Uzupełniające podejścia do badania strumienia mitofagii w komórkach β trzustki

Ten protokół przedstawia dwie metody analizy ilościowej mitofagii w komórkach β trzustki: pierwsza, kombinacja przepuszczalnych dla komórek barwników specyficznych dla mitochondriów, a druga, genetycznie kodowany reporter mitofagii. Te dwie techniki są komplementarne i mogą być wdrażane w zależności od konkretnych potrzeb, co pozwala na elastyczność i precyzję w ilościowym podejściu do kontroli jakości mitochondriów.

Nasz protokół opisuje dwie uzupełniające się metody badania strumienia mitofagii komórek beta w rozdzielczości pojedynczej komórki za pomocą cytometrii przepływowej. Protokół mt-Keima wykorzystuje reporter mitofagii genetycznej, podczas gdy protokół MtPhagy łączy trzy barwniki fluorescencyjne, co ułatwia ekstrapolację na trudne do transfekcji komórki w próbkach ludzkich. Oceny mitofagii przy użyciu tradycyjnych podejść biochemicznych i metod obrazowania są zarówno czasochłonne, jak i trudne.

Dlatego ważne jest, aby opracować nowe, solidne i skuteczne metody badania strumienia mitofagii w komórkach beta. Zarówno metoda mt-Keima, jak i MtPhagy są ocenami ilościowymi, które są skuteczne w badaniu strumienia mitofagii w komórkach beta trzustki. Tak więc laboratorium Soleimanpour skupia się na różnych mechanizmach, które napędzają niewydolność komórek beta trzustki i cukrzycę.

W szczególności skupiamy się na różnych aspektach cyklu życia mitochondriów, w tym na mitofagii, aby zrozumieć, w jaki sposób defekty funkcji mitochondriów napędzają rozwój cukrzycy.