Name: Opracowanie modelu ekspozycji miazgi mysiej z nowatorskim kneblem do badań nad zapaleniem miazgi (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 16 s
Description: Poznaj nowatorski model zapalenia miazgi zęba u myszy C57 z innowacyjnym kneblem do ust. Ta metoda umożliwia badanie odpowiedzi zapalnej tkanek zębowych in vivo z analizą histologiczną.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało sfinansowane z grantów National Natural Science Foundation of China U21A20368 (L. Y.), 82101000 (H. W.) i 82100982 (F. L.), oraz przez Sichuan Science and Technology Program 2023NSFSC1499 (H. W.). Wszystkie oryginalne dane i obrazy są zawarte w tym artykule.

Procedury eksperymentalne w tym badaniu zostały zatwierdzone przez komisję etyczną West China School of Stomatology, Sichuan University (WCHSIRB-D-2021-125). Dorosłe myszy C57BL/6 uzyskano z Gempharmatech Experimental Animals Company w Chengdu w Chinach. Cała korona pierwszego zęba trzonowego szczęki wyrzyna się 21 dni po urodzeniu. Myszy do zabiegu chirurgicznego powinny być starsze niż 21 dni i mieć normalną witalność11. Tutaj do modelowania wykorzystano myszy w wieku od 6 do 8 tygodni. Rysunek 1 to diagram przepływu pokazujący używany protokół.
1. Przygotowanie przedoperacyjne (<silna klasa="xfig">Rysunek 2)
<ol>
	<li>Zaopatrz się w następujące instrumenty: mikroskop stereoskopowy, płytkę mocującą, taśmę medyczną, knebel, minimalnie inwazyjny frez dentystyczny o średnicy 0,6 mm, szybkoobrotową rękojeść dentystyczną, pilnik 8 # C +, poduszkę grzewczą, strzykawkę 1 ml, sterylny wacik, kleszcze do oczu.</li>
	<li>Zaopatrz się w następujące leki: mieszankę anestezjologiczną, maść weterynaryjną.</li>
</ol>
2. Przygotowanie knebla do ust
<ol>
	<li>Zważ i znieczul mysz przez dootrzewnowe wstrzyknięcie roztworu mieszanki znieczulającej (10% chlorowodorek ketaminy + 5% ksylazyna + 85% sterylna izotoniczna sól fizjologiczna) w stężeniu 0,007 ml/g masy ciała i potwierdź prawidłowe znieczulenie metodą szczypania palców u stóp. Nałóż okulistyczną maść nawilżającą na oczy, aby zapobiec obrażeniom oczu z powodu wysuszenia podczas pracy. 
	UWAGA: Niezbędne są czapki medyczne, maski, rękawice i kombinezony oraz inne podstawowe środki ochrony. Upewnij się, że zarówno środowisko zabiegowe, jak i komora myszy są czyste i bezpieczne. Niezbędna jest poduszka grzewcza zapewniająca wsparcie termiczne podczas całej procedury.</li>
	<li>Przygotuj knebel do ust zgodnie z opisem poniżej (<silna klasa="xfig">Rysunek 3).
	<ol>
		<li>Zaopatrz się w następujące materiały: drut łukowy ortodontyczny o średnicy 8 μm, szczypce do gięcia pętli dla młodzieży, ciężki obcinak do drutu, marker, gumową nasadkę o długości 3 mm i średnicy przekroju 1 mm.</li>
		<li>Najpierw wyprostuj drut łukowy lewą ręką w celu zamocowania i kciukiem, palec wskazujący prawej ręki zegnij lekko w stosunku do łuku drutu. Powtórz tę czynność kilka razy, ułatwi to zginanie do prawidłowego kąta trójwymiarowego.</li>
