Opracowanie modelu ekspozycji miazgi mysiej z nowatorskim kneblem do badań nad zapaleniem miazgi
27 października 2023
Ten artykuł przedstawia uproszczony protokół tworzenia modelu zapalenia miazgi u myszy za pomocą innowacyjnego knebla ustnego, po którym następuje analiza histologiczna.
Indywidualne eksperymenty, takie jak hodowle komórkowe 2D lub 3D, są szeroko stosowane do testowania reakcji komórek miazgi zębowej. Eksperymenty te nie mogą odzwierciedlać interakcji między tkanką miazgi a układowym układem odpornościowym. Dlatego eksperymenty in vivo stają się coraz bardziej popularne w badaniach endodontycznych.
Myszy C57 stają się coraz częstszym wyborem w badaniach nad stanem zapalnym miazgi zębowej ze względu na ich opłacalność, wysoką śmiertelność i witalność. Jednak niewielki rozmiar myszy i brak koordynacji stanowią poważne wyzwanie podczas procedur eksperymentalnych. Proces utrwalania jest ważnym czynnikiem podnoszącym próg techniczny.
Opracowaliśmy nowatorski knebel do ust, wykorzystując łatwo dostępne materiały i proste zestawy, aby pomóc naukowcom w chirurgii odsłonięcia miazgi. Według naszych badań ten knebel ustny może znacznie skrócić czas potrzebny początkującym na unieruchomienie jamy ustnej i odsłonięcie pierwszego zęba trzonowego szczęki myszy. Na początek wyprostuj drut łuku ortodontycznego o grubości ośmiu mikronów lewą ręką, trzymając prawą rękę lekko zgiętą przy łuku drucianym.
Użyj szczypiec do gięcia pętli Younga, aby zgiąć górną krawędź trapezu o około osiem milimetrów w środku drutu łukowego. Upewnij się, że punkt a znajduje się na krawędzi dzioba szczypiec. Teraz przytrzymaj szczypce lewą ręką, zaciśnij wolny koniec drutu łukowego prawym kciukiem i palcem wskazującym.
Następnie zegnij drut łukowy od punktu A, aby uzyskać kąt 120 stopni. Umieść drut łukowy na poziomym stole, aby sprawdzić, czy znajduje się w jednej płaszczyźnie. Pozostaw około dziewięciu milimetrów z każdej strony drutu i użyj szczypiec, aby zgiąć wolny koniec pod kątem 75 stopni.
Teraz zlokalizuj punkt c, który znajduje się około pięciu milimetrów od punktu b. Zegnij drut w punkcie c, aby uzyskać kąt 105 stopni. Podobnie zegnij drut w punktach d i e.
Zaciśnij jednocześnie części ik i kj. Zduplikuj zginanie a, b, c w punktach l, j i k. Następnie zegnij wolny koniec w punkcie j, aby ustawić go pionowo do płaszczyzny ikj.
Zegnij dodatkowy depresor języka dla części żuchwy. Zaciśnij punkt i pięć milimetrów od punktu j i zegnij wolny koniec, aby był równoległy zarówno do płaszczyzny ikj, jak i części cd. Następnie pozostaw pięciomilimetrowy odstęp od punktu i.
A w punkcie h zegnij łuk pionowo do płaszczyzn ih i jih. Zlokalizuj punkt g pięć milimetrów od h i zaciśnij pas jihg. Następnie zegnij łuk w punkcie g.
Teraz zegnij wolny koniec symetrycznie do płaszczyzny kj. Swobodny koniec po punkcie f powinien być symetryczny do swobodnego końca w punkcie e. Na koniec umieść gumowe zaślepki na wolnych końcach.
Na początek przymocuj znieczuloną mysz w pozycji leżącej na płytce mocującej. Zabezpiecz kończyny taśmą do skóry. Ściśnij wolne końce przygotowanego knebla na usta kciukiem i palcem wskazującym.
