Indukcja ostrego udaru niedokrwiennego u myszy przy użyciu techniki niedrożności dystalnej tętnicy środkowej

W niniejszym badaniu mamy na celu zapewnienie kompleksowego i szczegółowego protokołu do ustalenia modelu niedrożności przyśrodkowej tętnicy mózgowej u myszy C57BL / 6NJ przy użyciu obliczeń elektrod przezczaszkowych i oceny późniejszego zachowania neurologicznego i cech histopatologicznych. Przyśrodkowa tętnica mózgowa (MCA) jest uznawana za podstawowy zestaw udaru niedokrwiennego u ludzi. Metody okluzji MCA, w tym technika otaczania kraniotomii, ogniskowe wprowadzenie chemiczne i okluzja morfologiczna, były kosztownie stosowane do wywoływania ogniskowego niedokrwienia mózgu u gryzoni

W porównaniu z innymi modelami udaru niedokrwiennego, model ten ma tę zaletę, że jest mniej inwazyjny chirurgicznie, mniejszy rozmiar przekroczenia i wyższy wskaźnik przeżycia, co czyni go bardziej odpowiednim do badania długotrwałej poprawy funkcjonalnej po udarze niedokrwiennym. Ogólnie rzecz biorąc, obecne podejście skutecznie generuje wiarygodny eksperymentalny model udaru niedokrwiennego, który charakteryzuje się wysoką przeżywalnością i doskonałą powtarzalnością. W związku z tym metodologia ta służy jako nieocenione narzędzie zarówno w badaniach podstawowych, jak i translacyjnych w dziedzinie udaru mózgu.

W przyszłości zastosujemy paradygmaty zachowań, takie jak rozpoznawanie nowych obiektów i labirynt wodny, aby zbadać dynamiczne zmiany w zdolnościach uczenia się długoterminowego i pamięci wśród myszy z dystalnym zamknięciem MCA. Umożliwi nam to ustalenie zasadności wykorzystania ich jako modelu zwierzęcego do badań nad zaburzeniami poznawczymi po udarze. Aby rozpocząć, przetrzyj tablicę chirurgiczną ogrzewania 75% etanolem i ustaw temperaturę na 37 stopni Celsjusza.

Umieść znieczuloną mysz w prawej pozycji bocznej na tablicy, z głową odchyloną na bok. Aby chronić rogówkę przed wysuszeniem, nałóż maść do oczu. Po zgoleniu sierści od lewej orbity do lewego kanału słuchowego użyj kremu do depilacji, aby usunąć pozostałą sierść.

Trzykrotnie zdezynfekuj obszar operacyjny jodonem powidonu i 75% etanolem. Przeprowadź ocenę uszczypnięcia palców u stóp. Po wykonaniu pionowego nacięcia między lewym oczodołem a lewym kanałem słuchowym, cofnij miękką tkankę skórną, aby odsłonić mięsień skroniowy.

Za pomocą prostych mikrokleszczy oddziel wierzchołkowy i grzbietowy segment mięśnia skroniowego od czaszki. Zidentyfikuj rozwidlenie w kształcie litery Y środkowej tętnicy mózgowej lub MCA poniżej kości skroniowej. Następnie, za pomocą elektrycznego wiertła czaszkowego, rozrzedź czaszkę, aby utworzyć okno kostne, aż opona twarda stanie się widoczna.

Usuń oponę twardą powyżej MCA za pomocą zakrzywionych mikrokleszczyków. Za pomocą elektrycznych kleszczy do krzepnięcia skrzepnij tętnicę w miejscach proksymalnych i dystalnych do rozwidlenia. Monitoruj przepływ krwi w lewej gałęzi korowej MCA w laserowym mierniku przepływu krwi plamkowej.

Następnie zszyć mięsień i skórę oddzielnie szwami z kwasem poliglikolowym i nałożyć żel sodowy diklofenak i maść mupirocyny na nacięcie skóry. Umieść mysz w komorze odzyskiwania. Aby wykonać test siły chwytu we wcześniej opracowanym dystalnym modelu MCAO, chwyć tylną część ogona myszy i stopniowo opuszczaj mysz, aż przytrzyma poziomą belkę obiema przednimi łapami.

Trzymając ciało poziomo, pociągnij mysz do tyłu ze stałą prędkością dwóch centymetrów na sekundę. Kiedy mysz wypuści przednie łapy z drążka, zapisz szczytową siłę w gramach. Aby wykonać test na tyczce, umieść mysz pionowo na drewnianej tyczce.

Zapisz czas potrzebny myszy na odwrócenie się i całkowity czas zejścia ze słupa z 60-sekundowym czasem granicznym. Aby przeprowadzić test klejenia, przymocuj łatkę taśmy klejącej do prawej przedniej łapy myszy. Włóż mysz z powrotem do klatki hodowlanej i zapisz czas potrzebny myszy na usunięcie kleju z 60-sekundowym czasem odcięcia.

Aby przeprowadzić test cylindra, przetrzyj otwarty cylinder z przezroczystego szkła 75% etanolem i umieść w nim mysz. Za pomocą kamery nagrywaj jego spontaniczne zachowanie eksploracyjne w pozycji stojącej przez trzy minuty. Dystalne myszy MCAO wykazały znaczne zmniejszenie siły chwytu i wskaźnika użycia przedniej łapy po stronie przeciwnej w porównaniu z grupą operowaną pozorowaną.

Co więcej, myszy z okludacją wykazały znaczny wzrost czasu opadania w teście ciągnięcia i czasu potrzebnego na usunięcie kleju. Na początek uzyskaj wypreparowany mózg poddanego eutanazji dystalnego modelu myszy MCAO po testach behawioralnych i umieść go w zamrażarce o temperaturze minus 20 stopni Celsjusza na 20 minut. Następnie umieść mózg w jednomilimetrowej macierzy mózgowej i za pomocą ostrzy mikrotomu pokrój mózg na dwumilimetrowe odcinki wieńcowe.

Przenieś skrawki mózgu na 24-dołkową płytkę hodowlaną i dodaj 2% TTC, aby pokryć tkankę mózgową. Inkubować płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut. Następnie ostrożnie zamocuj część mózgu w 4% roztworze paraformaldehydu na 15 minut.

Za pomocą skanera wykonaj skanowanie optyczne wycinków mózgu. Analiza histologiczna mózgu ujawniła nieuporządkowane ułożenie komórek neuronalnych i znaczne zmniejszenie gęstości komórek NeuN-dodatnich w obszarze okołozawałowym dystalnych myszy z MCA.