Name: Trójwymiarowa morfogeneza w psich jelitach na chipie przy użyciu organoidów jelitowych pochodzących od pacjentów z nieswoistymi zapaleniami jelit (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Poznaj metodę trójwymiarowej morfogenezy jelitowej na chipie z wykorzystaniem psich organoidów pochodzących od pacjentów. To podejście umożliwia dynamiczne modelowanie in vitro bariery jelitowej i badań porównawczych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować WSU Small Animal Internal Medicine Service (Dr. Jillian Haines, Dr. Sarah Guess, Shelley Ensign LVT) oraz Koordynatorowi Badań Klinicznych WSU VTH Valorie Wiss za ich wsparcie w rekrutacji przypadków i pobieraniu próbek od naukowców-amatorów (dawców pacjentów). Prace te były częściowo wspierane przez Biuro Dyrektora Narodowych Instytutów Zdrowia (K01OD030515 i R21OD031903 do Y.M.A.) oraz Japońskie Towarzystwo Promocji Nauki za Granicą Program Wyzwań dla Młodych Badaczy (202280196 do I.N.). Rysunki 1A i 3A zostały utworzone za pomocą BioRender.com.

Establishment of 3D Morphogenesis in a Canine IBD Gut-on-a-Chip System

Autorzy nie mają do zadeklarowania żadnego konfliktu interesów.

Badanie to stanowi pionierską demonstrację zgodności organoidów jelitowych psów z opracowaniem modelu IBD Gut-on-a-Chip u psów. Integracja organoidów jelitowych i kultur jednowarstwowych pochodzących z organoidów w system mikroprzepływowy (tj. system Gut-on-a-Chip) przyczyniła się do dalszego rozwoju technologii, umożliwiając stworzenie modeli jelitowych in vitro , które ściśle naśladują dynamikę fizjologiczną i są bardziej reprezentatywne dla warunków biologicznych. W szczególności, ponieważ istnieje bardzo niewiele doniesień o hodowli Gut-on-a-Chip przy użyciu organoidów pochodzących z IBD u ludzi, obecne badanie z użyciem Gut-on-a-Chip pochodzącego z IBD u psów może dostarczyć wiodących informacji na temat badania IBD u ludzi.
Pomyślny rozwój morfogenezy 3D nabłonka jelitowego psów na Gut-on-a-Chip wymaga zwrócenia szczególnej uwagi na kilka krytycznych etapów. Po pierwsze, hydrofobowa powierzchnia kanałów mikroprzepływowych PDMS może utrudniać adhezję ECM i późniejsze przyłączanie komórek, co wymaga aktywacji powierzchniowej PDMS przed powlekaniem ECM i wysiewaniem komórek (patrz sekcja 1 protokołu). Aby uzyskać stabilną hodowlę jednowarstwową, usunięcie nadmiaru nieprzyłączonych komórek ma kluczowe znaczenie po przyłączeniu komórek (kroki protokołu 4.6-4.7). Dodatkowo, dynamiczna stymulacja, taka jak stały przepływ medium i perystaltyczny ruch próżni, jest niezbędna do morfogenezy 3D nabłonka jelitowego (krok protokołu 5.2). Ostrożne obchodzenie się z nim jest niezbędne, aby uniknąć pęcherzyków powietrza w mikrokanaliku podczas jakichkolwiek etapów hodowli Gut-on-a-Chip.
Jeśli napotkasz słabe wysiewanie komórek do Gut-on-a-Chip, może to być spowodowane niską liczbą komórek lub słabym przyczepieniem komórek. Aby rozwiązać problem z niską liczbą komórek, ważne jest, aby sprawdzić stan przygotowanych organoidów jelitowych, obserwując ich wzrost w Matrigel. Żywotność komórek można ocenić za pomocą barwienia błękitem trypanowym po dysocjacji komórek, aby upewnić się, że nie więcej niż 20% komórek jest martwych. Jeśli liczba żywotnych komórek jest niewystarczająca, można spróbować zoptymalizować warunki pożywki organoidowej. Inną możliwością jest niepełna dysocjacja organoidów, w wyniku której powstaje nadmiar grudek komórek większych niż 70 μm, które zostają uwięzione przez filtr. Aby rozwiązać ten problem, jedną z opcji jest wydłużenie czasu pipetowania podczas dysocjacji komórek. Alternatywnie, stożkowa rurka o pojemności 15 ml może być delikatnie mieszana co minutę podczas leczenia proteazą podobną do trypsyny. Słabe przyleganie komórek do Gut-on-a-Chip może być spowodowane niewłaściwą powłoką ECM. Podczas procesu powlekania zaleca się dokładne sprawdzenie obecności pęcherzyków powietrza i zapobieganie ich tworzeniu się poprzez delikatne dodawanie większej ilości roztworu powlekającego w razie potrzeby. Przeludnienie komórek i brak możliwości wypłukania nieprzyłączonych komórek może skutkować niewystarczającą początkową warstwą monowarstwową. W takim przypadku można zastosować łagodne pulsowanie podczas naciskania tłoka strzykawki. Te kroki rozwiązywania problemów mogą pomóc w identyfikowaniu i rozwiązywaniu problemów podczas procesu hodowli Gut-on-a-Chip.
Chociaż ta platforma Gut-on-a-Chip umożliwia tworzenie pofałdowanych warstw nabłonka 3D, zdajemy sobie sprawę z potrzeby dodatkowej złożoności biologicznej, aby w pełni odtworzyć mikrośrodowisko jelitowe. Kluczowe znaczenie ma rozważenie interakcji między komórkami nabłonkowymi i mezenchymalnymi, odkładania się ECM w celu regeneracji 3D oraz obecności cech kosmków kryptowych, które ustanawiają odpowiednią niszę komórek macierzystych. Komórki zrębu, takie jak fibroblasty, odgrywają istotną rolę w produkcji białek ECM i regulacji morfogenezy jelit 34,35,36. Włączenie komórek mezenchymalnych do tego modelu może potencjalnie poprawić zarówno morfogenezę, jak i efektywność przyłączania komórek. Warstwy śródbłonka, które obejmują naczynia włosowate i naczynia limfatyczne, odgrywają kluczową rolę w zarządzaniu transportem molekularnym i rekrutacją komórek odpornościowych37,38. Włączenie komórek odpornościowych pochodzących od pacjenta może mieć zasadnicze znaczenie w modelowaniu chorób jelit, ponieważ pozwala na wykazanie wzajemnych oddziaływań między odpornością wrodzoną i nabytą, a także ustanowienie odporności swoistej tkankowo39. Po zakończeniu morfogenezy 3D na Gut-on-a-Chip, pożywka do hodowli organoidów może zostać zmodyfikowana do pożywki różnicującej organoidy. Może to być realne podejście do indukowania dodatkowego różnicowania komórkowego, w zależności od celów eksperymentalnych.
Obrazowanie mikroarchitektury 3D in situ jest wyzwaniem ze względu na wymaganą dużą odległość roboczą, którą można pokonać za pomocą obiektywu długodystansowego. Dodatkowo, metody mikrofabrykacji i klejenia warstwa po warstwie utrudniają dostęp do górnych warstw w celu zbadania za pomocą SEM. W przypadku obecnej konstrukcji Gut-on-a-Chip potrzebna jest jedna pompa strzykawkowa na mikrourządzenie Gut-on-a-Chip, co zajmuje miejsce w inkubatorze CO2 i uniemożliwia eksperymenty na dużą skalę. Potrzebne są innowacje, aby zwiększyć skalowalność przyjaznej dla użytkownika platformy i badań przesiewowych o wysokiej przepustowości.
Te obecne protokoły pozwalają na spontaniczny rozwój warstw nabłonka 3D in vitro, przewyższając ograniczenia tradycyjnych organoidów 3D, monowarstw 2D i statycznych systemów hodowli mikrourządzeń. To dynamiczne mikrośrodowisko jelitowe in vitro można kontrolować, wprowadzając kohodowlę różnych typów komórek. Wcześniejsze badania dotyczyły metod manipulowania mikrośrodowiskiem Gut-on-a-Chip, w tym kokulturacji mikrobiomu jelitowego14,23 i obwodowych komórek jednojądrzastych30. To zrekonstruowane mikrośrodowisko ma wiele potencjalnych zastosowań, w tym testowanie leków, podstawowe badania mechanistyczne i modelowanie chorób. Zrekonstruowane mikrośrodowisko ma znaczny potencjał dla szerokiego zakresu zastosowań, takich jak testowanie leków 23,40,41 i modelowanie chorób 12,13,14,30, a także podstawowe badania mechanistyczne morfogenezy jelit 42. Różnorodne testy można przeprowadzić, zbierając supernatanty do oceny metabolitów43, zbierając komórki do badania genomowego 2,32 lub wizualnie badając komórki za pomocą barwników z żywych komórek lub utrwalenia do późniejszego obrazowania immunofluorescencyjnego 23,44.
W badaniu przedstawiono powtarzalny protokół opracowywania morfogenezy 3D warstw nabłonka jelitowego psów w platformie Gut-on-a-Chip. Uzyskana w ten sposób struktura nabłonka 3D zapewnia bardziej realistyczne odwzorowanie mikrośrodowiska jelitowego, co ma ogromny potencjał do zastosowań w różnych badaniach biomedycznych. Wykorzystując tę architekturę jelitową, możemy przeprowadzić więcej badań translacyjnych i potencjalnie przynieść obiecujące wyniki.

