Name: Pomiar funkcji mitochondrialnej naiwnych i efektorowych limfocytów T CD8 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Poznaj metodę pomiaru funkcji mitochondrialnej w limfocytach T CD8 przy użyciu testu Mito Stress. Technika ta pozwala analizować bioenergetykę komórek i sygnalizację receptora TCR w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Fundacja Hertz, Fundacja Amy Davis, Fundacja Rodziny Moore i Fundacja Heidi Horner dostarczyły nieocenionego wsparcia, za co jesteśmy wdzięczni. Praca ta była również częściowo wspierana przez granty NIH dla RMT (AI052157, AI136534), podczas gdy JAT był wspierany przez Hertz Graduate Fellowship.

Autorzy nie mają żadnych sprzecznych interesów, które mogliby ujawnić.

W tym artykule przedstawiono protokół oceny funkcji mitochondriów naiwnych i efektorowych limfocytów T CD8. Szczegółowo opisujemy i porównujemy metody przygotowania zarówno specyficznych dla antygenu, jak i poliklonalnych limfocytów T CD8 przy użyciu myszy OT-I i C57BL / 6. Nasze wyniki pokazują, że istnieją podobne trendy w metabolizmie pomimo metody aktywacji i wstępnego leczenia w limfocytach T CD8. Dane pokazują, że aktywacja specyficzna dla antygenu prowadzi do bardziej aktywnych metabolicznie limfocytów T OT-I CD8 ...

