Name: Procedura operacyjna i środki ostrożności związane z terapią akupunkturą z osadzaniem nici w chorobie Alzheimera (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-10T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 54 s
Description: Poznaj metodę akupunktury z osadzaniem nici w leczeniu objawów choroby Alzheimera u szczurów. Technika ta poprawia pamięć przestrzenną i zdolności poznawcze, oferując mniej inwazyjną alternatywę terapeutyczną.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została wsparta funduszami z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (NSFC) nr 82374564 (do YJD) i nr 82074566 (do YJD) oraz z Bazy Dziedziczenia Sun Guojie dla TCM Akupunktura-Moxibustion Światowej Federacji Towarzystw Akupunktury-Moxibustion w Wuhan, Chiny (Światowa Federacja Stowarzyszeń Akupunktury-Moxibustion [2019] Nr 26) (dla YJD) oraz projektu budowy National Famous TCM Inheritance Studio Narodowej Administracji Tradycyjna Medycyna Chińska, Chiny (Krajowa Administracja Tradycyjnej Medycyny Chińskiej [2022] nr 5) (do YJD).

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z Przewodnikiem Narodowych Instytutów Zdrowia dla Opieki i Użytkowania Zwierząt Laboratoryjnych i zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Zarządzania i Użytkowania Zwierząt Laboratoryjnych Centrum Kontroli i Zapobiegania Chorobom Prowincji Hubei. Do badania wykorzystano łącznie 18 3-miesięcznych samic szczurów rasy Sprague-Dawley (SD) o wadze 220-250 g. Wszystkie szczury utrzymywano w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność w temperaturze 23 ± 1 °C i wilgotności 40%-50%, ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody. Po tygodniowym okresie aklimatyzacji, podczas którego szczury mogły przyzwyczaić się do warunków laboratoryjnych, rozpoczęto eksperymenty.
1. Rozwój modelu
<ol>
	<li>Projekt eksperymentalny jest pokazany w Rysunek 1. Losowo podziel 18 3-miesięcznych samic szczurów Sprague-Dawley o wadze 220-250 g na grupy kontrolne, modelowe i TEAT. Każda grupa składa się z 6 szczurów.</li>
	<li>Grupie modelowej i grupie TEAT należy codziennie wstrzykiwać D-galaktozę (D-gal; 120 mg/kg/dobę), podczas gdy grupie kontrolnej podaje się zastrzyki z soli fizjologicznej (120 mg/kg/dobę) przez 7 tygodni (49 dni) w dolną część brzuszną22. Wstrzyknięcie należy podawać codziennie między 8:00 a 9:00 rano.</li>
	<li>Waż szczury 7 dnia każdego tygodnia między 9:00 a 10:00. Eksperyment trwał 49 dni. Zakopuj nici co 14 dni w 14, 28 i 42dniu. Ustal czas osadzania każdego wątku między 9:00 a 12:00.</li>
	<li>Kontynuuj dootrzewnowe podawanie D-galaktozy przez 7 tygodni w celu wywołania patologicznych objawów związanych z chorobą Alzheimera u szczurów22.</li>
</ol>
2. Przygotowanie do TEAT
<ol>
	<li>Sterylizuj narzędzia chirurgiczne, takie jak nożyczki okulistyczne, tace i pęsety, i dezynfekuj. Dokładnie oczyść powierzchnie w środowisku sali operacyjnej i zdezynfekuj.</li>
	<li>Przygotuj platformę chirurgiczną, kładąc płaską poduszkę grzewczą dla małych zwierząt na powierzchni, a następnie owijając ją sterylnym ręcznikiem. Następnie oczyszczoną i zdezynfekowaną tablicę operacyjną należy ułożyć gładko na wierzchu, szorstką stroną skierowaną do góry. Następnie włącz poduszkę grzewczą i ustaw temperaturę na 32 °C.</li>
	<li>Do zabiegu należy dobrać jednorazową igłę do zatapiania nici nr 6 o średnicy 0,6 mm oraz wchłanialny szew chirurgiczny 5-0 (szew kolagenowy) o długości 2 cm. Wchłanialny szew chirurgiczny 5-0 o długości 2 cm należy przeciąć na kawałki o długości 0,5 cm i 0,2 cm za pomocą nożyczek okulistycznych. Namocz przeciętą nić w 0,9% soli fizjologicznej i odstaw na bok.</li>
	<li>Myj ręce mydłem i wodą przez 20 s, a następnie wysusz je. Następnie załóż sterylne rękawiczki.</li>
	<li>Znieczulić szczury wstrzyknięciem hydratu chloralu (300 mg / kg) w dolną część brzuszną, upewniając się, że znieczulenie zostanie potwierdzone, gdy zwierzęta nie reagują na płaszczyźnie chirurgicznej, w oparciu o brak odpowiedzi z testu szczypania palca u nogi i utrzymując stabilny stan fizjologiczny. Dodatkowo, aby zapobiec wysuszeniu rogówki i potencjalnym uszkodzeniom, gdy szczury są pod narkozą, nałóż dużą ilość maści weterynaryjnej na oczy, upewniając się, że pozostają nawilżone przez cały zabieg. 
	UWAGA: Zaleca się znieczulenie szczura, ponieważ przekłucie jest dla niego bolesne.</li>
</ol>
3. Operacja osadzania wątków dla Baihui (GV 20)
<ol>
	<li>Zlokalizuj punkt akupunkturowy Baihui (GV 20) u szczurów w prawym środkowym punkcie kości ciemieniowej (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2A). Ustaw szczury tak, aby całkowicie odsłoniły głowę, z uszami pociągniętymi do przodu, aby przybliżyć metodę stosowaną u ludzi do łączenia linii wierzchołka ucha. Zidentyfikuj punkt Baihui (GV 20), dotykając palpacyjnie środkowego podłużnego grzbietu czaszki i wskazując położenie mniej więcej w jego punkcie środkowym. Potwierdź ten punkt akupunkturowy dalej na poziomie, na którym uszy stykałyby się z głową, gdyby były ułożone płasko, wyrównując się z przecięciem szwu strzałkowego i kości ciemieniowej. Użyj markera, aby oznaczyć Baihui (GV 20).</li>
	<li>Ogol obszar głowy wokół punktu akupunkturowego szczura za pomocą trymera (zwykle elektrycznego trymera do brody męskiej).</li>
	<li>Przed zabiegiem należy zdezynfekować punkty akupunkturowe i otaczającą skórę, nakładając 0,5% roztwór jodu okrężnymi ruchami, zaczynając od środka i kierując się na zewnątrz. Następnie należy przeprowadzić potrójny proces dezynfekcji: użyć jodoforu 3x, a następnie nałożyć alkohol, aby zapewnić odpowiednią dekontaminację i przygotować miejsce do stosowania techniki aseptycznej.</li>
	<li>Za pomocą kleszczy zaciśnij wchłanialny szew chirurgiczny o średnicy 0,2 cm nasączony solą fizjologiczną i umieść go w przedniej części rurki igły. Następnie podłącz go do rdzenia igły.</li>
	<li>Ściśnij obszar wokół Baihui (GV 20) kciukiem i palcem wskazującym jednej ręki, a drugą trzymając igłę.</li>
	<li>Wbić igłę poziomo i szybko pod kątem 15° do powierzchni skóry, 0,1 cm poniżej punktu Baihui (GV 20), jednocześnie ściskając skórę (<silna klasa="xfig">Rysunek 3A).</li>
	<li>Po tym, jak końcówka igły osiągnie 0,1 cm powyżej punktu Baihui (GV 20), popchnij rdzeń igły, jednocześnie chowając rurkę igły, aby całkowicie wszczepić wchłanialny szew chirurgiczny 0,2 cm w tkankę podskórną punktu akupunkturowego (<klasa silna = "xfig" >Rysunek 3B).</li>
	<li>Powoli wyjmij igłę, upewniając się, że żaden szew nie jest odsłonięty. Naciśnij otwór igły sterylną suchą bawełną przez 10 sekund, aby zapobiec krwawieniu. Jeśli gwint znajduje się na zewnątrz korpusu po osadzeniu żyłki w punktach akupunkturowych, wyjmij go i uruchom ponownie.</li>
</ol>
4. Operacja osadzania wątków dla Shenshu (BL 23)
<ol>
	Punkt akupunkturowy Shenshu (BL 23) u szczurów znajduje się 5 mm bocznie od drugiego kręgu lędźwiowego (<silna klasa="xfig">Ryc. 2B).<li> Najpierw zlokalizuj 6.kręg lędźwiowy na podstawie guzka biodrowego szczura. Następnie zlokalizuj 2.kręg lędźwiowy, licząc w górę cztery trzony kręgów. Shenshu (BL 23) będzie 5 mm boczny od niego23. 