Morfogeneza nabłonka jelitowego została w dużej mierze zbadana za pomocą laboratoryjnych modeli zwierzęcych, które są kosztowne, czasochłonne i nie reprezentują dokładnie procesów rozwojowych człowieka1. Co więcej, konwencjonalne statyczne modele hodowli komórkowych 2D nie są w stanie naśladować złożonej organizacji przestrzennej architektury nabłonka 3D2. W związku z tym istnieje potrzeba opracowania protokołu do indukowania morfogenezy 3D in vitro przy użyciu komórek nabłonka jelitowego z modeli zwierzęcych istotnych dla człowieka, aby pogłębić naszą wiedzę na temat architektury nabłonka jelitowego.
Psy do towarzystwa rozwinęły anatomię jelit i skład mikrobiomu, które są niezwykle podobne do ludzi, ze względu na ich wspólne środowisko i dietę podczas udomowienia3. Oprócz tego podobieństwa, zarówno ludzie, jak i psy mają różne przewlekłe choroby, które uważa się za przypisywane zdrowiu jelit. U psów, podobnie jak u ludzi, mogą spontanicznie rozwijać się choroby przewlekłe, takie jak otyłość, dysfunkcje poznawcze, cukrzyca, nieswoiste zapalenie jelit (IBD) i gruczolakorak jelita grubego4,5,6,7,8,9,10. Pomimo rozwoju i wykorzystania ludzkich i mysich komórek nabłonkowych w poprzednich badaniach Gut-on-a-Chip2,11,12,13,14, nabłonek jelitowy psów nie był do tej pory wykorzystywany. Nasze nowatorskie podejście, wykorzystujące nabłonek organoidów jelitowych psów w dynamicznym systemie hodowli z morfogenezą nabłonka 3D, ma znaczące implikacje zarówno dla medycyny psów, jak i ludzi.
Ostatnie postępy w hodowli organoidów jelitowych doprowadziły do powstania hodowli organoidów jelitowych u psów15. Ten system hodowli polega na hodowli jelitowych komórek macierzystych w określonym kondycjonowaniu morfogenu, w wyniku czego powstaje model 3D o właściwościach samoodnawiających się pochodzących z dorosłych komórek macierzystych16. Jednak przeprowadzanie testów transportu lub kokultur gospodarz-mikrobiom stwarza trudności z tym modelem 3D ze względu na zamknięty charakter światła jelitowego17. Aby rozwiązać ten problem, naukowcy stworzyli monowarstwę 2D pochodzącą z organoidów jelitowych, która pozwala na naświetlenie powierzchni światła18,19. Jednak zarówno organoidy 3D, jak i monowarstwy 2D są utrzymywane w warunkach statycznych, które nie odzwierciedlają dokładnie biomechaniki mikrośrodowiska jelitowego in vivo. Połączenie technologii organoidów psów pochodzących od pacjentów z morfogenezą 3D in vitro stwarza okazję do badań translacyjnych nad przewlekłymi chorobami wieloczynnikowymi. Podejście to umożliwia naukowcom opracowanie skuteczniejszych metod leczenia przynoszących korzyści zarówno ludziom, jak i psom oraz dalszy postęp badań translacyjnych, zgodnie z inicjatywą One Health, która jest podejściem opartym na współpracy, które uznaje wzajemne powiązania między zdrowiem ludzi, zwierząt i środowiska. Promuje interdyscyplinarną współpracę w celu sprostania złożonym wyzwaniom zdrowotnym i osiągnięcia optymalnych wyników zdrowotnych dla wszystkich. Poprzez zrozumienie współzależności między ludźmi, zwierzętami i ekosystemami, inicjatywa ma na celu ograniczenie ryzyka związanego z pojawiającymi się chorobami zakaźnymi, degradacją środowiska i innymi wspólnymi problemami zdrowotnymi20,21,22.
Ten protokół przedstawia kompleksowe metody hodowli komórek nabłonka jelitowego psów uzyskanych z organoidów pacjentów na mikrourządzeniu Gut-on-a-Chip z porowatą membraną na bazie polidimetylosiloksanu (PDMS). Ustalenie morfogenezy nabłonka 3D poprzez integrację organoidów jelitowych psów i tej technologii Gut-on-a-Chip umożliwia nam badanie, w jaki sposób jelito rozwija się i utrzymuje swoją organizację komórkową i niszę komórek macierzystych. Platforma ta oferuje cenną okazję do zbadania wpływu społeczności mikrobiomu na zdrowie jelit i zrozumienia, w jaki sposób te społeczności generują metabolity drobnoustrojów, które przyczyniają się do patofizjologii jelit14,23. Postępy te można teraz rozszerzyć na próbki jelit psów, dając naukowcom możliwość zbadania skomplikowanego związku między mikrobiomem jelitowym a fizjologią gospodarza. Otwiera to możliwości uzyskania cennych informacji na temat mechanizmów leżących u podstaw patofizjologii jelit i zrozumienia potencjalnej roli metabolitów drobnoustrojów zarówno w zdrowiu psów, jak i ludzi, a także w różnych stanach chorobowych. Protokół zastosowany w psim Gut-on-a-Chip jest powtarzalny, co czyni go odpowiednim modelem eksperymentalnym dla medycyny porównawczej, ponieważ takie podejście umożliwia badanie interakcji gospodarz-mikrobiom, infekcji patogenami i efektów terapeutycznych opartych na probiotykach zarówno u psów, jak i ludzi.