Na los i funkcjonalność komórek odpornościowych znaczący wpływ mają metabolizm, zużycie oksydacyjne i oddychanie beztlenowe1,2,3,4. Ostatnio wzrosło zainteresowanie modulacją metaboliczną jako strategią przeprogramowania lub ożywienia losu limfocytów T CD8 i funkcji efektorowej oraz poprawy klirensu wirusa lub wzmocnienia endogennej odporności przeciwnowotworowej5,6,7,8,9. Warto zauważyć, że sygnalizacja receptora antygenowego przez receptor limfocytów T (TCR) jest kluczowym wymogiem różnicowania limfocytów T CD8, co skutkuje dalszą sygnalizacją i aktywacją10,11,12 (Rysunek 1). Długotrwałe narażenie na uszkodzenia immunologiczne powoduje uporczywą stymulację TCR specyficzną dla antygenu, co ostatecznie prowadzi do przewlekłych stanów zapalnych, zmęczenia limfocytów T, przebudowy mikrośrodowiska immunologicznego i ucieczki immunologicznej11,13,14,15,16,17,18,19.
Metabolizm wyczerpanych limfocytów T CD8 zasadniczo różni się od metabolizmu funkcjonalnych efektorowych limfocytów T CD82,3,14,15,18,20. Różnicowanie limfocytów T, wydzielanie γ interferonu (IFNγ) i zdolność przypominania są częściowo determinowane przez funkcję mitochondriów i produkty rozpadu β-oksydacji. Limfocyty T IFNγ+ CD8 są krytycznymi składnikami zarówno przeciwnowotworowej, jak i przeciwwirusowej odpowiedzi immunologicznej21,22,23. Specyficzny strumień metaboliczny poprzez glikolizę i łańcuch transportu elektronów jest ważny dla aktywacji limfocytów T CD8, wydzielania cytokin i odpowiedzi pamięciowych4,11,13,15,18,24,25,26,27,28. Optymalne odpowiedzi, w tym aktywacja limfocytów T i różnicowanie efektorów, wymagają skoordynowanej i specyficznej odpowiedzi mitochondrialnej, podczas gdy defekty mitochondrialne i nadmierne reaktywne formy tlenu (ROS) charakteryzują wyczerpane lub dysfunkcyjne limfocyty T9,29. Ostatnio, uporczywa stymulacja TCR limfocytów T CD8 in vitro sprzyja wyczerpującemu różnicowaniu limfocytów T CD8 częściowo poprzez indukowanie stresu oksydacyjnego i przeprogramowanie metabolizmu oksydacyjnego i zdolności metabolicznych wymaganych do proliferacji limfocytów T1,2,13,20,24,29. Ogólnie rzecz biorąc, osie kontroli metabolicznej są kluczowymi elementami w kierowaniu różnicowaniem limfocytów T CD8 i ich progresją do fenotypów efektorowych, pamięciowych lub wyczerpania/dysfunkcji.
Związki metaboliczne również kierują odpowiedzią komórek odpornościowych, działając jako autokrynne lub parakrynne cząsteczki sygnałowe9,30,31,32,33,34,35. Sfingozyno-1-fosforan (S1P) i kwas lizofosfatydowy (LPA) są bioaktywnymi i zapalnymi lipidami, które sygnalizują za pośrednictwem receptorów sprzężonych z białkiem G (GPCR) modulowanie wyjścia limfocytów i cytotoksyczności przez limfocyty T CD836. Sygnalizacja LPA za pośrednictwem receptorów GPCR LPA na limfocytach T CD8 przeprogramowuje metabolizm w celu zwiększenia lipolizy, utleniania kwasów tłuszczowych i wycieku protonów9. Ogólnie rzecz biorąc, bioenergetyka i metabolizm limfocytów T CD8 są w dużej mierze napędzane przez dostępność substratu, sygnały środowiskowe i wymagania energetyczne.
Metodologie badania metabolizmu limfocytów T CD8 stały się coraz ważniejsze. Test stresu Cell Mito zapewnia kompleksową ocenę bioenergetyki i jest obecnie uznawany za technikę charakterystyczną w dziedzinie immunometabolizmu i energetyki komórek T CD89,37. Komórki adherentne były historycznie używane do testu Mito Stress Test38; jednak rośnie zainteresowanie stosowaniem tego protokołu do komórek hodowanych w zawiesinie, a konkretnie przy użyciu komórek odpornościowych do testu stresu Cell Mito. Tutaj przedstawiamy szczegółowy protokół pomiaru aktywności metabolicznej limfocytów T CD8 w oparciu o naszą najnowszą publikację9. Zapewniamy szczegółowe wyjaśnienie ekspansji limfocytów T CD8, naiwnej izolacji limfocytów T CD8, przygotowania testu i leczenia za pomocą protokołów zarówno leczenia wstępnego, jak i ostrych wstrzyknięć w teście Cell Mito Stress Test. Co ważne, porównujemy i kontrastujemy wiele metod stymulacji TCR i aktywacji limfocytów T CD8, w tym stymulację poliklonalną i specyficzną dla antygenu TCR.
Ten protokół szczegółowo opisuje stymulację specyficzną dla antygenu przy użyciu transgenicznych myszy OT-I (klasyczny transgeniczny model myszy), dla których wszystkie mysie limfocyty T wyrażają te same geny Vα2 i Vβ539. Wszystkie mysie limfocyty T CD8 OT-I zawierają ten sam TCR, który jest specyficzny wobec oktapeptydu albuminy jaja kurzego (OVA257-264, zapisywany również jako sekwencja aminokwasowa SIINFEKL lub N4, szeroko badany epitop, który po prezentacji przez główny kompleks zgodności tkankowej (MHC) klasy I aktywuje cytotoksyczne limfocyty T CD8 39 (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A). Ogólnie rzecz biorąc, transgeniczny model myszy OT-I jest szeroko stosowany przez immunologów do badania sygnalizacji TCR i funkcji efektora limfocytów T specyficznych dla antygenu. W przeciwieństwie do aktywacji monoklonalnej za pomocą mysiego modelu OT-I, poliklonalne limfocyty T CD8 mogą być generowane z przeciwciałami anty-CD3 / CD28 przeciwko podjednostkom TCR CD3 i cząsteczce kostymulującej CD2840 (<silna klasa = "xfig">Figura 1B). Przeciwciała anty-CD3/CD28 omijają specyficzny dla antygenu komponent sygnalizacji TCR, aby aktywować poliklonalną populację limfocytów T40. Ostatecznie wyniki opisane w tym raporcie porównują wiele metod wykorzystania testu wysiłkowego Cell Mito do ilościowego określenia dynamicznego przepływu metabolicznego w limfocytach T CD8.