		<li>Użyj szczypiec do gięcia pętli Yong, aby zgiąć górną krawędź (<silna klasa="xfig">Rysunek 3G, a-i) trapezu (<silna klasa="xfig">Rysunek 3C, a-l-k-b) o długości około 8 mm w środku drutu dziobowego. Upewnij się, że punkt a (Rysunek 3) znajduje się na krawędzi dzioba szczypiec.</li>
		<li>Przytrzymaj szczypce lewą ręką, zaciśnij wolny koniec drutu kabłąkowego prawym kciukiem i palcem wskazującym, a następnie zegnij drut kabłąkowy od punktu a, aby uzyskać kąt około 120°. Zduplikuj poprzednią akcję w punkcie i (<silna klasa="xfig">Rysunek 3G). Sprawdź, czy drut łukowy znajduje się w jednej płaszczyźnie, kładąc go na poziomym stole bez podważania.</li>
		<li>Pozostaw około 9 mm długości z każdej strony (<silna klasa="xfig">Rysunek 3D, a-b, l-k) i zegnij wolny koniec pod kątem 75°, używając tych samych umiejętności, co w kroku 2.2.4, upewniając się, że każda krawędź znajduje się w jednej płaszczyźnie. Zegnij ten ostry kąt końcówką dzioba szczypiec.</li>
		<li>Znajdź punkt c około 5 mm od punktu b. Postępuj zgodnie z tą samą umiejętnością, aby zgiąć kąt 105° w punkcie c. Zegnij kolejny kąt 105° w punkcie d 5 mm od punktu c. Pozostaw około 4,5 mm od punktu d i znajdź punkt e. Zegnij swobodny koniec w punkcie e, aby utworzyć kąt około 100 -105° (<silna klasa="xfig">Rysunek 3E). 
		UWAGA: 6-8-tygodniowe myszy C57, których używaliśmy, ważyły około 20 g. Odstęp 5 mm mógł nie tylko zablokować górną i dolną szczękę myszy bez ruchu, ale także nie uciskał skóry myszy i nie powodował dyskomfortu. Jeśli używane są inne gatunki lub wiek myszy, dostosuj długość części c-d i i-h zgodnie z rzeczywistą sytuacją (<silna klasa = "xfig" > Rysunek 3E,G).</li>
		<li>Zegnij dodatkowy depresor języka dla części żuchwy (<silna klasa="xfig">Rysunek 3G, j-i-h-g).</li>
		<li>Zduplikuj kroki gięcia części a-b-c na części l-k-j. Clamp części i-k i k-j w tym samym czasie i zegnij wolny koniec w punkcie j, aby ustawić go pionowo do płaszczyzny i-k-j. Clamp punkt i, który znajduje się 5 mm od punktu j, zegnij wolny koniec, aby był równoległy zarówno do płaszczyzny i-k-j, jak i części c-d (<silna klasa = "xfig">Rysunek 3H).</li>
		<li>Pozostaw 5 mm długości od punktu i, w punkcie h zegnij łuk pionowo do części IH i równolegle do płaszczyzny JAH. Znajdź punkt g w odległości 5 mm od punktu h. Clamp płaszczyznę j-i-h-g i zegnij wolny koniec symetrycznie do części k-j. Wtedy wolny koniec po punkcie f powinien być symetryczny do punktu e-wolnego końca (<silna klasa="xfig">Rysunek 3H).</li>
		<li>Umieść gumowe zaślepki na wolnym końcu (<silna klasa="xfig">Rysunek 3F).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Unieruchomienie
<ol>
	<li>Przymocuj mysz na wznak do płytki mocującej za pomocą kończyn zabezpieczonych taśmą ochronną. Ściśnij wolne końce knebla kciukiem i palcem wskazującym.</li>
	<li>Zamocuj przednie siekacze myszy w trapezoidalnym rowku dwóch ramion. Upewnij się, że ramię z depresorem języka jest przeznaczone dla żuchwy. Dostosuj knebel ustny, aby upewnić się, że język myszy jest unieruchomiony, ale nie niedokrwiony.</li>
</ol>
4. Ocena zębów
<ol>