<table><tbody><tr><td>Organoid podłoże podstawowe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>2 mM, substytut glutaminy</td></tr><tr><td>1 M HEPES</td><td>VWR Life Science</td><td>J848-500ML</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>100x penicylina&ndash; streptomycyna</td><td>Corning</td><td>MT30009CI</td><td>1x</td></tr><tr><td>Organoidy i organoidy pożywka</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A-83-01&nbsp;</td><td>PeproTech&nbsp;</td><td>9094360</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>suplement B27&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>1x</td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Reprocell</td><td>04-0004-base</td><td>2.5 &micro; Komórki M</td></tr><tr><td>HEK293 zaprojektowane do wydzielania Noggin&nbsp;</td><td>Baylor College of Medicine Mysia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech&nbsp;</td><td>315-09-1MG</td><td>50 ng/ml</td></tr><tr><td>Murine Wnt-3a</td><td>PeproTech&nbsp;</td><td>315-20-10UG</td><td>100 ng/ml</td></tr><tr><td>N-acetylo-L-cysteina</td><td>Sigma</td><td>A9165-25G</td><td>1 mM</td></tr><tr><td>N2 MAX Suplement prasowy&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>17502-048</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>Nikotynamid</td><td>Sigma</td><td>N0636-100G</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Kondycjonowany Noggin Medium</td><td>NA</td><td></td><td>NA 10% vol/vol&nbsp;</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>InvivoGen</td><td>ant-pm-1</td><td>100 &mikro; g/ml</td></tr><tr><td>Komórki R-spondyny1 (Rspo1)</td><td>Trevigen</td><td>3710-001-01</td><td>Komórki Rspo1</td></tr><tr><td>R-Spondin-1 Kondycjonowane podłoże</td><td>NA</td><td>NA</td><td>20% obj./obj."</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7067-25MG</td><td>&nbsp; 10 &mikro; M</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>StemCellTechnologies</td><td>72308</td><td>10 i mikro; M</td></tr><tr><td>[Leu15 ]-Gastrin I człowiek&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9145-.5MG</td><td>10 nM</td></tr><tr><td>Odczynniki</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% roztwór paraformaldehydu</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ19943K2</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A22287</td><td>x250 rozcieńczenie</td></tr><tr><td>Anti-Rabbit IgG H& L oznaczone Alexa Fluor 555</td><td>Abcam</td><td>ab150078</td><td>x1,000 rozcieńczenie</td></tr><tr><td>Przeciwciało poliklonalne anty-ZO-1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>61-7300</td><td>x50 rozcieńczenie</td></tr><tr><td>Roztwór do odzyskiwania komórek</td><td>Corning</td><td>354253</td><td></td></tr><tr><td>Kolagen I, Ogon Szczura 3 mg / ml</td><td>Gibco</td><td>A10483-01</td><td></td></tr><tr><td>Diamidino-2-fenyloindol (DAPI)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td>rozcieńczenie x1 000</td></tr><tr><td>EMS Aldehyd glutarowy Wodny 50%</td> <td>mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>16320</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Matrix</td><td>Corning</td><td>356255</td><td></td></tr><tr><td>roztwór poli(etyleniminy)</td><td>Sigma</td><td>408700-250ML</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12604-021</td><td></td></tr><tr><td>Materiały i sprzęt</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24-well Płytki hodowlane</td><td>Multimetr przemysłowy Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>87 V</td><td>Wirówka Fluke Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inkubator CO2</td><td>Eppendorf</td><td></td> 5910R Mikroskop fluorescencyjny Eppendorf C170i <td></td></tr><tr><td>DMi8 Suszarka sucha</td><td>Leica microsystems</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> Fisher Scientific 15-103-0519 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlexCell FX-5000 System napinania</td><td>Flexcell International Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop z odwróconym kontrastem fazowym</td><td>Leica microsystems</td><td>DMi1</td><td></td></tr><tr><td>SP8-X odwrócony mikroskop konfokalny</td><td>Leica microsystems</td><td>SP8-X</td><td></td></tr><tr><td>Pompa strzykawkowa</td><td>Braintree Model</td><td>naukowy nr. BS-8000 Strzykawka 120 V</td><td></td></tr><tr><td>, sterylna 3 ml</td><td>BD Biosciences</td><td>14-823-435</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki, 1 ml sterylna</td><td>BD Biosciences</td><td>14-823-434</td><td></td></tr><tr><td>Generator UV/ozonu</td><td>Jelight Company</td><td>model nr 30</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LAS X oprogramowanie do obrazowania&nbsp;</td><td>Mikrosystemy</td><td></td><td></td> Leica</tr></tbody></table>