<table><tbody><tr><td>Antymycyna A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotynylowany anty-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ Zestaw</td> <td>do izolacji limfocytów TMiltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Sitka do komórek (100 &mikro; m)</td> <td>LECZENIE KOMÓRKOWE</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>Kwas etylenodiaminotetraoctowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>gradient gęstości średni&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluorometoksy)fenylo)karbohydrazonoilodicyjanek)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glukoza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LS Kolumny</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Kolumny pozytywnej selekcji</td></tr><tr><td>Magnetyczna kolumna do separacji komórek</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Microplate Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycyna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Pirogronian</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Rekobinant IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Pożywka dla konika morskiego</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>Kartridż z czujnikiem</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna płytka 6-dołkowa</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna płytka 24-dołkowa</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

pomiar funkcji mitochondrialnej naiwnych i efektorowych limfocytów t cd8

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

Zrozumienie, jak immunometabolizm wpływa na funkcję, różnicowanie i los limfocytów, wzbudziło duże zainteresowanie i uwagę. Biologia limfocytów została zbadana za pomocą analizy bioenergetycznej i stała się obecnie niezwykle ważnym narzędziem w tej dziedzinie. W związku z tym staraliśmy się zoptymalizować test analizy bioenergetycznej, który można dostosować do wstępnych zabiegów i ostrego wstrzykiwania w celu stymulacji receptorów. Tutaj oceniliśmy metabolizm limfocytów T CD8 ex vivo za pomocą testu wysiłkowego Cell Mito w celu oceny wskaźników zużycia tlenu i zakwaszenia zewnątrzkomórkowego w naiwnych i efektorowych limfocytach T CD8. Specyficzne dla antygenu efektorowe limfocyty T CD8 uzyskano poprzez stymulację ex vivo, a naiwne limfocyty T CD8 pobrano ze splenocytów i wyizolowano za pomocą separacji kolumn z kulkami magnetycznymi. 
Wstępne obróbki są wykonywane na mikropłytkach i szczegółowo opisujemy, jak przygotować wkłady z czujnikami. Pokazujemy, w jaki sposób porty iniekcyjne mogą być ładowane lekami, aby pośrednio mierzyć zdolności metaboliczne, a dzięki modulatorom metabolicznym protokół ten można wykorzystać do badania określonej aktywności enzymów. Stymulacje receptorów limfocytów T można badać w czasie rzeczywistym za pomocą ostrego wstrzyknięcia i stymulacji anty-CD3/CD28 za pomocą portów iniekcyjnych. Analizatory przyrządów służą do pomiarów i gromadzenia danych, a wizualizacja danych odbywa się za pomocą programów do interpretacji metabolizmu komórkowego. Strategia ta generuje obszerną ilość danych na temat biologii komórek odpornościowych i bioenergetyki mitochondriów, umożliwiając naukowcom dostosowanie protokołu na wiele sposobów w celu zbadania metabolizmu limfocytów T CD8.

Zdolności metaboliczne glikolityczne i oksydacyjne można zmierzyć za pomocą testu funkcjonalnego mitochondriów, który ocenia te zdolności poprzez celowanie w komponenty łańcucha transportu elektronów w określonych punktach czasowych (Rysunek 2A). Do portów wkładu czujnika można wprowadzić różne schematy iniekcji w celu zmodyfikowania tradycyjnego testu i oceny ostrej stymulacji TCR (Rysunek 2B,C). Liczba komórek oraz stężenie leku dla różnych ty...