	UWAGA: Połączenie punktów akupunkturowych Baihui (GV 20) i Shenshu (BL 23) jest często wykorzystywanym zestawem w teorii Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (TCM) do zapobiegania i leczenia zaburzeń mózgowych. Jak potwierdziły poprzednie badania20,21, ta para punktów akupunkturowych została ustalona ze względu na swoją skuteczność.</li>
	<li>Użyj markera, aby oznaczyć Shenshu (BL 23). Ogol plecy i talię wokół punktu akupunkturowego szczura za pomocą trymera (zwykle elektrycznego trymera do brody).</li>
	<li>Przed zabiegiem należy zdezynfekować punkty akupunkturowe i otaczającą skórę, nakładając 0,5% roztwór jodu okrężnymi ruchami, zaczynając od środka i kierując się na zewnątrz. Następnie należy przeprowadzić potrójny proces dezynfekcji: należy użyć jodoforu trzy razy, za każdym razem należy nałożyć alkohol, aby zapewnić odpowiednią dekontaminację i przygotowanie miejsca do stosowania techniki aseptycznej.</li>
	<li>Za pomocą kleszczy zaciśnij wchłanialny szew chirurgiczny o długości 0,5 cm nasączony solą fizjologiczną i umieść go w przedniej części rurki igły. Następnie podłącz go do rdzenia igły.</li>
	<li>Rozciągnij skórę palcami wskazującym i środkowym ręki naciskającej lub kciukiem i palcami wskazującymi. Trzymać igłę ręką nakłuwającą.</li>
	<li>Szybko wbić igłę prostopadle do punktu 0,25 cm poniżej Shenshu (BL 23). Zobacz Rysunek 4A.</li>
	<li>Po tym, jak końcówka igły znajdzie się 0,5 cm pod skórą, wyreguluj końcówkę igły, sprawiając, że kierunek wprowadzania jest dośrodkowy, tworząc kąt 45° z powierzchnią skóry i ukośnie włóż 0,5 cm (<klasa silna = "xfig">Rysunek 4B). 
	UWAGA: Ważne jest, aby zachować ostrożność podczas nakłuwania Shenshu (BL 23), który znajduje się w pobliżu nerki. Głębokie wkłucie lub wielokrotne podnoszenie i wbijanie igły może spowodować uszkodzenie. Dlatego zalecamy głębokość wsunięcia około 0,3-0,6 cm.</li>
	<li>Wciśnij rdzeń igły, jednocześnie chowając rurkę i całkowicie wszczepij wchłanialny szew chirurgiczny o długości 0,5 cm w tkankę mięśniową akupunktury (<klasa silna = "xfig" >Rysunek 4C).</li>
	<li>Powoli wyciągnij igłę, upewniając się, że szew nie jest odsłonięty. Następnie dociśnij otwór igły sterylną suchą bawełną przez 10 sekund, aby zapobiec krwawieniu. Jeśli gwint znajduje się na zewnątrz korpusu po osadzeniu żyłki w punktach akupunkturowych, wyjmij go i uruchom ponownie.</li>
</ol>
5. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Po operacji umieść szczura na poduszce grzewczej dla małych zwierząt ustawionej na temperaturę 32°C, aby ułatwić powrót do zdrowia po znieczuleniu. Upewnij się, że zwierzę jest w pełni przytomne, a jego stan jest zadowalający, zanim zostanie zwrócone do pomieszczenia dla uchodźców.</li>
	<li>Po zabiegu w ciągu tygodnia obserwuj oznaki jałowych reakcji zapalnych w dotkniętym obszarze. Objawy te mogą obejmować zaczerwienienie, obrzęk lub wydzielinę przypominającą ropę. Zazwyczaj objawy te nie wymagają żadnego leczenia. Jeśli jednak występuje nadmierna ilość wysięku, osusz i zdezynfekuj dotknięty obszar. W takich przypadkach należy stosować maść z erytromycyną do momentu całkowitego zagojenia się rany.</li>
</ol>
6. Testy behawioralne i badanie histologiczne
<ol>
	<li>Po interwencji, w 8 tygodniu, przeprowadź eksperyment Morris Water Maze (MWM) 2,24, aby ocenić ich zdolności uczenia się i zapamiętywania. Wykonuj próby uczenia się przez 5 dni, po cztery próby dziennie. Następnie przeprowadzić próbę sondy po 24 godzinach od ostatniego dnia pozyskania.</li>
	<li>Wykonuj porównania statystyczne za pomocą oprogramowania do analizy statystycznej. Analizuj dane behawioralne dotyczące zdolności uczenia się za pomocą jednokierunkowej analizy wariancji (ANOVA) i testu Tukeya post hoc. Oceń znaczenie danych dotyczących opóźnienia ucieczki za pomocą dwukierunkowej analizy wariancji powtarzanych pomiarów (ANOVA), a następnie testu Bonferroniego post-hoc. Wartość p <0,05 jest uważana za istotną we wszystkich testach.</li>
	<li>Po ocenie behawioralnej znieczulić szczury jak powyżej i poddać eutanazji za pomocą zastrzyków dootrzewnowych 150 mg/kg masy ciała pentobarbitalu sodu.</li>
	<li>Napraw mózg szczura poprzez perfuzję za pomocą 4% paraformaldehydu perfuzji przez układ naczyniowy25.
	<ol>
		<li>Wprowadzanie i mocowanie igły do wbijania
		<ol>
			<li>Przygotuj igłę 12G i upewnij się, że jest prosta i nadaje się do przejścia przez komorę szczura. Zlokalizuj komorę szczura, która zwykle jest lewą komorą, i włóż przez nią igłę do aorty wstępującej. Ten krok wymaga precyzji i dobrego zrozumienia anatomii szczura.</li>
			<li>Gdy igła znajdzie się na miejscu, użyj hemostatu, aby zacisnąć igłę w pobliżu miejsca, w którym wchodzi ona do aorty. Pomoże to zabezpieczyć igłę i zapobiec jej przesuwaniu się.</li>
			<li>Upewnij się, że zacisk jest wystarczająco ciasny, aby bezpiecznie utrzymać igłę, ale nie tak mocno, aby uszkodzić aortę lub utrudnić przepływ krwi. Igła do zgłębnika powinna pozostać w aorcie wstępującej przez cały czas trwania zabiegu, aby utrzymać prawidłową perfuzję.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Perfuzja z solą fizjologiczną
		<ol>
			<li>Przygotuj strzykawkę o pojemności 50 ml bez igły do perfuzji. Drugi koniec igły do zgłębnika, który znajduje się na zewnątrz ciała szczura, należy przymocować do strzykawki wypełnionej zwykłą solą fizjologiczną.</li>
			<li>Wykonaj małe nacięcie, aby przeciąć prawy uszek przedsionkowy, aby umożliwić przepływ krwi z serca. Ten krok zapewnia, że krew jest wypierana przez sól fizjologiczną podczas perfuzji.</li>
			<li>Rozpocznij wstrzykiwanie normalnej soli fizjologicznej do aorty wstępującej ze stałą i stałą szybkością. Spowoduje to wypłukanie krwi i przygotowanie tkanek do utrwalenia.</li>
			<li>Należy monitorować płyn wydostający się z wyrostka prawego przedsionka i być przygotowanym do zmiany strzykawki w razie potrzeby, aby utrzymać ciągłą perfuzję świeżego soli fizjologicznej. 
			umieszczone, przygotuj się do perfuzji z utrwalaczem.</li>
			<li>Zastrzykawkę zawierającą sól fizjologiczną należy zastąpić strzykawką zawierającą 4% paraformaldehydu, powszechnie stosowanego utrwalacza w histologii. Kontynuuj perfuzję za pomocą paraformaldehydu, aby utrwalić tkanki na miejscu w celu późniejszego przetwarzania i analizy. 
			UWAGA: Podczas tej procedury ważne jest utrzymanie technik aseptycznych, aby zapobiec infekcji i delikatne obchodzenie się ze szczurem, aby zminimalizować obrażenia. Ponadto cały zaangażowany personel powinien zostać przeszkolony w zakresie tej techniki, aby zapewnić spójność i skuteczność.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Usuń mózg szczura i umieść go w butelce z próbką zawierającą 4% paraformaldehydu na 24-48 godzin w temperaturze 4 °C25,26. Wykonaj odwodnienie etanolu i leczenie ksylenem krok po kroku, a następnie konwencjonalne ciągłe przekroje koronalne (4-5 μm) w celu pomiaru. Oceń morfologię i utratę neuronów hipokampa w każdej grupie za pomocą barwienia hematoksyliną i eozyną (H&E) (200x). 
	UWAGA: Nie przeprowadzono sekcji zwłok gryzoni w celu oceny zmian żołądkowo-jelitowych (GI) ze względu na brak objawów klinicznych wskazujących na zaburzenia przewodu pokarmowego w całym okresie doświadczalnym. Zwierzęta nie wykazywały żadnych jawnych działań niepożądanych, które sugerowałyby obecność takich patologii.</li>
</ol>