trójwymiarowa morfogeneza w psich jelitach na chipie przy użyciu organoidów jelitowych pochodzących od pacjentów z nieswoistymi zapaleniami jelit

Three-Dimensional Morphogenesis in Canine Gut-on-a-Chip Using Intestinal Organoids Derived from Inflammatory Bowel Disease Patients

Jelita psów mają podobieństwa w anatomii, mikrobiologii i fizjologii do ludzkich, a psy naturalnie rozwijają spontaniczne zaburzenia jelitowe podobne do ludzkich. Przezwyciężenie nieodłącznego ograniczenia trójwymiarowych (3D) organoidów w dostępie do wierzchołkowej powierzchni nabłonka jelitowego doprowadziło do powstania dwuwymiarowych (2D) kultur jednowarstwowych, które odsłaniają dostępną powierzchnię światła za pomocą komórek pochodzących z organoidów. Integracja tych organoidów i jednowarstwowych kultur pochodzących z organoidów w mikroprzepływowy system Gut-on-a-Chip przyczyniła się do dalszego rozwoju technologii, umożliwiając opracowanie bardziej fizjologicznie istotnych dynamicznych modeli jelitowych in vitro.
W tym badaniu prezentujemy protokół generowania morfogenezy 3D nabłonka jelitowego psów przy użyciu pierwotnych próbek tkanki jelitowej pobranych od psów dotkniętych nieswoistym zapaleniem jelit (IBD). Przedstawiamy również protokół generowania i utrzymywania kultur jednowarstwowych 2D i systemów intestine-on-a-chip z wykorzystaniem komórek pochodzących z organoidów jelitowych 3D. Protokoły przedstawione w tym badaniu służą jako podstawowe ramy do ustanowienia mikroprzepływowego systemu Gut-on-a-Chip zaprojektowanego specjalnie dla psów. Kładąc podwaliny pod to innowacyjne podejście, dążymy do rozszerzenia zastosowania tych technik w badaniach biomedycznych i translacyjnych, zgodnie z zasadami inicjatywy "Jedno zdrowie". Wykorzystując to podejście, możemy opracować bardziej fizjologicznie istotne dynamiczne modele in vitro do badania fizjologii jelit zarówno u psów, jak i ludzi. Ma to znaczące implikacje dla zastosowań biomedycznych i farmaceutycznych, ponieważ może pomóc w opracowaniu skuteczniejszych metod leczenia chorób jelit u obu gatunków.