Bioenergetyka limfocytów T CD8 może być badana za pomocą testu stresu Mito. Metodologia ta może być wykorzystana do badania ostrego i przewlekłego programowania metabolicznego. Protokół ten opisuje podejścia do badania relacji między biologią receptora komórek T a analizą bioenergetyczną.

Pomiar funkcji mitochondrialnej naiwnych i efektorowych limfocytów T CD8

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

Nasze laboratorium bada tolerancję immunologiczną, nadzór immunologiczny i sygnalizację receptora antygenowego przez limfocyty. Odkryliśmy, że kwas lizofosfatydowy zaburza cytotoksyczność limfocytów T CD8, promując tolerancję obwodową poprzez zmniejszenie elastyczności metabolicznej w komórkach efektorowych. Wykorzystujemy technologie do pomiaru metabolizmu mitochondriów i pojemności energetycznych w limfocytach T CD8.Nasze laboratorium wykazało, że kwas lizofosfatydowy moduluje sprawność metaboliczną limfocytów T CD8 i może być ważnym wyznacznikiem fenotypów limfocytów T. Nasz opisany tutaj protokół ocenia funkcjonalny metabolizm i bioenergetykę sygnalizacji receptora limfocytów T w czasie rzeczywistym. Na początek dodaj 200 mikrolitrów wody destylowanej do każdej studzienki płytki użytkowej.Umieść wkład czujnika na górze płytki użytkowej, upewniając się, że końce wkładu czujnika są zanurzone, aby umożliwić prawidłowe nawodnienie. Inkubować płytkę użytkową z wkładem czujnika w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez co najmniej 10 godzin w inkubatorze bez dwutlenku węgla. Następnie napełnij 50-mililitrową stożkową rurkę 50 mililitrami roztworu kalibru i inkubuj.Następnego dnia przesuń talerz, aby usunąć wodę destylowaną. Nawodnij płytkę za pomocą 200 mikrolitrów kalibru. Wymień wkład czujnika na górze tabliczki użytkowej i umieść płytkę narzędziową z powrotem w inkubatorze bez dwutlenku węgla.Następnie użyj pipety wielokanałowej, aby ponownie zawiesić 10 milionów limfocytów T CD8 w 4,5 mililitra kompletnego podłoża. Odpipetować 90 mikrolitrów zawiesiny do każdego dołka, a następnie 90 mikrolitrów wyznaczonego podłoża na studzienkę podczas obróbki wstępnej. Odpipetować 180 mikrolitrów kompletnego podłoża do studzienek narożnych, aby zapobiec parowaniu.Następnie umieść mikropłytkę z limfocytami T CD8 w inkubatorze bez dwutlenku węgla. Umieść adaptery płytek bezpiecznie na wkładzie czujnika. Po inkubacji użyj adapterów płytek, aby odpipetować oligomycynę, FCCP, rotenon i antymycynę A do odpowiednich portów.Umieścić mikropłytkę w inkubatorze bez dwutlenku węgla na godzinę przed rozpoczęciem testu. Otwórz oprogramowanie i skalibruj analizator na 30 minut przed załadowaniem mikropłytki. Oznacz studzienki i przejrzyj schemat wtrysku w systemie oprogramowania.Następnie załaduj wkład czujnika do przyrządu podczas kalibracji. Przeprowadź test przez oprogramowanie. W przypadku dodatkowych wstrzyknięć należy zmodyfikować schematy wstrzykiwań, korzystając z dodatkowej komory do wstrzykiwania.Załaduj anty-CD3 i anty-CD28 do portu A wkładu czujnika. Załaduj oligomycynę do portu B, FCCP do portu C, a rotenon i antymycynę A do portu D. W celu indywidualnej stymulacji anty-CD3 i anty-CD28 pipetuj 20 mikrolitrów biotynylowanego anty-CD3 w dawce 10 mikrogramów na mililitr do wyznaczonych dołków wkładu czujnika. Odpipetować 20 mikrolitrów anty-CD28 i streptawidyny do wyznaczonych studzienek.W celu stymulacji anty-CD3 lub CD28 połącz i pipetuj 20 mikrolitrów biotynylowanego anty-CD3, anty-CD28 i streptawidyny do wyznaczonych studzienek. Przygotować studzienki kontrolne poprzez wstrzyknięcie pożywki. Do połączonej stymulacji anty-CD3 i CD-28 użyj stosunku jeden do jednego kulek do komórek i pipetuj pięć mikrolitrów kulek magnetycznych anty-CD3 CD-28 do wyznaczonych studzienek zawierających 200 000 komórek na studzienkę.Przygotować studzienki kontrolne z pożywką tylko do wstrzykiwań. Dostosuj trucizny w każdym porcie, aby osiągnąć końcowe stężenia po wstrzyknięciu. Upewnij się, że schemat wstrzykiwania odzwierciedla zaktualizowane punkty czasowe przed załadowaniem mikropłytki do urządzenia.Zaprogramuj oprogramowanie tak, aby uruchamiało test ostrej stymulacji TCR przez łącznie 140 minut. Zmodyfikuj schemat, aby uwzględnić 10 pomiarów punktów czasowych przed wstrzyknięciem oligomycyny. Ostra stymulacja TCR za pomocą biotynylowanego anty-CD3 i / lub anty-CD28 ze streptawidyną i stymulacją kulek magnetycznych anty-CD3 i / lub CD-28 skutkowała zwiększonym wskaźnikiem zużycia tlenu i wskaźnikiem zakwaszenia zewnątrzkomórkowego w porównaniu z kontrolami zawierającymi tylko pożywki.Stymulacja kulek magnetycznych anty-CD3 i CD-28 wykazała odpowiedzi metaboliczne porównywalne z biotynylowanymi iniekcjami anty-CD3 i CD-28 z podobnym wzrostem wskaźnika zużycia tlenu i szybkości zakwaszenia zewnątrzkomórkowego.

