnie załadowanych profili tuning mix z listy referencyjnej, która pojawi się w menu rozwijanym.</li>
	<li>Aby przeprowadzić kalibrację, należy załadować strzykawkę do TOF roztworem mieszanki strojącej. Po prawej stronie okna użyj ustawień zatytułowanych Tryb kalibracji dla różnych typów kalibracji, które należy ustawić, aby osiągnąć najwyższy wynik.</li>
	<li>Upewnij się, że wynik jest jak najbardziej zbliżony do 100%. Przełączaj się między liniowym, czwororadycznym i ulepszonym kwadratowym, aby osiągnąć najlepszy wynik.</li>
	<li>Skalibruj pod kątem mobilności, wykonując kroki 6.1-6.3 używane do kalibracji m/z.</li>
	<li>Po kalibracji zapisz metodę MS, wybierając kartę Metoda na górnym pasku. Z menu rozwijanego wybierz opcję Zapisz jako, aby wygenerować nowy plik metody MS.</li>
</ol>
7. Tworzenie metody akwizycji niezależnej od danych (dia) równoległej akumulacji szeregowej
<ol>
	<li>Po zebraniu zestawu danych w akwizycji równoległej zależnej od danych (dda) akumulacji równoległej i fragmentacji szeregowej, uruchom eksperymenty w dia. Otwórz aplikację oprogramowania do mobilności jonów i załaduj metodę dda zapisaną w kroku 6.5.</li>
	<li>Pozostaw wszystkie ustawienia takie same, jak dla ustawienia MS, zmień je z akumulacji równoległej-fragmentacji szeregowej na akumulację dia- akumulację równoległą-fragmentację szeregową.</li>
	<li>Na dole panelu wybierz zakładkę MSMS, a następnie kliknij Edytor okien, aby otworzyć wyskakujące okienko dia pokazane w Rysunek 2.</li>
	<li>Załaduj wcześniej zapisany zestaw danych dda (plik .m) za pomocą przycisku otwórz analizę znajdującego się w górnej części wyskakującego okienka.</li>
	<li>W lewym dolnym rogu pojawi się mapa skupień z oknami z wielokątem okien biegnących po przekątnej wykresu. Kliknij i przeciągnij, aby zmienić rozmiar wielokąta tak, aby pasował do danych na mapie skupień (narożniki można wybrać, klikając dwukrotnie linie boczne, pojawi się punkt, który można przeciągnąć i zmienić jego rozmiar).</li>
	<li>Po prawej stronie okien znajdują się ustawienia okien. Ustaw szerokość bryły (50 to idź do) i ustaw zakładkę poziomą, oba w Da.</li>
	<li>Ustaw liczbę okien ruchomości na szerokość masy i nakładanie się w pionie.</li>
	<li>Kliknij Oblicz okna w prawym dolnym rogu wyskakującego okienka, aby wyświetlić okna z nowymi ustawieniami. Gdy będzie to odpowiednie, kliknij Zastosuj dia-PASEF Windows do metody. Spowoduje to zamknięcie wyskakującego okienka, przywracając je do ekranu głównego.</li>
</ol>
8. Przetwarzanie danych TOF mobilności jonów HPLC
<ol>
	<li>Otwórz oprogramowanie do analizy danych. W lewym górnym rogu kliknij kartę Plik i wybierz Otwórz z listy rozwijanej. W oknie nowych plików wybierz odpowiednie pliki i kliknij przycisk Otwórz.</li>
	<li>Sprawdź kalibrację. Kliknij prawym przyciskiem myszy nazwę pliku w polu analizy i wybierz Właściwości. Pojawi się okno z etykietą file name_analysis właściwości. Wybierz opcję Calibration Status (Stan kalibracji).</li>
	<li>Z listy rozwijanej wybierz opcję Kalibracja przyrządu dla spektrometru masowego. Upewnij się, że błąd nie jest większy niż 1 μg/ml. Wybierz opcję Initial Mobility Calibration (Wstępna kalibracja ruchliwości) i upewnij się, że błąd nie jest większy niż 1 μg/ml.</li>
	<li>Przygotuj chromatogram w oprogramowaniu do analizy danych zgodnie z poniższym opisem.
	<ol>
		<li>Kliknij prawym przyciskiem myszy Chromatogram pod nazwą pliku, wybierz Edytuj chromatogram. W polu Wpisz pole rozwijane i wybierz opcję Chromatogram wyekstrahowanych jonów.</li>
		<li>W obszarze filtru wybierz opcję Wszystkie MS, a w trybie skanowania wybierz opcję Wszystkie. Ma to na celu wyświetlenie pików interesującej cząsteczki, a nie tylko jej fragmentów.</li>
		<li>Poniżej poszukaj dwóch opcji filtrowania do wyboru cząsteczki: masy lub formuły podświetlone na niebiesko.</li>
		<li>Jeśli używasz mas do ekstrakcji jonu, wstaw teoretyczne m/z cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania. W tym przypadku wybrać (masa dla reprezentatywnego wyniku) m/z.</li>
		<li>Jeśli używasz formuły do ekstrakcji jonu, wprowadź wzór dla cząsteczki, a także formy jonów będące przedmiotem zainteresowania dla chromatogramu. W takim przypadku wybierz protonowany jon, [M+H]+.</li>
		<li>Ustaw polaryzację na tryb dodatni.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Widmo masowe
	<ol>
		<li>Kliknij prawym przyciskiem myszy na linii bazowej szczytu związku i przeciągnij do drugiej krawędzi szczytu. Spowoduje to utworzenie masowego spektrum fragmentów w tym czasie przechowywania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Generowanie mobilogramu
	<ol>
		<li>Kliknij prawym przyciskiem myszy na lewą zakładkę zatytułowaną mobilogram i wybierz Edytuj mobilogram. Pojawi się okno zatytułowane edytuj ślady mobilogramu. Wykonaj kroki 8.4.2-8.4.7 w celu edycji chromatogramu.</li>
		<li>W danych wejściowych czasu przechowywania dodaj zakres czasu przechowywania szczytu zainteresowania.</li>
		<li>Po wybraniu parametrów kliknij przycisk Dodaj, a następnie przycisk Ok w prawym górnym rogu okna edycji śladów mobilogramu.</li>
		<li>Po krótkim czasie oprogramowanie przetworzy żądane selekcje i wygeneruje chromatogram. Powtórzyć kroki 8.6.1-8.6.3 dla wszystkich jonów w mieszaninie.</li>
		<li>Generowanie widm związków
		<ol>
			<li>W dolnej części okna widoku widma wybierz pozycję Profil MS i Fragment MS. Pozwoli to na uwzględnienie jonów z pełnego skanowania i PASEF.</li>
			<li>W widoku widma kliknij prawym przyciskiem myszy i wybierz opcję Kopiuj widma złożone. Dzięki danym widma, które pojawiają się po prawej stronie, znajdź więcej informacji na temat związku, takich jak rozdzielczość, zdolność rozdzielcza, intensywność i stosunek sygnału do szumu (S/N).</li>
		</ol>
		</li>
		<li>przetwarzanie danych
		<ol>
			<li>Aby przetworzyć dane, należy ręcznie zintegrować chromatogram i piki ruchliwości, aby uzyskać ważne informacje o interesującej nas cząsteczce.</li>
			<li>Kliknij prawym przyciskiem myszy Znajdź i wybierz Integruj tylko chromatogram lub mobilogram. Kliknij lewym przyciskiem myszy i przeciągnij, aby podświetlić żądany szczyt. Zostaną wyświetlone informacje, które obejmują czas przechowywania, obszar, sygnał / numer i mobilność.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Harvesting the Orthogonality of LC and TIMS&#45;TOF MS&#47;MS to Screen Fentanyl Analogs