Improving Cognitive Functions in Rats via Thread-Embedding Acupuncture Therapy

Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia.

Czas interwencji Etiologia choroby Alzheimera jest złożona, a jej patogeneza pozostaje niepewna. Obecnie nie ma skutecznego leczenia choroby, a jej przebieg jest nieodwracalny. W związku z tym społeczność akademicka osiągnęła konsensus co do tego, jak ważne jest skupienie się na profilaktyce i leczeniu choroby Alzheimera. Strategie zapobiegania i leczenia choroby Alzheimera kładą nacisk na wczesną interwencję, zgodnie z koncepcją TCM leczenia stanów przed ich wystąpieniem, kładąc nacisk na leczenie przed ich wystąpieniem, transmisją i nawrotem. Skumulowane badania na ludziach 29,30 i gryzoniach31,32 wykazały, że wczesna interwencja akupunktury i moksowania może przynieść znaczące rezultaty bez widocznych skutków ubocznych, co czyni ją obiecującą potencjalną metodą zapobiegania i leczenia AD. W związku z tym w badaniu tym podawano leczenie podczas procesu modelowania. TEAT został wdrożony na początku iniekcji dootrzewnowej D-gal.
Wybór punktu akupunkturowego Choroba Alzheimera jest ciężką chorobą neurodegeneracyjną, która atakuje przede wszystkim obszary mózgu odpowiedzialne za pamięć, język, rozumowanie i zachowania społeczne. Mózg (Nao) jest uważany za morze szpiku (Sui) w TCM. Szpik kostny (Sui) jest zbudowany z esencji (Jing), substancji unikalnej w TCM, która jest uważana za niezbędną konstytucyjną siłę, witalność i odporność organizmu. Esencja (Jing) jest przechowywana głównie w nerkach (Shen). Jeśli esencja nerkowa (Shen Jing) jest słaba, mózgowi (Nao) może brakować pożywienia i może dojść do upośledzenia funkcji poznawczych. Dlatego TCM sugeruje, że tonizacja nerek i korzyści płynące z esencji (Jing) mogą pomóc w poprawie funkcjonowania mózgu. Na mózg mogą mieć bezpośredni wpływ niektóre meridiany, takie jak naczynie gubernatora (GV) i meridian pęcherza stopy Taiyang (BL), gdy wchodzą one do mózgu. Kombinacja naczynia gubernatora (GV) i meridianu pęcherza moczowego stopy Taiyang (BL) stosowana w zapobieganiu i leczeniu AD jest wysoce wykorzystywana33,34. Baihui (GV 20) to punkt akupunktowy znajdujący się na wierzchołku głowy i będący częścią statku Gubernatora. Według literatury, w badaniach z zastosowaniem akupunktury i moksowania w profilaktyce i leczeniu AZS, Baihui (GV 20) ma najwyższą częstotliwość występowania i jest uważany za punkt krytyczny we wzorze35. Shenshu (BL 23) to punkt akupunkturowy na meridianie pęcherza moczowego stopy Taiyang. Znajduje się 1,5 cun bocznie do dolnej granicy wyrostka kolczystego drugiego kręgu lędźwiowego. Jako punkt transportujący nerkę z powrotem-Shu, może wzmocnić wszystkie aspekty nerek, w tym yin nerek, yang, esencję (Jing) i qi. Akupunktura i moksowanie w Baihui (GV 20) i Shenshu (BL 23) mogą poprawić funkcje poznawcze i złagodzić objawy AD na różne sposoby36,37.
Czas interwału Standardy działania TEAT38 nakazują, aby odstęp między leczeniem i przebieg leczenia był ustalany w zależności od stanu choroby i wybranego miejsca operacji, w odstępie od 1 tygodnia do 1 miesiąca. Przebieg leczenia może wynosić od 1 do 5 razy. Sugestia ta może być również stosowana w eksperymentalnych badaniach na zwierzętach. Na podstawie dokonanego przeglądu piśmiennictwa39 stwierdzono, że leczenie stosuje się na ogół raz w tygodniu lub co 2 tygodnie, przy czym w większości przypadków obejmuje to 4-8 kolejnych zabiegów. Eksperyment trwał 49 dni, podczas których nici zakopywano w 14, 28 i 42dniu.
Narzędzie i metody W obecnych eksperymentalnych badaniach na zwierzętach stosuje się różne narzędzia do osadzania gwintów. Należą do nich jednorazowe igły do osadzania nici nr 740 lub nr 941, samodzielnie wynalezione igły oraz igła do nakłuwania lędźwiowego nr 1242. Wynalezione na nowo igły wykorzystują strzykawki nr 5-7 jako rurkę i odpowiednią igłę nitkowatą do rdzenia igły. Końcówka igły została wcześniej wygładzona. Na przykład w badaniu na szczurach SD o wadze 250 ± 20 g (wiek miesiąca nie określony w tekście) wybierz strzykawkę nr 7 i igłę nitkową 0,30 x 0,40 mm43,44. Jednak samodzielnie wynalezione igły muszą być ściśle zdezynfekowane, co uniemożliwia ich szerokie zastosowanie. Jeśli końcówka igły jest zbyt duża lub ostra, może uszkodzić naczynia krwionośne i nerwy, zwiększając prawdopodobieństwo powstania siniaków45. Igły do nakłuć lędźwiowych, które mają dużą średnicę i ostre końcówki, są bardziej podatne na uszkodzenie naczyń krwionośnych i nerwów. Jednorazowa igła do zatapiania jest najczęściej stosowana w praktyce klinicznej39. Jest wygodniejszy w użyciu i bezpieczniejszy w obsłudze w porównaniu z samodzielnie wynalezionymi igłami i igłami do nakłuwania lędźwiowego, dzięki czemu idealnie nadaje się do SMOCZKA. Dodatkowo celem eksperymentu jest poprawa stanu zdrowia człowieka. Dlatego badania na zwierzętach powinny odzwierciedlać sytuację kliniczną. Dlatego zaleca się używanie jednorazowych igieł do osadzania nici jako narzędzi do osadzania gwintów.
Catgut był głównym materiałem nici używanym w TEAT, ale ze względu na odrzucenie tkanek i składniki pochodzenia zwierzęcego został zastąpiony biosyntetycznymi wchłanialnymi szwami chirurgicznymi. Szwy są dostępne w różnych rozmiarach i powinny być dopasowane do igły, np. No.7 dla szwów 4-0 lub 3-0. W badaniach na zwierzętach stosuje się głównie 3-041, 4-046 i 5-047 . Większość szwów ma długość 1-2 cm. Jednak gryzonie mają znacznie mniejsze ciała niż ludzie, więc brakuje odpowiedniego rozmiaru do ich wielkości ciała. Dlatego naukowcy muszą pociąć szwy na segmenty o długości 0,2-0,5 cm, aby były odpowiednie dla gryzoni. Dlatego zaleca się, aby szwy po przecięciu i przed namoczeniem przepłukać szwy czystą i sterylną wodą destylowaną lub solą fizjologiczną w celu późniejszego użycia lub natychmiastowego zastosowania, aby zmniejszyć ryzyko infekcji46.
W niektórych badaniach zaproponowano szczegółowe wymagania dotyczące metody zatapiania, takie jak szybkie wprowadzanie igieł do punktu akupunkturowego od około 0,5 cm poniżej punktu akupunkturowego w kierunku punktuakupunkturowego 48. Jest to ważne, ponieważ gryzonie są małe. Oprócz obfitej tkanki mięśniowej w kończynach dolnych, ich tkanka podskórna i warstwy mięśniowe w głowie, plecach i brzuchu są stosunkowo słabe. W związku z tym należy tutaj podkreślić kwestię punktów wprowadzania TEAT i kąta wprowadzania w badaniach na zwierzętach. Podczas wykonywania SMOCZENIA na kończynach dolnych gryzoni możliwe jest bezpośrednie nakłuwanie w punkty akupunkturowe. Jeśli chodzi o ciało, zaleca się wprowadzenie igły poniżej punktów akupunkturowych (odległość można elastycznie regulować w zależności od długości korpusu nici) za pomocą igłowania ukośnego (<45°) lub płaskiego (<15°), aby uniknąć uszkodzenia narządów wewnętrznych.
Potencjał TEAT w profilaktyce i leczeniu choroby Alzheimera Ostatnio pojawiają się badania nad TEAT, chociaż jego działanie i mechanizmy pozostają nieuchwytne. Jak wspomniano powyżej, TEAT może poprawić czynniki ryzyka związane z chorobą Alzheimera, takie jak otyłość13,14, cukrzyca15, bezsenność16, osteoporoza pomenopauzalna17 i depresja18. Ma korzystny wpływ na zaburzenia uczenia się i pamięci u szczurów VD19. TEAT reguluje metabolizm lipidów poprzez szlak PPAR w celu złagodzenia uszkodzeń tkanek u zmęczonych szczurów wywołanych wysiłkiem fizycznym49 i wywiera działanie przeciwzapalne i przeciwbólowe u myszy wywołanych przerywanym zimnem poprzez szlak TRPV150. W niniejszym badaniu wykazaliśmy, że leczenie osadzaniem nici u szczurów podobnych do AD może złagodzić zaburzenia uczenia się i pamięci poprzez łagodzenie utraty pamięci przestrzennej i redukcję zdegenerowanych komórek w regionach CA1 hipokampa. Jednak ze względu na brak jednolitości i standaryzacji w obecnych badaniach w kilku krytycznych elementach działania TEA, w tym w metodzie zatapiania, narzędziu do zatapiania, nici i okresie interwału osadzania, w niniejszym artykule omówiono głównie krytyczne elementy operacyjne TEAT w badaniach eksperymentalnych. Badania te były jedynie wstępnym badaniem wpływu TEAT na chorobę Alzheimera, co wymagało znacznie więcej uzupełnień i ulepszeń w wyjaśnieniu dokładnej molekularnej i interakcji między nimi. Niemniej jednak zaproponowano nowe badanie dla nieuniknionego procesu AD, które może w jakiś sposób odciążyć publiczny system opieki zdrowotnej.

