Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Badamy wpływ przeciwności społecznych nastolatków na rozwój neurologiczny i wyniki behawioralne, koncentrując się w szczególności na samcach i samicach myszy C57BL / 6. Modelujemy cierpienie społeczne za pomocą zaadaptowanej wersji paradygmatu chronicznej porażki społecznej. Nasz model, zwany przyspieszonym stresem porażki społecznej, jest dostosowany do jego stosowania u dorastających myszy C57BL/6.

Protokół stresu porażki społecznej wymaga agresywnego zachowania od odpornej myszy. Istniejące badania są często przeprowadzane w połowie okresu dojrzewania lub brakuje im swoistości pod względem dnia ekspozycji po urodzeniu. Niektóre badania rozciągają się na wczesną dorosłość lub wykorzystują szczepy myszy, które nie są powszechnie stosowane.

Wdrożenie modelu porażki społecznej u dorastających myszy C57BL/6 było wyzwaniem, ponieważ myszy dorosłe lub dorastające zazwyczaj nie atakują myszy płci męskiej lub żeńskiej we wczesnym okresie dojrzewania, a okres dojrzewania to krótki okres życia, który obejmuje dyskretne okna czasowe podatności. Model AcSD skutecznie indukuje unikanie społeczne 24 godziny później zarówno u mężczyzn, jak i kobiet. Jest wystarczająco krótki, aby umożliwić ekspozycję w dyskretnych okresach dojrzewania.

Umożliwia segregację odpornych i podatnych myszy i jest pierwszym dostępnym modelem do badania stresu porażki społecznej u dorastających samic myszy C57BL / 6. Nasz model został wygenerowany do użytku u dorastających samców i samic myszy C57BL/6. Ten czterodniowy paradygmat stresu, z dwiema sesjami ataku fizycznego dziennie, wykorzystuje dorosłą mysz płci męskiej C57BL / 6 do przygotowania myszy CD-1 do agresywności, zapewniając, że mysz CD-1 łatwo zaatakuje eksperymentalnego samca lub samicę myszy.

Na początek umieść dorastającą mysz C57BL/6 w tej samej klatce, co mysz z zagruntowaną płytą CD-1. Kiedy mysz CD-1 gryzie lub umieszcza zęby na jakiejkolwiek części ciała dorastającej myszy, zarejestruj to jako atak. Kiedy mysz C57BL/6 odsuwa obie tylne łapy od pozycji, w której początkowo się znajdowały, uważa się, że się odsuwa.

Oddziel zwierzęta plastikową linijką, jeśli mysz CD-1 gryzie więcej niż raz z rzędu. Podobnie, rozdziel zwierzęta, jeśli mysz CD-1 gryzie i nie puszcza lub jeśli mysz C57BL/6 jest uwięziona w rogu lub przygwożdżona przez mysz CD-1 i nie może się ruszyć. Aby przebadać i zagruntować myszy CD-1, załóż parę rękawiczek do badania nitrylowego.

Pierwszego dnia wprowadź dorosłego samca myszy C57BL/6 w wieku 65 lat lub starszego po urodzeniu jako intruza do klatki myszy CD-1 na trzy minuty. Zarejestruj opóźnienie do pierwszej agresji i liczbę wykonanych agresji. Od drugiego do ostatniego dnia badań przesiewowych i przygotowania wprowadź dorosłego samca C57BL/6 w wieku 65 lat po urodzeniu lub starszego na jedną minutę, a następnie zamień go na pięć minut z dorastającą myszą C57BL/6 w 25. dniu po urodzeniu.

Jeśli torowanie ma na celu agresywność w stosunku do samic myszy C57BL/6, należy przeprowadzić badanie przesiewowe i gruntowanie na dorastających samicach myszy. Zarejestruj opóźnienie do pierwszej agresji, liczbę ataków i rany odniesione przez wszystkie myszy C57BL/6. Jeśli mysz CD-1 nie zbliża się do dorastających myszy C57BL/6 przez dwa dni podczas badania przesiewowego lub gruntowania, nie dołączaj myszy CD-1.

Na początek użyj przegród ze szkła akrylowego, aby podzielić klatki regałów na dwie komory. Dodaj ściółkę z twardych wiórów drzewnych po obu stronach klatki, a następnie umieść bawełniany kwadrat z każdej strony. Zabezpiecz górę drutu za pomocą spinaczy do segregatorów.

Następnie umieść pokrywę bez bawełny ochronnej na klatce. Umieść mysz CD-1 po jednej stronie przegrody. Oznacz klatkę znacznikiem umieszczonym na zewnątrz, aby ułatwić identyfikację każdej myszy.

W przypadku sesji porażki ułóż harmonogram dwóch sesji dziennie przez cztery dni z innym agresorem na każdą sesję. Zważ młodocianą mysz C57BL/6. Następnie wprowadź samca myszy C57BL/6 w wieku 65 lat lub starszej po urodzeniu na 30 sekund do strony CD-1 klatki porażki.

Zamień go na dorastającą mysz C57BL/6 w wieku od 24 do 28 dni po urodzeniu na 10-minutowy epizod porażki lub do momentu wystąpienia 10 ataków. Zarejestruj opóźnienie do pierwszej agresji, liczbę ataków i rany odniesione przez wszystkie myszy C57BL/6. Oddziel zwierzęta po każdym ataku plastikową linijką.

Po każdej sesji porażki sprawdź, czy nie ma kontuzji i potraktuj je kremem przeciwbólowym. Zarejestruj liczbę urazów. Umieść pokonaną młodocianą mysz C57BL/6 w wolnej komorze obok jej agresora i zostaw ją tam do następnej sesji.

Rozpocznij nową sesję z myszami eksperymentalnymi i agresorowymi, które nie zostały sparowane w poprzedniej sesji. Monitoruj obrażenia dorosłych samców myszy C57BL/6 używanych do gruntowania. W przypadku myszy kontrolnych umieść dwie myszy kontrolne w klatce, po jednej z każdej strony klatki.

Umieść je w aparacie porażki społecznej w oddzielnym pomieszczeniu od myszy porażki społecznej. Dla każdej sesji występującej w grupie porażki należy obracać myszy w grupie kontrolnej tak, aby każda eksperymentalna mysz została wprowadzona do klatki nieznanej myszy C57BL/6. Myszy CD-1 atakowały myszy C57BL / 6 w spójny sposób w wielu kohortach.

Dorastający mężczyźni otrzymali więcej ataków z użyciem myszy z CD-1 podczas przyspieszonej porażki społecznej niż dorastający mężczyźni narażeni na protokół przewlekłej porażki społecznej. Przygotowane myszy CD-1 wykazywały agresywne ataki w stosunku do dorastających samców i samic myszy C57BL / 6. Nie stwierdzono interakcji między dniem a kohortą w różnych eksperymentach.

Porównując liczbę ataków otrzymanych przez odporne i podatne myszy doświadczające przyspieszonej porażki społecznej, nie stwierdzono różnicy, jeśli eksperymenty przeprowadza się na samcach czy samicach.