Name: Izolacja, ekspansja in vitro i charakterystyka mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej najądrza myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-12T13:05:00.000+00:00
Duration: 4 min 53 s
Description: Poznaj izolację i charakterystykę mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej myszy Swiss. Ta metoda pozwala badać potencjał terapeutyczny ADSC w leczeniu chorób zapalnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania wspierane przez grant z Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnologico (480807/2011-6) i Fundação de Amparo à Pesquisa de Minas Gerais (APQ-01237-11). Badanie to zostało częściowo sfinansowane przez PROPP UESC (073.6764.2019.0021079-85). MGAG i URS dzięki stypendium przyznanemu odpowiednio przez Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) oraz Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).

Primary Culture of Adipose Tissue Derived Stem Cells from Mouse Epididymis

<ol><li>Caplan, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells.</a> J Orthop Res. 9 (5), 641-650 (1991).</li>
<li>Pittenger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+perspective%3A+cell+biology+to+clinical+progress%5BTitle%5D)+AND+%22npj+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell perspective: cell biology to clinical progress.</a> npj Regen Med. 4, 22(2019).</li>
<li>Lin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+and+cancer%3A+Clinical+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells and cancer: Clinical challenges and opportunities.</a> BioMed Res Int. 2820853, 1-12 (2019).</li>
<li>Mazini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hopes+and+limits+of+adipose-derived+stem+cells+%28ADSCs%29+and+mesenchymal+stem+cells+%28MSCs%29+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Hopes and limits of adipose-derived stem cells (ADSCs) and mesenchymal stem cells (MSCs) in wound healing.</a> Int J Mol Sci. 21 (4), 1306(2020).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+mechanisms+of+mesenchymal+stem+and+stromal+cells+in+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory mechanisms of mesenchymal stem and stromal cells in inflammatory diseases.</a> Nat Rev Nephrol. 14 (8), 493-507 (2018).</li>
<li>Uccelli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in health and disease.</a> Nat Rev Immunol. 8 (9), 726-736 (2008).</li>
<li>Dong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue-derived+small+extracellular+vesicles+promote+soft+tissue+repair+through+modulating+M1-to-M2+polarization+of+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue-derived small extracellular vesicles promote soft tissue repair through modulating M1-to-M2 polarization of macrophages.</a> Stem Cell Res Ther. 14 (1), 67(2023).</li>
<li>Maffioli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+the+secretome+of+human+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+primed+by+pro-inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of the secretome of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells primed by pro-inflammatory cytokines.</a> J. Proteomics. 166, 115-126 (2017).</li>
<li>Akiyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal-stem-cell-induced+immunoregulation+involves+FAS-ligand-%2FFAS-mediated+T+cell+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal-stem-cell-induced immunoregulation involves FAS-ligand-/FAS-mediated T cell apoptosis.</a> Cell Stem Cell. 10, 544-555 (2012).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+mesenchymal+stem+cells+in+immunomodulation%3A+pathological+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Plasticity of mesenchymal stem cells in immunomodulation: pathological and therapeutic implications.</a> Nat Immunol. 15, 1009-1016 (2014).</li>
<li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+vs.+autologous+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells+in+their+medication+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Allogeneic vs. autologous mesenchymal stem/stromal cells in their medication practice.</a> Cell Biosci. 11, 187(2021).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenges+and+promises+of+allogeneic+mesenchymal+stem+cells+for+use+as+a+cell-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">The challenges and promises of allogeneic mesenchymal stem cells for use as a cell-based therapy.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 234(2015).</li>
<li>Jurado, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+as+part+of+therapy+for+chronic+graft-versus-host+disease%3A+A+phase+I%2FII+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells as part of therapy for chronic graft-versus-host disease: A phase I/II study.</a> Cytotherapy. 19 (8), 927-936 (2017).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-derived+exosome-educated+macrophages+alleviate+systemic+lupus+erythematosus+by+promoting+efferocytosis+and+recruitment+of+IL-17%2B+regulatory+T+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-derived exosome-educated macrophages alleviate systemic lupus erythematosus by promoting efferocytosis and recruitment of IL-17+ regulatory T cell.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 484(2022).</li>
<li>Fernández, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+%28AdMSC%29+for+the+treatment+of+secondary-progressive+multiple+sclerosis%3A+A+triple+blinded%2C+placebo+controlled%2C+randomized+phase+I%2FII+safety+and+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived mesenchymal stem cells (AdMSC) for the treatment of secondary-progressive multiple sclerosis: A triple blinded, placebo controlled, randomized phase I/II safety and feasibility study.</a> PLoS One. 13 (5), 0195891(2018).</li>
<li>Abdolmohammadi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-based+therapy+as+a+new+therapeutic+approach+for+acute+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-based therapy as a new therapeutic approach for acute inflammation.</a> Life Sci. 312, 121206(2023).</li>
<li>Hoang, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-based+therapy+for+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Stem cell-based therapy for human diseases.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 272(2022).</li>
<li>Lee, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+expression+analysis+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+bone+marrow+and+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Characterization and expression analysis of mesenchymal stem cells from human bone marrow and adipose tissue.</a> Cell Physiol Biochem. 14 (4-6), 311-324 (2004).</li>
<li>Strem, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+differentiation+of+adipose+tissue+derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Keio+J+Med%22%5BJournal%5D)">Multipotential differentiation of adipose tissue derived stem cells.</a> Keio J Med. 54 (3), 132-141 (2005).</li>
<li>Kern, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow%2C+umbilical+cord+blood%2C+or+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue.</a> Stem Cells. 24 (5), 1294-1301 (2006).</li>
<li>Dominici, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li>
<li>Berryman, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+hormone%27s+effect+on+adipose+tissue%3A+Quality+versus+quantity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Growth hormone's effect on adipose tissue: Quality versus quantity.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (8), 1621(2017).</li>
<li>Shomer, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+rodent+euthanasia+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Review of rodent euthanasia methods.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 59 (3), 242-253 (2020).</li>
<li>Miranda, V. H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+damage+in+schistosomiasis+is+reduced+by+adipose+tissue-derived+stem+cell+therapy+after+praziquantel+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Liver damage in schistosomiasis is reduced by adipose tissue-derived stem cell therapy after praziquantel treatment.</a> PLoS Negl Trop Dis. 14 (8), e0008635(2020).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+primary+bone+marrow+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of primary bone marrow mesenchymal stromal cells.</a> Ann N Y Acad Sci. 1370 (1), 109-118 (2016).</li>
<li>Boregowda, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mouse+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation of mouse bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Methods Mol Biol. 1416, 205-223 (2016).</li>
<li>Sreejit, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+mesenchymal+stem+cell+lines+from+murine+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Generation of mesenchymal stem cell lines from murine bone marrow.</a> Cell Tissue Res. 350 (1), 55-68 (2012).</li>
<li>Bunnell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Cells. 10 (12), 3433(2021).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

