Name: Szybka ocena mikrobiologiczna na miejscu w kierunku chorób zakaźnych płuc (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 3 min 22 s
Description: Poznaj metodę M-ROSE do szybkiej oceny mikrobiologicznej zakażeń płuc w czasie rzeczywistym. Technika barwienia komórek i obrazowania mikroskopowego wspiera lekarzy w podejmowaniu trafnych decyzji terapeutycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Doceniamy projekt zachęt i wskazówek dla instytucji naukowo-badawczej w Chongqing (jxyn-2021-15 i jxyn-2021-2-6) za wsparcie finansowe.

Badanie kliniczne zostało zatwierdzone przez Komitet Zatwierdzający Szpitala Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chongqing (nr 2022-ky-31). Typowy przypadek dotyczył pacjenta, u którego zdiagnozowano zapalenie płuc wywołane przez Pneumocystis i uzyskano od niego świadomą zgodę.
1. Wymagania sprzętowe i materiałowe dla ROSE
<ol>
	<li>Sprzęt: Zapoznaj się z plikiem Tabela materiałów, aby zapoznać się z urządzeniami używanymi w tym protokole. 
	UWAGA: Konieczne jest wykorzystanie dedykowanego mikroskopu cytologicznego i systemu obrazowania graficznego (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A).</li>
	<li>Przygotowanie materiału (patrz Tabela materiałów).
	<ol>
		<li>Przygotuj sterylne szkiełka do hodowli komórkowych (o silnej adhezji komórek), chłonny papier, bezpudrowe rękawiczki lateksowe, jednorazowe igły strzykawkowe o pojemności 2,5-5 ml i umieść kompletny zestaw roztworów barwiących Diff Quik (DQ) w szklanych słoikach do barwienia z uszczelnionymi pokrywkami dla łatwej obsługi (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przepływ pracy M-ROSE
<ol>
	<li>Przygotowanie preparatów cytologicznych 
	UWAGA: Istnieje wiele sposobów przygotowania preparatów, a poniżej przedstawiono kilka powszechnie stosowanych metod przygotowania.
	<ol>
		<li>Prowadnice rolkowe 
		UWAGA: Podczas tego procesu należy zapewnić minimalną utratę próbki tkanki.
		<ol>
			<li>Usuń cząstki tkanki za pomocą jednorazowej igły strzykawkowej o pojemności 2,5-5 ml (<klasa silna = "xfig">Rysunek 2A).</li>
			<li>Rozprowadzić okrągły obszar o średnicy około 1 cm i umiarkowanej grubości, od wewnętrznej do zewnętrznej jednej trzeciej części barwionego końca (koniec wykazujący silne przyczepienie komórek) na sterylnym szkiełku cytologicznym.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Zjeżdżalnie szczotkowe 
		UWAGA: Ta metoda ma zastosowanie do próbek uzyskanych przy użyciu konwencjonalnych szczotek komórkowych, szczoteczek do komórek zapobiegających zanieczyszczeniom lub szczoteczek do ultradrobnych komórek, a także próbek półpłynnych, takich jak plwocina i lepkie płyny ustrojowe.
		<ol>
			<li>Wysuń główkę szczoteczki i nałóż ją na dystalną trzecią część sterylnego szkiełka cytologicznego (szkiełko ma silne właściwości adhezyjne komórek), aby uzyskać prostokątny obszar o wymiarach około 2 cm x 1 cm o umiarkowanej grubości.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Szkiełka natryskowe
		<ol>
			<li>Umieścić igłę do nakłuwania na jednej trzeciej wybarwionego końca sterylnego szkiełka cytologicznego o silnej adhezji komórek.</li>
			<li>Zastosuj ciśnienie powietrza do końcówki igły do przekłuwania i włóż ją od wewnętrznej strony na zewnątrz, tworząc okrągły obszar o średniej grubości o średnicy około 1 cm.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Barwienie szkiełka cytologicznego 
	UWAGA: Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) zaleca szybkie barwienie szkiełka cytologicznego ROSE przy użyciu barwnika Diff's dye5. Barwnik Diff może być ponownie użyty, ale nie powtarzany wiele razy. Jeśli jest osad, należy go przefiltrować po użyciu. Zbyt głębokie barwienie może zostać odpowiednio odbarwione metanolem lub alkoholem, najlepiej już nie farbowanym. Jeśli barwienie jest zbyt głębokie lub zbyt płytkie, należy dostosować czas barwienia lub stężenie cieczy roboczej; wartość pH ma pewien wpływ na barwienie, a szkiełko powinno być czyste i wolne od zanieczyszczeń kwasowych i zasadowych. Zarówno roztwór Diff A, jak i roztwór Diff B są lotne i powinny być szczelnie zamknięte i przechowywane po użyciu.
	<ol>
		<li>Zanurz szkiełko w roztworze Diff A na 10-30 s (<silna klasa="xfig">Rysunek 2B), a następnie przepłucz je w kąpieli barwiącej PBS, aby usunąć nadmiar roztworu Diff A i delikatnie strząśnij pozostały bufor (<silna klasa="xfig">Rysunek 2C).</li>
		<li>Następnie zanurz szkiełko w roztworze Diff B na 20-40 s (<silna klasa="xfig">Rysunek 2E).</li>
		<li>Na koniec wyczyść szkiełko w zbiorniku do barwienia wodą (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2F), osusz i wytrzyj resztki płynu szkiełka papierem absorpcyjnym (<silna klasa = "xfig" > Rysunek 2D) i zakończ farbowanie. 
		UWAGA: M-ROSE umożliwia bezpośrednią wizualizację mikroorganizmów chorobotwórczych i ułatwia ocenę jakości próbek z dróg oddechowych, umożliwiając rozróżnienie między infekcją a brakiem infekcji oraz infekcją i zanieczyszczeniem, co ma zasadnicze znaczenie dla oceny ciężkości infekcji i rokowania. Sekcja dyskusji będzie dotyczyła tego aspektu, ponieważ nie obejmuje ona żadnych procedur eksperymentalnych.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Enhancing Pulmonary Infection Treatment Using M-ROSE

