Name: Model wcześniaka do badań nad bólem (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-09T13:10:00.000+00:00
Duration: 1 min 37 s
Description: Poznaj protokół tworzenia modelu wcześniaka u szczurów do badań nad bólem noworodkowym. Metoda obejmuje cięcie cesarskie, histerektomię i adopcję przez surogatkę, umożliwiając badanie mechanizmów bólu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez Uniwersytet Federalny w Alfenas - UNIFAL-MG i Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brazylia (Stypendium CAPES, Laura Pereira Generoso; Natalie Lange Candido i Maria Gabriela Maziero Capello) - Kod finansowy 001.

Wszystkie procedury eksperymentalne były zgodne z Przewodnikiem dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych przyjętym przez Komitet Etyczny ds. Eksperymentów na Zwierzętach Uniwersytetu Federalnego w Alfenas (protokół 32/2016).
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Pozyskaj dorosłe samce i nieródki szczurów Wistar (w wieku około ośmiu tygodni) z Centralnego Ośrodka dla Zwierząt Uniwersytetu Federalnego w Alfenas.</li>
	<li>Trzymaj szczury w kontrolowanych warunkach temperatury i wilgotności w cyklu światła i ciemności o godzinie 12:12 i karm je karmą i wodą ad libitum w obiektach dla zwierząt na Wydziale Fizjoterapii (Uniwersytet Federalny w Alfenas).</li>
</ol>
2. Sprawdzanie, czy nie ma ciąży
<ol>
	<li>Przez 1 miesiąc, codziennie rano między 8:00 a 9:00 rano, transportuj każdą klatkę dla zwierząt do pomieszczenia doświadczalnego. Aby wykonać płukanie pochwy, ostrożnie wprowadź plastikową pipetę zawierającą 10 μl 0,9% roztworu NaCl do pochwy szczura. Upewnij się, że wkładka jest płytka, aby uniknąć głębokiej penetracji, a następnie delikatnie wycofaj, aby zebrać wydzielinę z pochwy.</li>
	<li>Umieść pobrany płyn dopochwowy na poszczególnych szkiełkach podstawowych, przypisując osobny szkiełko do każdej klatki ze zwierzętami.
	<ol>
		<li>Uzyskaj pojedynczą kroplę niebarwionego materiału od każdego szczura za pomocą czystej końcówki pipety. Zbadaj materiał pod mikroskopem świetlnym za pomocą soczewek obiektywowych 10x i 40x, bez użycia soczewki kondensoracyjnej.</li>
		<li>Zidentyfikuj trzy różne typy komórek na podstawie ich cech: okrągłe i jądrzaste komórki nabłonkowe, nieregularne zrogowaciałe komórki bez jądra oraz małe i okrągłe leukocyty15.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wystaw samice szczurów rasy Wistar z intensywnym rogowaceniem i złuszczaniem pochwy, charakterystycznym dla cyklu rujowego i wskazującym na zwiększoną podatność samców, na krycie. Połącz szczury, umieszczając 2 samice i 1 samca w klatce. Określ dzień ciąży 0, sprawdzając obecność plemników i komórek fazy rujowej w rozmazach z pochwy.</li>
</ol>
3. Klasyfikacja i postępowanie z ciężarnymi matkami i ich potomstwem
<ol>
	<li>Pozbywaj się trzech rodzajów ciężarnych matek (po 2 matki każda) w zależności od ich etapu ciąży: wcześniaki, donoszone i zastępcze. Pozwól ciężarnym matkom urodzić w sposób naturalny w 22 dniu ciąży i wykorzystaj ich mioty do grupy donoszonej.</li>
	<li>W 19 dniu ciąży należy wykonać cesarskie cięcie u wcześniaków w ciąży, czyli 3 dni przed przewidywanym terminem porodu. Wykorzystaj te mioty dla grupy wcześniaków. Biorąc pod uwagę, że zabieg ten nie sprzyja przeżyciu matki, należy powierzyć wcześniaki matkom zastępczym, które urodziły w sposób naturalny 2 dni przed cesarskim cięciem u wcześniaków.</li>
	<li>Trzymaj młode matki zastępczej przy sobie przez kilka godzin, pozwalając ich zapachom mieszać się z miotami wcześniaków. Po tym okresie należy wprowadzić mioty wcześniaków i usunąć pierwotne młode surogatki, a następnie złożyć je w ofierze za pomocą dużych dawek wdychania izofluranu. 
	UWAGA: Ten krok jest niezbędny, aby upewnić się, że matki zastępcze już stymulowały produkcję mleka w swoich gruczołach mlecznych, ustawiając je do skutecznego karmienia wcześniaków16.</li>
</ol>
4. Cesarskie cięcie
<ol>
	<li>Częściowo znieczulić wcześniaki ciężarne 2% izofluranem i poddać je eutanazji na 3 dni przed spodziewanym terminem porodu za pomocą zwichnięcia szyjki macicy. Po eutanazji wydobywaj potomstwo jedno po drugim poprzez histerektomię.</li>
	<li>Wykonaj 3 cm nacięcie w linii środkowej dolnej części brzucha, a następnie 2 cm podłużne cięcie. Z tych nacięć wykonaj nacięcie wzdłuż granicy antykrezkowej w środkowej części każdego jajowodu.</li>
	<li>Delikatnie wyekstrahuj młode szczurów i łożysko za pomocą histerektomii17,18. Natychmiast wyekstrahuj potomstwo jeden po drugim.</li>
</ol>
5. Opieka pooperacyjna i przygotowanie szczeniąt do adopcji
