Name: Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-15T14:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Poznaj model przyspieszonego stresu porażki społecznej dla dorastających myszy C57BL/6 obu płci. Ta metoda pozwala badać wpływ stresu na rozwój neuronalny i zachowanie, umożliwiając rozróżnienie osobników odpornych i wrażliwych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez Kanadyjskie Instytuty Badań nad Zdrowiem (numery grantów CF: MOP-74709; PJT 190045), National Institute on Drug Abuse (numer grantu CF: R01DA037911), Kanadyjska Rada ds. Badań Przyrodniczych i Inżynieryjnych (numer grantu CF: 2982226). Andrea Pantoja-Urban była wspierana przez Krajową Radę Nauk Humanistycznych, Nauki i Technologii/Consejo Nacional de Humanidades, Ciencias y Tecnologías (CONAHCYT) z Meksyku oraz program stypendialny FRQNT - Merit dla studentów zagranicznych (PBEEE). Samuel Richer otrzymał stypendium w ramach Zintegrowanego Programu Neuronauki na Uniwersytecie McGill. Ilustracje rysunkowe zostały stworzone przy użyciu szablonów z BioRender.com.

Adolescent Social Stress Paradigm in C57BL&#47;6 Mice for Behavioral Research

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Konsekwentne, agresywne zachowanie u myszy CD-1 Podczas fazy badań przesiewowych bardzo ważne jest, aby zwrócić uwagę na wszystkie zachowania wyświetlane przez CD-1 (gonienie, dosiadanie, wąchanie, pielęgnacja lub gryzienie) i uważnie śledzić te zapisy podczas wyboru myszy CD-1 do AcSD. Jest prawdopodobne, że mysz CD-1, która wchodzi w interakcję z dorastającą myszą bez atakowania jej, rozwinie agresywność w stosunku do dorastających myszy podczas torowania. W przeciwieństwie do tego, mysz CD-1, która atakuje dorosłą mysz, ale nie zbliża się do dorastającej myszy, prawdopodobnie nie rozwinie agresywności w stosunku do dorastających myszy.
Faza torowania CD-1 pozwala na rozwinięcie agresywnego zachowania w stosunku do dorastających myszy. Dlatego posiadanie dokładnego rejestru zachowań ma kluczowe znaczenie dla wyboru myszy. Co więcej, ważne jest, aby zawsze badać myszy CD-1 przed nowym eksperymentem, nawet jeśli mysz CD-1 przeszła wcześniej porażkę. Niektóre myszy CD-1 mogą przestać atakować dorastające myszy, gdy są pozostawione w klatkach domowych przez pewien czas, inne mogą rozwinąć zwiększone zachowania terytorialne, ponieważ są trzymane w izolacji.
Do przygotowania myszy CD-1 protokół zaleca 3 dni. Jeśli zastosuje się naiwne myszy CD-1, torowanie można przedłużyć, jeśli myszy CD-1 nie będą aktywnie atakować dorastających myszy. W przypadku myszy z CD-1, które przeżyły porażkę społeczną z dorastającymi myszami, czas trwania tej fazy wstępnej można skrócić.
Faza przesiewowa i gruntowania mają kluczowe znaczenie dla udanych sesji AcSD. Na przykład myszy CD-1, które zostały odpowiednio przygotowane, zaatakują i osiągną limit 10 ataków szybciej niż mniej agresywna mysz CD-1, co pozwoli na krótkie epizody porażki.
Podczas AcSD kluczowe jest rozdzielenie zwierząt, gdy ataki są bardzo gwałtowne (np. mysz CD-1 nie puszcza myszy C57BL/6J); W przeciwnym razie dorastające myszy zostaną zranione, a ataki muszą być ograniczone. Leczenie urazów jest również bardzo ważne, aby uniknąć infekcji; Zaleca się, aby nie używać tłustych maści do leczenia urazów, ponieważ zwierzęta będą zlizywać maść, tracąc przy tym włosy i odsłaniając ranę.
Rozwiązywanie problemów z AcSD używanym u dorastających myszy płci męskiej i żeńskiej C57BL/6 Model przewlekłego stresu związanego z porażką społeczną stanowił istotne ograniczenia w jego stosowaniu we wczesnym okresie dojrzewania zarówno u samców, jak i samic myszy C57BL/6. W tej części opisano modyfikacje, które zostały dokonane w celu opracowania modelu AcSD w okresie dojrzewania.
Wyposażenie: Pełna lista wyposażenia znajduje się w Tabeli materiałów. Młodociane myszy C57BL/6 we wczesnym okresie dojrzewania (PND 21-30) były zbyt małe dla opisanego wcześniej sprzętu używanego w laboratorium60. Średnica perforacji na przegrodach ze szkła akrylowego jest na tyle duża, że myszy C57BL/6 mogą przejść z jednej komory do drugiej, w której przebywa agresor. Aby temu zapobiec, wykonano przegrody ze szkła akrylowego, które posiadają perforacje o małej średnicy. Ponadto górna część z drutu stalowego musiała być zabezpieczona klipsami, aby zapobiec ucieczce myszy z klatek. Zastosowane pokrywy pokryw są zwykle używane do klatek wentylowanych. W tym przypadku te pokrywy zostały użyte bez bawełny ochronnej, aby umożliwić odpowiednią wentylację i zapobiec ucieczce myszy z klatki. Ważne jest, aby wziąć pod uwagę, że ilość użytej ściółki z wiórów drzewnych powinna umożliwiać dorastającym myszom dotarcie do jedzenia i dozownika wody umieszczonego na pokrywie pokrywy. Jednak duże ilości zrębków drzewnych mogą ulec zamoczeniu.