Niniejszy protokół pozwala na niezawodne ułatwienie spontanicznego rozwoju 3D morfogenezy jelitowej w systemie Gut-on-a-Chip. Podejście to wykorzystuje psie komórki nabłonka jelitowego uzyskane z organoidów jelitowych pochodzących od psów cierpiących na nieswoiste zapalenia jelit (IBD) (Rysunek 1B). Po 6-9 dniach przepływu medium w całym mikrokanale można zaobserwować sporadyczne grupowanie się 3D morfogenezy psich komórek nabłonka jelitowego (Rysunek 3C). Zmiany morfologiczne te można monitorować przy użyciu technik kontrastu fazowego. W niniejszym badaniu wykorzystano organoidy pochodzące od dwóch psów zdiagnozowanych z IBD. Co istotne, pomyślną 3D morfogenezę zaobserwowano w dwóch powtórzeniach biologicznych, z których każde wykonano w dwóch powtórzeniach technicznych. Wyniki tego badania stanowią podstawę do przyszłych analiz z wykorzystaniem organoidów jelitowych pochodzących od innych psich dawców. Wyniki te demonstrują potencjalną przydatność i powtarzalność naszego podejścia eksperymentalnego, które było wcześniej raportowane dla próbek ludzkich. Odkrycia te stanowią dalsze potwierdzenie, że technologia Gut-on-a-Chip ma zastosowanie w przypadku psich komórek nabłonka jelitowego, co było wcześniej raportowane w badaniach z wykorzystaniem ludzkich komórek nabłonka jelitowego2.
Niniejszy protokół wykazał, że barwienie immunofluorescencyjne może być wykorzystane do oceny struktury 3D monowarstw pochodzących z organoidów, które utworzyły struktury przypominające kosmki w chipach mikrofluidycznych, przy użyciu konwencjonalnej mikroskopii fluorescencyjnej (Rycina 4 A,B). Protokół ten można dostosować w celu walidacji zróżnicowanych i zorganizowanych przestrzennie fenotypów komórkowych poprzez barwienie immunofluorescencyjne. Wizualizacja morfogenezy 3D w układzie Gut-on-a-Chip stwarza doskonałą okazję do badania odpowiedzi gospodarza podczas różnych interakcji patologicznych14,23,31. W połączeniu z komórkami nabłonkowymi pochodzącymi od pacjentów-dawców, jak wcześniej opisano w przypadku ludzi, technologia ta może być wykorzystana do konstruowania spersonalizowanych modeli chorób jelit13. Dzięki integracji obrazowania immunofluorescencyjnego z ukierunkowanymi technikami wizualizacji RNA, takimi jak fluorescencyjna hybrydyzacja in situ, możliwe jest przeprowadzenie analizy wizualnej transkryptomów i proteomów gospodarza w systemie Gut-on-a-Chip.
Zachowanie integralności błony jelitowej jest niezbędne dla utrzymania homeostazy jelit, a platforma Gut-on-a-Chip zapewnia istotną przewagę, umożliwiając precyzyjne monitorowanie i kwantyfikację tej kluczowej funkcji. Pomiar TEER z wykorzystaniem technologii Gut-on-a-Chip oferuje szereg korzyści. Przykładowo, w poprzednich badaniach z sukcesem oceniano TEER podczas kokultywacji komórek jelitowych z bakteriami niepatogennymi i probiotycznymi32, a także w warunkach zespołu nieszczelnego jelita23. Pozwala to badaczom analizować wpływ różnych czynników na funkcję bariery jelitowej oraz identyfikować potencjalne interwencje wspierające zdrowie jelit.
<img alt="Rysunek 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65720/65720fig01.jpg" /> 
Rysunek 1: Utworzenie modelu Gut-on-a-Chip dla psiej choroby zapalnej jelit (IBD) pochodzącej od pacjenta. (A) Integracja pochodzących od pacjenta organoidów jelitowych z platformą Gut-on-a-Chip. Można przeprowadzić biopsję endoskopową w celu wyizolowania komórek krypt jelitowych do opracowania specyficznych dla dawcy organoidów jelitowych. Komórki nabłonkowe mogą zostać rozdzielone na pojedyncze komórki z organoidów, a następnie wysiane do Gut-on-a-Chip opartego na PDMS i hodowane w unikalnym dynamicznym mikrośrodowisku. (B) Reprezentatywne obrazy kolonoidów od psa z IBD. Pasek skali = 100 µm. (C) Ten schemat ilustruje urządzenie Gut-on-a-Chip składające się z porowatej membrany umieszczonej pomiędzy górnym a dolnym mikrokanałem. Górny mikrokanał jest zaznaczony niebieskim obszarem, natomiast dolny mikrokanał jest zaznaczony czerwonym obszarem. Po każdej stronie mikrokanału znajdują się komory próżniowe, które odkształcają porowatą membranę, aby naśladować ruchy perystaltyczne24. (D) Układ psiego Gut-on-a-Chip obejmuje urządzenie Gut-on-a-Chip oparte na PDMS, zmontowane z rurkami i umieszczone na szkiełku nakrywkowym2,24. Rurka obejściowa jest kluczowa, aby uniknąć wzrostu ciśnienia w mikrokanale podczas obsługi (np. podczas podłączania strzykawek). Do zaciskania rurek używa się klipsów biurowych. Materiały wrażliwe na objętość mogą być wprowadzane przez otwarte otwory górnego lub dolnego wylotu. Pożywkę do hodowli organoidów można wprowadzać, podłączając strzykawki do tępych igieł, a przepływ odbywa się przez górny i dolny wlot. Skróty: IBD = inflammatory bowel disease (choroba zapalna jelit); PDMS = polydimethylsiloxane (polidimetylosiloksan). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65720/65720fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Rysunek 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65720/65720fig02.jpg" /> 