<ol>
	<li>Skorzystaj z procedury adopcji, aby zapobiec niewłaściwemu zachowaniu operowanej matki z powodu zabiegu chirurgicznego i potencjalnego bólu, który może wpłynąć na dorosłe zachowanie szczeniąt.</li>
	<li>Po urodzeniu oczyść drogi oddechowe szczeniąt szczurów za pomocą ręczników papierowych. Oczyść młode szczurów, kąpiąc je, aby zapobiec kanibalizmowi przez zastępcze matki. Umyj młode szczura w wodzie o temperaturze 28 °C i wysusz je.</li>
	<li>Usunąć wszelkie ślady krwi i umieścić młode na szalkach Petriego w ogrzewanym świetle podczerwonym, utrzymując temperaturę około 28 °C do momentu, gdy ich oddech stanie się regularny.</li>
	<li>Przetnij ich pępowinę tuż poniżej łożyska i użyj bawełny nasączonejH2O2, aby zatrzymać krwawienie z pępowiny. Na koniec zaoferuj je matkom zastępczym do adopcji.</li>
</ol>
6. Interakcja z matką zastępczą i adopcja wcześniaka
<ol>
	<li>Umieść każdą matkę zastępczą ze swoim miotem w oddzielnych plastikowych klatkach. Przed przekazaniem oznacz każde szczenię z ręki opiekuna. To oznaczenie ma kluczowe znaczenie dla późniejszych analiz zachowań matek. Utrzymuj integralność klatek matek zastępczych przez cały proces adopcji.</li>
	<li>Początkowo umieść wcześniaki na zewnątrz gniazda. Ta strategia pozwala matce zastępczej rozpoznać i zapoznać się z zapachem nowych szczeniąt na neutralnym terytorium. Wybierz również jedno lub dwa młode matki zastępczej i umieść je na zewnątrz gniazda obok wcześniaków. Ta mieszanka skłania matkę zastępczą do zbierania zarówno własnych, jak i wcześniaków, sprzyjając w ten sposób akceptacji i integracji nowych szczeniąt w swoim gnieździe</li>.
	<li>Początkowo wymieszaj przybrane potomstwo z biologicznym potomstwem. Potwierdź skuteczną adopcję. Usuń szczenięta matki zastępczej z gniazda i złóż je w ofierze19. 
	UWAGA: W tym badaniu żywotność wcześniaków wynosiła 100% i nie zostały one odrzucone przez matkę zastępczą.</li>
</ol>
7. Standaryzacja miotu
<ol>
	<li>Utrzymuj wielkość miotu wynoszącą 8 młodych w miocie we wszystkich grupach szczeniąt hodowanych przez surogatki, z 4 samcami i 4 samicami. Poświęć pozostałe szczenięta szczurów po standaryzacji.</li>
</ol>
8. Projekt eksperymentalny i implementacja protokołu
UWAGA: Celem tego protokołu było uzyskanie zdolnych do życia wcześniaków do opracowania następujących procedur eksperymentalnych.
<ol>
	<li>Do zabiegów wykorzystaj łącznie 20 ciężarnych matek. Podziel je na dwie grupy eksperymentalne, z których każda składa się z 10 zapór.
	<ol>
		<li>Stymuluj młode w pierwszej grupie, grupie PP, bodźcami kłującymi od PND 2 do PND 15.</li>
		<li>Oznacz drugą grupę jako grupę CC, która służy jako grupa kontrolna, przy czym młode w tej grupie nie otrzymują stymulacji nakłucia.</li>
		<li>Przez cały ten okres należy pilnie monitorować zachowanie matczyne matek i wagę miotów.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
9. Oceny po odsadzeniu i testy behawioralne
<ol>
	<li>Odstawienie potomstwa od piersi w dniu 22 PND. Sortuj je według płci i trzymaj w klatkach o maksymalnej pojemności 4 zwierząt każda, aż osiągną wiek około 8 tygodni.</li>
	<li>Następnie poddaj te zwierzęta ocenie wrażliwości na bolesne bodźce za pomocą elektronicznego testu von Freya. Skoncentruj się w szczególności na bólu wywołanym stanem zapalnym z powodu CFA.</li>
	<li>Aby złagodzić potencjalne wpływy związane z miotem, wybierz 1 samca i 1 samicę szczura z każdego miotu dla każdej grupy eksperymentalnej, aby przejść testy behawioralne w wieku dorosłym.</li>
	<li>Użyj każdego zwierzęcia w jednym eksperymencie, aby uniknąć interferencji czynników hormonalnych w odpowiedziach nocyceptywnych samic szczurów. W szczególności należy upewnić się, że testy są przeprowadzane na samicach w fazie diestrus ich cyklu rujowego.</li>
</ol>
10. Powtarzająca się indukcja bólu u noworodków
<ol>
	<li>Wywołaj powtarzający się ból u noworodka za pomocą techniki nakłucia szpilką podobną do tej opisanej w poprzednim badaniu20. Zainicjuj codzienne bodźce do nakłuwania szpilkami dla młodych szczurów, począwszy od 2 dnia po urodzeniu (PND 2) i kontynuuj tę praktykę do 15 PND.</li>
	<li>Ostrożnie wbić igłę 22 G na płytką głębokość w środkową część podeszwy prawej tylnej łapy.
	<ol>
		<li>Upewnij się, że penetracja jest wystarczająca do stymulacji bez powodowania nadmiernych obrażeń. Skalibruj miernik, aby zapobiec głębszej penetracji, biorąc pod uwagę ryzyko, że w tym wieku przejdzie on całkowicie przez łapę.</li>
