Prosta metoda flotacji kału do diagnozowania nicieni odzwierzęcych w warunkach polowych i laboratoryjnych
15 grudnia 2023
Ta praca opisuje użycie metody flotacji do identyfikacji Toxocara canis i Ancylostoma spp. wykrytych w próbkach kału pobranych od psów w Meksyku w latach 2017 do 2021 w warunkach polowych.
Obecnie prowadzone są ogólnokrajowe badania geolokalizacyjne odzwierzęcych pasożytów psów w celu opracowania dalszych strategii kontroli i zapobiegania tym chorobom. Istnienie wielu różnych ekosystemów w Meksyku wpływa na częstotliwość zakażeń pasożytami u psów. Dlatego konieczne jest przeprowadzenie prac terenowych i zidentyfikowanie tych pasożytów, aby móc zaproponować wytyczne dotyczące odrobaczania specyficzne dla danego regionu zgodnie z epidemiologią każdego pasożyta.
Prosta technika flotacji nie jest wystarczająco czuła, aby wykryć oocysty Cryptosporidium, cysty Giardia lub jaja Trichuris. Proponujemy procedurę koncentracji w celu lepszego koproparytoskopowego wykrywania tych pasożytów. Technika ta może przyspieszyć i ułatwić diagnozę zakażenia robakami pasożytniczymi u psów na obszarach, na których nie jest dostępna infrastruktura ani sprzęt laboratoryjny.
Wyniki i zalecenia dotyczące odrobaczania można przepisać natychmiast po każdym badaniu mikroskopowym. Protokół ten może być pomocny w przeprowadzaniu rutynowych badań kału w warunkach terenowych lub laboratoryjnych w celu oszacowania częstości zakażeń Toxocara canis i Ancylostoma u psów. Na początek zbierz co najmniej dwa gramy próbki kału z ziemi natychmiast lub w ciągu 10 minut od wypróżnienia.
Dokładnie zamknij worki zawierające próbkę kału. Wstaw torebki do lodówki w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Aby przygotować nasycony roztwór soli, dokładnie umyj pustą, jednolitrową butelkę po napoju gazowanym wodą.
Odmierz 420 gramów soli w plastikowym kubku o pojemności od 12 do 14 uncji i dodaj do litrowej butelki. Napełnij butelkę wodą. Dokręcić nakrętkę i energicznie potrząsać butelką, aż roztwór zostanie nasycony.
Na początek zbierz próbki kału od psów i przygotuj nasycony roztwór soli w litrowej butelce. Umieść około trzech gramów kału w plastikowym kubku. Dodaj jeden mililitr nasyconego roztworu soli do filiżanki i mieszaj przez minutę, aby uzyskać pastę.
Dodaj 100 mililitrów nasyconego roztworu soli do filiżanki. Przepuścić zawiesinę przez plastikowe sitko do świeżego plastikowego kubka, aby usunąć gruboziarniste cząstki. Pozostawić zawiesinę na 15 do 20 minut.
Podgrzej pętlę inokulacyjną przez jedną sekundę, aby upewnić się, że jest wolna od jaj, cyst lub oocyst i pozwól jej ostygnąć przez pięć sekund. Weź około trzech kropli zawiesiny kałowej z powierzchni za pomocą pętli do zaszczepiania. Umieść trzy oddzielne krople na szklanym szkiełku.
Obserwuj każdą kroplę pod mikroskopem za pomocą obiektywu 10X. Umieść szkiełko nakrywkowe na próbce, aby wyświetlić próbkę w 40-krotnym powiększeniu. Obrazy z mikroskopu świetlnego w 40-krotnym powiększeniu wykazały obecność jaj gatunków Toxocara canis i Ancylostoma.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejsza praca koncentruje się na identyfikacji Toxocara canis oraz Ancylostoma spp. w próbkach kału psów w Meksyku z wykorzystaniem metody flotacji. Badanie podkreśla znaczenie strategii odrobaczania specyficznych dla danego regionu, opartych na epidemiologii tych pasożytów.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Parazytologia
- Medycyna weterynaryjna
- Epidemiologia
Wstęp
- Badanie geolokalizacji pasożytów odzwierzęcych u psów w Meksyku.
- Wpływ zróżnicowanych ekosystemów na wskaźniki infekcji pasożytniczych.
- Konieczność prowadzenia prac terenowych w celu identyfikacji pasożytów dla zapewnienia skutecznej kontroli.
- Ograniczenia prostej metody flotacji w wykrywaniu niektórych pasożytów.
Cel badania
- Identyfikacja Toxocara canis oraz Ancylostoma spp. w próbkach kału psów.
- Zaproponowanie wytycznych dotyczących odrobaczania specyficznych dla danego regionu.
- Udoskonalenie technik diagnostycznych w kierunku infekcji helminotozę.
Zastosowane metody
- Metoda flotacji do identyfikacji pasożytów.
- Pobieranie próbek terenowych od psów z obszaru Meksyku.