Rysunek 2: Tworzenie struktur przypominających kosmki w psim modelu Gut-on-a-Chip dla IBD. Rozdzielone komórki nabłonkowe zasiano w urządzeniu Gut-on-a-Chip powleczonym ECM. Po przytwierdzeniu się rozdzielonych komórek do membrany PDMS, zainicjowano przepływ apikalny na okres 3 dni (D0-D3). Po utworzeniu się konfluentnej monowarstwy 2D (D3), zainicjowano przepływ basolateralny z częstym rozciąganiem (Stretching, AP, and BL Flow). Po 2-3 dniach podwójnego przepływu i rozciągania membrany, monowarstwa 2D zaczyna wykazywać morfogenezę 3D, a struktury przypominające kosmki tworzą się po 9 dniach hodowli (3D morphogenesis, D9-D12). Skróty: ECM = macierz pozakomórkowa; PDMS = polidimetylosiloksan; AP = apikalny; BL = basolateralny. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65720/65720fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Rysunek 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65720/65720fig03.jpg" /> 
Rysunek 3: Wysiew psich organoidów jelitowych i morfogeneza 3D w układzie Gut-on-a-Chip. (A) Etapy eksperymentalne aktywacji powierzchni membrany porowatej w układzie Gut-on-a-Chip opartym na PDMS. Zastosowanie obróbki UV/Ozon, PEI oraz GA w połączeniu z nimi ułatwia sieciowanie amin obecnych w roztworach ECM. Proces ten prowadzi do stabilnej immobilizacji białek ECM na membranie porowatej. (B) Obrazy w kontraście fazowym przedstawiają morfologię komórek bezpośrednio po wysiewie (lewo) oraz 3-5 h po wysiewie (prawo). Membrana porowata po 3 h od wysiewu wykazuje cieńsze i ciemniejsze obszary, w których przytwierdziły się pojedyncze komórki, co obrazuje proces adhezji. (C) Obrazy w kontraście fazowym przedstawiają morfogenezę 3D monowarstw jelitowych w systemie Gut-on-a-Chip. Monowarstwy te pochodziły od psów chorych na IBD, a komórki organoidowe były hodowane przez okres 12 dni w warunkach dynamicznych, obejmujących przepływ cieczy i ruchy rozciągające. Paski skali = 50 µm (B,C). Skróty: IBD = nieswoiste zapalne choroby jelit; ECM = macierz zewnątrzkomórkowa; PDMS = polidimetylosiloksan; PEI = polietylenoimina; GA = glutaraldehyd. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65720/65720fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Rysunek 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65720/65720fig04.jpg" /> 
Rysunek 4: Ocena rozwoju morfologicznego 3D w psim modelu Gut-on-a-Chip pochodzącym od pacjenta. (A) Obrazowanie immunofluorescencyjne psiego modelu Gut-on-a-Chip z IBD, przedstawiające widok z góry w pełni rozwiniętego nabłonka 3D po 12 dniach hodowli, ocenione za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Białko połączeń ścisłych (ZO-1) jest widoczne na żółto; błona rąbka szczoteczkowego (F-actin) pojawia się na czerwono; a jądra komórkowe są barwione DAPI i pojawiają się na niebiesko. (B) Obrazowanie immunofluorescencyjne psiego modelu Gut-on-a-Chip z IBD przy użyciu mikroskopu konfokalnego z obiektywem do długich odległości. Zgodnie ze schematem, przedstawiono obraz fluorescencyjny przekroju struktury przypominającej kosmek w pełni rozwiniętego nabłonka 3D po 12 dniach hodowli. Ponadto, obrazowanie Z-stack pokazuje widok boczny nabłonka 3D, co ujawnia formowanie się struktur przypominających kosmki. Błona rąbka szczoteczkowego (F-actin) pojawia się na czerwono, a jądra komórkowe są barwione DAPI i pojawiają się na niebiesko. (C) Funkcję bariery jelitowej oceniono i zmierzono za pomocą TEER w psich modelach Gut-on-a-Chip pochodzących od pacjenta. Stabilne wartości TEER osiągnięto w 5 dniu hodowli w modelu Gut-on-a-Chip. Słupki błędów przedstawiają SEM pomiarów. Wartość TEER była mierzona w dwóch powtórzeniach biologicznych z jednym powtórzeniem technicznym. Paski skali = 50 µm (A), 25 µm (B). Skróty: IBD = nieswoiste zapalne choroby jelit; DAPI = 4',6-diamidino-2-fenyloindol; TEER = transepitelialna oporność elektryczna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65720/65720fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
Rysunek uzupełniający S1: Charakterystyka poliklonalnego przeciwciała anty-ZO-1 w monowarstwach pochodzących z psich kolonoidów oraz na urządzeniach Gut-on-a-Chip. (A) Barwienie immunofluorescencyjne ZO-1 na żółto oraz F-aktyny na czerwono wraz z obrazem nałożonym. Pasek skali = 25 µm. (B) Wizualizacja immunofluorescencyjna ZO-1 na żółto w układach „Leaky Gut Chips” została przeprowadzona w różnych warunkach, w tym przy stymulacji bakteriami probiotycznymi (LGG + cytokiny lub VSL#3 + cytokiny) oraz w kontrolach wolnych od drobnoustrojów bez stymulacji probiotykami (cytokiny). Pasek skali = 50 µm. Rysunek został powielony z pracy Min et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65720/FigureS1.zip" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.</a>
Tabela uzupełniająca S1: Podsumowanie informacji o dawcach tkanek. Tabela podsumowująca wiek, płeć, rasę, ocenę histopatologiczną oraz wynik wskaźnika aktywności IBD u psów (CIBDAI) dawców. CIBDAI jest numerycznym systemem punktacji stosowanym do oceny stopnia nasilenia klinicznego IBD u psów33. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65720/65720_SupplementTable.JoVE.Nagao (2).xlsx" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.</a>