Wybór myszy CD-1: W modelu przewlekłym myszy CD-1 są badane pod kątem agresywnego zachowania przed rozpoczęciem eksperymentu. Myszy CD-1 są wybierane po 3 dniach badań przesiewowych i oceniane jest ich agresywne zachowanie. Po przeprowadzeniu badań przesiewowych do następnej fazy wybierane są zwierzęta, które mają opóźnienia do ataku poniżej 30 s i wykazują konsekwentne ataki. Jednak podczas eksperymentów z przewlekłą porażką społeczną myszy CD-1 nie utrzymywały stałej liczby ataków przez 10 dni (Figura 2B). W związku z tym kilka myszy CD-1 musiało zostać usuniętych z eksperymentu z powodu braku agresji w stosunku do myszy intruza. W rzeczywistości, podczas gdy tylko niewielka część myszy CD-1 zaatakowała mysz intruza, niektóre z tych myszy były niezwykle agresywne i czasami poważnie raniły samce myszy C57BL / 6 PND 21. W związku z tym badania przesiewowe myszy CD-1 zostały zmienione tak, aby wybrać agresywne myszy w stosunku do dorastających myszy, zwiększając agresję fizyczną.
Konsekwencja agresji fizycznej: Konsekwentna agresja fizyczna prowadzi do uzyskania szybkiej i solidnej porażki intruza6. W celu standaryzacji procedur między eksperymentami a eksperymentatorami zastosowano operacyjną definicję ataku57, co pozwoliło na precyzyjny ilościowy pomiar agresywności.
Agresywność torująca: Podczas eksperymentów z chroniczną porażką społeczną liczba ataków była bardzo zróżnicowana, zmniejszając się w ostatnich dniach eksperymentu (Ryc. 2B). Aby zwiększyć agresywne zachowanie myszy CD-1 w stosunku do dorastających samców myszy C57BL / 6, myszy CD-1 zostały przygotowane do aktywnej agresji niezależnie od myszy, które zostały wprowadzone do ich klatki domowej. Zachowanie to osiągnięto poprzez wprowadzenie dorosłego samca myszy C57BL/6 na 1 minutę przed dorastającą myszą, zachęcając mysz CD-1 do zaatakowania dorastających myszy po odzyskaniu dorosłego osobnika.
Czas trwania modelu: Dorastające myszy C57BL/6 w PND 21 są bardzo małe, a myszy CD-1 mogą je poważnie zranić już jednym atakiem. Dlatego, aby skupić się na wczesnym okresie dojrzewania i nadal mieć powtarzające się sesje porażki społecznej, wybrano model alternatywny do klasycznego 10-dniowego przewlekłego stresu związanego z porażką społeczną. Przyspieszony stres porażki społecznej (AcSD)42 składa się z dwóch sesji agresji fizycznej dziennie, jednej sesji rano i jednej po południu, w sumie przez 4 dni (8 sesji). Model AcSD pozwolił na wydłużenie wieku dorastających myszy z PND 21 do PND 25, nadal ukierunkowany tylko na wczesną adolescencję.
Ograniczenia AcSD w okresie dojrzewania Model AcSD ma pewne ograniczenia. W porównaniu z modelem przewlekłej porażki społecznej u dorosłych, AcSD wymaga badań przesiewowych dwukrotnie większej liczby myszy CD-1 niż dorastających myszy C57BL/6. Czas trwania fazy przygotowania może się różnić w zależności od agresywnego zachowania myszy CD-1; w związku z tym harmonogram AcSD powinien być planowany z wyprzedzeniem i wszystkie te zmienne muszą być brane pod uwagę. Ponieważ większość dorastających myszy wykaże odporność na unikanie społeczne po ekspozycji na AcSD, aby uzyskać reprezentatywną liczbę podatnych myszy, kohorta eksperymentalna powinna składać się z co najmniej 20 zwierząt dla samców i 30 dla samic.
AcSD u dorastających myszy daje spójne wyniki we wszystkich kohortach eksperymentalnych Po ekspozycji na stres społeczny z przewlekłą porażką społeczną i protokołami AcSD, większość dorastających samców myszy wykazywała odporność na unikanie społeczne. Jednak w przypadku modelu chronicznej porażki społecznej nie było możliwe odrzucenie zmienności w liczbie ataków CD-1 jako zmiennej zakłócającej. W przeciwieństwie do eksperymentów AcSD, myszy CD-1 są przygotowywane przed każdą sesją porażki, aby uzyskać stałą liczbę ataków w różnych sesjach (Rysunek 2D, E). Ogólnie rzecz biorąc, wszystkie eksperymentalne kohorty myszy narażonych na AcSD wykazują podobną liczbę ataków w różnych sesjach (Figura 2D); jednak nie dotyczy to kohort myszy narażonych na model przewlekłej porażki społecznej (Figura 2B).