<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+value+of+endoscopic+ultrasound-guided+fine+needle+aspiration+with+rapid+on-site+evaluation+performed+by+endoscopists+in+solid+pancreatic+lesions%3A+A+prospective%2C+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic value of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration with rapid on-site evaluation performed by endoscopists in solid pancreatic lesions: A prospective, randomized controlled trial.</a> J Gastroenterol Hepatol. 37 (10), 1975-1982 (2022).</li>
<li>Bruno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+cost+effectiveness+of+rapid+on+site+examination+%28ROSE%29+in+management+of+patients+with+mediastinal+lymphadenopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficacy and cost effectiveness of rapid on site examination (ROSE) in management of patients with mediastinal lymphadenopathies.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17 (11), 1517-1522 (2013).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+rapid+on-site+evaluation%3A+a+better+method+for+Mucoid+Pseudomonas+Aeruginosa+diagnosis+in+bronchiectasic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Microbiology rapid on-site evaluation: a better method for Mucoid Pseudomonas Aeruginosa diagnosis in bronchiectasic patients.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (5), 1738-1742 (2022).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbiological+rapid+on-site+evaluation+in+respiratory+intensive+care+units%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Application of microbiological rapid on-site evaluation in respiratory intensive care units: a retrospective study.</a> Ann Transl Med. 10 (1), 7(2022).</li>
<li>Yan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+value+of+microbiology+rapid+on-site+evaluation+of+sepsis+caused+by+pulmonary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">The value of microbiology rapid on-site evaluation of sepsis caused by pulmonary infection.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 27 (12), 5862-5868 (2023).</li>
<li>Muri, R., Trippel, M., Borner, U., Weidner, S., Trepp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+rapid+on-site+evaluation+on+the+quality+and+diagnostic+value+of+thyroid+nodule+fine-needle+aspirations%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">The impact of rapid on-site evaluation on the quality and diagnostic value of thyroid nodule fine-needle aspirations.</a> Thyroid. 32 (6), 667-674 (2022).</li>
<li>Wang, Z., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+rapid+on-site+evaluation+in+contemporary+pediatric+interventional+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Practical+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Application of rapid on-site evaluation in contemporary pediatric interventional respiratory diseases.</a> Chinese Journal of Practical Pediatrics. 12, 470-475 (2019).</li>
<li>Shah, P. L., Herth, F. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Progress in interventional pulmonology.</a> Respiration. 95 (5), 287-288 (2018).</li>
<li>Hsia, D., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology.</a> Med Clin North Am. 95 (6), 1095-1114 (2011).</li>
<li>Moore, A. J., Mercer, R. M., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 271-280 (2018).</li>
<li>Majid, A., Fernandez-Bussy, S., Folch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology+and+solitary+pulmonary+nodule%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Bronconeumol%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology and solitary pulmonary nodule.</a> Arch Bronconeumol. 54 (10), 497-498 (2018).</li>
<li>Ali, M. S., Sorathia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palliative+care+and+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Palliative care and interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 57-64 (2018).</li>
<li>Czarnecka, K., Yasufuku, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%3A+focus+on+pulmonary+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology: focus on pulmonary diagnostics.</a> Respirology. 18 (1), 47-60 (2013).</li>
<li>Schacht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration%3A+performance+of+biomedical+scientists+on+rapid+on-site+evaluation+and+preliminary+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: performance of biomedical scientists on rapid on-site evaluation and preliminary diagnosis.</a> Cytopathology. 27 (5), 344-350 (2016).</li>
<li>Pearson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+on-site+evaluation+of+fine-needle+aspiration+by+non-cytopathologists%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+diagnostic+accuracy+studies+for+adequacy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Rapid on-site evaluation of fine-needle aspiration by non-cytopathologists: A systematic review and meta-analysis of diagnostic accuracy studies for adequacy assessment.</a> Acta Cytol. 62 (4), 244-252 (2018).</li>
<li>Arimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiopsy+with+endobronchial+ultrasonography+using+a+guide+sheath+for+peripheral+pulmonary+lesions+and+DNA+analysis+by+next+generation+sequencing+and+rapid+on-site+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Investig%22%5BJournal%5D)">Cryobiopsy with endobronchial ultrasonography using a guide sheath for peripheral pulmonary lesions and DNA analysis by next generation sequencing and rapid on-site evaluation.</a> Respir Investig. 57 (2), 150-156 (2019).</li>
<li>Gianella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+rapid+on-site+cytologic+evaluation+during+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+in+malignant+and+nonmalignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Utility of rapid on-site cytologic evaluation during endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration in malignant and nonmalignant disease.</a> Acta Cytol. 62 (5-6), 380-385 (2018).</li>
<li>Natella, V., Cozzolino, I., Sosa Fernandez, L. V., Vigliar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+nodes+fine+needle+cytology+in+the+diagnosis+of+infectious+diseases%3A+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Infez+Med%22%5BJournal%5D)">Lymph nodes fine needle cytology in the diagnosis of infectious diseases: clinical settings.</a> Infez Med. 20, 12-15 (2012).</li>
<li>Baughman, R. P., Spencer, R. E., Kleykamp, B. O., Rashkin, M. C., Douthit, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventilator+associated+pneumonia%3A+quality+of+nonbronchoscopic+bronchoalveolar+lavage+sample+affects+diagnostic+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Ventilator associated pneumonia: quality of nonbronchoscopic bronchoalveolar lavage sample affects diagnostic yield.</a> Eur Respir J. 16 (6), 1152-1157 (2000).</li>
<li>Petrone, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+cytotechnician+training+influence+the+accuracy+of+EUS-guided+fine-needle+aspiration+of+pancreatic+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Does cytotechnician training influence the accuracy of EUS-guided fine-needle aspiration of pancreatic masses.</a> Dig Liver Dis. 44 (4), 311-314 (2012).</li>
</ol>