Integracja organoidów jelitowych psów i systemu mikroprzepływowego Gut-on-a-Chip oferuje odpowiednie modele translacyjne dla chorób jelit u ludzi. Przedstawione protokoły pozwalają na morfogenezę 3D i dynamiczne modelowanie jelit in vitro, pomagając w opracowaniu skutecznych metod leczenia chorób jelit u psów i ludzi z One Health.

Trójwymiarowa morfogeneza w psich jelitach na chipie przy użyciu organoidów jelitowych pochodzących od pacjentów z nieswoistymi zapaleniami jelit

Canine intestines possess similarities in anatomy, microbiology, and physiology to those of humans, and dogs naturally develop spontaneous intestinal ...

Naszym celem badawczym jest stworzenie metody hodowli struktur 3D z wykorzystaniem komórek jelitowych zwierząt podobnych do ludzi, a konkretnie psów. Morfogeneza komórek jelitowych została w dużej mierze zbadana za pomocą laboratoryjnych modeli zwierzęcych, które są kosztowne, czasochłonne i nie odzwierciedlają dokładnie procesów rozwojowych człowieka. Co więcej, konwencjonalne statyczne modele hodowli komórkowych 2D nie są w stanie naśladować złożonej organizacji przestrzennej architektury 3D abSerial.Osiągnięcie przyłączenia pojedynczych komórek pochodzących z organoidów jelitowych do powierzchni PDMS pokrytej ECM stanowiło poważne wyzwanie. Jest to kluczowy krok w kierunku sprostania temu wyzwaniu, zarówno poprzez zapewnienie jednolitej powłoki ECM poprzez aktywację powierzchni, jak i umożliwienie jej wyschnięcia przez noc. Integracja technologii organoidów psów pochodzących od pacjentów z morfogenezą 3D in vitro oferuje obiecującą drogę do prowadzenia badań translacyjnych nad przewlekłymi chorobami wieloczynnikowymi, zgodnie z inicjatywą One Health.Protokół IBD u psów, Gut-on-a-Chip, oferuje powtarzalny model dla medycyny porównawczej, umożliwiając badania nad morfogenezą jelit, interakcjami gospodarz-mikrobiom, infekcjami, badaniami przesiewowymi leków i probiotyków oraz ma zastosowanie międzygatunkowe. Na początek umieść urządzenie Gut-on-a-Chip w suchym piekarniku ustawionym na 60 stopni Celsjusza na 30 minut, aby wyeliminować wilgoć. Następnie za pomocą generatora ozonu UV należy wystawić urządzenie na działanie promieniowania UV i ozonu przez 60 minut.Zabezpiecz rurki wlotowe, obejściowe i wylotowe górnego mikrokanału za pomocą zacisków do segregatorów. Clamp rurkę doprowadzającą do dolnego mikrokanału, a następnie odłącz rurkę wylotową dolnego mikrokanału. Upewnij się, że rurka obejściowa dolnego mikrokanału pozostaje otwarta.Za pomocą mikropipety P100 dodaj 100 mikrolitrów 1% roztworu polietylenoiminy przez otwór wylotowy dolnego mikrokanału. Podłącz ponownie rurkę wylotową dolnego mikrokanału. Zabezpiecz obejście wlotowe i rurkę wylotową dolnego mikrokanału, a następnie rurkę wlotową górnego mikrokanału za pomocą zacisków do segregatorów.Teraz odłącz rurkę wylotową górnego mikrokanału, upewniając się, że rurka obejściowa pozostaje otwarta. Następnie dodaj 100 mikrolitrów 1% roztworu polietylenoiminy przez otwór wylotowy górnego mikrokanału. Ponownie podłącz rurkę wylotową górnego mikrokanału i pozwól urządzeniu inkubować go w temperaturze pokojowej przez 10 minut.Powtórz procedurę z 0,1% aldehydem glutarowym, a następnie z wodą dejonizowaną, aby usunąć nadmiar roztworu aktywującego powierzchnię, wysusz frytek przez noc w temperaturze 60 stopni Celsjusza w piekarniku. Następnego dnia wyjmij frytki z piekarnika i pozwól mu ostygnąć w komorze bezpieczeństwa biologicznego przez 10 minut. Zabezpiecz rurki wlotowe, obejściowe i wylotowe górnego mikrokanału, w tym rurkę wlotową dolnego mikrokanału za pomocą zacisków do segregatorów.Odłącz rurkę wylotową dolnego mikrokanału. Dodaj 20 mikrolitrów macierzy zewnątrzkomórkowej lub mieszaniny ECM przez otwór wylotowy dolnego mikrokanału. Następnie ponownie zamocuj rurkę wylotową dolnego mikrokanału.Zabezpiecz rurki wlotowe, obejściowe i wylotowe dolnego mikrokanału, w tym rurkę wlotową górnego mikrokanału, za pomocą zacisków do segregatorów. Po odłączeniu rurki wylotowej górnego mikrokanału, dodaj 20 mikrolitrów mieszaniny VCM przez otwór wylotowy górnego mikrokanału. Ponownie zamocuj rurkę wylotową górnego mikrokanału, a następnie wyjmij zacisk spinacza z rurki wylotowej dolnego kanału, upewniając się, że obie rurki wylotowe są otwarte.Umieść chip w inkubatorze z 5% dwutlenkiem węgla o temperaturze 37 stopni Celsjusza na godzinę. Na początek przygotuj organoidową pożywkę hodowlaną zawierającą 10 mikromolowych Y-27632 i 2,5 mikromolowych CHIR99021. Po nałożeniu ECM na Gut-on-a-Chip, odłącz rurkę wylotową od górnego mikrokanału, pozostawiając otwartą rurkę obejściową górnego mikrokanału.Za pomocą spinacza do segregatora zabezpiecz zarówno wlot, jak i wylot dolnego mikrokanału. Za pomocą mikropipety P100 dodaj 20 mikrolitrów zawiesiny komórek do otworu wylotowego górnego mikrokanału. Zabezpiecz rurkę obejściową i wlotową górnego mikrokanału za pomocą zacisków do segregatorów.Ponownie przymocuj rurkę wylotową do otworu wylotowego górnego mikrokanału, upewniając się, że rurka pozostaje otwarta przez cały proces. Po zakończeniu stopniowo zabezpiecz rurkę wylotową górnego mikrokanału za pomocą spinacza do segregatora Następnie pod mikroskopem sprawdź, czy komórki są równomiernie rozmieszczone w górnym mikrokanaliku. Umieść urządzenie Gut-on-a-Chip w nawilżonym inkubatorze dwutlenku węgla w temperaturze 37 stopni Celsjusza.Podłączyć strzykawkę podłączoną do górnego mikrokanalika chipa do pompy strzykawkowej umieszczonej w inkubatorze. Ustaw natężenie przepływu na 30 mikrolitrów na godzinę i rozpocznij ciągły przepływ medium osadzającego dla górnego mikrokanału. W tym okresie należy pozostawić dolny mikrokanał zaciśnięty.Dzień po wysiewie należy zastąpić pożywkę organoidową pożywką zawierającą tylko A8301. Po ustaleniu monowarstwy dla górnego mikrokanału, zainicjuj ciągły przepływ medium osadzającego do dolnego mikrokanału. Następnie wprowadź pożywkę do hodowli organoidów zarówno do górnych, jak i dolnych mikrokanałów, aby zainicjować rozwój trójwymiarowej morfogenezy w chipie.Zwiększ natężenie przepływu do 50 mikrolitrów na godzinę, aby osiągnąć czysty stres 0,02 obiadu na centymetr kwadratowy w konstrukcji Gut-on-a-Chip. Korzystając z bioreaktora regulowanego komputerowo, zastosuj 10% cykliczne odkształcenie i częstotliwość 0,15 Hz do komórek hodowanych na urządzeniu Gut-on-a-Chip przez dwa do trzech dni, aby ustalić trójwymiarową morfogenezę. Po sześciu do dziewięciu dniach średniego przepływu zaobserwowano sporadyczne grupowanie trójwymiarowej morfogenezy komórek nabłonka jelitowego psów w całym mikrokanale.Barwienie immunofluorescencyjne pozwoliło ocenić trójwymiarową strukturę monowarstw pochodzących z organoidów i struktur przypominających kosmki w chipach mikroprzepływowych. Funkcja bariery jelitowej mierzona za pomocą teer wykazała stabilne wartości teer w piątym dniu hodowli.