Stosowanie przewlekłego stresu porażki społecznej u dorosłych samic myszy C57BL / 6 było wyzwaniem w porównaniu z innymi używającymi tego modelu u innych gatunków i szczepów 9,13,45,61. W przypadku eksperymentów AcSD na dorastających samicach myszy C57BL / 6 faza primingu została wydłużona, zapewniając agresywne zachowanie myszy CD-1 (Figura 4A). Można jednak zaobserwować zmienność w liczbie ataków w kohortach eksperymentalnych kobiet (Figura 4B). Niemniej jednak w tych eksperymentach wszystkie myszy CD-1 wykazywały agresywne zachowanie w stosunku do samic. Aby zwiększyć liczbę ataków, torowanie z samcami myszy można przedłużyć do 1 minuty. Podobnie jak u samców, odsetek dorastających samic myszy C57BL / 6 odpornych na unikanie społeczne był wyższy niż tych wykazujących podatność (Figura 4C, D). Co więcej, liczba ataków nie różniła się między myszami odpornymi i podatnymi (Figura 4E), co wskazuje, że fenotyp jest niezależny od ataków. AcSD może być stosowany u dorastających samic myszy C57BL/6, a eksperymenty można przeprowadzać w tym samym czasie u obu płci przy użyciu tych samych myszy CD-1.

Paradygmat chronicznego stresu związanego z porażką społeczną jest powszechnie stosowany do modelowania stresu społecznego u dorosłych gryzoni w dniu poporodowym (PND) >65 samców. Paradygmat ten opiera się na naturalnym agresywnym zachowaniu dorosłego samca gryzonia, gdy intruz wdziera się na jego terytorium. Model ten jest używany u różnych gatunków gryzoni, w tym szczurów, chomików i myszy1,2,3,4,5,6,7,8,9i polega na połączeniu agresji fizycznej i stresu psychicznego trwającego około 10 dni, podczas którego gryzoń-intruz eksperymentuje z kilkuminutową agresją fizyczną ze strony gryzonia rezydenta. Dwa gryzonie pozostają w klatce domowej mieszkańca, oddzielone przegrodą, która umożliwia kontakt sensoryczny, ale nie fizyczny7. W eksperymentach na myszach najczęściej używanymi myszami rezydentami/agresorami są emerytowane szwajcarskie myszy CD-1, które wykazują silne zachowanie terytorialne przeciwko myszom intruzom6,7. W przypadku myszy intruzów najlepiej scharakteryzowanym szczepem jest szczep wsobny C57BL/62,4,5. Pokonana mysz jest codziennie wystawiana na działanie nowego agresora, aby zapobiec przyzwyczajeniu się do agresora. Myszy kontrolne są codziennie trzymane w innym gatunku. Po 24 godzinach od ostatniej sesji porażki myszy eksperymentalne są testowane w teście interakcji społecznych (SIT), w którym mogą eksplorować otwarte pole pod nieobecność (brak celu) lub obecność nowej myszy CD-1 (cel). Myszy kontrolne spędzają więcej czasu w strefie interakcji z celem w porównaniu z niedocelową częścią zadania. Pokonane myszy są klasyfikowane jako podatne (stosunek<1) lub odporne (stosunek>1) zgodnie ze stosunkiem interakcji społecznych (czas spędzony w strefie interakcji z obecnym agresorem / czas spędzony w strefie interakcji z nieobecnym agresorem). Procedura ta stanowi przydatne narzędzie do badania indywidualnych różnic w odpowiedzi na stres.
Do niedawna model chronicznej porażki społecznej był najczęściej stosowany u dorosłych samców myszy, ponieważ uwydatnione hierarchie dominacji mężczyzn obejmują walkę z samcami, ale nie z samicami6,7. Co więcej, samce gryzoni zazwyczaj nie atakują samic; Zamiast tego angażują się w zachowania godowe<klasa sup="xref">10. Pomimo tych przeszkód opracowano różne strategie w celu dostosowania paradygmatu przewlekłej porażki społecznej do dorosłych samic myszy. Dla przykładu, mysi kalifornijski model porażki społecznej opiera się na naturalnej agresji tego monogamicznego gatunku z obu płci podczas obrony swojego terytorium9,11. Inne podejścia koncentrują się na wywoływaniu agresywnego zachowania myszy CD-1 poprzez stymulowanie ich brzuszno-przyśrodkowego podwzgórza do spójnego agresywnego zachowania10,12, lub poprzez zastosowanie moczu samców u eksperymentalnych dorosłych samic myszy, aby otrzymać ataki agresorów CD-113. Ta zwiększona i konsekwentna agresja myszy CD-1 ma kluczowe znaczenie dla eksperymentalnej myszy intruza, aby wykazać wyraźne behawioralne oznaki podporządkowania się powtarzającym się atakom agresora podczas trwania interakcji6.