<ol><li>Gladden, R. M., Martinez, P., Seth, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fentanyl+Law+Enforcement+Submissions+and+Increases+in+Synthetic+Opioid-Involved+Overdose+Deaths+-+27+States%2C+2013-2014%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Fentanyl Law Enforcement Submissions and Increases in Synthetic Opioid-Involved Overdose Deaths - 27 States, 2013-2014.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 65 (33), 837-843 (2016).</li>
<li>Rudd, R. A., Seth, P., David, F., Scholl, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increases+in+Drug+and+Opioid-Involved+Overdose+Deaths+-+United+States%2C+2010-2015%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Increases in Drug and Opioid-Involved Overdose Deaths - United States, 2010-2015.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 65, 1445-1452 (2016).</li>
<li>Department of Justice Drug Enforcement Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugs+of+Abuse%3A+A+DEA+Resource+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22Department+of+Justice+Drug+Enforcement+Administration%22%5BJournal%5D)">Drugs of Abuse: A DEA Resource Guide.</a> Department of Justice Drug Enforcement Administration. , (2022).</li>
<li>Vardanyan, R. S., Hruby, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fentanyl-related+compounds+and+derivatives%3A+current+status+and+future+prospects+for+pharmaceutical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Future+medicinal+chemistry%22%5BJournal%5D)">Fentanyl-related compounds and derivatives: current status and future prospects for pharmaceutical applications.</a> Future medicinal chemistry. 6 (4), 385-412 (2014).</li>
<li>Center for Forensic Science Research and Education (CFSRE). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Q4+2022+NPS+Opioids+Trend+Report%5BTitle%5D)+AND+%22Center+for+Forensic+Science+Research+and+Education+%28CFSRE%29%22%5BJournal%5D)">Q4 2022 NPS Opioids Trend Report.</a> Center for Forensic Science Research and Education (CFSRE). , (2022).</li>
<li>Drug Enforcement Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fentanyl+SIgnature+Profiling+Program+Report%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Enforcement+Administration%22%5BJournal%5D)">Fentanyl SIgnature Profiling Program Report.</a> Drug Enforcement Administration. , (2019).</li>
<li>Drug Enforcement Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+a+Chemical+Precursor+Used+in+the+Illicit+Manufacture+of+Fentanyl+as+a+List+I+Chemical%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Enforcement+Administration%22%5BJournal%5D)">Control of a Chemical Precursor Used in the Illicit Manufacture of Fentanyl as a List I Chemical.</a> Drug Enforcement Administration. , (2007).</li>
<li>Valdez, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas+Chromatography-Mass+Spectrometry+Analysis+of+Synthetic+Opioids+Belonging+to+the+Fentanyl+Class%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Gas Chromatography-Mass Spectrometry Analysis of Synthetic Opioids Belonging to the Fentanyl Class: A Review.</a> Critical Reviews in Analytical Chemistry. 52 (8), 1938-1968 (2022).</li>
<li>Churley, M., Cuadra-Rodriguez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+Note%3A+Screen+More+Drugs+with+the+Agilent+GC%2FMS+Toxicology+Analyzer+with+a+High+Efficiency+Source%5BTitle%5D)+AND+%22Agilent+Technologies+Incorporation%22%5BJournal%5D)">Application Note: Screen More Drugs with the Agilent GC/MS Toxicology Analyzer with a High Efficiency Source.</a> Agilent Technologies Incorporation. , (2017).</li>
<li>Gerace, E., Salomone, A., Vincenti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytical+Approaches+in+Fatal+Intoxication+Cases+Involving+New+Synthetic+Opioids%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Analytical Approaches in Fatal Intoxication Cases Involving New Synthetic Opioids.</a> Curr Pharm Biotechnol. 19 (2), 113-123 (2018).</li>
<li>McIntyre, I. M., Trochta, A., Gary, R. D., Malamatos, M., Lucas, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Acute+Acetyl+Fentanyl+Fatality%3A+A+Case+Report+With+Postmortem+Concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">An Acute Acetyl Fentanyl Fatality: A Case Report With Postmortem Concentrations.</a> Journal of Analytical Toxicology. 39 (6), 490-494 (2015).</li>
<li>Marchei, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+synthetic+opioids+in+biological+and+non-biological+matrices%3A+A+review+of+current+analytical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">New synthetic opioids in biological and non-biological matrices: A review of current analytical methods.</a> Trends in Analytical Chemistry. 102, 1-15 (2018).</li>
<li>Shoff, E. N., Zaney, M. E., Kahl, J. H., Hime, G. W., Boland, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+Identification+of+Fentanyl+Analogs+and+Other+Opioids+in+Postmortem+Cases+by+UHPLC-Ion+Trap-MSn%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Qualitative Identification of Fentanyl Analogs and Other Opioids in Postmortem Cases by UHPLC-Ion Trap-MSn.</a> Journal of Analytical Toxicology. 41 (6), 484-492 (2017).</li>
<li>Drug Enforcement Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientific+Working+Group+for+the+Analysis+of+Seized+Drugs+%28SWGDRUG%29+Recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Enforcement+Administration%22%5BJournal%5D)">Scientific Working Group for the Analysis of Seized Drugs (SWGDRUG) Recommendations.</a> Drug Enforcement Administration. , (2022).</li>
<li>Peters, F. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+comparison+of+four+different+workup+procedures+for+systematic+toxicological+analysis+of+urine+samples+using+gas+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A systematic comparison of four different workup procedures for systematic toxicological analysis of urine samples using gas chromatography-mass spectrometry.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 393 (2), 735-745 (2009).</li>
<li>Remane, D., Meyer, M. R., Peters, F. T., Wissenbach, D. K., Maurer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+simple+procedure+for+liquid-liquid+extraction+of+136+analytes+from+different+drug+classes+for+development+of+a+liquid+chromatographic-tandem+mass+spectrometric+quantification+method+in+human+blood+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fast and simple procedure for liquid-liquid extraction of 136 analytes from different drug classes for development of a liquid chromatographic-tandem mass spectrometric quantification method in human blood plasma.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 397 (6), 2303-2314 (2010).</li>
<li>Cayman Chemical. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supplemental+Material%3A+Differentiation+of+Isobaric+and+Isomeric+Fentanyl+Analogs+by+Gas+Chromatography-Mass+Spectrometry+%28GC-MS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cayman+Chemical%22%5BJournal%5D)">Supplemental Material: Differentiation of Isobaric and Isomeric Fentanyl Analogs by Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS).</a> Cayman Chemical. , (2018).</li>
<li>Armenian, P., Vo, K. T., Barr-Walker, J., Lynch, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fentanyl%2C+fentanyl+analogs+and+novel+synthetic+opioids%3A+A+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Fentanyl, fentanyl analogs and novel synthetic opioids: A comprehensive review.</a> Neuropharmacology. 134, 121-132 (2018).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+application+of+a+High-Resolution+mass+spectrometry+method+for+the+detection+of+fentanyl+analogs+in+urine+and+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mass+Spectrometry+and+Advances+in+the+Clinical+Lab%22%5BJournal%5D)">Development and application of a High-Resolution mass spectrometry method for the detection of fentanyl analogs in urine and serum.</a> Journal of Mass Spectrometry and Advances in the Clinical Lab. 26, 1-6 (2022).</li>
<li>Concheiro, M., Chesser, R., Pardi, J., Cooper, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postmortem+Toxicology+of+New+Synthetic+Opioids%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Postmortem Toxicology of New Synthetic Opioids.</a> Frontiers in Pharmacology. 9, 1210(2018).</li>
<li>Mohr, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Novel+Synthetic+Opioids+U-47700%2C+U-50488+and+Furanyl+Fentanyl+by+LC-MS%2FMS+in+Postmortem+Casework%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Analysis of Novel Synthetic Opioids U-47700, U-50488 and Furanyl Fentanyl by LC-MS/MS in Postmortem Casework.</a> Journal of Analytical Toxicology. 40 (9), 709-717 (2016).</li>
<li>Moody, M. T., Diaz, S., Shah, P., Papsun, D., Logan, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+fentanyl+analogs+and+novel+synthetic+opioids+in+blood%2C+serum%2Fplasma%2C+and+urine+in+forensic+casework%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Testing+and+Analysis%22%5BJournal%5D)">Analysis of fentanyl analogs and novel synthetic opioids in blood, serum/plasma, and urine in forensic casework.</a> Drug Testing and Analysis. 10 (9), 1358-1367 (2018).</li>
<li>Seither, J., Reidy, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confirmation+of+Carfentanil%2C+U-47700+and+Other+Synthetic+Opioids+in+a+Human+Performance+Case+by+LC-MS-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Confirmation of Carfentanil, U-47700 and Other Synthetic Opioids in a Human Performance Case by LC-MS-MS.</a> Journal of Analytical Toxicology. 41 (6), 493-497 (2017).</li>
<li>Strayer, K. E., Antonides, H. M., Juhascik, M. P., Daniulaityte, R., Sizemore, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LC-MS%2FMS-Based+Method+for+the+Multiplex+Detection+of+24+Fentanyl+Analogues+and+Metabolites+in+Whole+Blood+at+Sub+ng+mL%28-1%29+Concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">LC-MS/MS-Based Method for the Multiplex Detection of 24 Fentanyl Analogues and Metabolites in Whole Blood at Sub ng mL(-1) Concentrations.</a> ACS Omega. 3 (-1), 514-523 (2018).</li>
<li>Kahl, J. H., Gonyea, J., Humphrey, S. M., Hime, G. W., Boland, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+Fentanyl+and+Six+Fentanyl+Analogs+in+Postmortem+Specimens+by+UHPLC-MS-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of Fentanyl and Six Fentanyl Analogs in Postmortem Specimens by UHPLC-MS-MS.</a> Journal of Analytical Toxicology. 42 (8), 570-580 (2018).</li>
<li>Fogarty, M. F., Papsun, D. M., Logan, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Fentanyl+and+18+Novel+Fentanyl+Analogs+and+Metabolites+by+LC-MS-MS%2C+and+report+of+Fatalities+Associated+with+Methoxyacetylfentanyl+and+Cyclopropylfentanyl%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Analysis of Fentanyl and 18 Novel Fentanyl Analogs and Metabolites by LC-MS-MS, and report of Fatalities Associated with Methoxyacetylfentanyl and Cyclopropylfentanyl.</a> Journal of Analytical Toxicology. 42 (9), 592-604 (2018).</li>
<li>Lurie, I. S., Berrier, A. L., Casale, J. F., Iio, R., Bozenko, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+of+illicit+fentanyl+using+UHPLC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Forensic+Science+International%22%5BJournal%5D)">Profiling of illicit fentanyl using UHPLC-MS/MS.</a> Forensic Science International. 220 (1-3), 191-196 (2012).</li>
<li>Krajewski, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+fentanyl+analog+screening+kit+toward+the+identification+of+emerging+synthetic+opioids+in+human+plasma+and+urine+by+LC-QTOF%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Application of the fentanyl analog screening kit toward the identification of emerging synthetic opioids in human plasma and urine by LC-QTOF.</a> Toxicology Letters. 320, 87-94 (2020).</li>
<li>Pirok, B. W. J., Stoll, D. R., Schoenmakers, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Developments+in+Two-Dimensional+Liquid+Chromatography%3A+Fundamental+Improvements+for+Practical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Recent Developments in Two-Dimensional Liquid Chromatography: Fundamental Improvements for Practical Applications.</a> Analytical Chemistry. 91 (1), 240-263 (2018).</li>
<li>Keller, T., Keller, A., Tutsch-Bauer, E., Monticelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+ion+mobility+spectrometry+in+cases+of+forensic+interest%5BTitle%5D)+AND+%22Forensic+Science+International%22%5BJournal%5D)">Application of ion mobility spectrometry in cases of forensic interest.</a> Forensic Science International. 161 (2-3), 130-140 (2006).</li>
<li>Klingberg, J., Keen, B., Cawley, A., Pasin, D., Fu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+in+high-resolution+mass+spectrometric+analyses+of+new+psychoactive+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Developments in high-resolution mass spectrometric analyses of new psychoactive substances.</a> Archives of Toxicology. 96 (4), 949-967 (2022).</li>
<li>Fleming, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+U-47700%2C+a+Novel+Synthetic+Opioid%2C+in+Human+Urine+by+LC-MS-MS+and+LC-QToF%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Analysis of U-47700, a Novel Synthetic Opioid, in Human Urine by LC-MS-MS and LC-QToF.</a> Journal of Analytical Toxicology. 41 (3), 173-180 (2017).</li>
<li>Guale, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+LC-TOF-MS+screening+for+drugs%2C+metabolites%2C+and+collateral+compounds+in+forensic+toxicology+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Validation of LC-TOF-MS screening for drugs, metabolites, and collateral compounds in forensic toxicology specimens.</a> Journal of Analytical Toxicology. 37 (1), 17-24 (2013).</li>
<li>Palmquist, K. B., Swortwood, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Data-independent+screening+method+for+14+fentanyl+analogs+in+whole+blood+and+oral+fluid+using+LC-QTOF-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Forensic+Science+International%22%5BJournal%5D)">Data-independent screening method for 14 fentanyl analogs in whole blood and oral fluid using LC-QTOF-MS.</a> Forensic Science International. 297, 189-197 (2019).</li>
<li>Adams, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+isomeric+opioids+in+urine+using+LC-TIMS-TOF+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Analysis of isomeric opioids in urine using LC-TIMS-TOF MS.</a> Talanta. 183, 177-183 (2018).</li>
</ol>