Autorzy nie zgłaszają konfliktu interesów.

Pulmonologia interwencyjna jest cenną gałęzią współczesnych chorób układu oddechowego; W szczególności znajduje szerokie zastosowanie w diagnostyce chorób płuc 8,9. W ostatnich latach diagnostyczna pulmonologia interwencyjna rozwija się ze względu na zwiększoną częstość występowania nowotworów złośliwych płuc, większą liczbę lekoopornych zakażeń patogenami występującymi w dolnych drogach oddechowych oraz wymagające zapytania o diagnozę kłopotliwych i krytycznych chorób układu oddechowego 10,11,12. Skuteczność diagnostyki interwencyjnej zależy od takich czynników, jak wielkość i anatomiczne umiejscowienie obszarów ogniskowych, odsetek powikłań i liczba miejsc biopsji oraz choroby podstawowe, co sprzyja klinicznemu zastosowaniu wielu zaawansowanych technologii i udogodnień13. ROSE spotkała się z niezwykłym zainteresowaniem i szybko pojawiła się jako "technika towarzysząca w czasie rzeczywistym" do diagnozowania w pulmonologii interwencyjnej.
ROSE jest przeznaczony do szybkiej oceny, wstępnej diagnozy i priorytetyzacji satysfakcji próbki podczas procedur takich jak nakłucie, biopsja i szczotkowanie. Dostarcza informacji zwrotnych, które kierują kolejnym postępem technologicznym 14,15,16,17. M-ROSE, oddział ROSE, koncentruje się przede wszystkim na ocenie tła mikrobiologicznego, a nie na ocenie złośliwości komórek tkankowych5. Metoda M-ROSE jest techniką szybkiej oceny, a nie narzędziem diagnostycznym, dlatego nie należy przesadzać z jej skutecznością diagnostyczną. Jego zastosowanie kliniczne obejmuje przede wszystkim następujące aspekty: identyfikację wizualną niektórych mikroorganizmów chorobotwórczych, różnicowanie między zakażeniem a zakażeniem oraz rozróżnienie między zakażeniem a brakiem zakażenia7.
Po szybkim barwieniu jądro komórkowe tkanki wykazywało fioletowo-czerwony odcień, podczas gdy cytoplazma wykazywała niebieskawo-fioletowy kolor. Bakterie i grzyby wydawały się niebieskie, co powodowało wyraźny kontrast między komórkami tkankowymi a patogenami7. Projekt M-ROSE może wykazać pewien poziom zdolności w zakresie identyfikacji bakterii i grzybów. W szczególności wykazuje wysoki dodatni wskaźnik dla Aspergillus, cryptococcus, Pneumocystis jiroveci i innych grzybów 3,18. Ma jednak ograniczenia, jeśli chodzi o rozpoznawanie patogenów o małej objętości i średnicy lub wewnątrzkomórkowych czynników chorobotwórczych. Należy podkreślić, że diagnoza każdej choroby powinna opierać się na kompleksowej ocenie obejmującej podstawowy stan pacjenta, objawy kliniczne, badania obrazowe i inne czynniki, a nie polegać wyłącznie na mikroskopowej identyfikacji mikroorganizmów chorobotwórczych.
M-ROSE oferuje również korzyści w identyfikacji infekcji i zanieczyszczeń, takie jak ocena jakości próbek płynu z płukania pęcherzyków płucnych. Na oddziałach, na których pozwalają na to warunki, można przeprowadzić ocenę płynu popłuczyn przy łóżku poprzez wirowanie i barwienie. Kwalifikowane próbki płynu z płukania pęcherzyków płucnych wykazują, że odsetek komórek płaskonabłonkowych wśród wszystkich komórek (z wyłączeniem czerwonych krwinek) pod mikroskopią o małej mocy wynosi mniej niż 1%, komórki nabłonka walcowatego są mniejsze niż 5%, a czerwone krwinki są mniejsze niż 10% (z wyłączeniem czynników związanych z urazem lub krwawieniem)19. Badanie mikroskopowe tła cytologicznego ułatwi nam dokonanie oceny w odpowiednim czasie.
