Name: Przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres u szczurów na podstawie medycyny mongolskiej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-27T14:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: Poznaj model CUMS depresji u szczurów oparty na teorii medycyny mongolskiej z testami behawioralnymi. Ta metoda pozwala badać czynniki wewnętrzne i zewnętrzne wpływające na zdrowie psychiczne.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Jesteśmy wdzięczni za dostarczone oprzyrządowanie i laboratorium, aby wyrazić naszą wdzięczność mongolskiemu wydziałowi medycznemu Uniwersytetu Medycznego Mongolii Wewnętrznej w Chinach.To badanie było wspierane przez dostarczenie niezbędnego oprzyrządowania i zaplecza laboratoryjnego. Badanie to otrzymało wsparcie finansowe od Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (grant nr 81760762) oraz projektu Chińskiego Uniwersytetu Medycznego Mongolii Wewnętrznej (grant nr 1). YKD2022MS074) oraz Projekt Naukowo-Badawczy Szkolnictwa Wyższego w Mongolii Wewnętrznej w Chinach (grant nr NJZY22661) oraz projekt Funduszu Otwartego Kluczowego Laboratorium Medycyny Chińskiej i Mongolskiej w Regionie Autonomicznym Mongolii Wewnętrznej w Chinach (grant nr 1). MYX2023-K07).