Akupunktura (TEA) polega na osadzaniu w punktach akupunkturowych katgutowych lub wchłanialnych szwów za pomocą specjalnej igły. Ta technika ma przedłużony efekt, aż szwy zostaną wchłonięte i zdegradowane. Zapewnia ciągłą i długotrwałą stymulację punktów akupunkturowych przez tydzień lub dłużej1, osiągając porównywalny wynik bez konieczności wykonywania codziennych powtarzających się procedur2. Zmniejsza to liczbę pacjentów zgłaszających się do lekarza, a tym samym w pewnym stopniu oszczędza zasoby medyczne. W ostatnich latach TEAT jest coraz częściej stosowany w różnych dziedzinach medycyny w Chinach, w tym w medycynie wewnętrznej, medycynie zewnętrznej, dermatologii, rysach twarzy, ginekologii i pediatrii3. Badania wykazały, że jest skuteczny w wytwarzaniu długotrwałych i niezawodnych efektów w przypadku niektórych przewlekłych i złożonych chorób, takich jak padaczka4 i paraliż nerwu twarzowego5. Ma zalety minimalnego urazu, a jego prostą obsługą6. Ponadto stwierdzono, że koszty leczenia TEAT są niższe niż w przypadku elektroakupunktury (EA)7. Dlatego TEAT jest coraz bardziej ceniony w badaniach klinicznych i naukowych.
Choroba Alzheimera (AD) jest chorobą neurodegeneracyjną, która postępuje z czasem. Jego proces patofizjologiczny zaczyna się kumulować około 20 lat przed pojawieniem się objawów klinicznych, ale jego mechanizm nadal nie jest w pełni poznany8. Biorąc pod uwagę ograniczoną dostępność skutecznych leków na chorobę Alzheimera, badania coraz częściej koncentrują się na etapach prodromalnych i przedklinicznych choroby9. Zapobieganie jest kluczową strategią przeciwdziałania rozwojowi i postępowi AD9,10. W ostatnich latach Tradycyjna Medycyna Chińska (TCM) poczyniła znaczne postępy i oczekuje się, że zaoferuje nowe możliwości zapobiegania i leczenia AD11,12. Jako podtyp akupunktury, TEAT jest preferowany w stosunku do innych terapii ze względu na szeroki zakres leczenia, minimalny uraz, prostą obsługę, niską częstotliwość leczenia i długotrwałą skuteczność6. Pojawiająca się literatura sugeruje, że TEAT może przynieść korzyści osobom z otyłością13,14, diabetes15, insomnia16, osteoporozą pomenopauzalną17 i depresją18, z których wszystkie są czynnikami ryzyka AD. Poprawia również starzenie się starzenia u starzejących się szczurów poprzez regulację mitofagii2, poprawia uczenie się przestrzenne i upośledzenie pamięci, łagodzi patologiczne uszkodzenia hipokampa i hamuje odpowiedź zapalną u szczurów z otępieniem naczyniopochodnym (VD)19. Atrakcyjne wydawało się ustalenie, czy TEAT może również wpływać na procesy patologiczne podczas choroby Alzheimera.
Obecne badania nie są jednolite i ustandaryzowane w kilku kluczowych elementach działania TEA, w tym w metodzie osadzania, narzędziu do osadzania, wątku i okresie interwału osadzania. Ten brak standaryzacji wpływa na ocenę efektu terapii i eksplorację powiązanych mechanizmów oraz ogranicza zewnętrzną promocję i komunikację. Wcześniejsze badania20,21 wykazały, że dootrzewnowe podawanie D-galaktozy (D-gal) może indukować zmiany patologiczne podobne do choroby Alzheimera u szczurów, w tym zwyrodnienie neuronów i zaburzenia poznawcze. Ponadto wykazano, że elektroakupunktura w Baihui (GV20) i Shenshu (BL23) skutecznie łagodzi spadek funkcji poznawczych, łagodzi zapalenie nerwów i zmniejsza uszkodzenia neuronów. W tym badaniu jako przykład wzięto szczury modelowe podobne do choroby Alzheimera, aby przedstawić wybór punktów akupunkturowych oraz proces operacji i środki ostrożności TEAT w tym modelu. Omówiono w nim krytyczne elementy operacyjne TEAT w badaniach eksperymentalnych, aby zapewnić odniesienie dla przyszłych badań.