Co więcej, M-ROSE może pomóc w rozróżnieniu zmian zakażonych i niezakażonych5. W zakażonych zmianach często dochodzi do naciekania neutrofili, makrofagów i limfocytów przez komórki zapalne, z okazjonalną obserwacją fagocytozy neutrofili. I odwrotnie, niezakażone zmiany zazwyczaj nie mają nacieku komórek zapalnych.
Przedstawiony tutaj protokół przedstawia proces działania M-ROSE; Dzięki interpretacji tła mikrobiologicznego można postawić wstępną diagnozę lub zawęzić diagnostykę różnicową. Jak sugerują nasze wyniki, rozpoznanie PCP wymaga potwierdzonych dowodów na obecność Pneumocystis jiroveci, które nie powinny opierać się na objawach klinicznych i obrazowaniu, nawet u objawowych pacjentów wysokiego ryzyka. Mikroskopowa identyfikacja worków i form troficznych jest najbardziej intuicyjnym dowodem. Skuteczność diagnostyczna zależy w dużej mierze od metody barwienia próbki. Historycznie rzecz biorąc, konwencjonalne barwniki, takie jak srebro Wrighta-Giemsa, srebro heksaaminowe i błękit toluidynowy, są dostępne dla PCP, ale są czasochłonne i mają niższą wrażliwość. W tym przypadku natychmiastowe rozpoznanie PCP zostało potwierdzone w pierwszej dobie od przekazania pacjenta na OIT z zastosowaniem ROSE. Diff-quick wykazał swoją przewagę w identyfikacji pneumocystów, charakteryzujących się wyraźną strukturą, ostrym kontrastem i łatwą identyfikacją worka (ryc. 5A).
W zastosowaniu medycyny etnicznej ROSE ma również znaczącą wartość. Na przykład w chorobach ropnych klinicyści mogą zidentyfikować różnorodny zakres komórek zapalnych zdominowanych głównie przez neutrofile w tle mikrobiologicznym5. W związku z tym leki o właściwościach oczyszczających z ciepła i detoksykujących mogą być wybierane jako potencjalne metody leczenia tych schorzeń, takich jak między innymi wiciokrzew, mniszek lekarski i patrynia.
Ponieważ ROSE jest dodatkowym programem, który nie musi być wybierany w pulmonologii interwencyjnej, przeprowadzenie ROSE z pewnością zwiększy koszty pracy i koszty ekonomiczne. Dyskusyjne jest, czy ROSE powinien być stosowany regularnie. Jeśli chodzi o korzyści ekonomiczne, martwimy się o czas i koszty pracy. Głównym dodatkowym zapotrzebowaniem na siłę roboczą jest ewaluator. Ocena ROSE może być przeprowadzona przez cytotechnologa, patologa lub klinicystę. Cytotechnolodzy są najbardziej prawdopodobnym personelem do procedury ROSE. Jednak w praktyce klinicznej klinicyści zastępują tę rolę, ale może to wymagać pewnej podstawy szkoleniowej15. Poprzednie badanie wykazało, że program szkoleniowy może pomóc w poprawie dokładności oceny adekwatności przeprowadzanej przez klinicystów i wyeliminowaniu zmiennych zakłócających20. Ponadto M-ROSE, jako morfologiczna technika diagnostyczna, ma czynniki subiektywne w swoim raporcie wyników. Klinicyści powinni dokonać kompleksowej oceny w oparciu o dodatkowe informacje kliniczne.
Zalecamy, aby szpitale dysponujące odpowiednim wyposażeniem i przeszkolonymi specjalistami rozważyły wdrożenie procedury ROSE na swoich oddziałach chorób układu oddechowego lub oddziałach intensywnej terapii, ponieważ może ona ułatwić wczesną ocenę trudnych chorób układu oddechowego i skutecznie kierować leczeniem klinicznym.