MSCs mogą być ekstrahowane z różnych tkanek. Pomimo tego, że szpik kostny stanowi powszechne źródło MSCs zarówno u myszy, jak i u ludzi25,26, zdecydowaliśmy się pracować z tkanką tłuszczową w tym badaniu ze względu na jej bogactwo MSC, dystrybucję w organizmie i łatwość dostępu do niej. Alternatywnie, komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej mogą być wykorzystane do wytworzenia unieśmiertelnionych komórek podobnych do MSCs27.
Niektóre punkty ekstrakcji zasługują na szczególną uwagę ze względu na powodzenie udostępnionych tutaj protokołów. Po pierwsze, zwracamy uwagę na staranność przy pobieraniu tkanki, która musi być wykonywana w warunkach aseptycznych. Dlatego przed rozpoczęciem operacji upewnij się, że myszy są odpowiednio zdezynfekowane 70% alkoholem. Kolejną ważną kwestią jest to, aby nie używać tego samego zestawu pęset i nożyczek do zbierania tkanki tłuszczowej najądrza, unikając w ten sposób jakiegokolwiek źródła zanieczyszczenia. 
Drugim problemem jest przetwarzanie tkanek. Fragmenty w stożkowej probówce muszą być właściwie i energicznie wstrząśnięte podczas 10 minut inkubacji w temperaturze 37 °C. Bardzo ważna jest zmiana podłoża następnego dnia, a następnie co 2-3 dni. Zaleca się codzienną obserwację kultury, sprawdzanie koloru podłoża, kształtu komórek i wszelkich ingerencji w środowisko kultury. 
Trzecia obawa dotyczy najlepszego czasu/przejścia dla charakterystyki MSC. Tutaj zalecamy zrobienie tego przy trzecim przejściu komórek, ale nie jest to obowiązkowe. To zależy od celu badania. W trzecim fragmencie mamy około 80% komórek scharakteryzowanych jako MSCs, co wystarcza na przykład do osiągnięcia celów tego badania. Charakterystykę fenotypową przeprowadza się poprzez analizę ekspresji markerów krwiotwórczych (na przykład CD34 i CD45) i markerów mezenchymalnych (na przykład CD29, CD73, CD90 i CD105). Co więcej, Międzynarodowe Towarzystwo Terapii Komórkowej i Genowej (ISCT)21 podkreśla, że ADSC powinny mieć morfologię podobną do fibroblastów i przylegać do plastiku platformy hodowlanej. Morfologię można obserwować pod mikroskopem podczas uprawy kultury. Charakterystykę funkcjonalną przeprowadza się poprzez analizę potencjału ADSC do różnicowania się w komórki osteoblastów, adipoblastów i chondroblastów. W charakterystyce fenotypowej procent markerów mezenchymalnych i krwiotwórczych może się różnić w zależności od gatunku zwierzęcia i źródła komórek, nie w pełni spełniając liczby zalecane przez ISCT. Na przykład ISCT zaleca dla ludzkich MSCs ≥95% CD105, CD73, CD90 i ≤2% CD45, CD34, CD14 lub CD11b, CD79a lub CD19, ludzki antygen leukocytarny - izotyp DR (HLA-DR)21. Ponadto ważne jest, aby przeprowadzić charakterystykę funkcjonalną i potwierdzić wielomoc komórek różnicujących się w osteoblasty, chondrocyty i linie adipocytów. Co najmniej dwie z tych linii są zalecane do udowodnienia multipotencji. 
Oprócz tych podkreślonych punktów, niektóre sugerowane tutaj testy można zastąpić, na przykład czerwień alizarynową S zamiast barwienia Von Kossa, Shiff kwasu okresowego zamiast błękitu alcian i reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) zamiast cytometrii przepływowej. 
Spośród trzech typów tkanki tłuszczowej opisanych u ludzi (biała, brązowa i beżowa), biała tkanka tłuszczowa ma największe źródło MSCs28. Tkankę tę można uzyskać z obszarów podskórnych, brzusznych i pachwinowych, takich jak tłuszcz nad najądrzem, o którym mowa tutaj. Fizyczna fragmentacja i trawienie enzymatyczne przez kolagenazę zastosowane w udostępnionym tutaj protokole wyprowadzają frakcję naczyniową zrębu (SVF) złożoną z wielu typów komórek, z wyjątkiem adipocytów, które są wyczerpywane podczas przetwarzania. 
Podsumowując, do głównych zalet stosowania tkanki tłuszczowej jako źródła MSCs należy zaliczyć ich obfitość i łatwość metod izolacji komórek, związane z potencjałem terapeutycznym MSCs jako właściwości przeciwzapalnych i regeneracyjnych.

Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) to dorosłe komórki wielopotencjałowe różnicujące się w komórki takie jak osteoblast, chondroblast i adipocyte1,2. Komórki te znajdują się w kilku narządach i z tego powodu można je pobrać z dorosłych tkanek, takich jak szpik kostny, mięśnie, tłuszcz, mieszek włosowy, korzeń zęba, łożysko, skóra właściwa, okołochrzęstne, pępowina, płuca, wątroba i śledziona3,4.
Opisano wpływ MSCs na fizjologię i układ odpornościowy5,6. Komórki te są obiecujące w leczeniu wielu chorób, zarówno w medycynie ludzkiej, jak i weterynaryjnej. MSCs mogą kontrolować stan zapalny i promować angiogenezę oraz homeostazę tkanek poprzez różne mechanizmy, takie jak kontakt komórka-komórka, czynniki rozpuszczalne i małe pęcherzyki zewnątrzkomórkowe7,8,9,10. Co więcej, MSCs są komórkami uprzywilejowanymi immunologicznie, zdolnymi do przetrwania u immunoniezgodnych biorców przeszczepów allogenicznych, ponieważ komórki te wykazują niską ekspresję cząsteczek głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC) klasy I i są stosowane w terapii komórkowej do przeszczepu allogenicznego11,12. Niska immunogenność w połączeniu z potencjałem regeneracyjnym sprawia, że MSCs są idealnymi kandydatami do terapii komórkowej, takiej jak między innymi choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi (GvHD)13, toczeń rumieniowaty układowy (SLE)14 i stwardnienie rozsiane1516,17.
Pomimo faktu, że MSCs znajdują się w kilku dorosłych tkankach, tkanka tłuszczowa oferuje przewagę nad innymi źródłami, takimi jak dostępność do pobrania, przy minimalnej interwencji chirurgicznej; duża liczba dostępnych komórek o wysokim współczynniku ekspansji; i łatwa ekspansja in vitro przy użyciu łatwego do wykonania protokołu bez konieczności stosowania specjalnego sprzętu i tanich materiałów18,19, 20. Po ekstrakcji, komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej (ADSC) muszą być scharakteryzowane zgodnie z ustaleniami Międzynarodowego Towarzystwa Terapii Komórkowej (ISCT)21. W związku z tym MSCs muszą wykazywać morfologię podobną do fibroblastów, przyleganie do hodowli plastycznej, ekspresję wysokiego procentu (≥95%) markerów mezenchymalnych, takich jak endoglin (CD105), ekto-5'-nukleotydaza (CD73) i Thy-1 (CD90) oraz niski odsetek (≤2%) markerów krwiotwórczych, takich jak wspólny antygen leukocytów (CD45), transbłonowa fosfoglikkoproteina (CD34), glikoproteina błonowa zakotwiczona w glikolipidach (CD14), integryna alfa M (CD11b), białko alfa związane z receptorem antygenu komórek B (CD79α) lub antygen powierzchniowy B-limfocytów B4 (CD19) i ludzki antygen leukocytarny klasy II (HLA-II). Ponadto wymagana jest charakterystyka funkcjonalna, a komórki powinny być w stanie różnicować się w komórki osteoblastów, chondroblastów lub adipoblastów21.
Tutaj pokazujemy, jak uzyskać MSCs z tkanki tłuszczowej najądrza za pomocą mechanicznej dysocjacji i trawienia enzymatycznego do badań in vitro i charakterystyki morfologicznej wstępnie skonfigurowanej przez ISCT.