		<li>Jeśli wystąpi krwawienie, natychmiast je zatrzymaj za pomocą wacika z bawełnianą końcówką; zazwyczaj ta interwencja trwa tylko kilka sekund. Podawaj bodźce 4 razy, zachowując 2-minutową przerwę między nimi, w sumie 8 nakłuć dziennie.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aby zminimalizować potencjalne czynniki zakłócające związane z separacją matki i obchodzeniem się z noworodkiem, należy oddzielić młode szczurów od ich matek na maksymalnie 5 minut. Zastosuj ten sam czas separacji do grupy kontrolnej. Po każdym zestawie bodźców natychmiast zwróć młode szczurów do ich matek5,21,22.</li>
</ol>
11. Ocena zachowań matki
<ol>
	<li>Aby ocenić zachowanie matki, należy ocenić zachowanie matek w obu grupach eksperymentalnych (n = 10 na grupę) od PND 2 do PND 15. Przeprowadź ocenę w dwóch sesjach: jedną rano, przed bodźcami ukłutymi na młode szczurów (między 08:00 a 09:30), a drugą po południu, po bodźcach nakłutych na młodych szczurach (między 15:00 a 16:30).</li>
	<li>Podczas tych sesji pilnie obserwuj, rejestruj i oceniaj zachowanie każdej matki co 3 minuty podczas tych sesji, co prowadzi do 30 obserwacji na okres dziennie. Daje to w sumie 60 obserwacji na matkę dziennie.</li>
</ol>
12. Rejestrowanie zachowań matczynych i niematczynych
<ol>
	<li>Rejestruj parametry zachowania matki, które obejmują takie czynności, jak pielęgnacja lub lizanie (ciała lub okolicy odbytu i narządów płciowych), karmienie piersią, utrzymywanie wygiętych w łuk pleców w pozycji przypominającej "koc" poprzez leżenie nad młodymi, bierne leżenie na plecach lub boku podczas karmienia, angażowanie się w budowanie gniazd i samodzielna pielęgnacja matki (w tym stymulacja piersi poprzez samooczyszczanie).</li>
	<li>Udokumentuj parametry zachowania niezwiązane z matką, w tym takie działania, jak karmienie, eksploracja klatki, nieeksplorowanie i brak samodzielnej pielęgnacji matki.</li>
	<li>Przedstaw dane jako procent całkowitego zachowania matczynego i niematczynego. Podziel liczbę zarejestrowanych obserwacji zachowania celu przez całkowitą liczbę obserwacji i pomnóż wynik przez 1005,23,24.</li>
</ol>
13. Ocena wagi miotu
<ol>
	<li>Przez całą fazę stymulacji nakłucia szpilkami (PND 2-15) monitoruj masę miotów zarówno w grupie PP, jak i CC, z których każda składa się z 8 miotów.</li>
	<li>Podczas fazy stymulacji nakłucia (PND 2-15) należy stale kontrolować masę miotów zarówno w grupie PP, jak i CC, z których każda składa się z 8 miotów.</li>
</ol>
14. Test progu mechanicznego
<ol>
	<li>W tym eksperymencie należy podać zastrzyki soli fizjologicznej lub CFA, każde w objętości 100 μl, szczurom (w wieku 8 tygodni) z grup PP i CC. Następnie umieść je indywidualnie w akrylowych klatkach (42 cm × 24 cm × 15 cm) z podłogą z siatki drucianej 15-30 minut przed testem, aby ocenić hiperalgezję mechaniczną.</li>
	<li>W teście wywołaj odruch zgięcia tylnej łapy za pomocą ręcznego przetwornika siły wyposażonego w końcówkę polipropylenową o średnicy 0,5 mm2 (elektroniczny von Frey).
	<ol>
		<li>Stopniowo nakładaj końcówkę między pięć dystalnych opuszków prawej tylnej łapy, zwiększając nacisk, aż do zaobserwowania reakcji. 
		UWAGA: Kiedy następuje wycofanie łapy, bodziec automatycznie ustaje, a jego siła jest udokumentowana. Test kończy się wyraźną reakcją drgania, po której następuje wycofanie łapy. Podskórne podanie CFA wywołuje przedłużony stan zapalny, osiągający szczyt po 24 godzinach i utrzymujący się przez co najmniej 7 dni25.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przeprowadzić testy na zwierzętach przed i po 4 godzinach, 7 godzinach, 10 godzinach i 24 godzinach po podaniu soli fizjologicznej lub CFA4. Przedstaw wyniki pod względem progu wycofania, mierzonego w gramach (g), i oblicz go, uśredniając trzy pomiary.</li>
	<li>Aby zapobiec interferencji potencjalnych czynników hormonalnych w odpowiedziach nocyceptywnych wśród potomstwa płci żeńskiej, należy upewnić się, że testy są wykonywane wyłącznie w fazie diestrus ich cyklu rujowego.</li>
</ol>
15. Analiza danych
<ol>
	<li>Przetwarzaj dane za pomocą oprogramowania do analizy statystycznej i przedstaw je jako średnią ± błędu standardowego średniej (SEM). Aby zidentyfikować statystycznie istotne różnice między grupami, należy zastosować dwukierunkową analizę wariancji (ANOVA) z powtarzającymi się pomiarami, biorąc pod uwagę takie czynniki, jak ocena parametrów matczynych i niematczynych oraz ocena masy miotu.</li>
	<li>W szczególności przeanalizuj bodźce PND i pinprick pod kątem parametrów matczynych oraz bodźce von Freya: CFA i pinprick do oceny masy miotu. W razie potrzeby przeprowadź analizę post hoc za pomocą testu Bonferroniego.</li>
</ol>