Matthew Willetts i Melvin A. Park są pracownikami firmy Bruker Daltonics Inc., producenta komercyjnego instrumentu timsTOF Pro2. Wszyscy pozostali autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Analityczne rozdzielanie próbek biologicznych o wysokiej zawartości izomerów może być wyzwaniem analitycznym. W niniejszej pracy opisana metoda ma na celu scharakteryzowanie 29 zestawów izomerów, co daje łącznie 185 analogów z 250 standardowych zestawów opioidów. Podczas przygotowywania grupy testowej ważne jest, aby upewnić się, że nie ma dwóch analogów z m/z, których nie można eksperymentalnie rozróżnić. Opisane tutaj dane wykorzystują standardy, które nie pochodzą z matrycy opartej na człowieku, jeśli ta metoda ma być stosowana w doświadczeniu terenowym; Konieczne są dodatkowe badania z wykorzystaniem matrycy będącej przedmiotem zainteresowania, aby zapewnić możliwość zastosowania metody. Matryca może powodować, że anality jonizują się inaczej niż w eksperymencie bez matrycy, co sprawia, że konieczne jest określenie, jakie dominujące formy jonów będą obserwowane. W analizie identyfikacja opiera się na wzorcach izotopowych najliczniejszych form (np. [M+H]+1 i [M+Na]+1).
Wybór programu LC ma kluczowe znaczenie w przypadkach, gdy izomery nie są rozdzielone w domenie mobilności. Zmniejszenie nachylenia gradientu może zwiększyć specyficzność metody poprzez zwiększenie różnicy między pikami chromatograficznymi.
Podczas analizy danych ważne jest, aby nieistotne sygnały były ignorowane przy określaniu czasu retencji i mobilności. Zalety HRMS pozwalają na uzyskanie wąskich okien m/z (typowa rozdzielczość masowa ~50 000) z dodatkowym filtrowaniem mobilności, redukując w ten sposób szum chemiczny.
Opisana tutaj metoda stanowi bibliotekę referencyjną do badań przesiewowych na obecność analogów fentanylu z nieznanej próbki. Zgłoszony wzorzec fragmentacji RT, K, izotopowy i MS są używane jako kwalifikatory podczas przetwarzania danych i nieznanego przypisania. W porównaniu z tradycyjną analizą MRM LC-QQQ, podczas gdy podobny LOD jest osiągalny 13,19,27, unikalną zaletą jest badanie przesiewowe pod kątem alternatywnych opioidów, które nie zostały uwzględnione w bazie danych wygenerowanej przy użyciu zestawu FID. Każdy nowy opioid będzie wymagał analizy przy użyciu syntetycznego wzorca w celu jego ostatecznej walidacji.