Technika szybkiej oceny na miejscu (ROSE) jest wysoce efektywną metodą stosowaną w dziedzinie procedur chorób płuc. Umożliwia pobieranie próbek w czasie rzeczywistym i interwencję diagnostyczną, ułatwiając natychmiastową analizę cytologiczną1. To innowacyjne podejście polega na naniesieniu części próbki tkanki na szkiełko podstawowe przy zachowaniu jej integralności. Jedną z kluczowych zalet ROSE jest jej zdolność do ułatwiania szybkiej interpretacji informacji klinicznych za pomocą specjalistycznych technik mikroskopowych. Obejmuje to analizę morfologii komórki, klasyfikację, kwantyfikację, określenie proporcji składników, ocenę ułożenia, analizę korelacji, ocenę tła i identyfikację ciał obcych. Integrując wszystkie te dane z informacjami klinicznymi pacjenta, ROSE odgrywa kluczową rolę w ocenie adekwatności pobierania próbek i kierowaniu procedurami i technikami interwencyjnymi w czasie rzeczywistym2.
Jako spółka zależna technologii ROSE, technologia M-ROSE skupia się przede wszystkim na pozyskiwaniu mikrobiologicznego tła docelowych zmian, a nie na rozróżnianiu komórek łagodnych i złośliwych3,4. Z jednej strony M-ROSE umożliwia mikroskopową identyfikację patogenów, takich jak Aspergillus, Cryptococcus, Pneumocystis i Candida5. Z drugiej strony, ma istotne implikacje przewodnie w ocenie jakości próbek układu oddechowego, odróżnianiu chorób zakaźnych od niezakaźnych, odróżnianiu infekcji od zanieczyszczenia, a także ocenie ciężkości infekcji i rokowania6,7. Na przykład w próbce oddechowej współistnienie bakterii o identycznej morfologii z naciekającymi komórkami zapalnymi wskazuje na infekcję; I odwrotnie, obecność wielu morfologicznie zróżnicowanych bakterii, którym towarzyszą komórki nabłonkowe, sugeruje zanieczyszczenie. Zdolność do kompleksowej analizy informacji klinicznych i przewidywania wyników sprawia, że M-ROSE jest nieocenionym narzędziem w procedurach chorób płuc.
Podsumowując, ROSE służy jako kluczowy nośnik cytologiczny, który znacznie zwiększa skuteczność i precyzję diagnozowania chorób płuc. Jego wieloaspektowe możliwości przyczyniają się do poprawy wyników leczenia pacjentów, zapewniając szybką interwencję i ułatwiając dokładną diagnozę dzięki technikom pobierania próbek w czasie rzeczywistym i interwencji diagnostycznej. Należy jednak pamiętać, że postępy te polegają na uzyskiwaniu kwalifikowanych próbek. W niniejszym artykule przedstawiamy ustandaryzowany protokół M-ROSE obejmujący przygotowanie preparatów, techniki barwienia i wytyczne dotyczące interpretacji. Protokół ten służy jako nieocenione odniesienie dla klinicystów w ustalaniu dokładnych planów oceny i leczenia, ułatwiając jednocześnie podejmowanie decyzji dotyczących późniejszego postępowania z próbkami docelowymi.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop cytologiczny</td><td>Olympus Corporation</td><td>CX43</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik (DQ) roztwory barwiące</td><td>Besso Biotechnology Co. LTD</td><td>G1541</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe igły strzykawkowe 2,5-5 ml</td><td>Shandong Zhu Pharmaceutical Group</td><td>20183150304</td><td></td></tr><tr><td>Bezpudrowe rękawiczki lateksowe</td><td>Henan Yadu Industrial Co., LTD</td><td>20182140728</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna komórka slajdy kulturowe</td><td>Jinan Preret przemysł i handel Co., LTD</td><td>7101</td><td></td></tr></tbody></table>

szybka ocena mikrobiologiczna na miejscu w kierunku chorób zakaźnych płuc

Microbiological Rapid On-Site Evaluation for Pulmonary Infectious Diseases

Szybkie rozpoczęcie empirycznej terapii przeciwinfekcyjnej jest kluczowe u pacjentów z niewyjaśnioną infekcją płuc. Chociaż w praktyce klinicznej pobieranie obrazowania jest stosunkowo proste, jego brak swoistości często wymaga dodatkowych czasochłonnych badań, takich jak posiew plwociny, posiew płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego lub sekwencjonowanie genetyczne w celu dokładnego zidentyfikowania etiologii leżącej u podstaw choroby. Co więcej, ograniczona skuteczność empirycznego leczenia przeciwinfekcyjnego może przyczyniać się do nadużywania antybiotyków. Ostatnie postępy w interpretacji tła mikrobiologicznego na szkiełkach do szybkiej oceny na miejscu (ROSE) umożliwiły klinicystom szybkie uzyskanie próbek za pomocą bronchoskopii (np. płukanie pęcherzyków płucnych, szczotkowanie błony śluzowej, zacisk tkankowy), ułatwiając barwienie przy łóżku pacjenta i interpretację, która dostarcza niezbędnych informacji o tle mikrobiologicznym. W związku z tym stanowi to podstawę do opracowania ukierunkowanego leczenia przeciwinfekcyjnego i zindywidualizowanych planów terapii lekowej. Dzięki lepszemu zrozumieniu, które patogeny powodują infekcje w czasie rzeczywistym, lekarze mogą uniknąć niepotrzebnych antybiotyków o szerokim spektrum działania, które przyczyniają się do oporności na antybiotyki. Ustanowienie szybkiego i ustandaryzowanego przepływu pracy M-ROSE na oddziałach chorób układu oddechowego lub intensywnej terapii znacznie pomoże lekarzom w formułowaniu dokładnych strategii leczenia pacjentów, co ma istotne implikacje kliniczne.