Creating a Preterm Rat Model for Early Postnatal Pain Research

<ol><li>Cooper, A. H., Hanmer, J. M., Chapman, V., Hathway, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+complete+Freund%27s+adjuvant-induced+inflammation+does+not+induce+or+alter+hyperalgesic+priming+or+alter+adult+distributions+of+C-fibre+dorsal+horn+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Reports%22%5BJournal%5D)">Neonatal complete Freund's adjuvant-induced inflammation does not induce or alter hyperalgesic priming or alter adult distributions of C-fibre dorsal horn innervation.</a> Pain Reports. 5 (6), e872(2020).</li>
<li>Davis, S. M., Rice, M., Burman, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+neonatal+pain+disrupts+maternal+behavior+and+subsequent+fear+conditioning+in+a+rodent+model%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Psychobiology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory neonatal pain disrupts maternal behavior and subsequent fear conditioning in a rodent model.</a> Developmental Psychobiology. 62 (1), 88-98 (2020).</li>
<li>Mooney-Leber, S. M., Brummelte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+pain+and+reduced+maternal+care+alter+adult+behavior+and+hypothalamic-pituitary-adrenal+axis+reactivity+in+a+sex-specific+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Psychobiology%22%5BJournal%5D)">Neonatal pain and reduced maternal care alter adult behavior and hypothalamic-pituitary-adrenal axis reactivity in a sex-specific manner.</a> Developmental Psychobiology. 62 (5), 631-643 (2020).</li>
<li>Vilela, F. C., Vieira, J. S., Giusti-Paiva, A., Silva, M. L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experiencing+early+life+maternal+separation+increases+pain+sensitivity+in+adult+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Experiencing early life maternal separation increases pain sensitivity in adult offspring.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 62, 8-14 (2017).</li>
<li>de Carvalho, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+neonatal+needle-prick+stimulation+increases+inflammatory+mechanical+hypersensitivity+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Repeated neonatal needle-prick stimulation increases inflammatory mechanical hypersensitivity in adult rats.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 78, 191-197 (2019).</li>
<li>Carbajal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+treatment+of+painful+procedures+in+neonates+in+intensive+care+units%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and treatment of painful procedures in neonates in intensive care units.</a> JAMA. 300 (1), 60-70 (2008).</li>
<li>Cong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+cumulative+pain%2Fstress+on+neurobehavioral+development+of+preterm+infants+in+the+NICU%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">The impact of cumulative pain/stress on neurobehavioral development of preterm infants in the NICU.</a> Early Human Development. 108, 9-16 (2017).</li>
<li>König, K., Stock, E. L., Jarvis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise+levels+of+neonatal+high-flow+nasal+cannula+devices+-+An+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">Noise levels of neonatal high-flow nasal cannula devices - An in-vitro study.</a> Neonatology. 103 (4), 264-267 (2013).</li>
<li>Newnham, C. A., Inder, T. E., Milgrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+preterm+cumulative+stressors+within+the+NICU%3A+the+Neonatal+Infant+Stressor+Scale%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Measuring preterm cumulative stressors within the NICU: the Neonatal Infant Stressor Scale.</a> Early Human Development. 85 (9), 549-555 (2009).</li>
<li>De Clifford-Faugère, G., Aita, M., Arbour, C., Colson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+evaluation+and+adaptation+of+a+critical+realism+informed+theory+of+procedural+pain+management+in+preterm+infants%3A+The+PAIN-Neo+theory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Advanced+Nursing%22%5BJournal%5D)">Development, evaluation and adaptation of a critical realism informed theory of procedural pain management in preterm infants: The PAIN-Neo theory.</a> Journal of Advanced Nursing. 79 (6), 2155-2166 (2023).</li>
<li>Barkhuizen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+production+in+the+striatum+and+cerebellum+of+a+rat+model+of+preterm+global+perinatal+asphyxia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicity+Research%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide production in the striatum and cerebellum of a rat model of preterm global perinatal asphyxia.</a> Neurotoxicity Research. 31 (3), 400-409 (2017).</li>
<li>Remesal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+prenatal+steroidal+inhibition+of+sPLA2+in+a+rat+model+of+preterm+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Pulmonary+Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Effect of prenatal steroidal inhibition of sPLA2 in a rat model of preterm lung.</a> Pulmonary Pharmacology & Therapeutics. 36, 31-36 (2016).</li>
<li>Corsini, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor-%CE%B3+agonist+pioglitazone+reduces+the+development+of+necrotizing+enterocolitis+in+a+neonatal+preterm+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor-γ agonist pioglitazone reduces the development of necrotizing enterocolitis in a neonatal preterm rat model.</a> Pediatric Research. 81 (2), 364-368 (2017).</li>
<li>Grases-Pintó, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preterm+rat+model+for+immunonutritional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">A preterm rat model for immunonutritional studies.</a> Nutrients. 11 (5), 999(2019).</li>
<li>Marcondes, F. K., Bianchi, F. J., Tanno, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+estrous+cycle+phases+of+rats%3A+some+helpful+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Biology%22%5BJournal%5D)">Determination of the estrous cycle phases of rats: some helpful considerations.</a> Brazilian Journal of Biology. 62 (4), 609-614 (2002).</li>