<table><tbody><tr><td>0,9% sól fizjologiczna, 4% paraformaldehyd, Hematoksylina, Eozyna Y (rozpuszczalna w wodzie), absolutny etanol, 0,01M PBS w proszku, ksylen, kwas solny, wbudowana parafina, neutralna guma</td><td>Sinopharm (www.sinopharm.com)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 wchłanialny szew chirurgiczny</td><td>bodamedical (www.bodamedical.com)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% alkohol, jodofor, wacik</td><td></td><td></td><td>Służy do dezynfekcji.</td></tr><tr><td>Hydrat chloralu</td><td>sigma</td><td>C8383</td><td></td></tr><tr><td>szkiełka nakrywkowe, szkiełka szklane</td><td>Guangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Odwadniacz</td><td>Wuhan Junjie JT-12J Komputerowy biologiczny odwadniacz</td><td></td><td></td>tkanek</tr><tr><td>DELUXE TERMOSTAT MATA GRZEWCZA</td><td>Instrumenty Zhenhua Do</td><td></td><td>utrzymywania temperatury ciała szczurów.</td></tr><tr><td>D-galactose</td><td>sigma</td><td>G0750</td><td></td></tr><tr><td>elektryczny męski trymer</td><td></td><td></td> do brody <td>Służy do golenia szczurów.</td></tr><tr><td>Waga elektroniczna dla małych zwierząt (ZK-DST)</td><td>Henan Zhike Information Technology Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>maść erytromycyna</td><td>szklane</td> naczynie frontpharm <td></td><td></td></tr><tr><td>Służy do umieszczania ciętych szwów wchłanialnych.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wysokociśnieniowy garnek do sterylizacji parowej (YM100Z)</td><td>Fabryka sprzętu medycznego Sanshen w Szanghaju</td><td>Do sterylizacji narzędzi chirurgicznych.</td><td></td></tr><tr><td>Kostkarka do lodu (CMB40)</td><td>Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop (BX-53)</td>Mleko <td>w</td> proszku OLYMPUS <td></td><td></td></tr><tr><td>Używany do testu MWM.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>System śledzenia wideo Morris Water Maze & Oprogramowanie do analizy danych (wersja: Watermaze 2.0)</td><td>Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>No.6 igła do osadzania nici</td><td>bodamedyczne (www.bodamedical.com)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>nożyczki okulistyczne, tace, pęsety</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Patologia Mikrotom&nbsp; (RM 2016)</td><td>LEICA, Niemcy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pentobarbital</td><td>Niemcy</td><td>P11011</td><td></td></tr><tr><td>marker permanentny</td><td></td><td></td><td>Służy do oznaczania punktu akupunkturowego.</td></tr><tr><td>Noże do krojenia (R35)</td><td>Pióra, mydło</td> japońskie <td></td><td></td></tr><tr><td>Służy do mycia rąk.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterylne rękawiczki</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

procedura operacyjna i środki ostrożności związane z terapią akupunkturą z osadzaniem nici w chorobie alzheimera

Operation Procedure and Precautions of Thread-Embedding Acupuncture Therapy in Alzheimer

Terapia osadzania nici (TEAT) to zabieg, który zapobiega chorobom i zarządza nimi poprzez wprowadzenie biodegradowalnego szwu do akupunktury, zapewniając długotrwałą stymulację. HERBATKA to proste podejście, które pozwala uniknąć dyskomfortu związanego ze zwykłą akupunkturą i zapewnia trwałe efekty terapeutyczne. W artykule omówiono potencjalny wpływ TEAT na zdolności uczenia się i zapamiętywania szczurów z objawami podobnymi do choroby Alzheimera. Ponieważ chemicznie indukowane zwyrodnienie neuronów i upośledzenie funkcji poznawczych u szczurów nie odzwierciedla w pełni prawdziwych zmian patologicznych obserwowanych w chorobie Alzheimera. W związku z tym nasza grupa badawcza określiła te objawy jako objawy podobne do choroby Alzheimera. Ustanowiono protokół określający dobór punktów akupunkturowych, proces operacji oraz niezbędne środki ostrożności dotyczące głowy i dolnej części pleców. Eksperyment przeprowadzono na trzech grupach: grupie kontrolnej, grupie modelowej i grupie TEAT, z których każda zawierała 6 szczurów. Aby wywołać objawy podobne do choroby Alzheimera, szczurom wstrzykiwano dootrzewnowo D-galaktozę przez 7 tygodni (49 dni). Szczury w grupie TEAT otrzymały leczenie osadzaniem katgutu w punkcie akupunkturowym. Po okresie interwencji przeprowadzono labirynt wodny Morrisa (MWM) w celu oceny uczenia się i pamięci szczurów. Następnie szczury zostały złożone w ofierze i zbadano ich tkankę mózgową. Przeprowadzono badanie histologiczne w celu zrozumienia wpływu TEAT na patologię szczurów wykazujących objawy choroby Alzheimera. Badanie to sugeruje, że TEAT może poprawić uczenie się i pamięć u szczurów z objawami podobnymi do choroby Alzheimera, co wskazuje na potencjalnie obiecujące nowe podejście do leczenia tego schorzenia neurodegeneracyjnego.