Fentanyl i jego analogi są głównymi czynnikami przyczyniającymi się do śmiertelnych i nieśmiertelnych przedawkowań w Stanach Zjednoczonych1,2. Centrum Kontroli i Prewencji Chorób (CDC) poinformowało, że liczba zgonów związanych z przedawkowaniem syntetycznych opioidów w latach 2013-2021 wyniosła ponad 258 000. Tylko w 2021 roku ponad 68 000 zgonów z powodu przedawkowania można przypisać syntetycznym opioidom, co stanowi 82% wszystkich zgonów związanych z przedawkowaniem w kraju3. Od 2013 roku zidentyfikowano setki analogów fentanylu o różnej sile działania4. Wraz z pojawieniem się nielegalnie produkowanych analogów fentanylu, syntetyczny opioid z grupy II sam w sobie pozostaje najpopularniejszym syntetycznym opioidem dostępnym w Stanach Zjednoczonych3. Według Center for Forensic Science Research and Education (CFSRE) najczęściej zgłaszanym analogiem fentanylu w 2022 r. był fluorofentanyl, a dodatkowe syntetyczne opioidy niezwiązane z fentanylem są obecnie wprowadzane do niestabilnej podaży na rynku narkotyków w szybkim tempie5.
Ze względu na przytłaczającą ilość fentanylu i jego analogów krążących na rynku narkotykowym, DEA wdrożyła program profilowania sygnatur fentanylu o nazwie Operacja Smok Śmierci, w celu śledzenia metodologii używanej do syntezy tych związków z nadzieją na powiązanie konfiskat narkotyków z ich pochodzeniem6. W 2018 r. 94% konfiskat narkotyków zidentyfikowano jako zsyntetyzowane metodą Janssena, podczas gdy pozostałe 6% zsyntetyzowano metodą Siegfrieda6. Podstawowa różnica między tymi dwiema metodami polega na obecności analogu fentanylu, benzylu fentanylu, wykrytego jako zanieczyszczenie w metodzie Janssena, podczas gdy obecność despropionylu fentanylu (4-ANPP), metabolitu/prekursora fentanylu, jest zanieczyszczeniem wykrytym podczas syntezy metodą Zygfryda7.
Stosowanie chromatografii gazowej i cieczowej w połączeniu ze spektrometrią mas (odpowiednio GC-MS i LC-MS) do ukierunkowanych badań przesiewowych i kwantyfikacji syntetycznych opioidów jest regularnie wdrażane w laboratoriach toksykologicznych. GC-MS został uznany za złoty standard w wykrywaniu narkotyków nadużywanych w próbkach biologicznych. Dostęp do publicznie dostępnych bibliotek widm masowych8 oraz oprzyrządowania sprzedawanego jako systemy plug and play9 to tylko niektóre z powodów, dla których GC-MS pozostał integralną częścią laboratoriów zarówno do kompleksowych badań przesiewowych, jak i ukierunkowanej kwantyfikacji9,10. Jednak obecne metody kwantyfikacji GC-MS w literaturze mają zwykle ograniczony zakres analitów11 i szybko stają się przestarzałe i nie mają zastosowania w bieżących pracach. Co ważniejsze, granice wykrywalności i kwantyfikacji nie są porównywalne z metodami LC-MS (< 1 ng/ml)12, co zwiększa ryzyko uzyskania wyników fałszywie ujemnych. Jedno z takich porównań między GC-MS i LC-MS, które dotyczyło próbek pośmiertnych, wykazało, że spośród 134 pozytywnie zidentyfikowanych przypadków karfentanylu, jednego z najsilniejszych syntetycznych opioidów do tej pory, 104 z tych przypadków były negatywnie przebadane na obecność karfentanylu przy użyciu GC-MS13. W laboratoriach analizujących leki GC-MS jest częściej stosowany i może być modyfikowany dla syntetycznych opioidów ze względu na wysokie stężenie analizowanych próbek. Jednak GC-MS jest nadal używany w połączeniu z dodatkowymi technikami, takimi jak spektroskopia transformacji Fouriera w podczerwieni (FT-IR) i skaningowa mikroskopia elektronowa (SEM) w celu potwierdzenia tych związków14. Zastosowanie GC-MS do analizy próbek biologicznych w toksykologii sądowej wymaga metod przygotowania próbek, które obejmują ekstrakcję tych związków za pomocą ekstrakcji ciecz-ciecz (LLE) lub ekstrakcji do fazy stałej (SPE)15. LLE można przeprowadzić przy użyciu różnych rozpuszczalników, jednak w laboratorium o wysokiej wydajności LLE może nie być opłacalne lub terminowe. LLE zużywa duże ilości rozpuszczalników, a także objętość próbki, podczas gdy alternatywa, SPE, może być zautomatyzowana i wymaga minimalnej objętości próbki16. Niedawne badanie GC-MS wykazało oddzielenie 20 różnych izomerycznych analogów fentanylu przy użyciu trzech oddzielnych programów termicznych GC17. Chociaż separacja linii bazowej między izomerami zakończyła się sukcesem, zastosowanie tej metody do odpowiednich przypadków kryminalistycznych i przepływów pracy jest ograniczone.
LC-MS zyskał popularność w testach kryminalistycznych, szczególnie ze względu na ograniczenia GC-MS, jeśli chodzi o związki nielotne i wrażliwe na ciepło18,19. Badania przesiewowe LC-MS z wykorzystaniem potrójnych kwadrupolów (QQQ) i oprzyrządowania pułapki jonowej odniosły sukces w wykrywaniu syntetycznych opioidów w niskich stężeniach (<1 ng / ml)12,20,21,22,23,24. Zazwyczaj te metody LC-MS są stosowane jako wtórne metody potwierdzenia w celu uzupełnienia wyników testu immunologicznego i/lub GC-MS. W 2017 roku Shoff i in. w laboratorium toksykologicznym departamentu medycyny sądowej hrabstwa Miami-Dade (MDME) opracowali kompleksową metodę badań przesiewowych dla 44 związków związanych z opioidami przy użyciu ultrawysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (UHPLC)-pułapka jonowa MSn 13. Podobnie jak w przypadku ukierunkowanych metod MRM, ta metoda pułapki jonowej wykorzystywała zaplanowaną listę prekursorów (SPL) zawierającą czasy retencji, jony docelowe prekursora, a także pierwotne jony potomne dla fragmentacji widmowej MS3, gdy było to możliwe. Tym, co odróżnia tę metodę przesiewową od metod opracowanych na potrójnych kwadrupolach i liniowych kwadrupolowych pułapkach jonowych, jest dodatkowa szczegółowość zawarta w danych spektralnych. To, czego ta metoda przesiewowa nie może zapewnić, to analiza ilościowa, która jest rzadko opracowywana na instrumentach pułapek jonowych, a także identyfikacja niewiadomych13. Metody LC-QQQ dla syntetycznych opioidów mogą jednocześnie przesiewać i określać ilościowo predefiniowaną listę celów. Stosowanie przejść monitorowania wielu reakcji (MRM) do identyfikacji i kwantyfikacji związków jest zaufaną techniką pozyskiwania danych i jest najpowszechniejszą techniką stosowaną w literaturze do wykrywania syntetycznych opioidów12,20. Podane zakresy liniowe dla kwantyfikacji szeregu syntetycznych opioidów wahają się od 0,01 do 100 ng / ml, z silniejszymi syntetycznymi opioidami, takimi jak karfentanyl, wykrytymi w zakresie sub-ng/ml11,24,25,26,27.
Separacja izomerycznych syntetycznych opioidów została rozwiązana w metodach LC-MS. Jedna z takich metod rozdzieliła 174 izomeryczne analogi fentanylu w ciągu 16 minut przy użyciu kolumny bifenylowej28. Ponadto wahania parametrów zależnych od LC, takich jak wydajność kolumny, pH w fazie ruchomej i zmiany ciśnienia, powodują przesunięcia w czasie retencji, które należy uwzględnić w testach celowanych ze spójnym monitorowaniem i większymi oknami pobierania (>0,4 min), co może skutkować potencjalnym nakładaniem się tych raz rozwiązanych izomerów. Zbadano dodatkowe techniki chromatograficzne do rozdzielania izomerów, w tym zastosowanie 2-wymiarowej chromatografii cieczowej (2D-LC)29; I chociaż ta technika ma zdolność do zapewnienia ortogonalnej separacji związków, wady przeważają nad zaletami, w tym zbyt długi czas działania, koszty, trudności w opracowaniu metody i użyteczność w porównaniu z alternatywnymi separacjami30.
Spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości (HRMS) staje się coraz bardziej niezawodna w identyfikacji syntetycznych opioidów. Kilka firm produkujących oprzyrządowanie wprowadziło na rynek ukierunkowane metody opracowane w celu identyfikacji szerokiej gamy syntetycznych opioidów w złożonych matrycach biologicznych19,28,31. Metody te, w przeciwieństwie do wcześniej omówionych metod, mogą przechowywać dane analityczne do analizy wstecznej. W ten sposób próbki, które były wcześniej analizowane z nieokreślonymi wynikami, mogą być później ponownie przeglądane w celu odkrycia nowo zidentyfikowanych związków. To, co odróżnia HRMS od QQQ, to dokładna identyfikacja masy. Podczas gdy obie techniki MS mogą dokładnie oznaczać ilościowo przy niskich stężeniach, udowodniono, że HRMS jest bardziej skuteczny we wstępnych badaniach przesiewowych i odkrywaniu nieznanych związków32,33,34. HRMS, a w szczególności analizatory MS czasu przelotu (TOF), były w czołówce odkryć NPS, umożliwiając laboratoriom badawczym dostarczanie wrażliwych na czas danych na temat nowych związków zarówno organom ścigania, jak i społeczności naukowej w celu skalowania rozprzestrzeniania się niektórych z tych związków, jednocześnie zwiększając świadomość i edukację33. Zastosowanie TOF do wykrywania narkotyków stało się niezwykle wszechstronne, z metodami zawierającymi ponad 600 związków oddzielonych w ciągu 10-minutowego programu chromatograficznego. Wcześniejsze badania wykazały zalety spektroskopii ruchliwości uwięzionych jonów (TIMS) sprzężonej z TOF do wykrywania i separacji izomerycznych opioidów35.
Korzystając z ortogonalności pomiędzy chromatografią cieczową, spektrometrią ruchliwości uwięzionych jonów i spektrometrią mas, prezentowana metoda zapewnia szeroką charakterystykę analogów fentanylu w oparciu o czas retencji, wzór izotopowy, ruchliwość i wzór fragmentacji.

