Przeciwbakteryjna terapia fotodynamiczna za pośrednictwem kurkuminoidów na mysim modelu kandydozy jamy ustnej

Kandydoza jamy ustnej jest bardzo rozpowszechniona, zwłaszcza w ruchomych wyrostkach zębowych u osób z obniżoną odpornością. Leczenie lekami przeciwgrzybiczymi ma wady, takie jak nawroty i oporność. Tak więc nasza grupa jest badana pod kątem alternatyw terapeutycznych od ponad 20 lat.

Ponieważ kliniczne modele zwierzęce są równie ważne, jak kroki poprzedzające badania kliniczne, staramy się ustalić mysz morską z kandydozą jamy ustnej. Przeciwdrobnoustrojowa terapia fotodynamiczna lub APDT to szybka alternatywa, która może być szeroko stosowana jako alternatywa dla obecnych metod leczenia przeciwbakteryjnego. Wymaga połączenia skupionego światła laserowego i tlenu, aby wywołać działanie przeciwdrobnoustrojowe przeciwko szerokiemu spektrum mikroorganizmów jamy ustnej, w tym tych opornych na konwencjonalne leki.

Kurkumina może być obiecującym fotouczulaczem na biofilmy Candida, jednak jest to hydrofobowy polifenol o niskiej rozpuszczalności w wodzie i biodostępności. W związku z tym przeprowadzono badania mające na celu zwiększenie skuteczności mediatora kurkuminy APDT poprzez zastosowanie systemów dostarczania leków lub powiązanie fotouczulacza z przeciwbakteryjnym zapaleniem wątroby. Szerokie stosowanie leków przeciwgrzybiczych doprowadziło do globalnego zagrożenia oporności u gatunków Candida i późniejszych niepowodzeń leczenia.

W związku z tym głównym celem naszych badań było kontrolowanie biofilmów Candida w walce z opornością na leki przeciwgrzybicze poprzez działanie fotodynamiczne. Opracowany przez nas mysi model jamy ustnej Candida może być wykorzystany do oceny patogenezy naszych zakażeń przez Candida oraz skuteczności alternatywnych metod przeciwgrzybiczych. Używamy modelu do oceny skuteczności APDT, w którym pośredniczy rozpuszczalny w wodzie związek kurkuminoidowy.

Na początek losowo rozłóż myszy, których jama ustna jest ujemna dla wzrostu Candida, na dziewięć grup, z których każda odpowiada innemu stężeniu kurkuminoidów ze światłem lub bez. Pierwszego dnia wstrzyknąć podskórnie lek immunosupresyjny prednizolon wszystkim członkom grupy. Zapewnij chlorowodorek tetracykliny w stężeniu 0,83 miligrama na mililitr w wodzie pitnej od pierwszego dnia do końca eksperymentu.

Drugiego dnia należy podać domięśniowo chlorek chlorpromazyny na każdy mięsień uda, aby uspokoić mysz do inokulacji wewnątrzustnej. Następnie zanurz sterylny wacik w świeżo przygotowanej standaryzowanej zawiesinie Candida albicans. Po ułożeniu myszy w pozycji leżącej na plecach pocieraj jej język nasączonym wacikiem przez 30 sekund.

W piątym dniu należy podać bezpłatne podskórne wstrzyknięcie prednizolonu w celu utrzymania immunosupresji. Siódmego dnia, przed zabiegiem, umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej na podkładce wyposażonej w nici. Owiń nić wokół siekaczy, aby usta były otwarte.

Dozować 70 mikrolitrów fotouczulacza na grzbiet języka każdej myszy należącej do grupy C plus Lplus . Następnie przenieś język z powrotem do jamy ustnej i trzymaj mysz w ciemnym otoczeniu przez 20 minut jako okres przed napromienianiem. Po okresie fotouczulnienia umieść urządzenie LED na grzbiecie języka i oświetlaj je przez siedem minut.

Nałóż fotouczulacz na grupy C plus L minus, jak pokazano, i trzymaj myszy w ciemności przez 27 minut natychmiast po podaniu, przetrzyj grzbiet języka przez jedną minutę, używając sterylnego bawełnianego wacika, aby pobrać Candida albicans z języka. Umieść każdy wymazówkę z próbką w probówce zawierającej jeden mililitr sterylnej soli fizjologicznej i wiruj przez jedną minutę. Aby ponownie zawiesić komórki drobnoustrojów.

Bezzwłocznie wykonać dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia w PBS i poszczepić 25 mikrolitrów aliquat na płytkach z dekstrozą sabourauda w dwóch egzemplarzach, inkubować płytki tlenowo w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 48 godzin. Po 48 godzinach użyj cyfrowego licznika kolonii, aby określić liczbę kolonii drożdży. Oblicz obciążenie Candida albicans dla każdego zwierzęcia.

Ósmego dnia po prawidłowej eutanazji zwierzęcia przystąp do chirurgicznego usunięcia języka, wykonaj usunięcie języka przed brodawką okołoporodową, aby upewnić się, że cały język został usunięty. Na koniec przystąp do analizy histopatologicznej izolowanego języka. Mysi model kandydozy jamy ustnej wykazał typowe białe plamy i pseudobłony na języku zakażonych myszy.

Przeciwdrobnoustrojowa terapia fotodynamiczna zmniejszała żywotność Candida albicans przy stężeniu kurkuminoidów 80 mikromolowych. Języki niezakażonych zwierząt wykazywały normalne, zdrowe tkanki, w tym nienaruszoną blaszkę właściwą, błonę podstawną i brodawki nitkowate W grupie C minus L minus w zrogowaciałej warstwie nabłonka zaobserwowano drożdże i włókna W zrogowaciałej warstwie nabłonka Łagodna reakcja zapalna była obecna w leżącej poniżej tkance łącznej. Natomiast myszy leczone przeciwbakteryjną terapią fotodynamiczną za pośrednictwem 80 mikromolowców.

Kurkuminoidy miały mniej komórek grzybów w zrogowaciałej warstwie nabłonka języka.