Niniejszy artykuł przedstawia specyficzną metodę przeprowadzania TEAT u szczurów z modelem choroby Alzheimera. Omówiono w nim kluczowe elementy operacyjne TEAT w badaniach eksperymentalnych, aby zapewnić punkt odniesienia dla przyszłych studiów.
TEAT poprawia proces uczenia się u szczurów z objawami choroby Alzheimera 
Jak przedstawiono na schemacie blokowym (Rysunek 5), podczas okresu treningu adaptacyjnego zaobserwowano, że szczury w każdej grupie obserwowały otoczenie podczas pływania. Analiza prędkości pływania (Rysunek 6) nie wykazała istotnych różnic między grupami, co wskazuje na spójne bazowe poziomy prędkości ruchu i percepcji wzrokowej. Wszelkie zaobserwowane różnice w wynikach eksperymentalnych nie wynikały ze zmienności zdolności ruchowych ani percepcji wzrokowej.
Szczury przeszły 5-dniowy trening poszukiwania platformy. Na Rysunku 7A można zauważyć, że trajektorie ruchu każdej grupy szczurów różniły się we wczesnej i późnej fazie treningu. W dniu 2. większość grup szczurów dążących do ucieczki pływała w sposób przypadkowy. Jednak w dniu 5. szczury w grupie kontrolnej pływały w określonym kierunku, podczas gdy szczury z grupy modelowej pływały przypadkowo wzdłuż ścianek basenu. Ruch szczurów z grupy TEAT stał się bardziej zagęszczony w kwadrancie docelowym. W eksperymencie zmierzono latencję ucieczki, gdzie krótsza latencja wskazywała na lepsze zdolności. Rysunek 7B pokazuje, że grupa modelowa wykazała obniżone zdolności uczenia się i zapamiętywania w porównaniu z grupą kontrolną. Jednak w grupie TEAT zaobserwowano znaczną poprawę w zakresie upośledzenia przestrzennej pamięci referencyjnej u szczurów z patologią typu AD.
TEAT poprawia pamięć przestrzenną u szczurów z modelem choroby Alzheimera 
W próbie badawczej lokalizacja, w której zwierzę spędza czas, wskazuje na preferencję przestrzenną27. Szczury stosują cztery główne metody poszukiwania platformy: strategię brzegową, losową, trendową oraz liniową28. Wyniki wskazują, że każda grupa szczurów stosowała inne strategie poszukiwania (Rycina 8A). Grupa kontrolna stosowała głównie strategie poszukiwania liniowego i kierunkowego, co sugeruje dobrą pamięć i zdolność do przypomnienia sobie lokalizacji platformy. W przeciwieństwie do nich, szczury w grupie modelowej wykazywały główną strategię poszukiwania brzegowego, co wskazuje na znaczny spadek zdolności pamięciowych. Nie nauczyły się one znajdować platformy ani zapamiętywać jej położenia. Szczury w grupie TEAT wykazały strategię poszukiwania trendowego. Gęstość trajektorii była najwyższa w kwadrancie, w którym znajdowała się pierwotna platforma, a także w kwadrantach sąsiednich. Wskazuje to na poprawę pamięci w porównaniu z grupą modelową.
Rysunek 8B oraz Rysunek 8C przedstawiają wyniki dotyczące czasu przebywania w kwadrancie pierwotnej platformy oraz liczby przejść szczurów przez miejsce, w którym znajdowała się platforma. Szczury z grupy modelowej wykazały istotne skrócenie czasu przebywania w kwadrancie pierwotnej platformy oraz zmniejszenie liczby przejść przez platformę w porównaniu z grupą kontrolną (p &lt;0.01). W porównaniu z grupą modelową, szczury z grupy TEAT wykazały istotne wydłużenie czasu przebywania w kwadrancie pierwotnej platformy oraz zwiększenie liczby przejść przez platformę (p &lt;0.01). Wyniki te sugerują, że TEAT może poprawiać zaburzenia uczenia się przestrzennego i pamięci u szczurów z patologią podobną do AD.
TEAT łagodzi starzenie się hipokampa u szczurów (Rycina 9). W porównaniu z grupą kontrolną, szczury w grupie modelowej wykazywały ciężkie zmiany patologiczne, w tym znaczną redukcję liczby komórek piramidowych oraz ich nieregularne rozmieszczenie. Dodatkowo zaobserwowano kondensację jąder komórkowych, degenerację neuronów oraz inne nieprawidłowości. Jednak po zastosowaniu leczenia TEAT liczba komórek piramidowych hipokampa u szczurów wzrosła, a ich struktura stała się bardziej uporządkowana. Mimo że w niektórych jądrach wystąpiła kondensacja, ogólna morfologia komórek wydawała się bardziej prawidłowa. Komórki były rozmieszczone gęściej i bardziej uporządkowanie, barwienie cytoplazmy było bardziej spójne, a obrzęk wokół komórek uległ znacznemu zmniejszeniu. Co istotne, zaobserwowano prawidłowe komórki piramidowe.
<img alt="Schemat osi czasu badań na myszach, harmonogram podawania D-gal przez 8 tygodni w analizie funkcji poznawczych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Schemat blokowy eksperymentu. Po 1 tygodniu adaptacji (tydzień 0), w badaniu przydzielono 18 szczurów do trzech grup: kontrolnej (Control), modelu (Model) oraz TEAT. W tygodniach od 1 do 7 grupa kontrolna otrzymywała iniekcje soli fizjologicznej, natomiast grupom modelu i TEAT podawano D-galaktozę. Grupa TEAT została dodatkowo poddana terapii akupunkturą z implantacją nici w tygodniach 2, 4 i 6. Wszystkie szczury zostały poddane testowi labiryntu wodnego Morrisa w 8. tygodniu, a następnie poddano je eutanazji. Skróty: Adapt = adaptacja, Con = grupa kontrolna, Mod = grupa modelu, TEAT = grupa terapii akupunkturą z implantacją nici, D-gal = D-galaktoza, MWM = test labiryntu wodnego Morrisa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Badanie skóry myszy; pomiar obszaru bezwłosiego za pomocą linijki do badań dermatologicznych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Lokalizacja punktów akupunkturowych. (A) Punkt akupunkturowy Baihui (GV 20) u szczurów. Znajduje się on w prawym punkcie środkowym kości ciemieniowej. (B) Punkt akupunkturowy Shenshu (BL 23) u szczurów. Znajduje się on 5 mm bocznie od drugiego kręgu lędźwiowego. Skróty: GV = Governor Vessel, pojęcie w Tradycyjnej Medycynie Chińskiej (TCM) odnoszące się do głównego południka przebiegającego wzdłuż linii środkowej tylnej powierzchni ciała, BL = Bladder, oznacza południk pęcherza moczowego, który w TCM odpowiada południkowi Stopy-Taiyang, jednemu z sześciu południków yang, przebiegającemu wzdłuż pleców i nóg. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Technika iniekcji u zwierząt; schemat procedury; metoda badawcza; podawanie znieczulenia szczurowi laboratoryjnemu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Szczegółowy przebieg operacji osadzania nici w punkcie Baihui (GV 20). (A) Igłę wprowadza się poziomo pod kątem 15° do powierzchni skóry, 0,1 cm poniżej punktu akupunktu Baihui (GV 20), chwytając skórę w celu ułatwienia procedury. (B) Gdy końcówka igły osiągnie pozycję 0,1 cm powyżej punktu akupunktu Baihui (GV 20), rdzeń igły jest wypychany przy jednoczesnym wycofywaniu kaniuli igły, aby w pełni osadzić 0,2 cm wchłanialnej nici chirurgicznej w tkance podskórnej w miejscu punktu akupunktu. Skróty: GV = Governor Vessel (Naczynie Rządzące), pojęcie w Tradycyjnej Medycynie Chińskiej (TCM) odnoszące się do głównego południka przebiegającego wzdłuż linii środkowej tylnej części ciała. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Metoda iniekcji u zwierząt za pomocą strzykawki; układ eksperymentalny dla procesu badań biomedycznych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Szczegółowy przebieg operacji osadzania nici w punkcie Shenshu (BL 23). (A) Igłę wprowadza się szybko, prostopadle do punktu akupunkturowego, na głębokość 0,25 cm poniżej Shenshu (BL 23). (B) Gdy końcówka igły osiągnie głębokość 0,5 cm pod powierzchnią skóry, igłę kieruje się w stronę centrum punktu akupunkturowego, tworząc kąt 45° z powierzchnią skóry, a następnie wprowadza się ją ukośnie na głębokość 0,5 cm. (C) Podczas posuwania trzonu igły, rurkę się wycofuje, zapewniając całkowite implantowanie 0,5 cm segmentu wchłanialnej nici chirurgicznej w tkankę mięśniową w punkcie akupunkturowym Shenshu (BL 23). Skróty: BL = Bladder, oznacza południk pęcherza, który w TCM odpowiada południkowi Stopy-Taiyang, jednemu z sześciu południków yang, biegnącemu wzdłuż pleców i nóg. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat labiryntu wodnego Morrisa; oś czasu dla prędkości pływania, latencji ucieczki i analizy kwadrantu docelowego." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figure 5"> 
Rycina 5: Schemat blokowy testu WMW. Trening adaptacyjny przed eksperymentem oznaczono jako dzień 0, podczas którego obserwuje się możliwości motoryczne szczurów i przeprowadza analizę statystyczną prędkości pływania. Następnie następuje pięciodniowa faza nawigacji przestrzennej (dni 1–5), w której porównuje się i analizuje czas dotarcia do wyjścia (latencję ucieczki) w różnych grupach. W dniu 6 przeprowadza się próbę sondy przestrzennej w celu oceny czasu spędzonego w kwadrancie docelowym (czas przebywania w kwadrancie docelowym) oraz liczby przecięć platformy. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig05large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Porównanie prędkości pływania, wykres słupkowy, analiza wyników grupy kontrolnej, grupy modelu i grupy TEAT." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig06v3.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 6"> 
Rycina 6: Porównanie prędkości pływania (m/s) pomiędzy grupami. Na rysunku przedstawiono średnie prędkości pływania (w metrach na sekundę) szczurów w różnych grupach eksperymentalnych, z których każda składała się z sześciu zwierząt (n=6). Słupki błędów przedstawiają odchylenie standardowe. Nie stwierdzono różnic międzygrupowych, co wskazuje oznaczenie ns (p &gt; 0.05). Analizę statystyczną przeprowadzono przy użyciu oprogramowania SPSS, a wszystkie dane miały rozkład normalny. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig06large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wyniki eksperymentu behawioralnego; schematy nawigacji w labiryncie; wykres czasu ucieczki; grupy kontrolna i badawcze." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig07.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 7"> 
Rycina 7: Wyniki nawigacji przestrzennej w WMW. (A) Ten panel przedstawia reprezentatywne schematy trajektorii ruchu, ilustrujące ścieżki nawigacyjne szczurów w każdej z grup eksperymentalnych podczas prób nawigacji przestrzennej. (B) Porównanie czasu ucieczki, mierzonego w sekundach (s), pomiędzy grupami; każda grupa składała się z sześciu szczurów (n=6). Analizę statystyczną przeprowadzono za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji z powtarzanymi pomiarami (two-way repeated measures ANOVA) w celu oceny efektów wewnątrzobiektowych w trakcie prób nawigacyjnych oraz różnic międzyobiektowych pomiędzy grupami. Dane są zgodne z założeniami rozkładu normalnego i przedstawiono je jako średnią grupową ± odchylenie standardowe. Istotne różnice oznaczono gwiazdkami (*p &lt; 0.05, **p &lt; 0.01) w porównaniu z grupą kontrolną oraz hashtagami (#p &lt; 0.05, ##p &lt; 0.01) w porównaniu z grupą modelową. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig07large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schematy eksperymentu w wodnym labiryncie Morrisa; ścieżki nawigacji myszy, wykresy słupkowe dla porównania danych grupowych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig08.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 8"> 
Rysunek 8: Wyniki próby pamięciowej (probe trial) w WMM. (A) Panel przedstawia reprezentatywne schematy trajektorii ruchu, które rejestrują zachowania eksploracji przestrzennej szczurów w próbie pamięciowej w każdej grupie eksperymentalnej. (B) Wykres ten porównuje czas przebywania (w sekundach, s) w kwadrancie docelowym pomiędzy grupami, co odzwierciedla retencję pamięciową szczurów dotyczącą lokalizacji platformy. (C) Wykres ilustruje częstotliwość (freq), z jaką szczury przecinały obszar platformy, co wskazuje na sprawność ich pamięci przestrzennej. Każda grupa składała się z sześciu szczurów (n=6), a dane zostały poddane analizie statystycznej za pomocą jednoczynnikowej analizy wariancji (one-way ANOVA) w celu oceny różnic między grupami. Dane wykazują rozkład normalny i są przedstawione jako średnia ± odchylenie standardowe. Istotne różnice są oznaczone gwiazdkami (**p &lt; 0.01) w porównaniu z grupą kontrolną oraz znakami hashtag (#p &lt; 0.05, ##p &lt; 0.01) w porównaniu z grupą modelową. **p &lt; 0.01 vs. grupa kontrolna, #p &lt; 0.05 vs. grupa modelowa, ##p &lt; 0.01 vs. grupa modelowa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig08large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Mikroskopia tkanki mózgowej; porównanie struktury komórkowej; skala 50 µm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65895/65895fig09.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 9"> 
Rycina 9: Ocena barwienia hematoksyliną i eozyną obszaru CA1 hipokampa w grupach szczurów przy powiększeniu 200x. (A) Grupa kontrolna wykazuje typową strukturę neuronalną z dobrze zachowanymi komórkami piramidowymi. (B) Grupa modelowa wykazuje wyraźne zmiany patologiczne, charakteryzujące się znacznym spadkiem gęstości komórek piramidowych, ciemno barwiącymi się zdegenerowanymi neuronami oraz zaburzoną strukturą. (C) Grupa TEAT wykazuje poprawioną architekturę hipokampa, z większą liczbą komórek piramidowych, które są rozmieszczone bardziej uporządkowanie i posiadają bardziej prawidłową morfologię. Pomimo sporadycznej kondensacji jąder, komórki są gęściej upakowane, wykazują jednolite barwienie cytoplazmy i znaczną redukcję obrzęku okołokomórkowego. Wyraźnie zauważalna jest obecność prawidłowych komórek piramidowych. Pasek skali = 50 µm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65895/65895fig09large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