<table><tbody><tr><td>Mrówczan amonu do HPLC</td><td>Fluka</td><td>17843-50G</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp; Probówki Safe-Lock do mikrowirówek Snap-Cap</td><td>Fisher</td><td>05-402-25</td><td></td></tr><tr><td>ESI-L Mieszanka tuningowa o niskim stężeniu</td><td>Agilent</td><td>G1969-85000</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do badań przesiewowych analogu fentanylu (FAS)&nbsp;</td><td>Cayman Chemical</td><td>9003237, 9003286, 9003380, zestaw 9003381</td><td>250 opioidów snthetic, 210 analogów fentanylu, podzielony na jeden zestaw i emergentne wersje panelowe 1-4</td></tr><tr><td>Kwas mrówkowy Optima LC/MS</td><td>Fisher</td><td>A117-50</td><td></td></tr><tr><td>Kolumna ochronna Onyx (5 x 4,6 mm)&nbsp;</td><td>Kolumna ochronna Phenomenex</td><td>CHO-7649</td><td>do kolumn C18</td></tr><tr><td>Monolityczny słup HPLC Onyx C18 (100 x 4,6 mm)</td><td>Phenomenex</td><td>CHO-7643</td><td>kolumna LC C18 z odwróconą fazą</td></tr><tr><td>Acetonitryl klasy Optima&nbsp;</td><td>Metanol Fisher</td><td>A996-4</td><td></td></tr><tr><td>Optima Fisher</td><td></td><td>A454-4</td><td></td></tr><tr><td>Optima klasa wody</td><td>Fisher</td><td>W7-4</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>Fisher</td><td>05-719-510</td><td>zestaw 1-10 i mikro; L, 10-100 i mikro; L oraz 100-1000 i mikro; Pipeta L</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 10 i mikro; L</td><td>Fisher</td><td>94060100</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 1000&micro; L</td><td>Fisher</td><td>94056710</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 200&micro; L</td><td>Fisher</td><td>94060310</td><td></td></tr><tr><td>Mikser płytowy</td><td>IKA&nbsp;</td><td>MS 3 D S1</td><td>IKA MS 3 digtital</td></tr><tr><td>Prominence LC-20 CE ultraszybki chromatograf cieczowy</td><td>Shimadzu, Japonia</td><td></td><td>wyposażony w DGU-20A5, LC-20AD, SIL-20AC, CTO-20A, SPD-M20A, CBM-20A, SPD-20A</td></tr><tr><td>timsTOF Pro</td><td>Bruker Daltonics Inc., Billerica, MA</td><td></td><td>instrument timsTOF z PASEF&nbsp;</td></tr></tbody></table>