Protokoły eksperymentalne zostały zatwierdzone przez Komisję ds. Etyki Opieki nad Zwierzętami w Eksperymentach Uniwersytetu Medycznego w Mongolii Wewnętrznej (YKD202301172) i były zgodne z wytycznymi National Institutes of Health dotyczącymi opieki i etyki w badaniach na zwierzętach. Numer licencji naszego ośrodka dla zwierząt to NO.110324230102364187. Pozyskano dwudziestu czterech samców szczurów Sprague-Dawley (SD) w wieku 8 tygodni (200 g ± 20 g), które utrzymywano w kontrolowanym środowisku o temperaturze 22°C ± 2°C i wilgotności 55% ± 15%. Szczury karmiono standardową karmą utrzymującą dla gryzoni, zapewniając dostęp do czystej wody oraz ściółki z kolb kukurydzy. Przed rozpoczęciem eksperymentów szczury przez 1 tydzień poddawano 12-godzinnemu cyklowi światła i ciemności (12 h/12 h).
1. Ustanowienie szczurzego modelu CUMS
<ol>
	<li>Grupowanie
	<ol>
		<li>Podziel 24 szczury losowo na 2 grupy: grupę kontrolną (CON), która nie będzie poddana izolacji ani stresowi, oraz grupę modelową (MOD). Każda grupa składa się z 12 szczurów.</li>
		<li>Umieść szczury w standardowych klatkach o wymiarach 55 cm x 40 cm x 20 cm, po 6 szczurów na klatkę. Zachowaj ten przydział do klatek przez cały okres aklimatyzacji, chyba że wskazano inaczej.</li>
		<li>Wypełnij każdą klatkę hodowlaną świeżą ściółką i wymieniaj ją dwa razy w tygodniu.</li>
		<li>Przeprowadź 1-tygodniowy okres aklimatyzacji. Zapewnij szczurom nieograniczony dostęp do pożywienia i wody, z wyjątkiem czasu stosowania stresorów CUMS. Utrzymuj stałe warunki środowiskowe z temperaturą 22°C ± 2°C, wilgotnością 55% ± 15% oraz 12-godzinnym cyklem światła i ciemności (12 h/12 h) od 08:00 do 20:00, chyba że zaznaczono inaczej.</li>
		<li>Przed rozpoczęciem eksperymentu codziennie manipuluj szczurami, aby przyzwyczaić je do badacza i zminimalizować dodatkowy stres w fazie eksperymentalnej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Izolacja z przewlekłym nieprzewidywalnym łagodnym stresem
	<ol>
		<li>Umieść jednocześnie grupy MOD i CON w oddzielnych pomieszczeniach. Szczury z grupy MOD trzymaj indywidualnie, natomiast szczury z grupy CON razem. Wszystkie pozostałe warunki utrzymuj na stałym poziomie.</li>
		<li>Wdróż 28-dniowy schemat stresorów25. Aby zapobiec habituacji i zapewnić nieprzewidywalność stresorów, stosuj jeden losowy stresor dziennie, unikając użycia tego samego stresora w kolejne dni.</li>
		<li>W różne dni stosuj losowo jeden z dziewięciu następujących stresorów26,27: 24-godzinną deprywację wody, 24-godzinną deprywację pokarmu, mokrą ściółkę, nachylenie klatki, odwrócenie cyklu światło/ciemność, ekspozycję na zimno w 4 °C, ekspozycję na ciepło w 45 °C, 1-minutowe zaciskanie ogona lub 15-minutowe wstrząsanie przy 160 rpm. Szczegółowy plan przedstawiono w Tabeli 1.</li>
		<li>Podczas stosowania stresora ogranicz dostęp do pożywienia i wody dla grupy MOD do momentu ustąpienia stresu, z wyjątkiem odwrócenia cyklu światło/ciemność. W przypadku grupy CON nie było wymagane ograniczanie wody i diety.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Metody stresowe
	<ol>
		<li>Rozpocznij eksperyment od zastosowania bodźców depresyjnych w połączeniu z 28-dniową izolacją u wszystkich szczurów, z wyłączeniem grupy kontrolnej. Umieść te szczury w indywidualnych klatkach. Warunki dotyczące bodźców depresyjnych znajdują się w Tabeli 2.</li>
		<li>Aby przeprowadzić metodę zaciskania ogona, unieruchom ogon szczura z grupy MOD, zaciskając go standardowym spinaczem biurowym w odległości 1-2 cm od nasady ogona. Mierz czas zaciskania przez okres 1 min (n = 12).</li>
		<li>W metodzie deprywacji wody odizoluj szczura z grupy MOD od wody poprzez usunięcie butelki z wodą i rejestruj przez 24 h. 
		UWAGA: Odnotowano czas rozpoczęcia deprywacji wody, aby można było dokładnie obliczyć czas jej zakończenia; obserwowano zachowanie szczurów w tym okresie, w tym aktywność, apetyt i stan psychiczny.</li>
		<li>W metodzie deprywacji pokarmu odizoluj szczura z grupy MOD od pożywienia i rejestruj przez 24 h. 
		UWAGA: Zapisz czas rozpoczęcia deprywacji pokarmu, aby można było dokładnie obliczyć czas jej zakończenia; upewnij się, że szczury są odpowiednio nawodnione w tym okresie; obserwuj zachowanie szczurów w tym czasie, w tym aktywność, stan psychiczny itd.</li>