W typowym przypadku 63-letni mężczyzna zgłosił się do szpitala z kaszlem, gorączką i bólem w klatce piersiowej. U pacjenta wcześniej zdiagnozowano zespół nerczycowy, charakteryzujący się białkomoczem i obrzękami, i przez dłuższy czas otrzymywał on leczenie prednizonem oraz takrolimusem. Wstępne badania laboratoryjne wykazały liczbę białych krwinek na poziomie 10.49 x 109/L, liczbę neutrofili 8.87 x 109/L oraz stężenie białka C-reaktywnego we krwi pełnej i (1-3)-β-D-glukanu wynoszące odpowiednio 155.81 mg/L i 249.7 pg/mL. Tomografia komputerowa (TK) klatki piersiowej wykazała zmętnienia typu „matowej szyby” o rozproszonej lokalizacji obustronnej i centralnej (Rycina 3A). Wstępne leczenie przeciwzakaźne cefoperazonem z tazobaktamem okazało się nieskuteczne, a objawy pacjenta nasiliły się pod postacią niewydolności serca, duszności oraz duszności wysiłkowej; powtórne badanie TK nie wykazało istotnej poprawy (Rycina 3B). Następnie pacjent został przeniesiony na oddział intensywnej terapii (OIT) w celu zastosowania wentylacji mechanicznej i poddano go bronchoskopii. Pobieranie próbek z ognisk zapalnych odbyło się przy użyciu nawigacji wirtualnej, w wyniku czego pobrano trzy próbki z biopsji kleszczykowej (Rycina 4). Metoda ROSE umożliwiła natychmiastową ocenę mikroskopową tkanki, co pozwoliło potwierdzić obecność Pneumocystis jiroveci (Rycina 5A). Pacjent niezwłocznie otrzymał leczenie przeciwgrzybicze sulfametoksazolem (1.92 g, co 6 h); późniejsze barwienia (Rycina 5B-E) potwierdziły tę diagnozę. Jednakże powtórne badania TK nadal nie wykazały istotnej poprawy (Rycina 3C). W związku z infekcją grzybiczą pacjent otrzymał karbofunginę (70 mg pierwszego dnia, następnie 50 mg dziennie), metyloprednizolon (80 mg dziennie) oraz immunoglobulinę (10 g dziennie). Objawy szybko ustąpiły, a pacjent kontynuował leczenie kontrolne.
<img alt="Układ mikroskopowy z barwnikami, rękawicami ochronnymi, strzykawką i szkiełkami do eksperymentu przygotowania próbki." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Sprzęt i materiały. (A) Mikroskop cytologiczny i system obrazowania graficznego. (B) Roztwór barwiący Diff Quik (DQ) A. (C) Roztwór barwiący Diff Quik (DQ) B. (D) Lateksowe rękawice bezpudrowe. (E) Sterylne szkiełka do hodowli komórkowych. (F) Jednorazowe igły do strzykawek 2,5-5 mL. (G) Papier chłonny. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Proces chromatografii; seria kroków pokazująca rozdział barwników na papierze; ustawienie eksperymentu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Schemat postępowania M-ROSE. (A) Drukowanie preparatu. (B) Zanurzenie preparatu w roztworze Diff A na 10-30 s. (C) Płukanie preparatu w kąpieli barwiącej PBS w celu usunięcia nadmiaru roztworu Diff A. (D) Osuszanie i wycieranie pozostałego płynu z preparatu za pomocą papieru chłonnego. (E) Zanurzenie preparatu w roztworze Diff B na 20-40 s. (F) Czyszczenie preparatu w zbiorniku z wodą do barwienia. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Porównanie tomografii komputerowej płuc, triada obrazowania medycznego dla analizy progresji choroby, serie A, B, C." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Obrazy TK klatki piersiowej. (A) W momencie przyjęcia. (B) W dniu przeniesienia na OIT. (C) Po leczeniu sulfametoksazolem <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schematy nawigacji bronchoskopowej i skany CT dla mapowania i analizy dróg płucnych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4: Lokalizacja segmentu bazalnego tylnego dolnego płata prawego za pomocą VBN. (A) Prawy oskrzela główny. (B) Prawy oskrzela środkowy. (C) Oskrzela segmentu bazalnego tylnego dolnego płata prawego. (D) Mapa 3D VBN. (E) Mapa czołowa CT klatki piersiowej. (F) Mapa osiowa CT klatki piersiowej. (G) Mapa strzałkowa CT klatki piersiowej <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig04large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Porównanie histologiczne, barwione przekroje tkanek przy różnych powiększeniach, badanie morfologii komórkowej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5: Zdjęcia dokumentujące wygląd pneumocystis w różnych metodach barwienia. (A) ROSE 100 x 10; biała strzałka: cysty zawierające askospory. (B) Hematoksylina i eozyna (H-E), 60 x 10. (C) Błękit alkianowy, 60 x 10. (D) GIEMSA, 40 x 10. (E) Srebro heksaminowe, 20 x 10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig05large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.</a>

Protokół tutaj demonstruje szybki i ustandaryzowany przepływ pracy szybkiej oceny mikrobiologicznej na miejscu (M-ROSE), obejmujący trzy kroki: tworzenie preparatów, barwienie i interpretację. Protokół ten pomoże lekarzom w podejmowaniu szybkich decyzji klinicznych.