analogowe badanie przesiewowe fentanylu przy użyciu lc-tims-tof ms/ms

Fentanyl Analog Screening using LC-TIMS-TOF MS/MS

Użycie fentanylu i pojawienie się analogów fentanylu w ostatnich dziesięcioleciach stało się coraz większym problemem dla całej społeczności. Fentanyl i jego analogi są głównymi czynnikami przyczyniającymi się do śmiertelnych i nieśmiertelnych przedawkowań w Stanach Zjednoczonych. Najnowsze przypadki przedawkowania fentanylu są związane z nielegalnie produkowanym fentanylem i jego ekstremalną siłą działania. W niniejszej pracy opisano wysokoprzepustowy protokół analityczny do badań przesiewowych analogów fentanylu. Zastosowanie komplementarnej chromatografii cieczowej, spektrometrii ruchliwości uwięzionych jonów i tandemowej spektrometrii mas pozwala na separację i przypisanie setek analogów fentanylu z jednej próbki w jednym skanie. Opisane podejście wykorzystuje niedawny rozwój akwizycji zależnej od danych i akwizycji niezależnej od danych przy użyciu równoległej akumulacji w pułapce mobilności, po której następuje sekwencyjna fragmentacja przy użyciu dysocjacji wywołanej zderzeniem. Analogi fentanylu są z pewnością przypisywane na podstawie ich czasu retencji, mobilności i wzorca fragmentacji SM.

Zestaw przesiewowy 250 standardów analogów fentanylu podzielono na 14 grup: 12 grup po 17 analogów i 2 grupy po 16 analogów, aby uniknąć interferencji m/z. Każdy analog jest dodatkowo charakteryzowany przez m/z, czas retencji (RT), mobilność (K) oraz wzorzec fragmentacji MS/MS.
Przykłady rozdzielania izomerów dla wzorów chemicznych C22H28N2O2 oraz C21H28N2OS przedstawiono odpowiednio na Rysunku 3 oraz Rysunku 4. 
Zestaw do przesiewania analogów fentanylu zawiera cztery izomery o wzorze chemicznym C22H28N2O2 (patrz Rysunek 3). Analiza Rysunku 4 przedstawia wyekstrahowany chromatogram jonowy [M+H]+, mobilogramy, rozkład izotopowy oraz wzorzec fragmentacji MS/MS. Metoksyacetylofentanyl i karbaminian fentanylu wykazują dobrą separację w obszarach LC i mobilności od para-metoksyacetylofentanylu i B-hydroksylo-fentanylu. Jednakże wyraźne rozdzielenie para-metoksyacetylofentanylu od B-hydroksylo-fentanylu jest możliwe dzięki ich wzorcom fragmentacji.
Zestaw do przesiewania analogów fentanylu zawiera trzy izomery o wzorze chemicznym C21H28N2OS. Analiza Rysunku 4 przedstawia wyekstrahowany chromatogram jonowy [M+H]+, mobilogramy, rozkład izotopowy oraz wzorzec fragmentacji MS/MS. α-metylo-tiofentanyl oraz (±)-trans-3-metylo-tiofentanyl rozdzielają się w domenie LC, ale nie w domenie mobilności. Co więcej, (±)-trans-3-metylo-tiofentanyl i (±)-cis-3-metylo-tiofentanyl rozdzielają się w domenie mobilności, a nie w domenie LC. Wykazuje to komplementarność rozdziału LC i mobilności, co poprawia identyfikację gatunków izomerycznych dzięki ortogonalności domen. Rysunek 4D podsumowuje ten wynik uzyskany za pomocą LC i mobilności.
<img alt="Ekran systemu chromatograficznego LC-20AD; ustawienia gradientu binarnego; konfiguracja metody chromatograficznej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65562/65562fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Rampa gradientowa w oprogramowaniu. Punkty czasowe gradientów w dialogu metody systemu ICF zastosowane podczas rozdziału w zależności od procentowego stężenia B. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65562/65562fig01large.jpg" target="_blank">Aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.</a>
<img alt="Schemat analizy danych spektrometrii mas z chromatogramem i mapą ciepła dla dopasowania widma i kalibracji." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65562/65562fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: ustawienia okien dia-PASEF. W metodach MS dla dia-PASEF ustawienia MS/MS są unikalne. Wykres po lewej stronie przedstawia wielokąty okien dostrojone na podstawie danych zarejestrowanych w metodzie dda-PASEF. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65562/65562fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Schemat chromatografii analizy chemicznej; widma GC-MS pochodnych fentanylu; struktura cząsteczkowa." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65562/65562fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Typowy ekstrahowany chromatogram jonowy, ekstrahowany mobilogram oraz wzmocniona projekcja MS dla opioidów izomerycznych. (A) Struktury metoksyacetylopentanylu, para-metoksyacetylopentanylu, β-hydroksy-fentanylu, karbamianu fentanylu oraz odpowiednio (B) typowy czas retencji, (C) typowa mobilność, (D) sygnał izomeryczny, (E) główne fragmenty i (F) reprezentacja fragmentacji. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65562/65562fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Izomery tiofentanylu; struktura cząsteczkowa, chromatogramy LC-MS, wykres mobilności IMS vs. LC." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65562/65562fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4: Typowe wyekstrahowane chromatogramy jonowe i wyekstrahowane mobilogramy dla izomerycznych opioidów. (A) Struktury α-metylotiofentanylu, (±)-trans-3-metylotiofentanylu i (±)-cis-3-metylotiofentanylu. Dla poszczególnych izomerów (B) typowy czas retencji, (C) typowa mobilność, (D) ortogonalność między czasem retencji a mobilnością. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65562/65562fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
Tabela uzupełniająca 1: Grupy mieszanin. Tabela ta przedstawia, które opioidy znajdują się w każdej z 14 mieszanin przygotowanych dla tej procedury. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65562/Supplementary%20table%201_RE.xlsx" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.</a>

Metoda badania analogów fentanylu na podstawie czasu ich retencji, mobilności i wzorca fragmentacji spektrometrii mas.

Analogowe badanie przesiewowe fentanylu przy użyciu LC-TIMS-TOF MS/MS

The use of fentanyl and the emergence of fentanyl analogs over recent decades has become an increasing concern to the community at large. Fentanyl and its ...