		<li>W przypadku stymulacji zimnem w 4 °C umieść szczura z grupy MOD w wiadrze z zimną wodą i rejestruj przez 5 min. Upewnij się, że temperatura wody pozostaje stała przez cały czas trwania testu. Po zakończeniu eksperymentu osusz szczura suszarką i zwróć go do oryginalnej klatki. 
		UWAGA: Utrzymuj temperaturę zimnej wody na poziomie 4 °C za pomocą termometru i kostek lodu w celu regulacji temperatury wody w przypadku jej wzrostu. Wodę należy zmieniać regularnie, aby zapewnić jej czystość i stałą temperaturę. Podczas pływania wszystkie kończyny i tułów szczurów powinny być zanurzone w zimnej wodzie, z wyjątkiem głowy. Głębokość wody musi być większa niż długość ciała szczura, aby zapobiec wyskakiwaniu szczura z wody w wyniku kontaktu z dnem wiadra.</li>
		<li>Aby zastosować stres cieplny w 45 °C, umieść szczura z grupy MOD w inkubatorze i rejestruj przez 5 min, upewniając się, że temperatura pozostaje stabilna przez cały test.</li>
		<li>W przypadku odwrócenia cyklu światło-ciemność okryj klatkę czarnym materiałem na 1 h, aby zasymulować dzienną ciemność. Następnie oświetl klatkę przez 12 h w nocy, aby naśladować światło dzienne. Rejestruj zachowanie szczura, spożycie pokarmu i wody oraz wzorce snu przez 24 h.</li>
		<li>W eksperymencie z mokrą ściółką wlej 200 mL wody do klatki zawierającej 100 g ściółki. Umieść szczura z grupy MOD w mokrej klatce i rejestruj zachowanie szczurów pod wpływem stresu wywołanego mokrą ściółką, w tym aktywność, apetyt, spożycie wody itd. Obserwuj, czy występują jakiekolwiek nieprawidłowe zachowania lub reakcje dyskomfortu, takie jak stan skóry i sierści szczurów, które mogą być spowodowane mokrą ściółką, i rejestruj je na bieżąco do późniejszej analizy przez 24 h. Po teście osusz szczura suszarką i zwróć go do klatki ze świeżymi wiórami drewnianymi.</li>
		<li>W metodzie nachylenia klatki umieść szczura z grupy MOD w klatce nachylonej pod kątem 45° względem ściany i rejestruj przez 24 h. Użyj konstrukcji ramy klatki, aby dostosować kąt i unieruchomić klatkę. 
		UWAGA: Oblicz czas od początku do końca i obserwuj zachowanie szczurów w okresie nachylenia klatki, w tym aktywność, apetyt i stan psychiczny; upewnij się, że kąt nachylenia klatki jest ustawiony prawidłowo i pozostaje stabilny, aby zapewnić dokładność i powtarzalność eksperymentu.</li>
		<li>W przypadku szybkiego wstrząsania umieść szczura z grupy MOD w mechanicznym wstrząsaczu ustawionym na 160 rpm i rejestruj przez 15 min. Następnie stosuje się metody testów behawioralnych w celu oceny prawidłowego ustanowienia modelu.</li>
		<li>Po zastosowaniu stresorów przenieś klatki grupy MOD z pomieszczenia CUMS z powrotem do pomieszczenia hodowlanego. Podczas 4-tygodniowego okresu ekspozycji na stres utrzymuj grupę CON w ich domowych klatkach znajdujących się w pomieszczeniu hodowlanym.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Środki ostrożności podczas eksperymentów
	<ol>
		<li>Przenieś klatki grupy MOD z powrotem do ogólnego pomieszczenia hodowlanego po zastosowaniu stresora w pomieszczeniu CUMS.</li>
		<li>Monitorowanie zwierząt podczas modelowania CUMS
		<ol>
			<li>Podczas zaciskania ogona zwierzę może szamotać się z powodu wywołanej stymulacji. Przez cały ten czas stale monitoruj zacisk. Jeśli się ześlizgnie, zatrzymaj stoper, ponownie nałóż zacisk, a następnie wznowij odliczanie do 1 min.</li>
			<li>Nie stosuj jednocześnie deprywacji wody i stresora w postaci mokrej ściółki. 
			UWAGA: Unikanie jednoczesnego stosowania mokrej ściółki i deprywacji wody pomaga zachować integralność eksperymentu, redukuje zmienne zakłócające i sprzyja dobrostanowi zwierząt.</li>
			<li>Temperatura ciała zwierzęcia i temperatura otoczenia mogą podnieść temperaturę wody podczas pływania w zimnej wodzie. Dlatego należy korygować ją poprzez dodawanie lodowatej wody lub kostek lodu, aby utrzymać stałą temperaturę wody.</li>
			<li>Obserwuj szczury w odstępach 30-minutowych podczas stosowania stresorów, z wyjątkiem odwrócenia cyklu dobowego. Zwróć szczególną uwagę na oznaki niezwykłego stresu, takie jak drżenie, letarg lub brak ruchu. Jeśli zaobserwowane zostaną takie objawy – w szczególności potencjalna hipotermia podczas pływania w zimnej wodzie (4 °C) i przy mokrej ściółce – natychmiast usuń szczura ze stresora. 