<li>Zhu, M. -R., Liu, H. -Y., Liu, P. -P., Wu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+the+patent+ductus+arteriosus+model+in+preterm+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Contemporary+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Establishment of the patent ductus arteriosus model in preterm rats.</a> Chinese Journal of Contemporary Pediatrics. 18, 372-375 (2016).</li>
<li>Bowers, D., McKenzie, D., Dutta, D., Wheeless, C. R., Cohen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+hormone+treatment+after+cesarean+delivery+in+rats+increases+the+strength+of+the+uterine+scar%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Growth hormone treatment after cesarean delivery in rats increases the strength of the uterine scar.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 185 (3), 614-617 (2001).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whey+peptides+improve+wound+healing+following+caesarean+section+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Whey peptides improve wound healing following caesarean section in rats.</a> The British Journal of Nutrition. 104 (11), 1621-1627 (2010).</li>
<li>Appleby, C. J., Towner, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+pulmonary+damage+in+the+term+and+premature+rat+neonate+exposed+to+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of pulmonary damage in the term and premature rat neonate exposed to hyperoxia.</a> Pediatric Research. 50 (4), 502-507 (2001).</li>
<li>Anand, K. J., Coskun, V., Thrivikraman, K. V., Nemeroff, C. B., Plotsky, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+behavioral+effects+of+repetitive+pain+in+neonatal+rat+pups%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Long-term behavioral effects of repetitive pain in neonatal rat pups.</a> Physiology & Behavior. 66 (4), 627-637 (1999).</li>
<li>Tal, M., Bennett, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extra-territorial+pain+in+rats+with+a+peripheral+mononeuropathy%3A+mechano-hyperalgesia+and+mechano-allodynia+in+the+territory+of+an+uninjured+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Extra-territorial pain in rats with a peripheral mononeuropathy: mechano-hyperalgesia and mechano-allodynia in the territory of an uninjured nerve.</a> Pain. 57 (3), 375-382 (1994).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+repetitive+pain+in+rats+leads+to+impaired+spatial+learning+and+dysregulated+hypothalamic-pituitary-adrenal+axis+function+in+later+life%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Neonatal repetitive pain in rats leads to impaired spatial learning and dysregulated hypothalamic-pituitary-adrenal axis function in later life.</a> Scientific Reports. 6 (1), 39159(2016).</li>
<li>Costa, H. H., Vilela, F. C., Giusti-Paiva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+central+infusion+of+cannabinoid+receptor+agonist+WIN+55%2C212-2+decreases+maternal+care+in+lactating+rats%3A+consequences+for+fear+conditioning+in+adulthood+males%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Continuous central infusion of cannabinoid receptor agonist WIN 55,212-2 decreases maternal care in lactating rats: consequences for fear conditioning in adulthood males.</a> Behavioural Brain Research. 257, 31-38 (2013).</li>
<li>Vilela, F. C., Ruginsk, S. G., de Melo, C. M., Giusti-Paiva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CB1+cannabinoid+receptor+mediates+glucocorticoid-induced+effects+on+behavioural+and+neuronal+responses+during+lactation%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv%3A+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The CB1 cannabinoid receptor mediates glucocorticoid-induced effects on behavioural and neuronal responses during lactation.</a> Pflugers Archiv: European Journal of Physiology. 465 (8), 1197-1207 (2013).</li>
<li>Fehrenbacher, J. C., Vasko, M. R., Duarte, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+inflammation%3A+Carrageenan-+or+complete+Freund%27s+Adjuvant+%28CFA%29-induced+edema+and+hypersensitivity+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Models of inflammation: Carrageenan- or complete Freund's Adjuvant (CFA)-induced edema and hypersensitivity in the rat.</a> Current Protocols in Pharmacology. , Chapter 5, Unit 5.4 (2012).</li>
<li>de Carvalho, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+repetitive+pinprick+stimulation+on+preterm+offspring%3A+Alterations+in+nociceptive+responses+and+inflammatory+hypersensitivity+in+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of repetitive pinprick stimulation on preterm offspring: Alterations in nociceptive responses and inflammatory hypersensitivity in adulthood.</a> Behavioural Brain Research. 454, 114633(2023).</li>
<li>Gieré, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+central+origin+of+nociceptive+hypersensitivity+in+adult+rats+after+a+neonatal+maternal+separation%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Towards a central origin of nociceptive hypersensitivity in adult rats after a neonatal maternal separation.</a> The European Journal of Neuroscience. 58 (10), 4155-4165 (2023).</li>
<li>Chang, P., Fabrizi, L., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+life+pain+experience+changes+adult+functional+pain+connectivity+in+the+rat+somatosensory+and+the+medial+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Early life pain experience changes adult functional pain connectivity in the rat somatosensory and the medial prefrontal cortex.</a> The Journal of Neuroscience. 42 (44), 8284-8296 (2022).</li>
<li>vanden Hoogen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+touch+and+needle-prick+stimulation+in+the+neonatal+period+increases+the+baseline+mechanical+sensitivity+and+postinjury+hypersensitivity+of+adult+spinal+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Repeated touch and needle-prick stimulation in the neonatal period increases the baseline mechanical sensitivity and postinjury hypersensitivity of adult spinal sensory neurons.</a> Pain. 159 (6), 1166-1175 (2018).</li>
<li>Butkevich, I. P., Mikhailenko, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effects+of+neonatal+pain+and+stress+on+reactivity+of+the+nociceptive+system%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Long-term effects of neonatal pain and stress on reactivity of the nociceptive system.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 161 (6), 755-758 (2016).</li>
</ol>