	<li>Upewnij się, że pierwszy ząb trzonowy szczęki do operacji powinien być wolny od próchnicy, urazów i zębodontogenezy. Upewnij się, że na otaczającym dziąśle nie ma zaczerwienienia, obrzęku ani przetoki. Upewnij się, że przeciwległe zęby są zdrowe i mogą działać jako zdrowa grupa kontrolna.</li>
</ol>
5. Ekspozycja na miazgę
<ol>
	<li>Użyj wiertła dentystycznego, aby wywiercić po stronie zgryzowej pierwszego zęba trzonowego szczęki z prędkością 20 000 obr./min. Upewnij się, że szkliwo zostało usunięte. Utrzymuj operację rękojeścią dentystyczną tylko w płytkiej warstwie zębiny, aby zapobiec nadmiernej stymulacji termicznej tkanki miazgi zębowej12.</li>
	<li>Jednocześnie zapobiegaj przegrzaniu, używając strzykawki do upuszczania zwykłej soli fizjologicznej na ząb co 3 minuty podczas operacji.</li>
	<li>Umieść pilnik C+ 8 # lub 10 # w najniższej pozycji wywierconego dołu i przebij ostatnią zębinę, aby odsłonić komorę miazgi. Będzie to oczywiste uczucie upadku, gdy miejscowa zębina zostanie dokładnie usunięta. Nie sonduj zbyt głęboko, ponieważ tkanka miazgi zębowej może zostać wyprowadzona z komory miazgi.</li>
	<li>Oczyść fragmenty wokół zęba. Zdejmij knebel do ust; Operacja jest zakończona. Użyj przeciwległego pierwszego zęba trzonowego szczęki jako kontroli bez operacji.</li>
</ol>
6. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Po zabiegu należy podać karprofen (5 mg/kg) podskórnie i umieścić mysz na chemotermicznej poduszce grzewczej w pozycji leżącej do czasu wyzdrowienia ze znieczulenia. Nakarm myszy i zapewnij wodę pitną. Proces odzyskiwania powinien być nadzorowany. Żadne inne zwierzęta nie powinny przebywać w tej samej komorze, dopóki mysz nie odzyska pełnej sprawności.</li>
</ol>
7. Pobieranie i przechowywanie próbek
<ol>
	<li>Poddaj mysz eutanazji z zwichnięciem szyjki macicy w warunkach głębokiego znieczulenia 24 godziny po operacji lub w dowolnym innym punkcie czasowym zgodnie z eksperymentem9. Przetnij mięśnie szkieletu przyczepione do szczęki i jarzmowej nożyczkami okulistycznymi. Usunąć szkielet, kość czołową i tkanki miękkie, a następnie wyjąć blaszkę gnathostegite z zębami trzonowymi szczęki. 
	UWAGA: Według He i wsp., zaleca się, aby próbka zapalenia miazgi była pobierana mniej niż 72 godziny po operacji, aby uniknąć rozległej martwicy tkanki miazgi zębowej13.</li>
	<li>Strzałkowo podzielić gnacjatom na pół i przechowywać tkankę w 4% paraformaldehydzie w PBS, pH 7,4, w temperaturze 4 °C przez 24 godziny utrwalenia.</li>
</ol>
8. Analiza histologiczna
<ol>
	<li>Przemyj tkankę solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) i odwapnij ją w codziennie zmienianym roztworze odwapniającym 5% EDTA i 4% sacharozy w PBS, pH 7,4, w temperaturze 4 °C przez 2-4 tygodnie10.</li>
	<li>Zanurz 1/2 gnathostegitu w parafinie i upewnij się, że strzałkowa powierzchnia bez zębów znajduje się na dnie kaset z tkankami.</li>
	<li>Pokrój blok parafiny na plastry o grubości 5 μm za pomocą mikrotomu parafinowego. Dostosuj kąt bloku parafiny zgodnie z bliższą, dystalną, górną i dolną zależnością obserwowaną pod mikroskopem, aby zapewnić wycięcie całej miazgi koronowej i perforacji pierwszego zęba trzonowego.</li>
</ol>