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Testy limfocytotoksyczności komórkowej (CML) mogą być wykorzystywane do badania odpowiedzi autoreaktywnych oraz mechanizmów śmierci komórek in vitro. Jednak dzięki zastosowaniu technik obrazowania konfokalnego żywych komórek z użyciem barwników fluorescencyjnych, typ i kinetyka śmierci komórkowej, a także wykorzystywane szlaki, mogą być badane w znacznie większych szczegółach.

Metody oceny śmierci komórek beta pośredniczonej przez cytotoksyczne limfocyty T

Ten film demonstruje ocenę funkcjonowania mitochondriów komórek śródbłonka naczyń mózgowych (CVE) za pomocą testu strumienia zewnątrzkomórkowego. Komórki CVE są siane na płytce do hodowli komórek strumienia zewnątrzkomórkowego. Czujniki strumienia zewnątrzkomórkowego są nawilżane przed załadowaniem i kalibracją do bioanalizatora. Płytka zawierająca komórki jest następnie ładowana do analizy.

Ocena funkcji mitochondriów w komórkach śródbłonka naczyń mózgowych

Ten protokół opisuje czuły, komórkowy test cytotoksyczności. Wyliczając spadek częstości żywych docelowych limfocytów T CD4 + w obecności rosnącej liczby efektorowych limfocytów T CD8 +, test ten pozwala na bezpośrednią ocenę aktywności cytolitycznej limfocytów T CD8 + specyficznych dla antygenu.

Test cytometrii przepływowej opartej na komórkach do pomiaru aktywności cytotoksycznej

Opisana tutaj jest metoda wykrywania i ilościowego oznaczania białek zewnętrznej błony mitochondrialnej poprzez immunoznakowanie mitochondriów wyizolowanych z tkanek gryzoni i analizę za pomocą cytometrii przepływowej. Metoda ta może być rozszerzona o ocenę funkcjonalnych aspektów subpopulacji mitochondrialnych.