Nie mamy nic do ujawnienia.

W tym badaniu zaobserwowaliśmy, że eksperymenty z nakłuciami szpilkowymi noworodków nie miały wpływu na zachowania matczyne i niematczyne. Tendencja ta rozciągała się również na zachowania niematczyne. Co więcej, przyrost masy ciała wcześniaków w okresie bodźca szpilkowego nie różnił się istotnie między grupą kontrolną a grupą nakłuwającą. Analizy progu wycofania łap wykazały godną uwagi redukcję zarówno samców, jak i samic szczeniąt z grup pinprick i CFA w porównaniu z młodymi z grup kontrolnych. Szczególnie uderzająca ...

Podczas okresu noworodkowego, szlaki nocyceptywne ulegają znacznemu strukturalnemu i funkcjonalnemu dojrzewaniu, a obecność uszkodzeń tkanek i związanego z tym bólu ma głębokie implikacje dla rozwoju przetwarzania somatosensorycznego1.
Wykorzystanie modeli zwierzęcych pozwala na kontrolowane eksperymentalne manipulowanie zwierzętami innymi niż ludzie, umożliwiając głębsze zrozumienie konsekwencji bólu noworodków na zachowanie w późniejszym życiu, jednocześnie łagodząc potencjalne zmienne zakłócające2,3. Często obserwowanym wynikiem jest wpływ bólu noworodka na zwiększoną wrażliwość na ból w wieku dorosłym2,4,5. Na oddziale intensywnej terapii noworodków (OIOM) ból noworodków jest bardzo powszechnym źródłem stresu, a wcześniaki zazwyczaj poddawane są średnio 10 inwazyjnym zabiegom dziennie6. Wcześniaki przebywające na OIOM-ie dla noworodków napotykają szereg czynników stresogennych, w tym ból, ograniczony kontakt z matką, bodźce słuchowe i nadmierne oświetlenie7,8,9.
Wykorzystanie modeli zwierzęcych jest niezbędne do pogłębienia naszego zrozumienia mechanizmów leżących u podstaw tych procesów i ułatwienia nowych postępów w tej dziedzinie. W szczególności wykorzystanie w badaniach modeli zwierzęcych wcześniaków może znacznie przyczynić się do poszerzenia wiedzy na temat wcześniaków i dostarczyć cennych informacji na temat interwencji w zakresie leczenia bólu u wcześniaków10.
Obecnie istnieje ograniczona liczba modeli gryzoni, które dotyczą wcześniactwa, przy czym większość z tych badań dotyczy przede wszystkim wpływu wcześniactwa na mózg11, rozwój płuc12, martwicze zapalenie jelit13, lub badania żywieniowe układu odpornościowego14. Jednak żaden z tych modeli nie bada dojrzewania układu bólowego, który jest szczególnie wrażliwy w przypadku wcześniactwa.
Przedwczesny poród i jego konsekwencje dla wczesnego leczenia bólu poporodowego pozostają kluczowymi obszarami badań. W związku z tym niniejsza praca miała na celu wzbogacenie literatury poprzez ustanowienie modelu wcześniaka. Model ten dostarcza informacji na temat wpływu bodźców kłujących szpilkami u noworodków na progi bólu na późniejszych etapach życia, poszerzając naszą wiedzę na temat bólu związanego z wcześniactwem.