Adaptacja modelu chronicznej porażki społecznej do użycia u nastolatków C57BL/6mice 
Okres dojrzewania jest okresem charakteryzującym się znacznym dojrzewaniem psychospołecznym, które rozwija się równolegle ze zmianami w mikro i makroarchitekturze mózgu, szczególnie w korze przedczołowej. Zarówno u ludzi, jak i u gryzoni nie ma zgody co do konkretnego początku i końca okresu dojrzewania14,15. Co więcej, w okresie dojrzewania istnieją krytyczne okresy podatności na wywołane doświadczeniem zakłócenia trwającego rozwoju mózgu i funkcji poznawczych16,17,18,19. Dojrzewanie i okres dojrzewania występują w tym samym czasie, ale terminy te nie są synonimami. Dojrzewanie oznacza początek dojrzewania płciowego, podczas gdy okres dojrzewania reprezentuje szerszą fazę charakteryzującą się stopniowym przejściem od stanu młodzieńczego do osiągnięcia niezależności20. Różne grupy sugerowały, że okres dojrzewania u myszy trwa od odsadzenia (PND 21) do dorosłości (PND 60)21. W szczególności wczesny okres dojrzewania można określić jako pierwszy i drugi tydzień po odsadzeniu (PND 21-34), a środek dojrzewania jako okres PND 35-48. Zakresy te obejmują odrębne okresy rozwojowe, dotyczące na przykład rozwoju układu dopaminowego22,23,24, podatność na wpływ leków na rozwój sieci neuronowych17,25,26,27 oraz różne cechy behawioralne16,20,28,29,30.
Zachowanie bojowe rezydującej myszy jest wymagane do protokołu porażki społecznej. Jednak, podobnie jak w przypadku samic myszy, samce zazwyczaj nie angażują się w agresywne interakcje z wczesnymi dorastającymi myszami, prawdopodobnie dlatego, że nie postrzegają ich jako zagrożenia. Większość badań nad skutkami przewlekłej porażki społecznej u dorastających myszy C57BL/6 przeprowadzono w okresie średniego wieku młodzieńczego31,32,33,34,35; inne nie określają dnia po urodzeniu nastolatka narażonego na kontakt 36,37, lub przedłużają dni porażki do wczesnej dorosłości38 lub nie zezwalają na kontakt sensoryczny39; Inne badania na dorastających myszach wykorzystują różne szczepy<klasa SUP="xref">40,<klasa SUP="xref">41. Charakterystykę tych badań z zastosowaniem przewlekłego stresu porażki społecznej u dorastających samców myszy podsumowano w Tabeli 1.
Nasza grupa badawcza jest zainteresowana celowaniem w konkretne okna ekspozycji u nastolatków, w tym wczesnego okresu dojrzewania, u myszy C57BL/6. Ze względu na krótki czas trwania różnych okresów młodzieńczych, zaprojektowano zmodyfikowaną wersję przyspieszonej wersji paradygmatu chronicznego stresu związanego z porażką społeczną42. Model ten został nazwany przyspieszonym stresem porażki społecznej (AcSD) dla dorastających myszy. Poprzednie badania pokazują, że istnieją znaczące różnice płci we wrażliwości na stres społeczny w okresie dojrzewania u szczurów8,26,43,44,45, a także w szkodliwym wpływie stresu społecznego na trajektorie zdrowia psychicznego u ludzi46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56. Model AcSD działa skutecznie również w przypadku dorastających samic myszy, umożliwiając im badanie potencjalnych konsekwencji specyficznych dla płci, a także badanie podstaw neurobiologicznych.
Tabela 1: Badania wykorzystujące paradygmaty stresu porażki społecznej u dorastających samców myszy. Szczep i gatunek: Mysz kalifornijska: Peromyscus californicus. C57BL/6: Odmiana myszy wsobnej Mus musculus black 6. C57BL/6J: Model myszy wsobnej M. musculus black 6 dostarczony przez laboratoria Jacksona. CD-1: M. musculus ze szwajcarskiego niekrewniaczego szczepu myszy albinosów. ICR: M. musculus Instytut Badań nad Rakiem niekrewniaczy szczep myszy albinosów. OF1: M. musculus Oncins France 1 niekrewniaczy szczep myszy albinosów. 