Creating a Pulp Inflammation Mouse Model Using a Novel Mouth-Gag 

<ol><li>Kleinert, A., Kleinert, L., Ozimirska, M., Chałas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endodontium+-+together+or+separately%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Morphol%22%5BJournal%5D)">Endodontium - together or separately.</a> Folia Morphol. 77 (3), 409-415 (2018).</li>
<li>Dhillon, H., Kaushik, M., Sharma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+endodontics-Creating+new+horizons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+B+Appl+Biomater%22%5BJournal%5D)">Regenerative endodontics-Creating new horizons.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 104 (4), 676-685 (2016).</li>
<li>Prati, C., Pirani, C., Zamparini, F., Gatto, M. R., Gandolfi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+20-year+historical+prospective+cohort+study+of+root+canal+treatments.+A+Multilevel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Endod+J%22%5BJournal%5D)">A 20-year historical prospective cohort study of root canal treatments. A Multilevel analysis.</a> Int Endod J. 51 (9), 955-968 (2018).</li>
<li>Su, Y., Wang, C., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Healing+rate+and+post-obturation+pain+of+single-+versus+multiple-visit+endodontic+treatment+for+infected+root+canals%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Healing rate and post-obturation pain of single- versus multiple-visit endodontic treatment for infected root canals: a systematic review.</a> J Endod. 37 (2), 125-132 (2011).</li>
<li>Murray, P. E., Garcia-Godoy, F., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+endodontics%3A+a+review+of+current+status+and+a+call+for+action%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action.</a> J Endod. 33 (4), 377-390 (2007).</li>
<li>Arora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+application+of+immunotherapy+for+modulation+of+pulp+inflammation%3A+opportunities+for+vital+pulp+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Endod+J%22%5BJournal%5D)">Potential application of immunotherapy for modulation of pulp inflammation: opportunities for vital pulp treatment.</a> Int Endod J. 54 (8), 1263-1274 (2021).</li>
<li>Eramo, S., Natali, A., Pinna, R., Milia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+regeneration+via+cell+homing%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Endod+J%22%5BJournal%5D)">Dental pulp regeneration via cell homing.</a> Int Endod J. 51 (4), 405-419 (2018).</li>
<li>Hasan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Toll-like+receptor+2%2C+Dectin-1%2C+and+Osteopontin+in+murine+model+of+pulpitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Investig%22%5BJournal%5D)">Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis.</a> Clin Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DDIT3+aggravates+pulpitis+by+modulating+M1+polarization+through+EGR1+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">DDIT3 aggravates pulpitis by modulating M1 polarization through EGR1 in macrophages.</a> Int Immunopharmacol. 120, 110328(2023).</li>
<li>Richert, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+analysis+of+research+methods+and+experimental+models+to+study+pulpitis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Endod+J%22%5BJournal%5D)">A critical analysis of research methods and experimental models to study pulpitis.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 1), 14-36 (2022).</li>
<li>Huang, X. F., Zhao, Y. B., Zhang, F. M., Han, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+gene+expression+during+tooth+eruption+and+orthodontic+tooth+movement+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparative study of gene expression during tooth eruption and orthodontic tooth movement in mice.</a> Oral Dis. 15 (8), 573-579 (2009).</li>
<li>Kwon, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+irritation+of+teeth+during+dental+treatment+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Restor+Dent+Endod%22%5BJournal%5D)">Thermal irritation of teeth during dental treatment procedures.</a> Restor Dent Endod. 38 (3), 105-112 (2013).</li>
<li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+tissue+inflammatory+reactions+after+experimental+pulpal+exposure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Pulpal tissue inflammatory reactions after experimental pulpal exposure in mice.</a> J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).</li>
<li>Karrar, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biomarkers+for+objective+assessment+of+symptomatic+pulpitis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Endod+J%22%5BJournal%5D)">Molecular biomarkers for objective assessment of symptomatic pulpitis: A systematic review and meta-analysis.</a> Int Endod J. 56 (10), 1160-1177 (2023).</li>
<li>Goldman, E., Reich, E., Abramovitz, I., Klutstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+apical+periodontitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Inducing apical periodontitis in mice.</a> J Vis Exp. (150), e59521(2019).</li>
<li>Duncan, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Present+status+and+future+directions-Vital+pulp+treatment+and+pulp+preservation+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Endod+J%22%5BJournal%5D)">Present status and future directions-Vital pulp treatment and pulp preservation strategies.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 3), 497-511 (2022).</li>
<li>Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+different+dental+burs+for+experimental+induction+of+pulpitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice.</a> Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).</li>
<li>Du, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indigenous+microbiota+protects+development+of+medication-related+osteonecrosis+induced+by+periapical+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oral+Sci%22%5BJournal%5D)">Indigenous microbiota protects development of medication-related osteonecrosis induced by periapical disease in mice.</a> Int J Oral Sci. 14 (1), 16(2022).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Jako jedyna tkanka miękka w zębach, miazga zębowa spełnia kluczową rolę w utrzymaniu bioaktywności zęba, ale pozostaje bardzo wrażliwa. Zachowanie tej niezbędnej miazgi stało się preferowanym podejściem początkowym w ostatnich zabiegach endodontycznych, co wymaga kompleksowego zrozumienia mechanizmów zapalnych miazgi zębowej16. Czasoprzestrzenne fluktuacje mikrośrodowiska zapalnego i interakcje między typami komórek rezydentnych w zapaleniu miazgi komplikują jego badanie poprzez badania in vit...