Zamocuj przednie siekacze myszy w trapezoidalnym rowku między dwoma ramionami knebla ustnego. Upewnij się, że ramię z depresorem języka jest umieszczone na żuchwie. Sprawdź pierwszy ząb trzonowy szczęki, aby upewnić się, że jest wolny od próchnicy, urazów i odontogenezy.
Oceń otaczające dziąsło, aby upewnić się, że nie ma zaczerwienienia, obrzęku ani przetoki. Następnie sprawdź stan zdrowia przeciwległych zębów. Następnie za pomocą wiertła dentystycznego wywierć zgryzową stronę pierwszego trzonowca szczęki z prędkością 20 000 obr./min.
Usuń szkliwo. Za pomocą strzykawki upuszczaj zwykłą sól fizjologiczną co trzy minuty na ząb, aby zapobiec przegrzaniu. Umieść pilnik C-plus o numerze 8 w najniższym miejscu wywierconego dołu i przebij ostatnią zębinę, aby odsłonić komorę miazgi.
Oczyść fragmenty wokół zęba, a następnie usuń knebel z ust. Czas potrzebny na zamocowanie ust za pomocą knebla ustnego i odnalezienie pierwszego zęba trzonowego szczęki uległ znacznemu skróceniu w porównaniu z metodą tradycyjną. Odsłonięcie miazgi potwierdzono za pomocą mikrotomografii komputerowej i modelowania rekonstrukcyjnego.
Po 24 godzinach od zabiegu większość tkanki miazgi zachowała swoją morfologię.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł przedstawia usprawniony protokół tworzenia modelu zapalenia miazgi u myszy z wykorzystaniem innowacyjnego uplustra, a następnie opisuje przeprowadzanie analizy histologicznej.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Badania endodontyczne
- Zapalenie miazgi zęba
- Modele eksperymentalne in vivo
Wprowadzenie
- Hodowle komórkowe 2D i 3D są powszechnie stosowane do badania komórek miazgi zęba.
- Eksperymenty in vivo zyskują na popularności w celu lepszego zrozumienia systemowych interakcji odpornościowych.
- Myszy C57 są często wykorzystywane w badaniach nad stanami zapalnymi ze względu na swoje zalety.
- W procedurach eksperymentalnych występują trudności wynikające z niewielkich rozmiarów myszy.
Cel badania
- Opracowanie wiarygodnego modelu zapalenia miazgi u myszy.
- Poprawa zrozumienia mechanizmów zapalenia miazgi zęba.
- Ułatwienie analizy histologicznej tkanki miazgi.
Zastosowane metody
- Opracowanie otwieracza do pyska w celu łatwiejszego dostępu podczas zabiegów.
- Ustanowienie modelu zapalenia miazgi u myszy C57.
- Analiza histologiczna po zakończeniu eksperymentu.
- Ocena odpowiedzi zapalnej w miazdze zęba.
Główne wyniki
- Innowacyjny jamnik poprawił wydajność procedury.
- Model zapalenia miazgi skutecznie wykazał obecność stanu zapalnego.
- Analiza histologiczna dostarczyła informacji na temat reakcji tkanek.
- Wyniki potwierdzają zasadność stosowania myszy C57 w badaniach endodontycznych.
Wnioski
- Ustanowiony protokół usprawnia badanie stanu zapalnego miazgi zęba.
- Modele in vivo są kluczowe dla zrozumienia interakcji systemowych.
- Niniejsza praca badawcza przyczynia się do postępów w metodologii endodontycznej.