<table><tbody><tr><td>140 stopni Celsjusza; C Sterylizacja wysokotemperaturowa Inkubator CO2</td><td>RADOBIO SCIENTIFIC CO. LTD, Chiny</td><td>C180</td><td></td></tr><tr><td>3-izobutylo-1-metyloksantyna</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>I7018</td><td></td></tr><tr><td>Kwas octowy lodowcowy</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany</td><td>Zjednoczone PHR1748</td><td></td></tr><tr><td>Alcian Blue 8GX</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>A9186</td><td>BioReagent, odpowiedni do wykrywania glikoprotein. 1% w kwasie octowym, pH 2,5</td></tr><tr><td>Alkohol 70%</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>65350-M</td><td>70% w wodzie</td></tr><tr><td>Amfoterycyna B</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR1662</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciała anty-mysie anty-CD29 FITC (Klon Ha2/5)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>555005</td><td>Funkcje w komórce: Adhezja i aktywacja, embriogeneza, leukocyty, DC, płytki krwi, komórki tuczne, fibroblasty i komórki śródbłonka</td></tr><tr><td>Przeciwciała anty-mysie anty-CD34 PE (Clone RAM34)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>551387</td><td>Funkcje w komórce: Czynnik adhezji komórek. Hematopoetyczne komórki macierzyste</td></tr><tr><td>Przeciwciała anty-mysie anty-CD45 APC (Clone 30-F11)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>559864</td><td>Funkcje w komórce: Pomaga w aktywacji leukocytów Przeciwciała</td></tr><tr><td>anty-mysie anty-CD71 FITC (Clone C2)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>553266</td><td>Funkcje w komórce: Kontroluje wychwyt żelaza podczas proliferacji komórek. Komórki proliferacyjne, retikulocyty i prekursory Przeciwciała</td></tr><tr><td>anty-mysie anty-CD90 PerCP (Clone OX-7)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>557266</td><td>Funkcje w komórce: sygnalizacja, adhezja. Limfocyt T, NK, monocyt, HSC, neuron, fibroblasty</td></tr><tr><td>Kwas askorbinowy</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>PHR1008</td><td></td></tr><tr><td>Pipety automatyczne</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, Stany Zjednoczone</td><td>4700850N</td><td>Finnpipette F1 Zestawy do pipetowania laboratoryjnego (GLP)</td></tr><tr><td>Zlewka</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>1 jednostka</td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Płytki do hodowli komórkowych (6-dołkowe)</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z707759</td><td>07 jednostek sterylnych. Płytki do hodowli tkankowych TPP</td></tr><tr><td>Płytki do hodowli komórkowych (96-dołkowe. Okrągłe lub V na dole)</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td>CLS353077</td><td>01 jednostka sterylna. Studnie, 96, powierzchnia poddana kulturze tkankowej (TC), przezroczyste studzienki z okrągłym dnem, sterylne</td></tr><tr><td>podłoże chondrogenne</td><td>Łodyga Pro Różnicowanie chondrogenezy&ndash; Technologie Życia</td><td>A1007101</td><td>TGF-&beta; 2, TGF-&beta; 3, deksametazon, insulina, transferyna, ITS, sód-l - askorbinian, pirogronian sodu, 2-fosforan askorbinianu</td></tr><tr><td>Kolagenaza typu II</td><td>Life Technologies, Kalifornia, USA</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>płyta korkowa lub styropianowa pokryta aluminium</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>1 sztuka</td></tr><tr><td>bawełny</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>50 g</td></tr><tr><td>deksametazonu</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki preparacyjne</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>03 sztuki sterylny</td></tr><tr><td>DPX Uchwyt do histologii</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s zmodyfikowany Orzeł" s medium (DMEM)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>D5523</td><td>Z 1000 mg/L glukozy i L-glutaminy, bez wodorowęglanu