Miazga zębowa, integralna część zęba, jest odpowiedzialna za wiele podstawowych funkcji, takich jak dostarczanie składników odżywczych, tworzenie zębiny, funkcje sensoryczne i reakcje obronne1. Niemniej jednak miazga zębowa, otoczona twardą tkanką, jest podatna na urazy i uszkodzenia spowodowane głęboką próchnicą, zapaleniem miazgi, urazami lub późniejszymi terapiami2,3. Brak funkcjonalnej miazgi zębowej zwiększa ryzyko łamliwości zębów4. Co więcej, utrata żywotności miazgi w młodych zębach stałych może niekorzystnie wpływać na dojrzewanie zębów, a obecne techniki protetyczne nie są w stanie przywrócić neuronalnego sprzężenia zwrotnego oferowanego przez zdrową miazgę 4. Ta sytuacja skłoniła naukowców do zbadania alternatywnych rozwiązań w zakresie radzenia sobie z zapalną miazgą, wykraczających poza zwykłe usunięcie.
W 2007 roku Murray et al. zainicjowali zastosowanie inżynierii tkankowej w endodoncji regeneracyjnej, wywołując tym samym wzrost zainteresowania konserwacją i regeneracją miazgi5. Jednak stan zapalny tkanki miazgi stanowi wyzwanie, ponieważ komórki uwalniają czynniki zapalne, takie jak IL-6, które rekrutują komórki zapalne i powodują martwicę komórek, utratę witalności miazgi i komplikacje w powrocie do sprawności6,7. Zrozumienie stanu zapalnego i związanej z nim śmierci komórki ma zatem kluczowe znaczenie dla postępów w zachowaniu niezbędnej miazgi. Istnieje wiele eksperymentów, które zostały przeprowadzone w celu zbadania biologii molekularnej zapalnej miazgi in vivo lub in vitro8,9. Chociaż eksperymenty in vitro, takie jak hodowle komórkowe 2D lub 3D, są opracowywane od lat i stają się dojrzałe i szeroko stosowane do testowania reakcji komórek miazgi na czynniki zapalne, eksperymenty te nie mogą odzwierciedlać interakcji między tkanką miazgi a układowym układem odpornościowym10. Jeśli badane zjawisko pochodzi z komórek pochodzenia tkankowego innego niż układ odpornościowy, naczyniowy i nerwowy, to czysta hodowla komórek miazgi doprowadzi do ślepego zaułka. Dlatego eksperymenty in vivo są bardzo potrzebne i referencyjne.
Myszy coraz częściej stają się częstym wyborem w badaniach nad stanami zapalnymi in vivo ze względu na ich opłacalność, wysoką płodność i witalność. Jednak obecnie brakuje kompleksowego protokołu dla modelu zapalenia miazgi u myszy, który mógłby służyć jako odniesienie. Niewielkie rozmiary myszy i ich wrażliwość na stymulację stanowią poważne wyzwanie podczas procedur eksperymentalnych. Obserwacja maleńkich zębów ukrytych głęboko w jamie ustnej myszy często wymaga użycia mikroskopu wspornikowego, niezależnie od bardziej powszechnej obecności mikroskopów biurkowych w laboratoriach. Brak otwieracza do ust wymaga pomocy innych. Aby rozwiązać ten problem, grupa opracowała knebel z łatwo dostępnymi materiałami, który ma na celu zapewnienie ustandaryzowanego i powtarzalnego protokołu konstruowania modelu zapalenia miazgi u myszy. Ten artykuł szczegółowo opisuje procedurę, obejmującą przygotowanie przedoperacyjne, unieruchomienie, operację odsłonięcia miazgi i pobieranie próbek na myszach C57. Protokół ten zaleca stosowanie knebla ustnego, dostarczając informacji na temat jego struktury, produkcji i zastosowania, aby ułatwić innym badaczom odtworzenie procedury.

<table><tbody><tr><td>Animal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57/B6J</td><td>myszy Gempharmatech Experimental Animals Company</td><td>C57/B6J</td><td>Do ustalenia ekspozycji na miazgę</td></tr> <tr><td>< silny>Sprzęt< / silny></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL strzykawka</td><td>Chengdu Xinjin Shifeng Aparatura medyczna i Instrumenty Co., Sp. z o.o.</td><td>SB1-074(IV)</td><td>Stosować w iniekcjach leków.</td></tr><tr><td>8 # Plik C +</td><td>Readysteel</td><td>0010047</td><td>Zastosuj do odsłaniania dachu komory miazgi.</td></tr><tr>Roztwór do <td></td><td></td><td>znieczulenia</td><td>10% chlorowodorek ketaminy + 5% ksylazyna + 85% sterylna sól fizjologiczna izotoniczna.</td></tr><tr><td>Roztwór do barwienia DAPI</td><td>Beyotime</td><td>C1005</td><td>Stosować w barwieniu immunofluorescencyjnym w celu barwienia przeciwstawnego jądra.</td></tr><tr><td>Dentystyczna szybkobieżna rękojeść dentystyczna</td><td>Jing yuan technologia handlu elektronicznego</td><td>WJ-422</td><td>Zastosuj w ekspozycji miazgi.</td></tr><tr><td>Ciężki przecinak do drutu</td><td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>brak</td><td>Zastosuj cięcie łukowe.</td></tr><tr><td>Zestaw do barwienia hematoksyliny i eozyny</td><td>Biosharp</td><td>BL700B</td><td>Do analizy histologicznej szkiełek.</td></tr><tr><td>Przeciwciało IL-6</td><td>Novus</td><td>NBP2-89149</td><td>Zastosuj w barwieniu immunofluorescencyjnym w celu wykrycia zapalenia miazgi zębowej.</td></tr><tr><td>Ketamina (chlorowodorek ketaminy)</td> <td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td><td>C3N VT1</td><td>100 mg / kg, IP. Zastosuj w nestetyzacji.</td></tr><tr><td>Kran</td><td>medyczny 3M</td><td>1530</td><td>Stosować w unieruchomieniu myszy.</td></tr><tr><td>Drut łuku ortodontycznego&nbsp;</td><td>Shanghai Wei Rong Aparatura Medyczna Co., LTD.</td><td>K417</td><td>Średnica 8 i mikro; </td></tr><tr><td>m Okrągły wiertło dentystyczne (0,6 mm)</td><td>Shofu global</td><td>072208</td><td>Stosować do usuwania szkliwa i płytkiej warstwy zębiny.</td></tr><tr><td>Młode szczypce do gięcia pętli</td><td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>brak</td><td>Stosować przy gięciu łukowym.</td></tr></tbody></table>