			UWAGA: Usuń zwierzęta eksperymentalne z badania, gdy wystąpią u nich problemy zdrowotne, takie jak infekcja, ciężki uraz, zachowania agresywne, nieprawidłowa ruchliwość itd. Warunki usuwania zwierząt z badania opierają się zazwyczaj na ochronie ich zdrowia i bezpieczeństwa przy jednoczesnym zapewnieniu integralności wyników eksperymentalnych.</li>
			<li>Przeprowadzaj codzienne inspekcje w poszukiwaniu ran lub innych nieprawidłowości fizycznych bądź behawioralnych u każdego szczura. W przypadku zaobserwowania jakichkolwiek nieprawidłowości skonsultuj się z weterynarzem laboratoryjnym, aby ustalić, czy szczur powinien zostać wykluczony z eksperymentu.</li>
			<li>Waż każdego szczura co 3 dni. Jeśli zwierzę straci więcej niż 20% swojej podstawowej masy ciała sprzed karmienia, musi zostać wykluczone z eksperymentu.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Testy behawioralne
<ol>
	<li>W pierwszej kolejności wszystkim szczurom, z wyjątkiem grupy kontrolnej, należy poddać działaniu bodźców depresyjnych w połączeniu z izolacją przez 28 dni. Szczury należy umieścić w indywidualnych klatkach. Szczegółowe warunki stosowania bodźców depresyjnych przedstawiono w Tabeli 2.</li>
	<li>Do testu otwartego pola należy wykorzystać czarną skrzynkę podzieloną na 25 kwadratowych sekcji o równej powierzchni. W skrzynce należy zainstalować system wideotrakingu do analizy ruchu. Szczura należy umieścić w centralnym kwadracie i monitorować jego aktywność horyzontalną oraz wertykalną przez 5 min. 
	UWAGA: Wymiary skrzynki wynoszą 500 mm x 500 mm x 300 mm. Dane dotyczące aktywności zostaną zebrane za pomocą systemu wideotrakingu w celu oceny zachowań lękowych u gryzoni po wystawieniu ich na nowe środowisko.</li>
	<li>Następnie należy zliczyć liczbę kwadratów pokonanych przez szczura (licząc wszystkie łapy), aby określić poziom aktywności horyzontalnej. Liczbę przypadków stania na tylnych łapach oraz pielęgnacji (grooming) należy przyjąć jako wskaźniki aktywności wertykalnej. Po każdym teście skrzynkę należy zdezynfekować 75% alkoholem, aby usunąć zapachy pozostałe po poprzednim zwierzęciu przed kolejnymi testami.</li>
	<li>Kolejno, anhedonię ocenia się za pomocą testu preferencji sakarozy. Na pokrywie klatki należy umieścić dwie butelki: butelkę A zawierającą czystą wodę oraz butelkę B zawierającą 1% roztwór sakarozy. Szczurowi należy zapewnić dostęp ad libitum do obu roztworów. Butelki należy zważyć przed i po spożyciu, aby obliczyć wskaźnik preferencji sakarozy w czasie 60 min w dniach 0, 7, 14, 21 i 28. Wzór jest następujący: 
	Spożycie sakarozy = <img alt="Równanie pokazujące stosunek spożycia wody z sakarozą; spożycie sakarozy B:A w stosunku do całkowitego spożycia; schemat wzoru." src="/files/ftp_upload/65889/65889eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Równanie 1"> × 100%</li>
	<li>W celu pomiaru pamięci przestrzennej i zdolności uczenia się należy zastosować test wodnego labiryntu Morrisa. Basen należy podzielić na cztery kwadranty, numerując je od jeden do cztery. W trzecim kwadrancie należy umieścić zatopioną platformę spoczynkową 1 cm poniżej powierzchni wody.</li>
	<li>Do basenu należy dodać mleko w celu zwiększenia mętności wody, a temperaturę wody należy utrzymywać na poziomie około 23 °C przez cały czas trwania procedury eksperymentalnej.</li>
	<li>Każdego szczura należy umieszczać w różnych kwadrantach labiryntu, dając im 120 s na zlokalizowanie ukrytej platformy. Szczury muszą polegać na pamięci przestrzennej i zdolnościach uczenia się, aby zapamiętać lokalizację platformy. Po nauczeniu się położenia platformy będą mogły dopłynąć do niej bezpośrednio. Czas latencji należy zarejestrować za pomocą systemu wideotrakingu labiryntu wodnego Morrisa.</li>
	<li>Szczura należy ustawić w stałym punkcie basenu. Jeśli badane zwierzę nie zlokalizuje ukrytej platformy w ciągu 120 s, czas latencji zapisuje się jako 120 s.</li>
	<li>Na koniec należy usunąć ukrytą platformę, ponownie umieścić szczura w wodzie i zarejestrować liczbę przekroczeń strefy w okresie 120 s.</li>
</ol>
3. Analiza statystyczna
<ol>
	<li>W celu oceny istotnych różnic w parametrach biochemicznych należy zastosować jednoczynnikową analizę wariancji (ANOVA), a następnie test post hoc Duncana. Dane należy przedstawić jako średnią ± błąd standardowy (SE), przyjmując, że wartość p mniejsza niż 0,05 jest statystycznie istotna.</li>
</ol>