Szybka ocena mikrobiologiczna na miejscu w kierunku chorób zakaźnych płuc

The prompt initiation of empirical anti-infective therapy is crucial in patients presenting with unexplained pulmonary infection. Although imaging ...

Naszym zamiarem jest wprowadzenie metody szybkiej oceny w czasie rzeczywistym, M-ROSE, aby pomóc lekarzom w formułowaniu dokładnych strategii leczenia pacjentów z pierwotnymi infekcjami. Technologia szybkiego barwienia komórek i system obrazowania mikroskopowego o wysokiej rozdzielczości są obecnie wykorzystywane do rozwoju badań w tej dziedzinie. Liczba badań klinicznych nad preparatem M-ROSE jest stosunkowo ograniczona.Największym wyzwaniem jest interpretacja wyników M-ROSE, co wymaga personelu i to dobrze wyszkolonego personelu, ponieważ trudno jest wizualnie zidentyfikować patogeny i odróżnić infekcję od zakażenia. Dzięki lepszemu zrozumieniu patogenów powodujących infekcje w czasie rzeczywistym, lekarze mogą uniknąć niepotrzebnych antybiotyków o szerokim spektrum działania przyczyniających się do oporności na antybiotyki i usprawnić leczenie zakażeń pierwotnych. M-ROSE działa w czasie rzeczywistym i jest bardzo wydajny.M-ROSE umożliwia makroskopową identyfikację patogenów, takich jak aspergillus, cryptococcus, pneumocystis i candida. Ma to istotne implikacje przewodnie w określaniu podstawowej jakości układu oddechowego, odróżnianiu chorób zakaźnych od niezakaźnych, rozróżnianiu infekcji od skażenia, a także ocenie infekcji, honorariów cywilnych i rokowań. Na początek zdobądź wszystkie wymagane materiały do M-ROSE i umieść kompletny zestaw roztworów barwiących Diff-Quik lub DQ w szklanych słoikach do barwienia z zamkniętymi pokrywkami.W celu przygotowania szkiełka rolkowego należy usunąć cząstki tkanki za pomocą jednorazowej igły strzykawkowej o pojemności od 2,5 do pięciu mililitrów. Następnie rozprowadź okrągły obszar o umiarkowanej grubości od wewnętrznej do zewnętrznej jednej trzeciej części szkiełka cytologicznego. Zanurz suwak w roztworze dyferencjału na 10 do 30 sekund.Aby usunąć nadmiar roztworu, umieść szkiełko w kąpieli barwiącej PBS i lekko kołysz nim w górę iw dół. Następnie delikatnie strząśnij pozostały bufor. Zanurz szkiełko w roztworze dyferencjału b na 20 do 40 sekund.Następnie włóż zjeżdżalnię do zbiornika do umierania wody i kołysz nią lekko w górę iw dół. Na koniec, za pomocą papieru chłonnego, zetrzyj resztki płynu ze szkiełka i przystąp do badania mikroskopowego. M-ROSE próbki z biopsji bronchoskopowej pacjenta przy użyciu barwienia DQ zidentyfikował pneumocystozę charakteryzującą się wyraźną strukturą, ostrym kontrastem i workiem.

microbiological-rapid-on-site-evaluation-for-pulmonary-infectious

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Test Xpert MTB/RIF integruje dekontaminację próbki, obsługę bezdotykową, pokładowe przetwarzanie próbki oraz ultrasensytywną hemi-zagnieżdżoną reakcję PCR w celu jednoczesnego wykrywania Mycobacterium tuberculosis oraz oporności na ryfampicynę, zarówno w odkrztuszonej plwocinie, jak i w zagęszczonych osadach z plwociny, w czasie około dwóch godzin. Badanie jest zestandaryzowane i wymaga jedynie umiarkowanej infrastruktury laboratoryjnej oraz przeszkolenia.

Diagnostyka gruźlicy płuc za pomocą testu Xpert MTB/RIF

Źródło: Perinbam, K., i Siryaporn, A. Szybki test wirulencji bakteryjnej oparty na obrazach z użyciem ameby. J. Vis. Exp. (2018)Ten film demonstruje szybką, opartą na obrazach metodę oceny zjadliwości bakterii poprzez inkubację ameb z bakteriami przytwierdzonymi do powierzchni lub planktonicznymi, zastosowanie podkładki kalcein-acetoxymetyloesterowej (kalcein-AM) agarozy oraz obrazowanie fluorescencji w celu wykrycia uszkodzeń komórek gospodarza.