Immunodetekcja białek błony zewnętrznej za pomocą cytometrii przepływowej izolowanych mitochondriów

Ten artykuł ilustruje potężną metodę ilościowego oznaczania mitochondriów lub lizosomów w żywych komórkach. Połączenie barwników specyficznych dla lizosomów lub mitochondriów z fluorescencyjnie sprzężonymi przeciwciałami przeciwko markerom powierzchniowym umożliwia ilościowe określenie tych organelli w mieszanych populacjach komórek, takich jak komórki pierwotne pobrane z próbek tkanek, przy użyciu wielobarwnej cytometrii przepływowej.

Kwantyfikacja mitochondriów i lizosomów w limfocytach T oparta na wielobarwnej cytometrii przepływowej

Opisujemy tutaj test zabijania in vivo oparty na cytometrii przepływowej, który umożliwia badanie dominacji immunologicznej w odpowiedziach cytotoksycznych limfocytów T (CTL) na modelowy antygen nowotworowy. Podajemy przykłady, w jaki sposób ten elegancki test może być wykorzystany do badań mechanistycznych i do testowania skuteczności leków.

Dostosowywanie testów cytotoksyczności in vivo do badania immunodominacji w odpowiedziach limfocytów T CD8 + specyficznych dla nowotworu

Tutaj opisujemy wiarygodną metodę pomiaru masy mitochondriów i potencjału błonowego w hodowanych ex vivo hematopoetycznych komórkach macierzystych i limfocytach T.

Pomiar masy mitochondrialnej i potencjału błonowego w hematopoetycznych komórkach macierzystych i limfocytach T metodą cytometrii przepływowej

Adaptacja metaboliczna jest fundamentalna dla limfocytów T, ponieważ decyduje o różnicowaniu, trwałości i cytotoksyczności. W tym artykule przedstawiono zoptymalizowany protokół monitorowania oddychania mitochondrialnego w ludzkich pierwotnych limfocytach T różnicowanych ex vivo cytokinami.

Monitorowanie oddychania mitochondrialnego w ludzkich pierwotnych limfocytach T różnicowanych cytokinami

Opisano procedurę badania dynamiki metabolizmu mitochondrialnego DNA (mtDNA) w komórkach przy użyciu formatu wielodołkowej płytki i automatycznego obrazowania immunofluorescencyjnego w celu wykrycia i ilościowego określenia syntezy i dystrybucji mtDNA. Można to dalej wykorzystać do zbadania wpływu różnych inhibitorów, stresów komórkowych i wyciszania genów na metabolizm mtDNA.

Wysokoprzepustowa, obrazowa kwantyfikacja syntezy i dystrybucji mitochondrialnego DNA

Ta technika opisuje efektywny przepływ pracy do wizualizacji i ilościowego pomiaru potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych w komórkach HeLa za pomocą obrazowania na żywo opartego na fluorescencji.

Kwantyfikacja potencjału błony mitochondrialnej i poziomów ponadtlenkowych na podstawie fluorescencji przy użyciu obrazowania na żywo w komórkach HeLa

Metody badania bioenergetyki mitochondriów pod fizjologicznie istotnymi stężeniami substratów w komórkach odpornościowych są ograniczone. Zapewniamy szczegółowy protokół, który wykorzystuje fluorespirometrię o wysokiej rozdzielczości do oceny zmian w odpowiedzi potencjału błony mitochondrialnej na zapotrzebowanie na energię w ludzkich limfocytach T, monocytach i obwodowych komórkach jednojądrzastych.

Fluorespirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny dynamicznych zmian potencjału błony mitochondrialnej w ludzkich komórkach odpornościowych

Poznaj metodę pomiaru funkcji mitochondrialnej w limfocytach T CD8 przy użyciu testu Mito Stress. Technika ta pozwala analizować bioenergetykę komórek i sygnalizację receptora TCR w czasie rzeczywistym.

Pomiar funkcji mitochondrialnej naiwnych i efektorowych limfocytów T CD8

Przeglądaj więcej filmów