Establishing and Validating a Chronic Unpredictable Mild Stress Rat Model

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Depresja to zaburzenie psychiczne charakteryzujące się objawami takimi jak obniżony nastrój, brak przyjemności i zmniejszona energia30. W dziedzinie badań nad depresją stworzenie wiarygodnego modelu zwierzęcego ma kluczowe znaczenie dla postępu w interwencjach terapeutycznych. Wśród różnych modeli zwierzęcych model CUMS jest szczególnie godny uwagi ze względu na jego wysoką wiarygodność, trafność i zgodność z charakterystyką ludzkiej depresji31. Doskonale nadaje się do naśl...

Duże zaburzenie depresyjne (MDD) jest powszechną chorobą psychiczną, plasującą się jako trzecia najczęstsza przyczyna niepełnosprawności na świecie i dotykającą ponad 300 milionów ludzi1,2,3. Warto zauważyć, że szacuje się, że co najmniej połowa osób dotkniętych chorobą nie otrzymuje odpowiedniego leczenia4. Biorąc pod uwagę tę lukę, modele zwierzęce służą jako kluczowe narzędzie do badania etiologii depresji. Do tej pory istnieje ponad 20 różnych zwierzęcych modeli depresji5. Wśród nich, model przewlekłego nieprzewidywalnego łagodnego stresu (CUMS), udoskonalony przez Paula Winera w 1987 roku, jest najczęściej używany6. Model CUMS opiera się na założeniu, że narażenie gryzoni na różnorodny zakres stresorów społeczno-środowiskowych prowadzi do objawów podobnych do lęku, napięcia i depresji. Metodologia polega na wystawianiu zwierząt na różne łagodne czynniki stresogenne przez kilka tygodni, których kulminacją jest szereg zmian behawioralnych, w tym anhedonia i zachowania podobne do depresji7,8. Zmianom tym towarzyszą zmiany w profilach endokrynologicznych i neuroprzekaźników, takie jak zmniejszenie 5-HT9,10. Wyniki te ściśle odzwierciedlają wyniki obserwowane u ludzi, u których zdiagnozowano MDD, potwierdzając w ten sposób użyteczność modelu. Model CUMS jest szczególnie ceniony ze względu na swoją skuteczność w ocenie leków przeciwdepresyjnych, wykazując wysoki poziom trafności powierzchniowej, strukturalnej i predykcyjnej11,12. W przeciwieństwie do innych modeli, CUMS jest wrażliwy na skutki przewlekłego podawania monoaminergicznych leków przeciwdepresyjnych. Na przykład wykazano, że selektywne inhibitory wychwytu zwrotnego serotoniny (SSRI), takie jak citalopram, paroksetyna i fluoksetyna, zapobiegają i odwracają anhedonię w warunkach przewlekłego stresu12,13. Ponadto nowe szybko działające leki przeciwdepresyjne, takie jak ketamina, również wykazały skuteczność w tym modelu14,15. W przeciwieństwie do tego, inne testy, takie jak test wymuszonego pływania (FST) i test zawieszenia ogona (TST), są mniej wiarygodne w modelowaniu długoterminowych zmian w zachowaniu, często odzwierciedlając adaptacje do ostrego stresu, a nie trwałe objawy depresji16. Cechy te podkreślają solidną trafność modelu CUMS w badaniach nad depresją. Jedną z najbardziej istotnych cech modelu CUMS, uznaną za wysoce wiarygodną w badaniach klasycznych, jest anhedonia - niezdolność do odczuwania przyjemności lub zainteresowania codziennymi czynnościami17,18. Zjawisko to jest powszechnie oceniane za pomocą testów preferencji sacharozy i wykazano, że wiele leków przeciwdepresyjnych odwraca zmniejszone spożycie sacharozy. Kilka innych wskaźników jest również powszechnie stosowanych w literaturze CUMS, w tym test otwartego pola (OFT), który ocenia dobrowolne zachowania motoryczne, tendencje eksploracyjne i napięcie, mierząc w ten sposób nasilenie depresji19. Inne testy, takie jak elevated plus maze (EPM) oceniają zachowania podobne do lęku, test labiryntu wodnego Morrisa (MWM) bada funkcjonowanie poznawcze 20, a FST ocenia podatność na negatywne emocje i rozpacz behawioralną<klasa sup = 'xref'>20. Co więcej, większość stresorów, które wpływają na ludzi, ma charakter społeczny. Osoby z nieoptymalnymi relacjami społecznymi, charakteryzującymi się ograniczoną aktywnością społeczną, sieciami i wsparciem, są narażone na zwiększone ryzyko różnych chorób21,22. Ma to również znaczenie w przypadku gryzoni, które są zwierzętami społecznymi żyjącymi w grupach. Na przykład szczury trzymane w izolacji wykazują cechy tak zwanego syndromu izolacji, który wywołuje stres społeczny i przyspiesza wystąpienie depresji23.
Medycyna mongolska, znacząca gałąź medycyny chińskiej, zakłada, że początek choroby to złożona interakcja między czynnikami wewnętrznymi i zewnętrznymi. Te czynniki zewnętrzne, określane jako cztery warunki pomocnicze, obejmują zmiany klimatu, dietę, styl życia i nagłe zdarzenia, takie jak infekcje, zaskakujące incydenty i zaburzenia psychiczne. Proces chorobowy jest konceptualizowany jako ciągła interakcja między trzema elementami - określanymi jako trzy typy homorów - a Siedmioma Składnikami Ciała w połączeniu z czterema warunkami pomocniczymi24. Medycyna mongolska utrzymuje, że ciało ludzkie funkcjonuje jako zintegrowana jednostka, utrzymywana przez względną równowagę między trzema homorami. Zaburzenie tej równowagi jest uważane za prekursor choroby24. Biorąc pod uwagę kluczową rolę eksperymentów na zwierzętach w łączeniu medycyny tradycyjnej i nowoczesnej, kluczowe znaczenie ma opracowanie modeli zwierzęcych, które są istotne dla badań w dziedzinie medycyny mongolskiej. W związku z tym zastosowaliśmy metodologię 28-dniowej izolacji w połączeniu z CUMS, aby symulować te fizjologiczne i psychologiczne czynniki stresogenne. Wybraliśmy dziewięć konkretnych nieprzewidywalnych stresorów i staraliśmy się oprzeć tę metodę modelowania na podstawie teorii trzech homorów medycyny mongolskiej. Stworzenie solidnego modelu zwierzęcego ma zasadnicze znaczenie dla postępu w badaniach podstawowych w medycynie mongolskiej i znacząco przyczyni się do ich podstawowego rozwoju.

<table><tbody><tr><td>1,5 ml probówka wirówkowa</td><td>serwis Biotechnology Co., Ltd</td><td>EP-150-M</td><td></td></tr><tr><td>1000 µ L Serwis pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>IC021198160223</td><td></td></tr><tr><td>10 &amp; mikro; L serwis końcówek do pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>IC012395160823</td><td></td></tr><tr><td>10 &amp; mikro; L serwis końcówek do pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>TP-10</td><td></td></tr><tr><td>1250 µ L serwis końcówek do pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>TP-1250</td><td></td></tr><tr><td>2 mL serwis probówek wirówkowych</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>EP-200-M</td><td></td></tr><tr><td>200 µ L serwis końcówek do pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>TP-200</td><td></td></tr><tr><td>200 &amp; micro; L serwis końcówek do pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>IC021029160323</td><td></td></tr><tr><td>300 &amp; mikro; L Wielokanałowa usługa pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>IC091006161022</td><td></td></tr><tr><td>50 &amp; mikro; L Serwis pipet</td><td>Biotechnology Co., Ltd</td><td>DS35110</td><td></td></tr><tr><td>Automatyczna myjka do płyt</td><td>rayto Life Sciences Co., Ltd</td><td>RT-3100</td><td></td></tr><tr><td>Stołowa wirówka do zamrażania o dużej prędkości</td><td>dalong construction Co., Ltd</td> Waga elektroniczna <td>D3024R</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Mettler Toledo International Trade (Shanghai) Co., Ltd</td><td>ME203E/02</td><td></td></tr><tr><td>Elektrotermiczne suszenie strumieniowo-ścierne piekarnik</td><td>Labotery Experimental Instrument Equipment Co., Ltd</td><td>GEL-70</td><td></td></tr><tr><td>Detektor etykiet enzymów</td><td>BioTeK Co., Ltd</td><td>Epoch</td><td></td></tr><tr><td>High Speed Tissue Grinder</td><td>service Biotechnology Co., Ltd</td><td>KZ-<img alt="Równanie 2" src="/files/ftp_upload/65889/65889eq02.jpg" style="margin: auto; ">-F</td><td></td></tr><tr><td>Zamrażarka pozioma</td><td>Mellow Group Co., Ltd</td><td>BCD-318AT</td><td></td></tr><tr><td>Laboratoryjna maszyna do wody ultraczystej</td><td>Jinan Aiken Environmental Protection Technology Co., Ltd   </td><td>AK-RO-C2</td><td></td></tr><tr><td>System analizy szlaków wideo labiryntu wodnego Morris </td><td>Tai Meng Tech Co., Ltd</td><td>WMT-200</td><td></td></tr><tr><td>Szczur 5-HT ELISA Kit</td><td>Lian Ke bio Co., Ltd, Chiny</td><td>96T / 48T</td><td></td></tr><tr><td>SPF klasa Sprague Dawley (SD) szczury</td><td>SPF (Pekin) Biotechnologia Co </td><td>SCXK(JING)2019-0010</td><td></td></tr><tr><td>Szczury Sprague Dawley</td><td>Beijing Biotechnology Co., Ltd, Chiny</td><td>  SCXK (JING) 2019-0010</td><td></td></tr><tr><td>Pionowa witryna chłodnicza</td><td>Xingx Group Co., Ltd</td> System śledzenia wideo <td>LSC-316C</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tai Meng Tech Co., Ltd</td> Mieszalnik wirowy <td>ZH-ZFT</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Servicebio technology Co., Ltd</td><td>MV-100</td><td></td></tr></tbody></table>

przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres u szczurów na podstawie medycyny mongolskiej

Chronic Unpredictable Mild Stress in Rats based on the Mongolian medicine

Depresja jest powszechnym zaburzeniem afektywnym i stanowi główną przyczynę globalnej niepełnosprawności. Ograniczenia obecnych interwencji farmakologicznych przyczyniają się do znacznego obciążenia zdrowotnego przypisywanego temu schorzeniu. Istnieje pilna potrzeba głębszego zrozumienia mechanizmów leżących u podstaw depresji, co sprawi, że modele przedkliniczne o potencjale translacyjnym będą bardzo cenne. Medycyna mongolska, podzbiór medycyny tradycyjnej, zakłada, że występowanie choroby jest ściśle związane z równowagą wiatru, żółci i flegmy. W tym badaniu przedstawiamy protokół metody przewlekłego nieprzewidywalnego łagodnego stresu (CUMS) u szczurów. W tym kontekście szczury są poddawane serii zmiennych, łagodnych stresorów w celu wywołania fenotypu podobnego do depresji, naśladując patogenezę ludzkiej depresji. Testy behawioralne stosowane w tym protokole obejmują test preferencji sacharozy (SPT), wskazujący na anhedonię - podstawowy objaw depresji; test otwartego pola (OFT), który mierzy poziom lęku; oraz test labiryntu wodnego Morrisa (MWM), który ocenia pamięć przestrzenną i zdolności uczenia się. Metoda CUMS wykazuje zdolność do wywoływania anhedonii i powodowania długotrwałych deficytów behawioralnych. Co więcej, protokół ten jest bardziej zgodny z mongolską teorią medyczną niż inne modele zwierzęce zaprojektowane do wywoływania zachowań podobnych do depresji. Opracowanie tego modelu zwierzęcego i późniejsze badania stanowią solidną podstawę dla przyszłych innowacyjnych badań w dziedzinie medycyny mongolskiej.

Wyniki testów behawioralnych w modelu depresji szczurów indukowanej przez CUMS 
Aby potwierdzić skuteczność procedury CUMS w indukowaniu zachowań depresyjnych, przeprowadzono kontrolę manipulacyjną. Samce szczurów Sprague-Dawley (SD) zostały losowo przydzielone do grupy MOD lub CON na okres 4 tygodni, zgodnie z opisem w kroku 1.2.3. Następnie szczury uśmiercono, a ich hipokampy całkowicie wypreparowano w celu oceny poziomu 5-HT, neuroprzekaźnika silnie powiązanego z patofizjologią depresji<sup class="...

Ten protokół przedstawia model chronicznego nieprzewidywalnego łagodnego stresu (CUMS) dla depresji oparty na mongolskiej teorii medycznej, wraz z metodami walidacji testów behawioralnych.

Przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres u szczurów na podstawie medycyny mongolskiej

Depression is a prevalent affective disorder and constitutes a leading cause of global disability. The limitations of current pharmacological ...