<table><tbody><tr><td>0,9% roztwór NaCl</td><td>Concare, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Klatki akrylowe (42 cm i razy 24 cm & razy 15 cm) z podłogą z siatki drucianej</td><td>Insight Equipamentos, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kompletny adiuwant Freunda (CFA)&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electronic von Frey,Insight</td> <td>Equipamentos, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H2O2 (nadtlenek wodoru)</td><td>ACS Cientifica, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oświetlenie podczerwone</td><td>Carci, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Izofluran (2%)</td><td>Crist&aaostry; lia, Brazylia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop pionowy</td><td>Nikon, Brazylia</td><td>Mikroskop ECLIPSE Ei</td><td>z soczewkami obiektywowymi 10x i 40x</td></tr></tbody></table>

model wcześniaka do badań nad bólem

A Preterm Rat Model for Pain Studies

To badanie zagłębia się w konsekwencje konsekwentnej stymulacji szpilkami u wcześniaków, aby ustalić jej długoterminowe implikacje dla wrażliwości na ból. Głównym celem tego protokołu było zbadanie wpływu bodźców kłujących szpilkami u noworodków na próg bólu w późniejszych etapach życia przy użyciu modelu wcześniaka. Ustanawiając ten model, dążymy do postępu w badaniach nad zrozumieniem i radzeniem sobie z wczesnym bólem poporodowym związanym z wcześniactwem. Wyniki tego badania wskazują, że podczas gdy wyjściowe progi dla bodźców mechanicznych pozostały nienaruszone, nastąpił znaczny wzrost nadwrażliwości mechanicznej po całkowitym wstrzyknięciu adiuwanta Freunda (CFA) u dorosłych szczurów. Co ciekawe, w porównaniu z samcami szczurów, samice szczurów wykazywały zwiększoną nadwrażliwość zapalną. Warto zauważyć, że zachowanie matki, waga miotów i trajektoria wzrostu potomstwa pozostały niezmienione przez stymulację. Manifestacja zmienionych reakcji nocyceptywnych w wieku dorosłym po bolesnych bodźcach noworodkowych może wskazywać na zmiany w przetwarzaniu sensorycznym i funkcjonowaniu receptorów glikokortykosteroidowych. Potrzebne są jednak dalsze badania, aby zrozumieć mechanizmy leżące u podstaw tego zjawiska i opracować interwencje w zakresie konsekwencji wcześniactwa i bólu noworodków u dorosłych.

W niniejszym badaniu nie stwierdzono różnic w zachowaniach macierzyńskich ani pozamacierzyńskich między matkami, niezależnie od tego, czy ich potomstwo było poddawane eksperymentom z nakłuciami w okresie noworodkowym, oraz czy potomstwo urodziło się przedwcześnie, czy w terminie (Rycina 1). W odniesieniu do zachowania macierzyńskiego adopcyjnych matek przedwcześnie urodzonego potomstwa, dwuczynnikowa analiza wariancji (ANOVA) wykazała wpływ PND (dzień postnatalny), ale brak wpływu bodźców w ...

Tutaj prezentujemy zwięzły protokół tworzenia modelu wcześniaka, ułatwiający badania nad wczesnym leczeniem bólu poporodowego. Metoda polega na wykonaniu cesarskiego cięcia na trzy dni przed spodziewanym porodem, ekstrakcji wcześniaków poprzez histerektomię i zintegrowaniu ich z biologicznym potomstwem matki zastępczej.

Model wcześniaka do badań nad bólem

This research delves into the consequences of consistent pinprick stimulation on preterm offspring to ascertain its long-term implications for pain ...

Na początek zaopatrz się w częściowo znieczuloną matkę w ciąży przedwczesnej. Po eutanazji wykonaj trzycentymetrowe nacięcie w linii środkowej dolnej części brzucha, a następnie dwucentymetrowe cięcie wzdłużne. Następnie wykonaj nacięcie wzdłuż granicy antykrezki w części środkowej każdego jajowodu macicy z tych nacięć.Następnie wykonaj histerektomię i delikatnie usuń młode szczura i łożysko jeden po drugim. Wykąp szczenię, aby zapobiec kanibalizmowi przez zastępcze matki. Po wysuszeniu szczeniaka usuń wszelkie ślady krwi.Za pomocą ręczników papierowych dokładnie oczyść drogi oddechowe szczeniaka. Następnie przetnij pępowinę tuż pod łożyskiem i za pomocą bawełny nasączonej nadtlenkiem wodoru zatamuj krwawienie z obszaru pępowiny. Umieść szczeniaka na szalce Petriego pod ogrzewanym oświetleniem podczerwonym w temperaturze 28 stopni Celsjusza, aż oddech się unormuje.W przypadku procedury adopcyjnej każdą matkę zastępczą należy umieścić osobno w miocie i zachować integralność klatek. Oznacz każde szczenię semestralne z ręki rodziny zastępczej. Następnie umieść wcześniaka wraz ze szczeniętami matki zastępczej na zewnątrz gniazda, aby zapoznać się z zapachem nowych szczeniąt.Usuń szczen

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Ze względu na prostotę zabiegu chirurgicznego oraz wyraźne efekty behawioralne, przewlekłe uciskowe uszkodzenie nerwu kulszowego jest jednym z najważniejszych modeli zwierzęcych bólu neuropatycznego. W ciągu 24 h po operacji rozwija się nadwrażliwość bólowa, którą można zmierzyć ilościowo za pomocą estezjometru von Freya (test mechaniczny) oraz urządzenia do pomiaru analgesii podeszwowej (test termiczny).