opracowanie modelu ekspozycji miazgi mysiej z nowatorskim kneblem do badań nad zapaleniem miazgi

Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research

Zapalenie miazgi, częsta przyczyna naturalnej utraty zębów, prowadzi do martwicy i utraty bioaktywności w zapalnej miazdze zębowej. Wyjaśnienie mechanizmów leżących u podstaw zapalenia miazgi i jego skuteczne leczenie jest przedmiotem ciągłych badań endodontycznych. Dlatego zrozumienie procesu zapalnego w miazdze zębowej ma kluczowe znaczenie dla poprawy zachowania miazgi. W porównaniu z innymi eksperymentami in vitro, mysi model zapalenia miazgi oferuje bardziej autentyczny i genetycznie zróżnicowany kontekst do obserwacji patologicznego postępu zapalenia miazgi. Jednak korzystanie z myszy, pomimo ich opłacalności i dostępności, stwarza trudności ze względu na ich małe rozmiary, słabą koordynację i niską tolerancję, co komplikuje zabiegi wewnątrzustne i dentystyczne. Protokół ten wprowadza nowatorski projekt i zastosowanie knebla do ust w celu odsłonięcia miazgi myszy, ułatwiając bardziej wydajne procedury wewnątrzustne. Knebel ustny, składający się z łuku zębowego łatwo dostępnego dla większości dentystów i może znacznie przyspieszyć przygotowanie chirurgiczne, nawet do pierwszych zabiegów. Mikrotomografia komputerowa, barwienie hematoksyliną-eozyną (HE) i barwienie immunofluorescencyjne zostały wykorzystane do identyfikacji zmian w morfologii i ekspresji komórek. Celem tego artykułu jest pomoc naukowcom w ustaleniu bardziej powtarzalnej i mniej wymagającej procedury tworzenia modelu zapalenia miazgi przy użyciu tego nowatorskiego knebla.

Opisaną powyżej procedurę przeprowadzono na prawym pierwszym trzonowcu szczękowym u 3 myszy rasy C57BL/6 w wieku od 6 do 8 tygodni, natomiast lewe pierwsze trzonowce szczękowe zachowano jako kontrolę. Do celów demonstracyjnych wykorzystano wyniki badań histologicznych i immunofluorescencyjnych z próbek kontrolnych (blank control) oraz próbek z zapaleniem miazgi po 12 h i 24 h.
Zgodnie z protokołem analizy CT według Goldman et al.15, odsłonięcie miazgi potwierdzono za po...

Ten artykuł przedstawia uproszczony protokół tworzenia modelu zapalenia miazgi u myszy za pomocą innowacyjnego knebla ustnego, po którym następuje analiza histologiczna.

Opracowanie modelu ekspozycji miazgi mysiej z nowatorskim kneblem do badań nad zapaleniem miazgi

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms ...