sodu, proszek, odpowiedni do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Eosin B</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>861006</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>47608</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycyna</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>G1397</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>H3136</td><td></td></tr><tr><td>Igła podskórna (0,3 mm x 13 mm)</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>5 sztuk</td></tr><tr><td>Indometacyna</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>I0200000</td><td></td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>I3536</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>563935</td><td>70% w H2O</td></tr><tr><td>Roztwór chlorowodorku ketaminy-D4</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>K-006</td><td>1,0 mg/ml w metanolu (jako wolna zasada), certyfikowany materiał odniesienia, Cerilliant&reg;</td></tr><tr><td>Komora Neubauera</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>BR718620</td><td>Komora licząca MARKA BLAUBRAND Neubauer wzór. Z klipsami,</td></tr><tr><td>końcówkami do pipet Nichiryo z podwójną linijką (0,1&ndash; 10 &mu; L)</td> <td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z645540</td><td>Zakres głośności 0,1&ndash; 10 &mu; L, wydłużone, opakowanie zbiorcze. Sterylne</td></tr><tr><td>końcówki do pipet Nichiryo (1&ndash; 10 mL)</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z717401</td><td>Zakres głośności 1&ndash; 10 mL, uniwersalny, opakowanie zbiorcze. Sterylne</td></tr><tr><td>końcówki do pipet Nichiryo (200 &mu; L)</td> <td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td>Z645516</td><td>Maksymalna objętość 200 &mu; L, z podziałką, ministack. Sterylny</td></tr><tr><td>roztwór oleju i czerwieni O</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>O1391</td><td>0,5% w parafinie izopropanolu</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>107.151</td><td>46&ndash; 48, w postaci bloku</td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>P4333</td><td>Roztwór stabilizowany, z 10 000 jednostek penicyliny i 10 mg streptomycyny / ml, 0,1 &mu; m przefiltrowany, BioReagent, odpowiedni do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej 1x (PBS).</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>P3813</td><td>Proszek, pH 7,4, do przygotowania 1 L roztworów. Zrównoważone i sterylne</td></tr><tr><td>probówki stożkowe z polipropylenu (15 ml)</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td>Sterylne</td></tr><tr><td>probówki stożkowe z polipropylenu (50 ml)</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>2 sztuki sterylnego</td></tr><tr><td>skalpela (opcjonalnie)</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>1 szt</td></tr>. <tr><td>Azotan srebra</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>85228</td><td></td></tr><tr><td>Tiosiarczan sodu</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>72049</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta chirurgiczna (15 cm)</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>3 sztuki sterylnych</td></tr><tr><td>szwajcarskich samców myszy (6&ndash; 8 tygodni)</td><td>Bioterium, Santa Cruz State University</td><td>021/22</td><td></td></tr><tr><td>strzykawka (1 ml)</td><td>Nie dotyczy</td><td></td><td>1 jednostka</td></tr><tr><td>Trypan Blue Dye</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>T8154</td><td>0,4%, płynny, sterylnie filtrowany, odpowiedni do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Trypsyna/EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR3263</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosforan sól disodowa hydrat</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>G9422</td><td>BioUltra, odpowiedni do hodowli komórkowych, odpowiedni do hodowli komórek roślinnych, &ge; 99% (miareczkowanie)</td></tr></tbody></table>