Zakres naszych badań to Mongolskie Badania Medyczne. W niniejszej pracy badamy czynniki przyczyniające się do depresji w medycynie mongolskiej, ze szczególnym naciskiem na interakcję między czynnikami wewnętrznymi, takimi jak wiatr, biofilm, a czynnikami zewnętrznymi. Problem dostosowania się do braku tradycyjnych mongolskich modeli medycznych został rozwiązany.Protokół ten odnosi się do ustanowienia modelu zwierzęcego opartego na mongolskiej teorii medycznej i zawiera pewne sugestie dotyczące przyszłych badań nad medycyną mongolską. W badaniach nad zaburzeniami depresyjnymi ustalenie modelu zwierzęcego ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia patologicznych mechanizmów i skutków nowych leków. W porównaniu z innymi technikami, protokół ten jest bardziej zgodny z patogenezą i zasadami leczenia depresji w tradycyjnej medycynie mongolskiej, co pomoże w przyszłych badaniach nad leczeniem depresji w medycynie mongolskiej.Protokół może wykazać związek między czynnikami zewnętrznymi i wewnętrznymi oddziałującymi na siebie w celu wywołania choroby i jest zgodny z systemem teoretycznym medycyny mongolskiej. Przyczyni się do rozwoju podstawowych badań tradycyjnej medycyny nad depresją i dostarczy pewnych zaleceń, które pomogą kolejnym badaczom w badaniach, rozwoju i wykorzystaniu tradycyjnych leków. Po podzieleniu szczurów na grupę kontrolną lub CON i modelową lub MOD, trzymaj je w indywidualnych klatkach.W przypadku metody zacisku ogonowego zabezpiecz ogon szczura i zmierz czas zaciskania przez jedną minutę. W przypadku metody pozbawiania wody wyjmij butelkę do karmienia z klatki i nagrywaj szczura przez 24 godziny. W przypadku metody pozbawiania pokarmu wyjmij pokarm z klatki i nagrywaj szczura przez 24 godziny.Aby uzyskać zimną stymulację w temperaturze czterech stopni Celsjusza, umieść szczura w wiadrze z zimną wodą i monitoruj jego aktywność przez pięć minut. Następnie osusz szczura dmuchawą i włóż go z powrotem do pierwotnej klatki. Aby poradzić sobie ze stresem cieplnym o temperaturze 45 stopni Celsjusza, umieść szczura w piekarniku i monitoruj przez pięć minut.Aby odwrócić cykl światło-ciemność, zawiń klatkę w czarną szmatkę na godzinę, aby stymulować ciemność w ciągu dnia. Następnie oświetl klatkę przez 12 godzin w nocy, aby naśladować światło dzienne i rejestruj dane przez 24 godziny. W eksperymencie z mokrą wyściółką wlej 200 mililitrów wody do klatki zawierającej 100 gramów wyściółki.Umieść szczura w mokrej klatce i monitoruj przez 24 godziny. Po wysuszeniu szczura, jak pokazano wcześniej, umieść go z powrotem w klatce zawierającej świeże wióry drzewne. W metodzie nachylenia klatki umieść szczura w klatce ustawionej pod kątem 45 stopni przy ścianie i monitoruj ją przez 24 godziny.W przypadku wytrząsania z dużą prędkością umieść szczura w wytrząsarkach mechanicznych ustawionych na 160 obr./min i rejestruj dane przez 15 minut. Po zastosowaniu stresorów przenieś klatkę grupy mod z pomieszczenia CUMS do pomieszczenia z obudową. Po podzieleniu szczurów na grupę kontrolną lub CON i modelową lub MOD, umieść je w indywidualnych klatkach.W przypadku testu w otwartym polu podziel czarną skrzynkę na 25 kwadratowych odcinków o równej powierzchni. Zainstaluj system analizy śledzenia wideo w pudełku. Umieść szczura na centralnym placu i monitoruj jego aktywność poziomą i pionową przez pięć minut.Po teście zdezynfekuj pudełko 75% alkoholem, aby usunąć wszelkie pozostałe zapachy szczurów. Aby ocenić anhedonię za pomocą testu preferencji sacharozy, zważ butelkę A zawierającą wodę i butelkę B zawierającą 1% sacharozy. Umieść obie butelki na pokrywie klatki i pozwól szczurowi na dostęp ad libitum do obu roztworów.Po spożyciu zważ butelki i korzystając z podanego wzoru, oblicz 60-minutowe stawki preferencji sacharozy w danych dniach. Aby wykonać test labiryntu wodnego Morrisa, podziel basen na cztery ćwiartki i ponumeruj je od jednego do czterech. W trzeciej ćwiartce umieść platformę spoczynkową jeden centymetr poniżej powierzchni wody.Dodaj mleko do basenu, aby zwiększyć nieprzezroczystość wody i utrzymuj temperaturę wody około 23 stopni Celsjusza przez cały czas trwania eksperymentu. Umieść szczura w jednej ćwiartce labiryntu i korzystając z systemu śledzenia wideo labiryntu wodnego Morris, zarejestruj czas opóźnienia, aby zidentyfikować platformę przez 120 sekund. Na koniec usuń ukrytą platformę z basenu.Następnie umieść szczura w wodzie i rejestruj liczbę przekroczeń strefy przez 120 sekund. W teście otwartym grupa MOD wykazywała niższe wyniki pionowe i poziome w porównaniu z grupą CON, co wskazuje na skuteczną indukcję lęku. Po 28 dniach grupa MOD wykazała niższy procent preferencji sacharozy niż grupa CON.Test labiryntu wodnego Morrisa ujawnił, że grupa MOD miała dłuższe opóźnienie w zlokalizowaniu platformy i przekroczyła ją mniej razy w porównaniu z grupą CON. Co więcej, grupa MOD wykazywała obniżony poziom 5HT w hipokampie w porównaniu z grupą CON.