Zakres naszych badań polega na opracowaniu metody rozróżniania i charakteryzowania analogów izomerycznych. Badania te mają na celu zbadanie, czy można opracować metodę pozwalającą na pewne różnicowanie dużej ilości, zwłaszcza izomerów strukturalnych. Protokół ten obejmuje cztery tryby charakteryzacji, które wcześniej nie były sprzężone.Zastosowanie czterech ortogonalnych metod identyfikacji analogów powinno poprawić zdolność do różnicowania izomerów, które są trudne do rozróżnienia przy użyciu obecnych standardowych procedur. Tytan jest dużym problemem społecznym w związku z epidemią opioidów. Każdego dnia odkrywane są nowe analogi tworzące laboratoria laserowe, a posiadanie metodologii, która szybko i poufnie pomaga określić każdy wariant analogu w próbce, może poprawić wydajność i egzekwowanie prawa antynarkotykowego.Rozpocznij od przygotowania faz ruchomych do wysokosprawnej chromatografii cieczowej lub HPLC. W przypadku ruchomej fazy A lub MPA należy użyć pięciomilimolowego mrówczanu amonu w wodzie z 0,05% kwasem mrówkowym. W przypadku ruchomej fazy B lub MPB należy użyć 0,05% kwasu mrówkowego w mieszaninie metanolu i acetonitrylu jeden do jednego.Aby rozpocząć opracowywanie metody HPLC, otwórz oprogramowanie do chromatografii cieczowej lub LC i utwórz nowy protokół. Następnie kliknij przycisk edycji metody, aby edytować gradient binarny. Na karcie gradientu binarnego ustaw znaczniki czasu i stężenia MPA i MPB.Ustaw czas zatrzymania na 18 minut, natężenie przepływu na 0,400 mililitra na minutę, a minimalne i maksymalne limity ciśnienia odpowiednio na zero i 6 000 PSI. Aby zainicjować HPLC, wstaw kolumnę LC i osłony kolumny w sekcji kolumny HPLC. Uważnie obserwuj minimalne i maksymalne ciśnienie w kolumnie.Aby rozpocząć, opracowanie metody TIMS-TOF MS/MS otwórz aplikację sterującą TIMS, w ustawieniach MS ustaw wartości początkowe i końcowe skanowania odpowiednio na 50 stosunek masy do ładunku i 1 800 stosunek masy do ładunku. Wybierz tryb polaryzacji jonów jako dodatni, a tryb skanowania jako akumulację równoległą, fragmentację szeregową lub PASEF. Następnie przejdź do wypustek pod źródłem i ustaw przesunięcie płyty końcowej na 500 woltów, kapilar na 4,500 woltów, nebulizator na 3,0 bar, suchy gaz na 10,0 litrów na minutę i suchą temperaturę na 200 stopni Celsjusza W ustawieniach pompy strzykawkowej przypisz strzykawkę jako Hamilton jeden mililitr.Włącz opcję aktywną i ustaw natężenie przepływu na 80,0 mikrolitrów na godzinę. W zakładce MS/MS w sekcji jony prekursorowe ustaw liczbę ramp PASEF na osiem, minimalny ładunek na jeden, a maksymalny ładunek na pięć. W ustawieniach planowania włącz powtórzenia prekursora i w obszarze aktywne wykluczenie zaznacz pole wyboru, aby włączyć i ustaw zwolnienie na 0,40 minuty po.Nie zmieniaj ustawień energii zderzenia i ustawień szerokości izolacji. Następnie kliknij, aby włączyć pole kroku TIMS. Aby przeprowadzić kalibrację zarówno dla stosunku masy do ładunku, jak i dla dziedziny mobilności, w ustawieniach kalibracji stosunku masy do ładunku wybierz jeden z wstępnie załadowanych profili tuningu mix z listy referencyjnej.Aby przeprowadzić kalibrację, należy załadować strzykawkę do TOF roztworem mieszanki strojącej. W trybie kalibracji po prawej stronie okna wybierz między liniowym, kwadratowym i ulepszonym kwadratowym, aby uzyskać najlepszy wynik. I kliknij kalibruj, aby zbliżyć się jak najbardziej do 100%.Następnie należy przeprowadzić kalibrację pod kątem mobilności, postępując zgodnie z krokami przedstawionymi wcześniej w celu kalibracji stosunku masy do ładunku. Po kalibracji zapisz metodę MS, wybierając zakładkę metody na górnym pasku. Z menu rozwijanego wybierz opcję Zapisz jako, aby wygenerować nowy plik metody MS.Po zebraniu zestawu danych TIMS-TOF MS/MS w trybie akwizycji zależnej od danych lub DDA PASEF, uruchom akwizycję niezależną od danych lub DIA w aplikacji oprogramowania do mobilności jonów. Aby to zrobić, najpierw załaduj wcześniej zapisaną metodę DDA. Zmień spektrometrię mas na pasywną fragmentację DIA.Pozostaw wszystkie inne ustawienia bez zmian. W zakładce MS/MS wybierz edytuj okna, a następnie użyj przycisku otwórz analizę znajdującego się w górnej części wyskakującego okienka DIA i załaduj wcześniej zapisany zestaw danych DDA. Gdy w lewym dolnym rogu pojawi się mapa skupień z wielokątem okien biegnących po przekątnej wykresu, kliknij i przeciągnij, aby zmienić rozmiar wielokąta tak, aby pasował do danych na mapie skupień.Ustaw liczbę okien ruchomości w przeliczeniu na szerokość masy i nakładanie się. Kliknij przycisk Oblicz okna w prawym dolnym rogu wyskakującego okienka, aby wyświetlić okna z nowymi ustawieniami. Gdy będzie odpowiedni, kliknij Zastosuj.Aby przetworzyć dane TOF ruchliwości jonów HPLC z badań przesiewowych analogu fentanylu, należy rozpocząć od sprawdzenia kalibracji w oprogramowaniu do analizy danych. W tym celu należy kliknąć prawym przyciskiem myszy na nazwę pliku pod polem analizy i wybrać właściwości. Gdy pojawi się okno z etykietą filename_analysis właściwości, wybierz stan kalibracji.Z listy rozwijanej wybierz kalibrację przyrządu dla spektrometru mas i potwierdź, że błąd nie jest większy niż jeden PPM. Następnie wybierz wstępną kalibrację ruchliwości i potwierdź, że błąd nie jest większy niż 1%Aby przygotować chromatogram w oprogramowaniu do analizy danych, kliknij prawym przyciskiem myszy chromatogram pod nazwą pliku i wybierz edytuj chromatogram. W polu Wpisz pole rozwijane i wybierz wyodrębniony chromatogram jonowy.W obszarze filtr zaznacz wszystkie MS, a w polu Tryb skanowania zaznacz wszystko. Jeśli używasz mas do ekstrakcji jonu, wprowadź teoretyczny stosunek masy do ładunku interesującej nas cząsteczki. Ustaw polaryzację na tryb dodatni i dodaj jon do listy.Jeśli używasz formuły do ekstrakcji jonu, wprowadź wzór dla cząsteczki, a także formy jonów będące przedmiotem zainteresowania dla chromatogramu. W przypadku widma masowego upewnij się, że chromatogram jest zaznaczony i kliknij prawym przyciskiem myszy linię bazową jednej krawędzi piku złożonego i przeciągnij do drugiej krawędzi piku. Aby wygenerować mobiligram, kliknij prawym przyciskiem myszy na lewą zakładkę zatytułowaną mobiligram i wybierz edytuj mobiligram.Gdy pojawi się okno zatytułowane edytuj ślady mobiligramu, rozpocznij edycję chromatogramu. W danych wejściowych czasu przechowywania dodaj zakres czasu przechowywania szczytu zainteresowania. Po wybraniu parametrów kliknij dodaj, a następnie w porządku w prawym górnym rogu.Aby wygenerować widma złożone, w dolnej części okna widoku widma wybierz kolejno profil MS i fragment MS.At widoku widma, kliknij prawym przyciskiem myszy i wybierz kopiuj widma złożone. Aby przetworzyć dane, kliknij znajdź, a następnie wybierz związki ręcznie, chromatogram lub mobiligram. Kliknij lewym przyciskiem myszy i przeciągnij, aby podświetlić żądany pik, aby uzyskać ważne informacje o interesującej nas cząsteczce.Badania przesiewowe czterech izomerów w konkretnym zestawie do badań przesiewowych analogu fentanylu wykazały, że metoksyacetylofentanyl i karbaminian fentanylu dobrze oddzieliły się w domenach LC i ruchliwości od para-metoksyacetylofentanylu i B-hydroksyfentanylu. Udało się jednak osiągnąć wyraźne rozdzielenie tych dwóch ostatnich we wzorcach fragmentacji. Badania przesiewowe trzech izomerów w innym zestawie wykazały, że alfa-metylotiofentanyl i trans-3-metylotiofentanyl rozdzieliły się w domenie LC, ale nie w domenie mobilności.Jednak trans-3-metylotiofentanyl i cis-3-metylotiofentanyl rozdzieliły się w domenie ruchliwości, a nie w domenie LC. Dane te wskazują na komplementarność ortogonalnych domen LC i ruchliwości w poprawie identyfikacji gatunków izometrycznych.