To badanie przedstawia protokół terapii akupunkturą z użyciem nici u szczurów podobnych do choroby Alzheimera.

Procedura operacyjna i środki ostrożności związane z terapią akupunkturą z osadzaniem nici w chorobie Alzheimera

Thread-embedding therapy (TEAT) is a treatment that prevents and manages diseases by inserting a biodegradable suture into an acupoint, providing ...

W tym badaniu uczymy, w jaki sposób akupunktura może pomóc w chorobie Alzheimera, zwłaszcza w problemach z pamięcią. Mamy obiecujące wyniki dzięki technice zwanej osadzaniem nici, która wydaje się pomagać szczurom z objawami podobnymi do choroby Alzheimera lepiej zapamiętywać. Może to być obiecujący sposób na walkę z tą chorobą.Technologie wykorzystywane obecnie do rozwoju badań w tej dziedzinie obejmują zaawansowane techniki obrazowania, takie jak rezonans magnetyczny i skany PET, do wizualizacji zmian w mózgu, narzędzia biologii molekularnej do analizy genetycznej i ekspresji produktów oraz wyrafinowane modele zwierzęce, które odtwarzają ludzką patologię choroby Alzheimera. Największymi przeszkodami laboratoryjnymi są mimikra ludzkiej choroby Alzheimera u zwierząt, upewnienie się, że odkrycia mogą przenieść się na ludzi oraz utrzymanie spójnych metod akupunktury w celu uzyskania wiarygodnych wyników. Podejście to ma na celu zapewnienie mniej inwazyjnej opcji, potencjalnie dostarczając opłacalną i dostępną metodę o zmniejszonych skutkach ubocznych.W przyszłości nasze laboratorium zamierza zbadać molekularne mechanizmy akupunktury, ocenić jej zdolność do dodatkowych terapii oraz ocenić jej bezpieczeństwo i skuteczność u pacjentów z chorobą Alzheimera poprzez badania kliniczne. Zacznij od ułożenia sterylnych narzędzi chirurgicznych, w tym jednorazowej igły do osadzania nici numer sześć i wchłanialnego szwu 5-0 na platformie operacyjnej. Za pomocą nożyczek okulistycznych przetnij szew chirurgiczny na kawałki o długości 0,5 i 0,2 centymetra.Namocz odcięte kawałki nici w 0,9% soli fizjologicznej. Zlokalizuj punkt akupunkturowy Baihui GV 20 u znieczulonego szczura w prawym środku kości ciemieniowej i zaznacz go za pomocą markera. Ogol obszar głowy wokół punktu akupunkturowego za pomocą trymera.Przed zabiegiem należy zastosować 0,5% roztwór jodu okrężnymi ruchami, aby zdezynfekować punkty akupunkturowe i otaczającą skórę. Następnie zdezynfekuj obszar trzy razy za pomocą jodo czterech, a następnie nałóż alkohol. Za pomocą kleszczy zaciśnij 0,2 centymetra wchłanialny szew chirurgiczny nasączony solą fizjologiczną i umieść go na przednim końcu rurki igły.Następnie połącz szew z rdzeniem igły. Ściśnij obszar wokół Baihui GV 20 kciukiem i palcem wskazującym jednej ręki. Trzymając igłę drugą ręką, wbij ją poziomo i szybko pod kątem 15 stopni do powierzchni skóry i 0,1 centymetra poniżej punktu.Gdy końcówka igły znajdzie się 0,1 centymetra powyżej punktu Baihui GV 20, popchnij rdzeń igły, jednocześnie chowając rurkę igły, aby wszczepić szew w tkankę podskórną akupunktu. Powoli wyjmij igłę, upewniając się, że żaden szew nie jest odsłonięty. Naciśnij otwór igły sterylną, suchą bawełną przez 10 sekund, aby zapobiec krwawieniu.Zlokalizuj szósty kręg lędźwiowy na podstawie guzka biodrowego szczura, a następnie policz cztery trzony kręgów w górę, aby zlokalizować drugi kręg lędźwiowy. Za pomocą markera zaznacz Shenshu BL 23, pięć milimetrów w bok od drugiego kręgu. Ogol plecy i talię wokół punktu akupunkturowego za pomocą trymera.Nałóż 0,5% roztwór jodu okrężnymi ruchami, aby zdezynfekować punkty akupunkturowe i otaczającą skórę. Ząbkować 0,5-centymetrowy wchłanialny szew chirurgiczny nasączony solą fizjologiczną za pomocą kleszczy i podłączyć go do rdzenia igły. Rozciągnij skórę palcami wskazującym i środkowym ręki naciskającej lub kciukiem i palcami wskazującymi.Trzymając igłę drugą ręką, szybko włóż ją prostopadle do punktu 0,25 centymetra poniżej punktu Shenshu BL 23. Gdy końcówka igły znajdzie się 0,5 centymetra pod skórą, wyreguluj końcówkę tak, aby kierunek wprowadzania był dośrodkowy, tworząc kąt 45 stopni z powierzchnią skóry i włóż ukośnie 0,5 centymetra. Wciśnij rdzeń igły, jednocześnie chowając rurkę, aby wszczepić 0,5-centymetrowy szew w tkance mięśniowej akupunktur.Powoli wyjmij igłę, upewniając się, że żaden szew nie jest odsłonięty, a następnie dociśnij otwór igły sterylną, suchą bawełną przez 10 sekund, aby zapobiec krwawieniu. Analiza prędkości pływania nie wykazała istotnej różnicy między grupami, co wskazuje na spójne wyjściowe poziomy prędkości ruchu i percepcji wzrokowej. Po pięciodniowym szkoleniu w zakresie wyszukiwania na platformie, trajektorie ruchu i analiza opóźnienia ucieczki wykazały, że grupa terapii osadzania wątków znacznie poprawiła się w pamięci odniesienia przestrzennego w porównaniu z grupami kontrolnymi i modelowymi.Badania wykazały, że grupa kontrolna stosowała strategie liniowe i kierunkowe, co sugeruje silną pamięć. Strategia oparta na krawędzi w grupie modelowej wykazała znaczny spadek pamięci, podczas gdy strategia terapii opartej na trendach grupy terapii opartej na wątkach wykazała poprawę pamięci. Czas pobytu i liczba przejść przez platformę ujawniły, że grupa terapii osadzania nici znacznie przewyższała grupę modelową, co wskazuje na lepsze uczenie się przestrzenne i pamięć.