chronic-unpredictable-mild-stress-rats-based-on-mongolian

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Protokół nieprzewidywalnego chronicznego łagodnego stresu (UCMS) jest sprawdzoną metodą badania zmian behawioralnych i fizjologicznych związanych z przewlekłym stresem i objawami depresyjnymi. Osiem tygodni od nałożenia protokołu UCMS wywołuje zmiany w zachowaniu i złe wyniki zdrowotne u gryzoni obu płci.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu w celu wywołania objawów depresyjnych, zmian w zachowaniu i negatywnych skutków zdrowotnych u gryzoni

Tutaj prezentujemy nieprzewidywalny protokół chronicznego łagodnego stresu u myszy. Protokół ten indukuje długoterminowy fenotyp podobny do depresji i umożliwia ocenę skuteczności przypuszczalnych leków przeciwdepresyjnych w odwracaniu behawioralnych i neuromolekularnych deficytów depresyjnych.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy

Tutaj prezentujemy protokół do stworzenia modelu depresyjnego myszy, obserwacji zmian w zachowaniu związanych z przewlekłym nieprzewidywalnym łagodnym stresem (CUMS) i oceny działania przeciwdepresyjnego Xiaoyaosan.

Ocena działania przeciwdepresyjnego Xiaoyaosan na przewlekle zestresowane myszy

Tutaj opisujemy protokół i implementację Methyl-Seq, platformy epigenomicznej, wykorzystującej model szczura do identyfikacji zmian epigenetycznych związanych z przewlekłym narażeniem na stres. Wyniki pokazują, że platforma Methyl-Seq u szczurów jest w stanie wykryć różnice w metylacji, które wynikają z ekspozycji na stres u szczurów.

Szczurza platforma sekwencyjna metylu do identyfikacji zmian epigenetycznych związanych z ekspozycją na stres

Ten artykuł dostarcza uproszczony i ustandaryzowany protokół indukcji zachowań depresyjnych u myszy chronicznie unieruchomionych za pomocą ogranicznika. Ponadto wyjaśniono zachowanie i techniki fizjologiczne w celu weryfikacji indukcji depresji.

Protokół przewlekłego stresu unieruchamiającego w celu wywołania zachowań podobnych do depresji u myszy

Obecny protokół opisuje metodę walidacji testów behawioralnych i bioinformatycznego przewidywania skuteczności terapeutycznej Zadi-5, tradycyjnego mongolskiego medycyny, w depresji.

Analizy behawioralne i farmakologia sieciowa dla tradycyjnej medycyny mongolskiej Zadi-5 w szczurzym modelu depresji

Ten artykuł omawia procedury wywoływania reakcji stresowych za pomocą fizycznego stresu powściągliwości u myszy i szczurów. Omówiono dodatkowe kwestie, które należy wziąć pod uwagę przy wyborze i stosowaniu naprężenia utwierdzenia w modelach gryzoni.

Powściągliwość w wywoływaniu stresu u myszy i szczurów

W badaniu tym oceniono skuteczność przeciwdepresyjną Qiangzhifang w szczurzym modelu przewlekłej depresji wywołanej stresem ograniczającym i wyjaśniono jego wpływ regulacyjny na szlaki HIF-1 i JAK-STAT za pomocą farmakologii sieciowej i analizy dokowania molekularnego.

Farmakologia sieciowa i walidacja mechanizmów przeciwdepresyjnych Qiangzhifang w modelu szczura depresji wywołanej przewlekłym stresem

Opisujemy dwie metody testowania czucia dotykowego w ostrych lub przewlekłych okresach po urazie rdzenia kręgowego u szczurów. Te zwalidowane procedury pozwalają wykryć rozwój i utrzymywanie się doznań typu allodynii.

Ostre i przewlekłe badanie czucia dotykowego po uszkodzeniu rdzenia kręgowego u szczurów

Opisujemy szczurzy model zespołu stresu pourazowego (PTSD), który wykazuje trwałe zmiany w funkcji neuroendokrynnej oraz opóźnioną, długotrwałą i nasiloną reakcję lękową, charakterystyczną dla pacjentów z PTSD. Opisany tutaj model zwierzęcy oraz metody są przydatne do korelacji biomarkerów w jądrach mózgu, które mają charakter mechanistyczny, ale nie mogą być mierzone u pacjentów, z biomarkerami w obwodowych leukocytach, które podlegają pomiarowi.

Biomarkery w modelu zwierzęcym służące do ujawnienia korelatów neuronalnych, hematologicznych i behawioralnych PTSD

Poznaj model CUMS depresji u szczurów oparty na teorii medycyny mongolskiej z testami behawioralnymi. Ta metoda pozwala badać czynniki wewnętrzne i zewnętrzne wpływające na zdrowie psychiczne.

Przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres u szczurów na podstawie medycyny mongolskiej

Przeglądaj więcej filmów