fentanyl-analog-screening-using-lc-tims-tof-msms

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Profilowanie metabolitów nieukierunkowanych za pomocą ultra wydajnej chromatografii cieczowej w połączeniu ze spektrometrią mas (UPLC-MS) jest potężną techniką badania metabolizmu.  W tym artykule przedstawiono typowy przepływ pracy wykorzystywany do nieukierunkowanego profilowania metabolitów w surowicy, w tym organizację i przygotowanie próbki, pozyskiwanie danych, analizę danych, kontrolę jakości i identyfikację metabolitów.

Wielkoskalowe, nieukierunkowane profilowanie metabolomiczne surowicy za pomocą ultrasprawnej chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (UPLC-MS)

Nieukierunkowana metabolomika dostarcza hipotezy generującej migawkę profilu metabolicznego.  Protokół ten zademonstruje ekstrakcję i analizę metabolitów z komórek, surowicy lub tkanki.  Szereg metabolitów jest badany za pomocą ekstrakcji ciecz-faza cieczowa, ultraprzepływowej chromatografii cieczowej/spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS) w połączeniu z oprogramowaniem do analizy różnicowej.

Nieukierunkowana metabolomika ze źródeł biologicznych przy użyciu ultrasprawnej chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS)

Tutaj opisujemy wysokoprzepustową metodę kompleksowego nadzoru nad narkotykami, która pozwala na lepszą rozdzielczość i wykrywanie dużych paneli nadużywanych narkotyków i ich metabolitów, z kontrolą jakości opartą na wielosegmentowej elektroforezie kapilarnej i spektrometrii mas.

Wysokowydajny i kompleksowy nadzór nad lekami za pomocą wielosegmentowej elektroforezy kapilarnej i spektrometrii mas

Tutaj prezentujemy protokół sekwencyjnej celowanej kwantyfikacji i nieukierunkowanej analizy związków fluorowanych w wodzie za pomocą spektrometrii mas. Metodologia ta zapewnia ilościowe poziomy znanych związków fluorochemicznych i identyfikuje nieznane substancje chemiczne w powiązanych próbkach wraz z półilościowymi oszacowaniami ich obfitości.

Identyfikacja per- i polifluorowanych związków chemicznych za pomocą połączonego przepływu pracy spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości z ukierunkowanymi i nieukierunkowanymi badaniami przesiewowymi

Diagnostyczne filtrowanie fragmentacji, zaimplementowane w MZmine, to eleganckie, post-akwizycyjne podejście do przesiewania zbiorów danych LC-MS/MS dla całych klas zarówno znanych, jak i nieznanych produktów naturalnych. To narzędzie przeszukuje widma MS/MS pod kątem jonów produktowych i/lub strat neutralnych, które analityk zdefiniował jako diagnostyczne dla całej klasy związków.

Naturalne odkrywanie produktu z diagnostycznym filtrowaniem fragmentacji LC-MS/MS: zastosowanie do analizy mikrocystyny

Obecne metody analizy przestrzegania przez pacjentów złożonych schematów leczenia gruźlicy opornej na leki (DR-TB) mogą być niedokładne i wymagające dużych zasobów. Nasza metoda analizuje włosy, łatwo zbieralną i przechowywaną matrycę, pod kątem stężeń 11 leków DR-TB. Dzięki LC-MS/MS możemy określić poziomy leków poniżej nanogramów, które można wykorzystać do lepszego zrozumienia przestrzegania leków.

Zweryfikowany panel LC-MS/MS do ilościowego określenia 11 leków opornych na gruźlicę w małych próbkach włosów

Analityczny przepływ pracy oparty na chromatografii cieczowej, spektrometrii ruchliwości uwięzionych jonów i spektrometrii mas czasu przelotu (LC-TIMS-ToF MS/MS) dla wysokiej pewności i wysoce powtarzalnej "oddolnej" analizy modyfikacji histonów i identyfikacji na podstawie głównych parametrów (czas retencji [RT], przekrój zderzenia [CCS] i dokładny stosunek masy do ładunku [m/z]).

Badania przesiewowe modyfikacji histonów przy użyciu chromatografii cieczowej, spektrometrii ruchliwości uwięzionych jonów i spektrometrii mas czasu przelotu

Prezentujemy metodę szybkiej spektrometrii mas (MS)/spektrometrii mas (MS) opartej na adnotacji i klasyfikacji alkaloidów tropanowych, przydatną zarówno do wstępnej dereplikacji próbek zawierających tropan jak i odkrywania nowych alkaloidów do izolacji.

Zastosowania tandemowej spektrometrii mas chromatografii cieczowej w badaniach nad produktami naturalnymi: alkaloidy tropanowe jako studium przypadku

Ten protokół przedstawia zweryfikowaną metodę chromatografii cieczowej, mobilności jonów i spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości, do określania obecności alkaloidów sporyszu w żywności, zgodnie z niedawno wydanym rozporządzeniem Komisji (UE) 2023/915.

Wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu

Opisano podejście do badań przesiewowych materiałów w celu opracowania mikromacierzy domieszkowanych białkiem pochodzącym zol-żel przy użyciu nowej metody produkcji druku pinów. Metodologia ta została zademonstrowana poprzez opracowanie mikromacierzy acetylocholinoesterazy i multikinaz, które są wykorzystywane do opłacalnych badań przesiewowych małych cząsteczek.

Podejście do badań przesiewowych materiałów z przewodnikiem w celu opracowania ilościowych mikromacierzy białkowych pochodzących zol-żel

Poznaj metodę różnicowania izomerów analogów fentanylu przy użyciu LC-TIMS-TOF MS/MS. To podejście łączy cztery ortogonalne techniki identyfikacji, poprawiając dokładność analizy w zwalczaniu epidemii opioidowej.

Analogowe badanie przesiewowe fentanylu przy użyciu LC-TIMS-TOF MS/MS

Przeglądaj więcej filmów