izolacja, ekspansja in vitro i charakterystyka mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej najądrza myszy

Isolation, In Vitro Expansion, and Characterization of Mesenchymal Stem Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissue

Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) były intensywnie badane jako nowe podejście terapeutyczne, głównie w celu powstrzymania zaostrzonego stanu zapalnego ze względu na ich potencjał do modulowania odpowiedzi immunologicznej. MSCs są komórkami uprzywilejowanymi immunologicznie, zdolnymi do przetrwania u immunoniezgodnych biorców przeszczepów allogenicznych w oparciu o niską ekspresję cząsteczek głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC) klasy I oraz przy zastosowaniu terapii komórkowej do przeszczepu allogenicznego. Komórki te można wyizolować z kilku tkanek, z których najczęściej stosuje się szpik kostny i tkankę tłuszczową. Zapewniamy prosty protokół izolacji, hodowli i charakterystyki MSCs z tkanki tłuszczowej najądrza myszy. Tkanka tłuszczowa najądrza jest wycinana chirurgicznie, fizycznie rozdrobniona i trawiona 0,15% roztworem kolagenazy typu II. Następnie pierwotne komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej (ADSC) są hodowane i namnażane in vitro, a charakterystyka fenotypowa jest przeprowadzana za pomocą cytometrii przepływowej. Przedstawiamy również kroki różnicowania ADSC na komórki osteogenne, adipogenne i chondrogenne, a następnie funkcjonalną charakterystykę każdej linii komórkowej. Przedstawiony tutaj protokół może być wykorzystany do eksperymentów in vivo i ex vivo, a alternatywnie, komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej mogą być wykorzystane do wygenerowania unieśmiertelnionych komórek podobnych do MSCs.

Komórki wyizolowane z tkanki tłuszczowej zgodnie z przedstawionym tutaj protokołem wykazywały morfologię zgodną z minimalnymi kryteriami dla MSC zaproponowanymi przez ISCT. Przegląd protokołu przedstawiono na Rysunku 1. Pod względem fenotypowym ADSCs wykazywały przyleganie do tworzywa sztucznego oraz morfologię fibroblastopodobną w pierwszych dniach hodowli komórkowej (Rysunek 2A). Ponadto rosły one homogenicznie i tworzyły kolonie. Co więcej, ADSCs wykazywały niską ekspresję markerów krwiotwórczych CD34 (2,12%) i CD45 (1,81%) oraz wysoką ekspresję markerów komórek mezenchymalnych CD71 (42,6%), CD29 (74,2%) i CD90 (55,1%) (Rysunek 2B).
<img alt="Wzrost komórek w dniach 2, 4, 10; histogramy cytometrii przepłyewej wykazujące markery różnicowania (CD34, CD45)." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65722/65722fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Charakterystyka fenotypowa komórek pochodzących z tkanki tłuszczowej. (A) Zmiana morfologii ADSC z okrągłej na fibroblastopodobną w dniach 2, 4 i 8 hodowli; pasek skali = 22.22 µm. (B) Histogramy dla markerów ekspresjonowanych (CD71, CD29 i CD90) lub nieekspresjonowanych (CD34 i CD45) przez ASC. Rycina ta została powielona za zgodą Mirandy i wsp.24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65722/65722fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
Pod względem funkcjonalnym ADSCs wykazały wielopotencjalność do różnicowania się w osteoblasty, adipoblasty i chondroblasty podczas hodowli w mediach warunkujących dla każdej linii komórkowej przez 14 lub 21 dni (Rysunek 3). Barwienie metodą Von Kossa ujawniło zmineralizowane guzki w macierzy zewnątrzkomórkowej, co jest charakterystyczne dla procesu osteogenezy (Rysunek 3). Barwienie Oil-red O wykazało obecność wakuol lipidowych w cytoplazmie ADSCs, a barwienie błękitem alkianowym (Alcian Blue) potwierdziło obecność glikozaminoglikanów w macierzy zewnątrzkomórkowej (Rysunek 3). Wspólnie cechy fenotypowe i funkcjonalne potwierdziły, że populacja komórek wyizolowanych z tkanki tłuszczowej najwidnieszka to MSCs.
<img alt="Etapy różnicowania komórek macierzystych; szlaki osteogeniczne, adipogeniczne i chondrogeniczne; obrazy mikroskopowe." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65722/65722fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Charakterystyka funkcjonalna komórek pochodzących z tkanki tłuszczowej. Potencjał wieloliniowy osteogeniczny, adipogeniczny i chondrogeniczny ADSC po 14 i 21 dniach hodowli. Pasek skali = 50 µm (panel górny), 100 µm (panele środkowy i dolny). Rysunek powtórzono za zgodą Mirandy i wsp.24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65722/65722fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>

Tkanka tłuszczowa jest doskonałym źródłem mezenchymalnych komórek macierzystych. Tutaj przedstawiamy krok po kroku ekstrakcję, hodowlę i charakterystykę komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej (ADSC) z tkanki tłuszczowej najądrza szwajcarskich myszy.

Izolacja, ekspansja in vitro i charakterystyka mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej najądrza myszy

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been extensively studied as a new therapeutic approach, mainly to stop exacerbated inflammation due to their potential ...