Skróty: wk = tydzień; PND = dzień poporodowy; res = odporny; sus = podatny; unsus = niepodatny. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Table 1_RE.xlsx" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 Myszy młodzieżowe&nbsp;</td><td>Hodowla</td><td></td> własna <td>Myszy hodowano w Centrum Neurofenotypowania Instytutu Zdrowia Psychicznego Douglas University.</td></tr><tr><td>C57BL/6 dorosłych myszy&nbsp;</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Kod szczepu: 027</td><td>Myszy są zamawiane tak, aby dotarły do PND>65 i są trzymane w grupach (cztery myszy w klatce) w standardowych klatkach dla myszy.</td></tr><tr><td>Młodociane myszy C57BL/6J&nbsp;</td>Kod <td>szczepu Jackson Labs</td><td>: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664</td><td>Myszy są uporządkowane tak, aby dotarły do PND 24 i są trzymane w grupach (cztery myszy na klatkę) w standardowych klatkach dla myszy.</td></tr><tr><td>Myszy CD-1&nbsp;</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Kod szczepu: 022</td><td>Myszy przeszły na emeryturę hodowców w wieku powyżej trzech miesięcy i są pojedyncze trzymane przez cały czas.</td></tr><tr><td>Roztwór czyszczący&nbsp;</td><td>Virox Animal Health</td><td>DIN 02537222</td><td>Prevail: Przyspieszony nadtlenek wodoru. Środek dezynfekujący i dezodorant.</td></tr><tr><td>Przegroda z przezroczystego perforowanego szkła akrylowego&nbsp;</td><td>Wyprodukowany przez Douglas Hospital, na zamówienie</td><td></td><td>0,6 cm (szer.) i czasy; 45,7 cm (gł.) i czasy; 22,23 cm (wys.); perforacja o średnicy 0,6 cm. Przegrody są perforowane, co pozwala na czuciowy, ale nie fizyczny kontakt między parą myszy.</td></tr><tr><td>Przezroczyste prostokątne klatki dla szczurów&nbsp;</td><td>Allentown</td><td></td><td>24 cm (szer.) i czasy; 48,3 cm (gł.) i czasy; 22,23 (wys.).</td></tr><tr><td>Kwadraty bawełniane na pościel</td><td>Inotiv Envigo</td><td>T.6060 iso-BLOX</td><td>2,5 cm x 2,5 cm. Dodawany do aparatu do walki społecznej.</td></tr><tr><td>Twarda ściółka z wiórów drzewnych</td><td>Inotiv Envigo</td><td>Teklad 7090, 7115</td><td>Ściółka z wiórów Sani.</td></tr><tr><td>Duże spinki do segregatorów do mocowania blatów z drutu stalowego</td><td>ZSZYWKI</td><td>Pozycja #: 132429, Model #: 24178-CA</td><td>51 mm</td></tr><tr><td>Średnie klipsy do segregatorów do mocowania blatów z drutu stalowego</td><td>Pozycja #: 132367, Model #: 24172-CA</td><td>32 mm, na wypadek, gdyby pokrywy klatek dla szczurów nie zamykały się dużymi klipsami</td>Krem przeciwbólowy Polysporin Plus Krem przeciwbólowy (format czerwony,<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> NIE maść), 2 Antybiotyki plus chlorowodorek lidokainy</td></tr><tr><td>Sparowane blaty z drutu stalowego&nbsp;</td><td></td><td></td><td>24 cm (szer.) i czasy; 48 cm (gł.) z 0,6 cm (szer.) odstępu między grillem</td></tr><tr><td>Zdejmowana obudowa z siatki drucianej&nbsp;</td><td>Tworzywa</td><td></td> przemysłowe Johnston <td>11 cm (szer.) i czasy; 6,8 cm (gł.) i czasy; 42 cm (wys.) na zamówienie; dwie na arenę testową interakcji społecznych zabezpieczoną wstępnie przyciętym przezroczystym poliwęglanem</td></tr><tr><td>Interakcja społeczna arena na otwartym polu</td><td>PEXIGLAS</td><td></td><td>45 cm (szer.) i czasy; 45 cm (gł.) i czasy; 49 cm (wys.), wykonane na zamówienie z nieprzezroczystego szkła akrylowego (pleksi)&nbsp;</td></tr><tr><td>Stoper&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Do pomiaru czasu sesji porażkowych</td></tr><tr><td>Kamera wideo ze światłami podczerwonymi&nbsp;</td><td>Swann</td><td>SRDVR-44580V&nbsp;</td><td>Swann Camera - 4-kanałowy cyfrowy rejestrator wideo 1080p i 2 x PRO-T853</td></tr><tr><td>Oprogramowanie do śledzenia wideo&nbsp;</td><td>Topscan</td><td></td><td>2.0 Clever Systems Inc.</td></tr></tbody></table>

model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy c57bl/6

Social Defeat Stress Model for Adolescent C57BL&#47;6 Male and Female Mice