Indywidualne eksperymenty, takie jak hodowle komórkowe 2D lub 3D, są szeroko stosowane do testowania reakcji komórek miazgi zębowej. Eksperymenty te nie mogą odzwierciedlać interakcji między tkanką miazgi a układowym układem odpornościowym. Dlatego eksperymenty in vivo stają się coraz bardziej popularne w badaniach endodontycznych.Myszy C57 stają się coraz częstszym wyborem w badaniach nad stanem zapalnym miazgi zębowej ze względu na ich opłacalność, wysoką śmiertelność i witalność. Jednak niewielki rozmiar myszy i brak koordynacji stanowią poważne wyzwanie podczas procedur eksperymentalnych. Proces utrwalania jest ważnym czynnikiem podnoszącym próg techniczny.Opracowaliśmy nowatorski knebel do ust, wykorzystując łatwo dostępne materiały i proste zestawy, aby pomóc naukowcom w chirurgii odsłonięcia miazgi. Według naszych badań ten knebel ustny może znacznie skrócić czas potrzebny początkującym na unieruchomienie jamy ustnej i odsłonięcie pierwszego zęba trzonowego szczęki myszy. Na początek wyprostuj drut łuku ortodontycznego o grubości ośmiu mikronów lewą ręką, trzymając prawą rękę lekko zgiętą przy łuku drucianym.Użyj szczypiec do gięcia pętli Younga, aby zgiąć górną krawędź trapezu o około osiem milimetrów w środku drutu łukowego. Upewnij się, że punkt a znajduje się na krawędzi dzioba szczypiec. Teraz przytrzymaj szczypce lewą ręką, zaciśnij wolny koniec drutu łukowego prawym kciukiem i palcem wskazującym.Następnie zegnij drut łukowy od punktu A, aby uzyskać kąt 120 stopni. Umieść drut łukowy na poziomym stole, aby sprawdzić, czy znajduje się w jednej płaszczyźnie. Pozostaw około dziewięciu milimetrów z każdej strony drutu i użyj szczypiec, aby zgiąć wolny koniec pod kątem 75 stopni.Teraz zlokalizuj punkt c, który znajduje się około pięciu milimetrów od punktu b. Zegnij drut w punkcie c, aby uzyskać kąt 105 stopni. Podobnie zegnij drut w punktach d i e.Zaciśnij jednocześnie części ik i kj. Zduplikuj zginanie a, b, c w punktach l, j i k. Następnie zegnij wolny koniec w punkcie j, aby ustawić go pionowo do płaszczyzny ikj.Zegnij dodatkowy depresor języka dla części żuchwy. Zaciśnij punkt i pięć milimetrów od punktu j i zegnij wolny koniec, aby był równoległy zarówno do płaszczyzny ikj, jak i części cd. Następnie pozostaw pięciomilimetrowy odstęp od punktu i.A w punkcie h zegnij łuk pionowo do płaszczyzn ih i jih. Zlokalizuj punkt g pięć milimetrów od h i zaciśnij pas jihg. Następnie zegnij łuk w punkcie g.Teraz zegnij wolny koniec symetrycznie do płaszczyzny kj. Swobodny koniec po punkcie f powinien być symetryczny do swobodnego końca w punkcie e. Na koniec umieść gumowe zaślepki na wolnych końcach.Na początek przymocuj znieczuloną mysz w pozycji leżącej na płytce mocującej. Zabezpiecz kończyny taśmą do skóry. Ściśnij wolne końce przygotowanego knebla na usta kciukiem i palcem wskazującym.Zamocuj przednie siekacze myszy w trapezoidalnym rowku między dwoma ramionami knebla ustnego. Upewnij się, że ramię z depresorem języka jest umieszczone na żuchwie. Sprawdź pierwszy ząb trzonowy szczęki, aby upewnić się, że jest wolny od próchnicy, urazów i odontogenezy.Oceń otaczające dziąsło, aby upewnić się, że nie ma zaczerwienienia, obrzęku ani przetoki. Następnie sprawdź stan zdrowia przeciwległych zębów. Następnie za pomocą wiertła dentystycznego wywierć zgryzową stronę pierwszego trzonowca szczęki z prędkością 20 000 obr./min.Usuń szkliwo. Za pomocą strzykawki upuszczaj zwykłą sól fizjologiczną co trzy minuty na ząb, aby zapobiec przegrzaniu. Umieść pilnik C-plus o numerze 8 w najniższym miejscu wywierconego dołu i przebij ostatnią zębinę, aby odsłonić komorę miazgi.Oczyść fragmenty wokół zęba, a następnie usuń knebel z ust. Czas potrzebny na zamocowanie ust za pomocą knebla ustnego i odnalezienie pierwszego zęba trzonowego szczęki uległ znacznemu skróceniu w porównaniu z metodą tradycyjną. Odsłonięcie miazgi potwierdzono za pomocą mikrotomografii komputerowej i modelowania rekonstrukcyjnego.Po 24 godzinach od zabiegu większość tkanki miazgi zachowała swoją morfologię.

establishment-murine-pulp-exposure-model-with-novel-mouth-gag-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Opisujemy krok po kroku metodę bezpośredniego pokrywania miazgi na zębach myszy w celu oceny gojenia się ran miazgi i naprawczego tworzenia zębiny in vivo.