Szybki test obrazowy do wykrywania zjadliwości bakteryjnej indukowanej powierzchnią

Szybkie i dokładne wykrywanie patogenów roślin na miejscu, zwłaszcza patogenów przenoszonych przez glebę, jest kluczowe dla zapobiegania dalszej produkcji inokulum i rozprzestrzenianiu się chorób roślin na polu. Opracowana tutaj metoda wykorzystująca przenośny system detekcji PCR w czasie rzeczywistym umożliwia diagnostykę na miejscu w warunkach polowych.

Wykrywanie molekularne fitopatogenów przenoszonych przez glebę na miejscu za pomocą przenośnego systemu PCR w czasie rzeczywistym

Szybko wdrażalne, niezależne od sieci laboratorium zostało zaprojektowane i zbudowane dla odległych, ograniczonych zasobami globalnych ustawień. Badane są cechy i krytyczne aspekty ulepszonych logistycznie, rozszerzalnych, wielofunkcyjnych modułów laboratoryjnych. Opracowywana i prezentowana jest lista kontrolna dotycząca podstawowego przebiegu pracy w laboratorium oraz protokół testu diagnostycznego na obecność wirusa układu oddechowego.

Zdalne zarządzanie laboratorium: diagnostyka wirusów układu oddechowego

Ten protokół przedstawia szybki test wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe (AST) w ciągu 2,5 godziny poprzez stymulowane pojedynczymi komórkami obrazowanie metabolizmu D2O. Metoda ta ma zastosowanie do bakterii w moczu lub środowisku krwi pełnej, które są transformujące dla szybkiego jednokomórkowego fenotypowego AspAT w klinice.

Szybkie badanie wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe za pomocą obrazowania stymulowanego rozpraszania Ramana indukcji deuteru w pojedynczej bakterii

Protokół podsumowuje najlepsze praktyki mające na celu zminimalizowanie obciążenia biologicznego mikroorganizmów w środowisku pomieszczeń czystych i zawiera strategie, takie jak monitorowanie środowiska, monitorowanie procesów i testowanie sterylności produktu. Jest to istotne dla zakładów produkcyjnych i badawczych, które są zobowiązane do spełniania aktualnych standardów dobrej praktyki tkankowej i aktualnych standardów dobrej praktyki wytwarzania.

Strategie kontroli i monitorowania mikrobiologicznego w pomieszczeniach czystych i terapiach komórkowych

EUCAST opracował protokół bezpośredniego testowania wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe (AST) dla automatycznych hodowli krwi. Jednak jego zależność od identyfikacji mikrobiologicznej opartej na spektrometrii mas można wyeliminować, stosując protokół bezpośredniego przygotowania inokulum w zautomatyzowanym systemie identyfikacji drobnoustrojów. Takie podejście może dostarczyć raporty AST w ciągu 24 godzin od pobrania próbki.

Bezpośrednia identyfikacja mikrobiologiczna przy użyciu zautomatyzowanego systemu identyfikacji drobnoustrojów w celu ułatwienia metody EUCAST RAST bez spektrometrii mas

Różne patogeny bakteryjne mogą powodować infekcje dróg oddechowych i prowadzić do poważnych problemów zdrowotnych, jeśli nie zostaną dokładnie wykryte i szybko leczone. Szybkie i dokładne wykrywanie tych patogenów za pomocą amplifikacji izotermicznej za pośrednictwem pętli zapewnia skuteczne zarządzanie i kontrolę infekcji dróg oddechowych w warunkach klinicznych.

Szybkie wykrywanie patogenów bakteryjnych powodujących infekcje dolnych dróg oddechowych za pomocą amplifikacji izotermicznej opartej na chipach mikroprzepływowych

Opisujemy metodologię łączącą zautomatyzowaną hodowlę komórek z obrazowaniem wysokotreściowym w celu wizualizacji i kwantyfikacji wielu procesów oraz struktur komórkowych w sposób wysokoprzepustowy. Takie metody mogą wspomagać dalszą adnotację funkcjonalną genomów, a także identyfikację sieci genów związanych z chorobami i potencjalnych punktów uchwytu dla leków.

Badania wysokoprzepustowe wysokiej treści (High Content Screening) w chorobach neurodegeneracyjnych

Szczury bawełniane są niezwykle pobudliwe i mają silną reakcję ucieczki lub walki. Opisano metodę postępowania zoptymalizowaną w celu zmniejszenia stresu u zwierząt, która sprawi, że szczury bawełniane będą bardziej dostępne jako model przedkliniczny.

Postępowanie ze szczurem bawełnianym w badaniach nad oceną przedkliniczną wirusów onkolitycznych

Poznaj metodę M-ROSE do szybkiej oceny mikrobiologicznej zakażeń płuc w czasie rzeczywistym. Technika barwienia komórek i obrazowania mikroskopowego wspiera lekarzy w podejmowaniu trafnych decyzji terapeutycznych.

Szybka ocena mikrobiologiczna na miejscu w kierunku chorób zakaźnych płuc

Przeglądaj więcej filmów