Przeciwności społeczne w okresie dojrzewania są powszechne i mogą negatywnie wpływać na trajektorie zdrowia psychicznego. Modelowanie stresu społecznego u dorastających samców i samic gryzoni jest potrzebne, aby zrozumieć jego wpływ na trwający rozwój mózgu i wyniki behawioralne. Paradygmat przewlekłego stresu porażki społecznej (CSDS) jest szeroko stosowany do modelowania stresu społecznego u dorosłych samców myszy C57BL/6 poprzez wykorzystanie agresywnego zachowania okazywanego przez dorosłego samca gryzonia intruzowi atakującemu jego terytorium. Zaletą tego paradygmatu jest to, że pozwala on na kategoryzację pokonanych myszy w grupy odporne i podatne na podstawie ich indywidualnych różnic w zachowaniach społecznych 24 godziny po ostatniej sesji porażki. Wdrożenie tego modelu u dorastających myszy C57BL/6 było wyzwaniem, ponieważ dorosłe lub dorastające myszy zazwyczaj nie atakują wczesnych dorastających samców lub samic myszy, a okres dojrzewania to krótki okres życia, obejmujący dyskretne okna czasowe podatności. Ograniczenie to zostało przezwyciężone poprzez dostosowanie przyspieszonej wersji CSDS do stosowania u dorastających samców i samic myszy. Ten 4-dniowy paradygmat stresu z 2 sesjami ataku fizycznego dziennie wykorzystuje dorosłego samca C57BL / 6 do przygotowania myszy CD-1 do agresywności, tak aby łatwo atakowała samca lub samicę młodocianej myszy. Model ten został nazwany przyspieszonym stresem porażki społecznej (AcSD) dla dorastających myszy. Ekspozycja nastolatków na AcSD indukuje unikanie społeczne 24 godziny później zarówno u samców, jak i samic, ale tylko w podgrupie pokonanych myszy. Ta luka w zabezpieczeniach występuje pomimo tego, że liczba ataków jest spójna w sesjach między grupami odpornymi i podatnymi. Model AcSD jest wystarczająco krótki, aby umożliwić ekspozycję w dyskretnych okresach dojrzewania, umożliwia segregację myszy w zależności od obecności lub braku zachowań unikania społecznego i jest pierwszym dostępnym modelem do badania stresu porażki społecznej u dorastających samic myszy C57BL / 6.

W sumie przeprowadzono cztery różne eksperymenty z wykorzystaniem modelu chronicznego stresu wywołanego społeczną porażką u młodocianych samców myszy C57BL/6 (21. dzień po urodzeniu, PND 21). Model ten wykazał jednak istotne ograniczenia w zastosowaniu u myszy C57BL/6 we wczesnej fazie okresu dojrzewania.
Modyfikacje sprzętu wymagane dla młodocianych myszy C57BL/6 
Pierwszym ograniczeniem był fakt, że sprzęt wykorzystany w aparaturze do symulowanej porażki społecznej (social defeat) został zaprojektowany dla myszy dorosłych. Ze względu na swój rozmiar, młodociane myszy C57BL/6 w 21. dniu po urodzeniu (PND 21) były w stanie przedostać się przez perforacje przegród na stronę agresora. Przeszkadzało to w zachowaniu okresu kontaktu sensorycznego. Dodatkowo młodociane myszy potrafiły uciekać przez pręty stalowych nadstawek. W związku z tym sprzęt został zmodyfikowany, aby zapobiec ucieczce myszy (Rysunek 1). Średnicę perforacji zmieniono z 1,1 cm na 0,6 cm (Rysunek 1B), a stalową nadstawkę z prętami w odstępach 1,1 cm zastąpiono nadstawką z odstępami 0,6 cm (Rysunek 1C). Dodatkowo nadstawkę zabezpieczono żabkami, a klatki dla szczurów przykryto plastikowymi pokrywami bez osłon bawełnianych. Poziom ściółki z trocin został również dostosowany do młodocianych myszy (Rysunek 1D-F).
Model AcSD wymaga wstępnego przygotowania dorosłych samców myszy CD-1, aby zapewnić spójne, agresywne ataki 
Drugim i ważniejszym ograniczeniem był brak spójności w agresji fizycznej myszy CD-1 wobec osobników młodocianych. Podczas sesji chronicznej porażki społecznej poziom agresji wahał się od braku ataków w ciągu 10 min sesji do jednego lub dwóch ugryzień, które okazały się śmiertelne ze względu na mały rozmiar myszy młodocianych. Jednakże, w przypadku wykorzystania myszy CD-1 w więcej niż jednym eksperymencie, spójność liczby ataków wzrosła.
Rycina 2B przedstawia liczbę ataków w poszczególnych dniach dla każdej kohorty eksperymentalnej w modelu chronicznej społecznej porażki (P0, A0, A1 i A2). Stwierdzono interakcję między dniem a kohortą (Rycina 2B, dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami: F(27, 234) = 3,83, p &lt; 0,0001), główny efekt dnia (F(6,288, 163,5) = 6,2, p &lt; 0,0001) oraz główny efekt kohorty (F(3, 26) = 3,8, p = 0,02). Testy post hoc wykazały różnice między kohortami w dniach 1, 2, 3 i 7 (testy post hoc Holm-Sidak: dzień 1, P0 vs. A2, p = 0,02; A1 vs. A2, p = 0,02; dzień 2, A1 vs. A2, p = 0,04; dzień 3, A0 vs. A1, p = 0,007; A1 vs. A2, p = 0,04; dzień 7, A0 vs. A1, p = 0,04). Wszystkie myszy CD-1 w eksperymentach P0 i A0 przestały atakować w ciągu ostatnich 3 dni. Myszy CD-1 wykorzystane w eksperymentach P0 i A0 zostały ponownie użyte w A1, w którym zaobserwowano stałą liczbę ataków (Rycina 2B), co wskazuje, że myszy CD-1 były bardziej podatne na agresję, jeśli wcześniej poddano je interakcjom fizycznym.