- Proponowana procedura zagęszczania w celu poprawy wykrywalności.
- Ocena technik diagnostycznych w warunkach ograniczonych zasobów.
Główne wyniki
- Identyfikacja Toxocara canis i Ancylostoma spp. w próbkach.
- Wykazanie potrzeby udoskonalenia metod diagnostycznych.
- Zaproponowana technika zagęszczania wykazała potencjał do lepszej detekcji.
- Wyniki wspierają opracowanie ukierunkowanych strategii odrobaczania.
Wnioski
- Identyfikacja pasożytów w terenie ma kluczowe znaczenie dla zdrowia publicznego.
- Udoskonalone metody mogą pomóc w kontrolowaniu zakażeń odzwierzęcych.
- Badania potwierdzają potrzebę stosowania dostosowanych metod zarządzania populacjami pasożytów.
Najczęściej zadawane pytania
Przemysłowe znaczenie wykonawcze
Niezawodna detekcja nicieni odzwierzęcych, takich jak Toxocara canis i Ancylostoma spp., w próbkach kału psów jest kluczowa dla wczesnej walidacji celów oraz oceny ryzyka epidemiologicznego w parazytologii translacyjnej. Diagnostyczny schemat oparty na metodzie flotacji umożliwia prowadzenie skutecznego nadzoru zarówno w warunkach terenowych, jak i laboratoryjnych, wspierając regionalne strategie interwencyjne. Możliwość ta zwiększa pewność prognostyczną w obszarze zdrowia publicznego oraz w portfelach badawczo-rozwojowych weterynarii zajmujących się ryzykiem transmisji zoonotycznej.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia bezpośrednią analizę rozpowszechnienia pasożytów w różnych kontekstach ekologicznych.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów diagnostycznych dla nicieni zoonotycznych.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka biologicznego poprzez kwantyfikację wskaźników zakażeń w różnych regionach geograficznych.
- Dostarcza danych służących do opracowania regionalnie dostosowanych strategii interwencyjnych.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Zapewnia zestandaryzowany, powtarzalny protokół flotacji do zastosowań w terenie i w laboratorium.
- Generuje wyniki ilościowe dla detekcji jaj pasożytów i szacowania ich częstotliwości występowania.
- Przygotowuje zwalidowane próbki biologiczne do dalszych analiz epidemiologicznych.
- Umożliwia skalowalny screening dużych kohort próbek w warunkach ograniczonych zasobów.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Umożliwia dopasowanie wyników diagnostycznych do nadzoru nad chorobą oraz monitorowania biomarkerów.
- Zapewnia ciągłość procesów od wykrycia w terenie po potwierdzenie laboratoryjne i planowanie interwencji.
- Uzasadnia dostosowane do ryzyka wdrażanie strategii odrobaczania i kontroli.
- Zapewnia mechanistyczną redukcję ryzyka dla modeli transmisji zoonotycznej.
Integracja rurociągu i przepływu pracy
Ta oparta na flotacji metoda diagnostyczna integruje etapy wczesnego wykrywania, nadzoru epidemiologicznego oraz planowania interwencji translacyjnych w przypadku nicieni odzwierzęcych.
- Biologia odkrywcza: Umożliwia weryfikację hipotez dotyczących rozmieszczenia i rozpowszechnienia pasożytów w populacjach psów.
- Przesiewy: Zapewniają powtarzalne, ilościowe wykrywanie jaj T. canis oraz Ancylostoma spp.
- Analityka: Wspiera statystyczne porównanie wskaźników zakażeń w różnych regionach i punktach czasowych.
- Badania translacyjne: Łączą nadzór terenowy z walidacją laboratoryjną w celu opracowania ukierunkowanych strategii odrobaczania.
- Zastosowanie w przedsiębiorstwie: Oferuje przenośny, adaptowalny protokół do ciągłego nadzoru i badań nad interwencjami.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną w ocenie ryzyka zoonotycznego i walidacji celów.
- Wartość operacyjna: Standaryzuje przepływy pracy diagnostycznej w celu zapewnienia powtarzalności i skalowalności w różnych warunkach.
- Wartość strategiczna: Umożliwia szybkie, oparte na danych podejmowanie decyzji typu go/no-go w zakresie wdrażania interwencji.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację programów nadzoru i kontroli z uwzględnieniem ryzyka.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymaga przeszkolonego personelu do mikroskopowej identyfikacji jaj pasożytów.
- Minimalne zapotrzebowanie na instrumentarium umożliwia zastosowanie w środowiskach o ograniczonych zasobach.
- Standaryzacja pobierania próbek i procedur flotacji jest niezbędna dla zapewnienia powtarzalności.
- Może być konieczna adaptacja metody w celu wykrycia pasożytów, których nie można zidentyfikować za pomocą prostej flotacji.
- Ograniczona czułość w przypadku niektórych pasożytniczych pierwotniaków wymaga zastosowania metod komplementarnych w celu przeprowadzenia kompleksowego nadzoru.