Moje badania koncentrują się na mezenchymalnych komórkach macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej jako nowym podejściu do leczenia, związanym lub nie związanym z innymi terapiami, w celu poprawy stanu zapalnego w kilku chorobach. Wykazaliśmy, że stosowanie mezenchymalnych komórek macierzystych tkanki tłuszczowej w połączeniu z prazykwantelem znacząco kontrolowało odczyn ziarniniakowy w zakażeniu Schistosoma mansoni, podkreślając korzyści płynące z tego skojarzonego podejścia do leczenia. Nasz protokół zajmuje się luką badawczą w skrupulatnym pobieraniu tkanki tłuszczowej najądrza w warunkach aseptycznych, szczegółowym przetwarzaniu fizycznym obejmującym energiczne potrząsanie i określa optymalny czas na wykorzystanie komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej.Nasz protokół oferuje znaczące korzyści, w szczególności dużą dostępność i potencjalną prostą izolację mezenchymalnych komórek macierzystych. Ponadto mezenchymalne komórki macierzyste mają silne właściwości terapeutyczne, w tym przeciwzapalne i generujące tkanki. Na początek umieść uśpioną mysz na tablicy korkowej brzuszną stroną skierowaną do góry.Za pomocą pęsety podnieś ogoloną skórę na środku brzucha i wykonaj nacięcie sterylnymi nożyczkami. Rozetnij skórę, aby oderwać ją od otrzewnej. Następnie podnieś warstwę otrzewnej i przetnij ją.Dzięki nowemu zestawowi sterylnych pęset i nożyczek delikatnie chwyć, unieś i przetnij całą tkankę tłuszczową naskórka znajdującą się nad jądrami. Umieść wycięty tłuszcz w 50-mililitrowej sterylnej stożkowej probówce zawierającej podłoże podstawowe na lodzie. Następnie umyj tkankę najądrza PBS.Za pomocą sterylnej pęsety przenieś tkankę tłuszczową najądrza do probówki zawierającej od 15 do 20 mililitrów roztworu trawiącego. Pokrój tkankę na fragmenty sterylnymi nożyczkami. Następnie inkubuj fragmenty tkanek w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez godzinę.Rozcieńczyć próbkę w równej objętości podłoża podstawowego w celu dezaktywacji kolagenazy. Odwirować zawiesinę o sile 250 g przez 10 minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Po odrzuceniu supernatantu ponownie zawiesić osad w jednym mililitrze podłoża podstawowego.Następnie zasiej studzienkę sześciodołkowej płytki zawierającej trzy mililitry podłoża podstawowego z izolowanymi komórkami. Inkubuj komórki przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 5% dwutlenkiem węgla. Następnego dnia dodaj trzy mililitry podłoża podstawowego do komórek przemytych PBS.Komórki wyekstrahowane z tkanki tłuszczowej wykazywały zgodność morfologii mezenchymalnych komórek macierzystych. Aby przeprowadzić funkcjonalną charakterystykę mysich komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej poprzez różnicowanie osteogenne, należy najpierw odłączyć komórki za pomocą trypsyny EDTA. Zbierz trypsynizowane komórki do stożkowej probówki.Następnie zasiej komórki w dołkach sześciodołkowej płytki z podłożem podstawowym. Inkubuj płytki w temperaturze 37 stopni Celsjusza pod 5% suplementacją dwutlenku węgla. Po 24 godzinach zastąp pożywkę pożywką osteogenną.Następnie wybarwić komórki barwnikiem von Kossa, aby ocenić zmineralizowane guzki. Przemyć komórki dwa razy PBS po zassaniu pożywki. Utrwal komórki w dwóch mililitrach 70% etanolu przez noc w temperaturze pokojowej.Następnie dodaj dwa mililitry 5% roztworu azotanu srebra do studzienek. Po umyciu komórek wodą destylowaną inkubować komórki w dwóch mililitrach 5% tiosiarczanu sodu przez pięć minut. Przeciwbarwić umyte komórki dwoma mililitrami eozyny przez 40 sekund.Po zmyciu plamy umieść płytkę pod mikroskopem optycznym, aby zobaczyć wybarwione komórki. Komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej wykazywały wielomoc różnicowania się w osteoblasty, adipoblasty i chondroblasty. Barwienie von Kossy wykazało obecność zmineralizowanych guzków, charakterystycznych dla osteoblastów.Komórki adipogenne wykazały obecność wakuoli lipidowych w cytoplazmie komórek macierzystych, podczas gdy barwienie Alcian Blue ujawniło obecność glikozaminoglikanu w macierzy zewnątrzkomórkowej.

isolation-vitro-expansion-characterization-mesenchymal-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film demonstruje technikę izolowania i hodowli fluorescencyjnie znakowanych komórek macierzystych pochodzących z grzebienia nerwowego (ADSC) z mysiej tkanki tłuszczowej łuku okołoaortalnego. Po wyizolowaniu NCADSC są wykrywane, sortowane za pomocą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją, a następnie hodowane na płytce, co sprzyja proliferacji komórek.