operation-procedure-precautions-thread-embedding-acupuncture-therapy

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Ten protokół szczegółowo opisuje procedurę kopania w punktach akupunkturowych i demonstruje jego skuteczność w leczeniu alergicznego nieżytu nosa.

Terapia osadzająca katagut Acupoint w tradycyjnej medycynie chińskiej w leczeniu alergicznego nieżytu nosa

To badanie bada terapię otyłości za pomocą katgutu w punktach akupunkturowych, obejmując zarządzanie pacjentem, przygotowanie materiału, wybór akupunktury, chirurgię i opiekę pooperacyjną.

Terapia osadzania Acupoint Catgut w leczeniu otyłości brzusznej

Powszechny protokół ekstrakcji białek przy użyciu buforu mocznikowego/tiomocznikowego/SDS dla tkanki mózgowej ludzi i myszy umożliwia identyfikację białek za pomocą 2D-DIGE i ich późniejszą charakterystykę za pomocą mini immunoblottingu 2DE. Metoda ta umożliwia uzyskanie bardziej powtarzalnych i wiarygodnych wyników z biopsji człowieka i modeli eksperymentalnych.

Konsensus białka pochodzenia mózgowego, protokół ekstrakcji do badania ludzkiego i mysiego proteomu mózgu przy użyciu immunoblottingu zarówno 2D-DIGE, jak i Mini 2DE

Opisujemy dwie metody wizualizacji i kwantyfikacji arboryzacji dendrytycznej w hipokampie modeli mysich: obrazowanie w czasie rzeczywistym i rozszerzoną głębię ostrości. Podczas gdy pierwsza metoda pozwala na zaawansowane śledzenie topograficzne i ilościowe określenie zakresu rozgałęzień, druga pozwala na szybką wizualizację drzewa dendrytycznego.

Ocena arboryzacji dendrytycznej w zakręcie zębatym okolicy hipokampa u myszy

Model zwierzęcy z wstrzyknięciem β amyloidu (Aβ) umożliwia podawanie określonej ilości i gatunku fragmentów Aβ oraz redukuje indywidualne różnice w każdej badanej grupie. Protokół ten opisuje wstrzyknięcie Aβ do komory mózgowej (ICV) bez instrumentów stereotaktycznych, umożliwiając wytwarzanie nieprawidłowości behawioralnych podobnych do choroby Alzheimera u normalnych myszy.

Wstrzyknięcie domózgowo-komorowe peptydów β amyloidu u normalnych myszy w celu ostrego wywołania deficytów poznawczych podobnych do choroby Alzheimera

Tutaj prezentujemy wyrafinowany protokół, który skutecznie ujawnia znakowanie biotynylowanej aminy dekstranu (BDA) metodą barwienia fluorescencyjnego poprzez wzajemną ścieżkę neuronową. Nadaje się do analizy drobnej struktury znakowania BDA i odróżniania jej od innych elementów nerwowych pod konfokalnym laserowym mikroskopem skaningowym.

Poprawa zastosowania biotynylowanej aminy dekstranu o wysokiej masie cząsteczkowej do śledzenia projekcji wzgórzowo-korowej u szczura

Terapia fotobiomodulacyjna jest innowacyjną nieinwazyjną metodą leczenia szerokiego zakresu zaburzeń neurologicznych i psychiatrycznych, a także może poprawić zdrowe funkcjonowanie mózgu. Protokół ten zawiera przewodnik krok po kroku dotyczący wykonywania fotobiomodulacji mózgu u myszy poprzez przezczaszkowe dostarczanie światła, który można dostosować do stosowania u innych gryzoni laboratoryjnych.

Protokół przezczaszkowej terapii fotobiomodulacyjnej u myszy

Tutaj prezentujemy protokół do wizualizacji przestrzennej korelacji peptydu związanego z genem kalcytoniny (CGRP) - immunoreaktywnych włókien nerwowych i naczyń krwionośnych w oponie twardej czaszki za pomocą immunofluorescencji i histochemii fluorescencyjnej odpowiednio z CGRP i falloidyną. Ponadto pochodzenie tych włókien nerwowych zostało prześledzone wstecznie za pomocą fluorescencyjnego znacznika neuronowego.

Wizualizacja immunoreaktywnego unerwienia peptydu związanego z genem kalcytoniny opony twardej czaszki szczura z immunofluorescencją i śledzeniem neuronalnym

Prezentujemy zestaw standardowych protokołów rejestracji przezczaszkowej stymulacji magnetycznej (TMS) z pojedynczym i parowanym impulsem, z opcjami konwencjonalnych pomiarów amplitudy i śledzenia progów. Program ten może sterować trzema różnymi typami stymulatorów magnetycznych i został zaprojektowany tak, aby umożliwić wygodne wykonywanie wszystkich testów przez jednego operatora.

Konwencjonalne i progowe testy przezczaszkowej stymulacji magnetycznej do obsługi jedną ręką

Grubość skrawków tkanek ograniczała badanie morfologiczne unerwienia skóry. Niniejszy protokół opisuje unikalną technikę oczyszczania tkanek w celu wizualizacji włókien nerwowych skóry w grubych skrawkach tkanki o grubości 300 μm pod mikroskopią konfokalną.

Demonstrowanie owłosionego i nagiego unerwienia skóry we wzorze 3D przy użyciu wielu metod barwienia fluorescencyjnego i oczyszczania tkanek

Poznaj metodę akupunktury z osadzaniem nici w leczeniu objawów choroby Alzheimera u szczurów. Technika ta poprawia pamięć przestrzenną i zdolności poznawcze, oferując mniej inwazyjną alternatywę terapeutyczną.

Procedura operacyjna i środki ostrożności związane z terapią akupunkturą z osadzaniem nici w chorobie Alzheimera

Przeglądaj więcej filmów