Z tego powodu, zgodnie z opisem w krokach 2.1 i 2.2, myszy CD-1 zostały przeselekcjonowane specjalnie pod kątem agresji wobec myszy w okresie dojrzewania oraz przygotowane poprzez kontakt z dorosłym samcem C57BL/6 w celu wywołania agresji wobec młodzieńczych myszy C57BL/6. Ponadto zastosowano AcSD, aby zwiększyć wiek z PND 21 do PND 25, nadal celując w wczesny okres dojrzewania.
W trakcie sesji AcSD myszy CD-1 zwiększyły liczbę ataków skierowanych przeciwko myszom młodzieńczym w sposób bardziej spójny, co przedstawiono na Rysunku 2D. W przeciwieństwie do paradygmatu chronicznej klęski społecznej nie stwierdzono istotnej interakcji między sesją a kohortą eksperymentalną (Rysunek 2D, dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami: F(35, 483) = 1.33, p = 0.1), odnotowano natomiast główny efekt sesji (F(5.644, 389.5) = 14.15, p &lt; 0.0001) oraz główny efekt kohorty (F(5, 69) = 7.91, p &lt; 0.0001); test post hoc Holma-Sidaka nie wykazał istotnych różnic między kohortami. Porównanie średniej liczby ataków między kohortami wykazało, że efekt ten był w głównej mierze spowodowany przez kohortę A7, w której odnotowano istotnie wyższą liczbę ataków (dane nie zostały przedstawione, jednoczynnikowa ANOVA F(5, 69) = 7.911, p &lt; 0.0001; testy post hoc Holma-Sidaka: A3 vs. A6, p = 0.04; A7 vs. A5, p = 0.002; A7 vs. A6, p &lt; 0.0001; A7 vs. A8, p = 0.0001).
Myszy młodociane doświadczyły większej liczby ataków ze strony uwrażliwionych myszy CD-1 podczas AcSD niż myszy młodociane poddane protokołowi chronicznej porażki społecznej (Rycina 2E, nieparowany test t z korektą Welcha, t = 15.40, df = 17.87, p &lt; 0.0001) z wykorzystaniem naiwnych (nieuwrażliwionych) myszy CD-1. Ataki nie były powtarzalne podczas protokołu chronicznej porażki społecznej, a w rzeczywistości kilka myszy eksperymentalnych nie zostało w ogóle zaatakowanych.
<img alt="Wyniki eksperymentu z pokonaniem społecznym młodzieńczych myszy; wykresy porównują ataki przewlekłe (CSDS) i ostre (AcSD)." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Porównanie liczby ataków na dobę w modelu przewlekłego stresu z pokonaniem społecznym oraz AcSD. (A) Oś czasu modelu przewlekłego stresu z pokonaniem społecznym. (B) Liczba ataków na dobę dla każdej kohorty eksperymentalnej (P0, P1, A1 i A2) podczas przewlekłego stresu z pokonaniem społecznym u młodzieńczych samców myszy C57BL/6 (dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami). (C) Oś czasu modelu przyspieszonego stresu z pokonaniem społecznym (AcSD). (D) Liczba ataków na dobę dla każdej kohorty eksperymentalnej (A3-A8) podczas AcSD u młodzieńczych samców myszy C57BL/6 (dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami). (E) Średnia liczba ataków była istotnie wyższa w przypadku AcSD (nie sparowany test t z korektą Welcha, ****p &lt; 0.0001). Wszystkie dane przedstawiono jako średnia ± SEM. Skróty: CSDS = przewlekły stres z pokonaniem społecznym; SIT = test interakcji społecznych; PND = dzień postnatalny; P0, A0-A8 = oznaczenia poszczególnych kohort eksperymentalnych. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig02large.jpg" target="_blank">Aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.</a>
Wzorzec ataków podczas sesji AcSD nie wpływa na fenotyp społeczny po 24 h 
Po poddaniu stresowi związanemu z porażką społeczną większość młodocianych myszy samców nie wykazała unikania społecznego podczas testu SIT (Rysunek 3B, chroniczna porażka społeczna: jednoczynnikowa analiza wariancji ANOVA F(2, 43) = 14,57, p &lt; 0,0001. F, AcSD: test Kruskala-Wallisa, H(2) = 72,35, p &lt; 0,0001). W obu modelach nie stwierdzono istotnych różnic w liczbie ataków pomiędzy myszami pokonanymi wykazującymi unikanie społeczne a tymi, które go nie wykazywały (Rysunek 3D, chroniczna porażka społeczna: dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami, F(9, 252) = 4,07, p = 0,21. H. AcSD: dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami, F(7, 511) = 1,32, p = 0,24). Jednakże odsetek myszy odpornych był wyższy po chronicznej porażce społecznej niż po ekspozycji na AcSD (Rysunek 3C,G, 70 % vs 55,26 %, test dwumianowy (jednostronny), p = 0,0047).