Często zadawane pytania
Znaczenie dla sektora przemysłowego
Opracowanie powtarzalnego mysiego modelu zapalenia miazgi z wykorzystaniem nowatorskiego kagańca jamowego odpowiada na istotną potrzebę stworzenia systemów in vivo, które wiernie odtwarzają zapalenie miazgi zębowej. Postęp ten umożliwia bardziej precyzyjne testowanie hipotez i ograniczanie ryzyka mechanistycznego we wczesnych etapach badań nad chorobami stomatologicznymi i zapalnymi. Model ten zapewnia ciągłość translacyjną od biologii odkrywczej do walidacji przedklinicznej, usprawniając proces podejmowania decyzji w zakresie rozwoju terapii stomatologicznych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia badanie mechanizmów stanu zapalnego w genetycznie zróżnicowanym, istotnym fizjologicznie kontekście.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów zaangażowanych w zapalenie miazgi oraz powiązane szlaki zapalne.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego poprzez modelowanie systemowych oddziaływań immunologicznych, które nie występują in vitro.
- Zwiększa pewność prognostyczną przy późniejszym testowaniu hipotez terapeutycznych.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Zapewnia standaryzowaną platformę in vivo do oceny potencjalnych interwencji ukierunkowanych na zapalenie miazgi.
- Umożliwia powtarzalną indukcję i ocenę zapalenia miazgi w celu uzyskania ilościowych wyników.
- Wspiera opracowywanie testów dzięki zwalidowanym punktom końcowym morfologicznym i immunofluorescencyjnym.
- Przyspiesza gotowość do badań przesiewowych poprzez zmniejszenie barier technicznych w ustanawianiu modelu.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Umożliwia dopasowanie modelowania chorób do klinicznie istotnych procesów zapalnych w miazdze zęba.
- Zapewnia ciągłość procesu od etapu odkryć po przedkliniczną walidację strategii przeciwzapalnych.
- Wspiera dostosowany do ryzyka rozwój programów badawczych nad chorobami zapalnymi i stomatologicznymi.
- Stanowi platformę do odkrywania i walidacji biomarkerów w badaniach nad zapaleniem miazgi.
Integracja potoku i przepływu pracy
Niniejszy mysi model zapalenia miazgi wpisuje się w kontinuum od odkryć do badań przedklinicznych, stanowiąc pomost między wczesnymi badaniami nad mechanizmami a badaniami translacyjnymi w zakresie stanów zapalnych w obrębie tkanek zęba.
- Biologia odkrywcza: Ułatwia weryfikację hipotez i wyjaśnianie szlaków sygnałowych w kontekście całego organizmu.
- Screening: Dostarcza powtarzalnych, ilościowych wyników do oceny kandydatów i standaryzacji analiz.
- Analityka: Wspiera pomiary morfologiczne, histologiczne i immunofluorescencyjne w celu wiarygodnego porównania warunków.
- Badania translacyjne: Zapewnia modelowanie istotne dla chorób w celu przedklinicznej walidacji terapeutyków stomatologicznych.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje skalowalną, zestandaryzowaną platformę do wielokrotnego zastosowania w badaniach nad stanami zapalnymi w stomatologii.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorczy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną w badaniach nad stanami zapalnymi tkanek stomatologicznych.
- Wartość operacyjna: Usprawnia tworzenie modeli, zwiększa powtarzalność i obniża bariery techniczne.
- Wartość strategiczna: Umożliwia podejmowanie bardziej świadomych decyzji o kontynuacji lub przerwaniu badań (go/no-go) oraz efektywniejsze wykorzystanie kapitału w rozwoju portfolio.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację aktywów w obszarze chorób zapalnych i stomatologii z uwzględnieniem analizy ryzyka.
Wskazówki dotyczące wdrożenia
- Wymaga doświadczenia w obchodzeniu się z myszami, przeprowadzaniu procedur stomatologicznych oraz tworzeniu modeli in vivo.
- Wymaga dostępu do infrastruktury do mikro-CT, analiz histologicznych oraz immunofluorescencyjnych.
- Konieczna jest standaryzacja międzyzespołowa w celu zapewnienia powtarzalności i porównywalności danych.
- Można być zmuszonym do adaptacji metody dla innych szczepów gryzoni lub modeli chorób stomatologicznych.
- Ograniczenia techniczne obejmują rozmiar myszy oraz złożoność procedur, co jest łagodzone przez zastosowanie nowej konstrukcji klemy do ust.
