Hodowla laboratoryjna i terenowa larw skałoczepa pantofelkowego, Crepidula fornicata

Interesuje mnie, w jaki sposób na rozwój larw morskich wpływa wiele czynników środowiskowych i stresorów oraz w jaki sposób układ nerwowy larw integruje informacje ze środowiska, aby regulować osiedlanie się larw, metamorfozę do młodocianych osobników bentosowych i rekrutację do dorosłych populacji. Larwy to niektóre gatunki morskie, takie jak skałoczep Crepidula fornicata, są dość odporne na zakwaszenie oceanów, ale istnieją ważne interakcje między zakwaszeniem a innymi czynnikami, takimi jak odżywianie i zasolenie. Nie wiemy zbyt wiele o tym, jak larwy rosną, rozwijają się i zachowują w naturze.

Terenowe obserwacje mezokosmiczne mogą wypełnić niektóre z tych luk i zasugerować hipotezy do przetestowania za pomocą manipulacji laboratoryjnych. Możemy zacząć pytać na poziomie neurobehawioralnym, rozwojowym i transkrypcyjnym, jak larwy radzą sobie ze stresorami, które zmieniają się w krótkich skalach czasowych w produktywnych środowiskach przybrzeżnych, które są szczególnie podatne na wpływ człowieka. Aby rozpocząć, przerwij napowietrzanie słoika zawierającego dorosłą Crepidula fornicata.

Odstaw słoik na 15 do 20 minut, aby umożliwić osadzanie się zanieczyszczeń. Następnie przymocuj krótką rurkę szklaną o szerokości pięciu milimetrów do miękkiej plastikowej rurki akwariowej. Gdy larwy podpłyną, umieść sito nad szklaną zlewką o pojemności 600 mililitrów.

Następnie przelej larwy przez rurkę do sita. Podnieś na chwilę sitko, odwróć je i spryskaj przefiltrowaną wodą morską na dno sita, aby spłukać larwy do szklanej miski z przefiltrowaną wodą morską. Aby rozpocząć, wywierć dwa pięciomilimetrowe otwory w pokrywce słoika.

Zamontuj króciec rurki w każdym otworze za pomocą nylonowej nakrętki 10-32. Nałóż odrobinę uszczelniacza akwariowego z kauczuku silikonowego na otwór gwintowanej wewnętrznej części zadzioru rurki. Przepchnij rurkę polietylenową o długości 20 centymetrów i szerokości dwóch milimetrów przez otwór.

Poczekaj, aż szczeliwo na końcu rurki utwardzi się. Następnie przytnij wystający koniec tak, aby zlicował się z końcem króćca rurki. Na początek umieść szklaną miskę zawierającą larwy Crepidula fornicata na stoliku mikroskopu preparacyjnego.

Za pomocą pipety Pasteura ręcznie przenieś i policz żądaną liczbę larw do słoika hodowlanego zawierającego przefiltrowaną wodę morską. Nakarm larwy odpowiednią ilością mikroalg. Dodaj przefiltrowaną wodę morską, aby objętość kultury znalazła się w odległości jednego centymetra od ramienia słoika.

Przykręć pokrywkę słoika z kulturą i podłącz dopływ powietrza wentylacyjnego do kluski na rurki prowadzącej do dna słoika. Użyj pompy powietrza do akwarium ze zwykłymi zaworami zespołu akwariowego, aby zapewnić wentylację powietrzem z otoczenia. Następnie dostosuj przepływ powietrza, aby uzyskać stały, powolny strumień pęcherzyków.

Aby zastąpić wodę hodowlaną, wlej zawartość słoika do sitka nad zlewką. Odwróć sito nad słoikiem z kulturą fermentacyjną zawierającą świeżą przefiltrowaną wodę morską. Następnie użyj butelki z filtrowaną wodą morską, aby spłukać larwy do słoika.

Dodaj trochę mikroalg jako pokarm dla larw i uzupełnij słoik przefiltrowaną wodą morską z dokładnością do jednego centymetra od ramienia słoika. Larwy Crepidula fornicata wydają się rosnąć wolniej w kulturach laboratoryjnych w porównaniu z kulturami mezokosmicznymi. Larwy zaczęły metamorfozę w ósmym dniu i wszystkie były zdolne do metamorfozy w 12 dniu.

Na początek użyj ręcznej elektrycznej piły szablastej, aby wyciąć cztery równomiernie rozmieszczone prostokątne otwory w bokach standardowego wiadra z polietylenu o pojemności siedmiu galonów. Za pomocą piły stołowej pokrój wycięte kawałki wzdłuż na paski o szerokości dwóch centymetrów. Wytnij cztery panele nylonowej siatki, aby zachodziły na wycięte otwory wiadra.

Tymczasowo zabezpiecz jedną krawędź panelu siatkowego nad długą krawędzią wycięcia za pomocą małych zacisków sprężynowych. Teraz przyklej krawędź panelu siatkowego do otworu wiadra za pomocą gorącego kleju. Po zamocowaniu pierwszej krawędzi przyklej pozostałe krawędzie, utrzymując napięte napięcie panelu.

Następnie przytnij końce wyciętych kawałków tak, aby pasowały do sklejonego obszaru panelu. Dociśnij każdy pasek zakrywający na miejsce dużą ilością kleju topliwego. Na koniec zabezpiecz koniec każdego paska nylonowym nitem zrywalnym zainstalowanym na zewnątrz wiadra.

Użyj maszynki do golenia, aby przyciąć nadmiar kleju i siatki z krawędzi pasków wzmacniających. Wydaje się, że larwy Crepidula fornicata rosną szybciej w mezokosmosie w porównaniu z kulturami laboratoryjnymi. Larwy uległy spontanicznej metamorfozie między piątym a szóstym dniem.

Prawie wszystkie larwy przeszły metamorfozę do siódmego dnia.