Izolowanie komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej myszy okołoortowej

Przedstawiamy protokół izolowania fragmentów mikronaczyniowych pochodzących z tkanki tłuszczowej, które reprezentują obiecujące jednostki unaczynienia. Można je szybko wyizolować, nie wymagają przetwarzania in vitro, a tym samym mogą być stosowane do jednoetapowej prewaskularyzacji w różnych dziedzinach inżynierii tkankowej.

Izolacja fragmentów mikronaczyniowych pochodzących z mysiej tkanki tłuszczowej jako jednostek unaczynienia dla inżynierii tkankowej

Ten protokół zapewnia bezenzymatyczną metodę izolowania mezenchymalnych komórek macierzystych z próbek abdominoplastyki i lipoaspiratu przy użyciu metody eksplantatu. Brak ostrych enzymów lub etapów wirowania zapewnia klinicznie istotne komórki macierzyste, które można wykorzystać do badań in vitro lub przenieść z powrotem do kliniki.

Bezenzymatyczna metoda izolacji i namnażania ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej

Ten protokół opisuje techniczne podejście do izolowania subpopulacji komórek zrębu adipogennych i włóknisto-zapalnych z mysich magazynów białej tkanki tłuszczowej (WAT) w jamie brzusznej poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją lub separację kulek immunomagnetycznych.

Izolacja adipogennych i włóknisto-zapalnych subpopulacji komórek zrębu z mysich wewnątrzbrzusznych magazynów tłuszczu

Prezentujemy prostą metodę izolowania wysoce żywotnych komórek progenitorowych tkanki tłuszczowej z najądrzy myszy za pomocą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją.

Preparat komórek progenitorowych tkanki tłuszczowej tkanki tłuszczowej najądrza myszy

Mezenchymalne komórki macierzyste pochodzące z tkanki tłuszczowej (Ad-MSC) mogą być potencjalnym źródłem MSC, które różnicują się w komórki produkujące insulinę (IPC). W tym protokole przedstawiamy szczegółowe kroki izolacji i charakterystyki Ad-MSC najądrza szczura, a następnie prosty, krótki protokół generowania IPC z tych samych Ad-MSC szczurów.

Izolacja mezenchymalnych komórek macierzystych tkanki tłuszczowej szczura w celu różnicowania w komórki produkujące insulinę

Ten protokół opisuje metodologię izolowania i identyfikacji mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej (MSC) od szczurów Sprague Dawley.

Izolacja i identyfikacja mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej szczurów Sprague Dawley

Endotelialne komórki progenitorowe tworzące kolonie (ECFCs) stanowią obiecujące narzędzie do badania homeostazy i regeneracji naczyń krwionośnych.1,2 Niniejsza praca przedstawia nową metodę izolacji i ekspansji ECFC z heparynowanej krwi obwodowej dorosłego człowieka bez użycia surowicy zwierzęcej, z wykorzystaniem puli lizatu płytek krwi człowieka (pHPL), co zmniejsza ryzyko immunizacji przeciwko białkom bydlęcym.

Izolacja i wielkoskalowa ekspansja dorosłych ludzkich endotelialnych komórek progenitorowych zdolnych do tworzenia kolonii

Niniejszy protokół opisuje izolację i następującą ekspansję mezenchymalnych komórek macierzystych oraz komórek endotelialnych tworzących kolonie bez użycia surowicy zwierzęcej, w celu wygenerowania autologicznych par do celów eksperymentalnej transplantacji.

Izolacja i ekspansja w warunkach wolnych od surowicy zwierzęcej mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) oraz endotelialnych komórek progenitorowych tworzących kolonie (ECFC) pochodzących z ludzkiej pępowiny

W niniejszym artykule prezentujemy izolację mysich rezydentnych mezenchymalnych komórek macierzystych płuc (lung MSC), ich ekspansję, charakterystykę oraz analizę właściwości immunomodulacyjnych.

Izolacja &amp;#38; Charakterystyka barwnika Hoechstniski CD45ujemny Mezenchymalne komórki macierzyste płuc myszy

Poznaj izolację i charakterystykę mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej myszy Swiss. Ta metoda pozwala badać potencjał terapeutyczny ADSC w leczeniu chorób zapalnych.

Izolacja, ekspansja in vitro i charakterystyka mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej najądrza myszy

Przeglądaj więcej filmów