three-dimensional-morphogenesis-canine-gut-on-chip-using-intestinal

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten protokół pozwala na różnicowanie ludzkich komórek pluripotencjalnych w organoidy jelitowe. Protokół naśladuje normalny rozwój człowieka poprzez różnicowanie komórek w populację ostatecznej endodermy, endodermy jelita tylnego, a następnie nabłonka jelitowego. To sprawia, że protokół nadaje się zarówno do badania rozwoju jelit, jak i zastosowań modelowania chorób.

Generowanie organoidów jelitowych pochodzących z hiPSC do zastosowań w modelowaniu rozwoju i choroby

Opisano eksperymentalne metody pobierania dorosłych komórek macierzystych z tkanek jelitowych i wątrobowych psów w celu stworzenia kultur organoidowych 3D. Ponadto omówiono techniki laboratoryjne zapewniające stały wzrost i standardowe procedury operacyjne w celu zbioru, biobanku i ożywienia kultur organoidów jelitowych i wątrobowych psów.

Standaryzacja i utrzymanie 3D kultur organoidowych wątroby i jelit psów do wykorzystania w badaniach biomedycznych

Tutaj prezentujemy protokół opisujący hodowlę organoidów jelitowych psów w dwukomorowym, przepuszczalnym systemie wsparcia. Opisano wysiewanie organoidów w przepuszczalnych podporach, utrzymanie monowarstwy i późniejsze eksperymenty z przepuszczalnością leków.

Organoidy jelitowe psów w dwukomorowym przepuszczalnym systemie nośnym

Organoidy jelitowe pochodzące z biopsji oraz technologie organ-on-a-chips są połączone w platformę mikrofizjologiczną, aby podsumować funkcjonalność jelit specyficzną dla regionu.

Połączenie ludzkich organoidów i technologii Organ-on-A-Chip w celu modelowania funkcjonalności specyficznej dla regionu jelitowego

Nasz szczegółowy protokół opisuje tworzenie i używanie zaawansowanego modelu jelita na chipie, który symuluje ludzką błonę śluzową jelit ze strukturami 3D i różnymi typami komórek, umożliwiając dogłębną analizę odpowiedzi immunologicznych i funkcji komórkowych w odpowiedzi na kolonizację mikrobiologiczną.

Immunokompetentny model jelita na chipie do analizy odpowiedzi immunologicznej błony śluzowej jelit

To badanie przedstawia protokół generowania monowarstw 2D organoidów wieprzowych pochodzących z jelita cienkiego i grubego. Wzrost tych monowarstw charakteryzuje się rosnącymi wartościami TEER, co wskazuje na solidną integralność nabłonka. Dodatkowo, te monowarstwy wykazują fizjologiczne reakcje wydzielnicze w eksperymentach w komorze Ussing po zastosowaniu forskoliny.

Dwuwymiarowe organoidy jelitowe świń odzwierciedlające fizjologiczne właściwości rodzimego jelita

Tutaj opisujemy protokół generowania organoidów wierzchołkowych z jelit ze standardowych kultur organoidów osadzonych w matrycy. Przedstawiono również późniejsze włączenie EdU do aktywnie proliferujących komórek i półautomatyczną kwantyfikację komórek EdU-dodatnich.

Wytwarzanie wierzchołkowych organoidów jelitowych i ocena szybkości proliferacji organoidów za pomocą znakowania EdU

Omówiono metodologię gromadzenia gęstych danych potencjałów wywołanych podczas wykonywania przez pacjentów z chorobą Alzheimera zadania z pamięcią rozpoznawczą. Protokół ten obejmuje przygotowanie badanych, zapewnienie jakości, akwizycję danych oraz analizę danych.

Badanie charakterystyki pamięci epizodycznej z wykorzystaniem potencjałów wywołanych zdarzeniami u pacjentów z chorobą Alzheimera

Zapalenie jelita grubego wywołane DNBS/TNBS oferuje alternatywną i tanią metodę badania patobiologii nieswoistych zapaleń jelit. Protokół omówiony w tym artykule przedstawia skuteczne zastosowanie DNBS do wywoływania zapalenia jelita grubego u myszy i szczurów oraz pozwala na dokładne zbadanie odpowiedzi jelitowych za pośrednictwem gospodarza.

Modele zapalenia jelita grubego DNBS/TNBS: dostarczające informacji na temat nieswoistych zapaleń jelit i wpływu tłuszczu w diecie

Ten artykuł zawiera szczegółowe metodologie wykorzystania testów trójwymiarowych (3D) do ilościowego określenia inwazji komórek raka piersi. W szczególności omawiamy procedury wymagane do skonfigurowania, takie jak testy, kwantyfikacja i analiza danych, a także metody badania utraty integralności błony, która ma miejsce podczas inwazji komórek.

Kwantyfikacja inwazyjności komórek raka piersi za pomocą modelu trójwymiarowego (3D)

Poznaj metodę trójwymiarowej morfogenezy jelitowej na chipie z wykorzystaniem psich organoidów pochodzących od pacjentów. To podejście umożliwia dynamiczne modelowanie in vitro bariery jelitowej i badań porównawczych.

Trójwymiarowa morfogeneza w psich jelitach na chipie przy użyciu organoidów jelitowych pochodzących od pacjentów z nieswoistymi zapaleniami jelit (Wideo) | JoVE Journal

Trójwymiarowa morfogeneza w psich jelitach na chipie przy użyciu organoidów jelitowych pochodzących od pacjentów z nieswoistymi zapaleniami jelit

Przeglądaj więcej filmów