Przewlekłe uciskowe uszkodzenie nerwu kulszowego i badanie nadwrażliwości bólowej u szczurów

Ból neuropatyczny jest konsekwencją uszkodzenia lub choroby wpływającej na układ somatosensoryczny. "Model mankietowy" bólu neuropatycznego u myszy polega na wszczepieniu mankietu polietylenowego wokół głównej gałęzi nerwu kulszowego. Mechaniczna allodynia jest testowana przy użyciu filamentów von Freya.

Model kajdanki nerwu kulszowego bólu neuropatycznego u myszy

Dostarczony jest tutaj protokół, który szczegółowo opisuje kroki prowadzące do stworzenia zwierzęcego modelu przewlekłego bólu po niedokrwieniu (CPIP). Jest to dobrze rozpoznawalny model naśladujący ludzki złożony zespół bólu regionalnego typu I. Dalej oceniane są nadwrażliwości mechaniczne i termiczne, a także zachowania nocyfensywne wywołane kapsaicyną obserwowane w modelu szczurzym CPIP.

Model przewlekłego bólu po niedokrwieniu złożonego zespołu bólu regionalnego typu I u szczurów

Aby opracować nowatorskie interwencje terapeutyczne w celu zapobiegania i leczenia bólu pleców, potrzebne są modele zwierzęce, które zbadają mechanizmy i skuteczność tych terapii z perspektywy translacyjnej. Niniejszy protokół opisuje test BMS, znormalizowaną metodę oceny wrażliwości mechanicznej pleców u szczura.

Ocena wrażliwości mechanicznej pleców u szczura do mechanistycznego badania przewlekłego bólu pleców

Metody prostej, szybkiej indukcji modelu bólu pleców u myszy są tutaj dostępne za pomocą iniekcji aktywatora plazminogenu w moczu do wnętrza więzadła.

Model bólu pleców myszy wywołany aktywatorem plazminogenu typu urokinazy

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego wywołuje długotrwały przewlekły ból neuropatyczny, charakteryzujący się przesadnymi reakcjami na bodźce termiczne i mechaniczne. Ten mysi model bólu neuropatycznego jest powszechnie stosowany do badania innowacyjnych terapii leczenia bólu. W tym artykule szczegółowo opisano procedurę chirurgiczną w celu poprawy standaryzacji i odtwarzalności.

Częściowe podwiązanie nerwu kulszowego: mysi model przewlekłego bólu neuropatycznego w celu zbadania antynocyceptywnego działania nowych terapii

Ten artykuł przedstawia manipulację w leczeniu przewlekłego ucisku zwoju korzenia grzbietowego u szczurów za pomocą terapii Tuina, wraz z metodą oceny jej skuteczności na podstawie zachowania bólu i wyników histopatologicznych.

Przeciwbólowe działanie tuiny na modele szczurów z kompresją bólu zwoju korzenia grzbietowego

Prezentujemy protokół wykorzystujący symulator manipulacji tuina do przeprowadzenia terapii tuina "Three-Manipulation and Three-Acupoint" dla szczurów z niewielkimi przewlekłymi urazami zwężeniowymi i oceny skutecznych punktów czasowych przeciwbólowych tuiny w ciągu 24 godzin, testując zmiany bólu poprzez analizę behawioralną i zmiany w ekspresji czynnika zapalnego za pomocą testu immunoenzymatycznego.

Charakterystyka zmian bólowych u szczurów z uszkodzeniem nerwów w ciągu 24 godzin po jednorazowej interwencji Tuina

Ten protokół pokazuje, jak wykonać amputację poniżej kolana u szczurów i natychmiast przeprowadzić ukierunkowaną reinnerwację mięśni (iTMR), aby zbadać strategie leczenia i zapobiegania bólowi związanemu z amputacją oraz lepiej zrozumieć mechanizmy bólu związane z amputacją.

Model ćwiczeniowy amputacji kończyny dolnej szczura poniżej kolana i natychmiastowa ingerencja mięśniowa

Protokół ten przedstawia powtarzalny model szczura wykorzystujący nerwy czuciowe do naśladowania bólu neuromimy u człowieka oraz oceny zabiegów chirurgicznych, oferując cenne narzędzie do badań nad neuromią translacyjną.

Nowy chirurgiczny model gryzonia do badania opcji leczenia bólu nerwiaka z wykorzystaniem ukierunkowanej renerwacji mięśni przez nerw odpiszczelowy

Protokół ten przedstawia krok po kroku instrukcje stworzenia urazu splotu ramiennego noworodka u szczurów, który będzie wzór w badaniach nad urazem przy porodzie ramiennym.

Opracowanie modelu noworodkowego szczura dla urazu urodzonego splotu ramiennego

Poznaj protokół tworzenia modelu wcześniaka u szczurów do badań nad bólem noworodkowym. Metoda obejmuje cięcie cesarskie, histerektomię i adopcję przez surogatkę, umożliwiając badanie mechanizmów bólu.

Model wcześniaka do badań nad bólem

Przeglądaj więcej filmów