Opracowanie modelu bezpośredniego pokrywania miazgi do oceny gojenia się ran miazgi i naprawczego tworzenia zębiny u myszy

Tutaj prezentujemy protokół miejscowego wywoływania wierzchołkowego zapalenia przyzębia u myszy. Pokazujemy, jak wywiercić otwór w zębie myszy i odsłonić jego miazgę, aby wywołać miejscowy stan zapalny. Przedstawiono również metody analityczne mające na celu zbadanie charakteru tego zapalenia, takie jak mikrotomografia komputerowa i histologia.

Wywoływanie wierzchołkowego zapalenia przyzębia u myszy

Ten artykuł przedstawia protokół tworzenia indukowanego przez ligaturę modelu mysiego zapalenia przyzębia obejmującego wiele zębów trzonowych szczęki, co skutkuje większymi obszarami zaangażowanej tkanki dziąsłowej i kości do późniejszej analizy, a także zmniejszeniem zużycia przez zwierzęta. Opisano również technikę oceny neutrofili w jamie ustnej w sposób analogiczny do osób badanych u ludzi.

Solidny model mysiego zapalenia przyzębia indukowany ligaturą do oceny neutrofili jamy ustnej

Ten protokół krok po kroku pokazuje, jak wydobyć pierwszy ząb trzonowy żuchwy u myszy. Stanowi alternatywną metodę dla badaczy zajmujących się gojeniem i regeneracją kości szczęki.

Opracowanie modelu gojenia zębodołu po ekstrakcji zębów trzonowych żuchwy u myszy

Aby zrozumieć molekularne mechanizmy uszkodzeń rozwojowych wywołanych przez etanol, opracowaliśmy model ekspozycji na etanol u rybek danio (zebrafish) i badamy zmiany fizyczne, komórkowe oraz genetyczne występujące po takiej ekspozycji1. Następnie dążymy do znalezienia potencjalnych interwencji i ich szybkiego przetestowania w tym modelu zwierzęcym.

Ocena zmian teratogennych w modelu ekspozycji płodowej na alkohol u rybek danio pręgowanych

Mysi model gojenia się ran skórnych, który może być używany do oceny związków terapeutycznych w warunkach fizjologicznych i patofizjologicznych.

Mysi model gojenia się ran

Opisano standaryzowany mysi model krwotoku podpajęczynówkowego za pomocą wewnątrzświetlnego koła perforacji Willisa. Perforacja naczynia i krwawienie podpajęczynówkowe są monitorowane za pomocą monitorowania ciśnienia śródczaszkowego. Ponadto rejestrowane i kontrolowane są różne parametry życiowe w celu utrzymania warunków fizjologicznych.

Mysi model krwotoku podpajęczynówkowego

Zmodyfikowana technika obniżania wagi jest łatwą, opłacalną procedurą stosowaną do indukcji łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu u młodych szczurów. Ta nowatorska technika daje klinicznie istotne symptomy, które posuną naprzód badania nad łagodnym urazowym uszkodzeniem mózgu (mTBI) i wstrząśnieniem mózgu.

Nowy model łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu u młodych szczurów

Mysi model nieodwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu (UUO) jest prezentowany razem z modelem odwracalnego UUO, w którym niedrożność moczowodu jest łagodzona przez zespolenie przerwanego moczowodu z pęcherzem moczowym. Modele te umożliwiają badanie stanu zapalnego i bliznowacenia nerek, a także przebudowy tkanek.

Mysi model nieodwracalnej i odwracalnej jednostronnej niedrożności moczowodu

Zdolność do modelowania infekcji dróg moczowych (ZUM) jest kluczowa, aby móc zrozumieć patogenezę bakterii i zapoczątkować rozwój nowych terapii. Celem tej pracy jest zademonstrowanie mysich modeli eksperymentalnego ZUM i ZUM związanego z cewnikiem, które podsumowują i przewidują wyniki obserwowane u ludzi.

Ustalenie i charakterystyka UTI i CAUTI w modelu mysim

Poznaj nowatorski model zapalenia miazgi zęba u myszy C57 z innowacyjnym kneblem do ust. Ta metoda umożliwia badanie odpowiedzi zapalnej tkanek zębowych in vivo z analizą histologiczną.

Opracowanie modelu ekspozycji miazgi mysiej z nowatorskim kneblem do badań nad zapaleniem miazgi

Przeglądaj więcej filmów