<img alt="Badanie pokonania społecznego u adolescentów; oś czasu eksperymentu, wykresy stosunku interakcji, wykresy kołowe." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rysunek 3: Porównanie wyników testu interakcji społecznych (SIT) po zastosowaniu stresu chronicznego pokonania społecznego oraz paradygmatu AcSD. (A) Oś czasu modelu stresu chronicznego pokonania społecznego. (B) Rozkład wyników SIT po stresie chronicznego pokonania społecznego w okresie adolescencji (jednoczynnikowa ANOVA). (C) Proporcja osobników odpornych/podatnych po stresie chronicznego pokonania społecznego w okresie adolescencji. (D) Liczba ataków otrzymanych w zależności od fenotypu podczas stresu chronicznego pokonania społecznego; nie stwierdzono istotnych różnic między osobnikami odpornymi a podatnymi (dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami). (E) Oś czasu modelu przyspieszonego stresu pokonania społecznego (AcSD). (F) Rozkład wyników SIT po AcSD w okresie adolescencji (test Kruskala-Wallisa). Rysunek zmodyfikowany na podstawie źródła57. (G) Proporcja osobników odpornych/podatnych po AcSD w okresie adolescencji. Rysunek zmodyfikowany na podstawie źródła57. (H) Liczba ataków otrzymanych w zależności od fenotypu podczas AcSD; brak różnic między osobnikami odpornymi a podatnymi (dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami). Rysunek zmodyfikowany na podstawie źródła59. **p &lt; 0,001, ****p &lt; 0,0001. Wszystkie dane przedstawiono jako średnia ± SEM. Skróty: PND = dzień postnatalny; Con = kontrola; Res = odporne; Sus = podatne. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig03large.jpg" target="_blank">Aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.</a>
AcSD można stosować u młodocianych samic myszy C57BL/6 
Ponieważ myszy C57BL/6 (samce i samice) w 25. dniu po urodzeniu (PND 25) nie osiągnęły jeszcze dojrzałości rozrodczej, uwrażliwione myszy CD-1 mogły wykazywać agresywne ataki wobec młodocianych samic, podobnie jak w przypadku młodocianych samców. Faza uwrażliwiania musiała jednak zostać wydłużona, aby osiągnąć stałą liczbę ataków (Rysunek 4A). Jak pokazano na Rysunku 4B, nie stwierdzono interakcji między dniem a kohortą w obrębie eksperymentów (Rysunek 4B, dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami: F(35,707) = 1.38, p = 0.07), stwierdzono główny efekt sesji (F(6.286, 634.9) = 16.1, p &lt; 0.0001) oraz główny efekt kohorty (F(5, 101) = 11.34, p &lt; 0.0001; testy post hoc Holm-Sidak: sesja 2 C4 vs C8, p = 0.03; sesja 6 C7 vs C4, p = 0.02; C7 vs C5, p = 0.02; sesja 7 C8 vs C3, p = 0.02; C8 vs C4, p = 0.045). Większość młodocianych samic myszy C57BL/6 poddanych AcSD była odporne na unikanie społeczne (Rysunek 4C, ANOVA Browna-Forsytha: F(2,113.4) = 27.2, p &lt; 0.0001), podobnie jak młodociane samce. Nie stwierdzono istotnej różnicy w liczbie ataków między myszami odpornymi a podatnymi (Rysunek 4E, dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami, interakcja sesja x fenotyp: F(7, 714) = 0.73, p = 0.64, główny efekt sesji F(6.375, 650.3) = 7.02, p &lt; 0.0001, brak głównego efektu fenotypu F(1, 102) = 0.4, p = 0.53).
<img alt="Badanie AcSD u dorastających samic z osią czasu, wykresem ataków w sesjach, analizą interakcji społecznych i wykresem kołowym." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66455/66455fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4: AcSD u dorastających myszy żeńskich. (A) Oś czasu eksperymentu. (B) Liczba ataków na dzień w trakcie eksperymentu podczas AcSD (dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami). (C) Rozkład wyników SIT po AcSD w okresie dojrzewania u myszy żeńskich (ANOVA Browna-Forsytha). (D) Proporcja osobników odpornych/podatnych po AcSD w okresie dojrzewania (po prawej). (E) Liczba ataków otrzymanych w zależności od fenotypu podczas AcSD; nie stwierdzono istotnych różnic między myszami odpornymi a podatnymi (dwuczynnikowa ANOVA z powtarzanymi pomiarami). Wszystkie dane przedstawiono jako średnia ± SEM. (C-E) Rysunki zostały zmodyfikowane na podstawie źródła59. Skróty: SIT = test interakcji społecznych; PND = dzień postnatalny; C3-C8 = oznaczenia poszczególnych kohort eksperymentalnych; Con = grupa kontrolna; Res = odporne; Sus = podatne. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/66455fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.</a>
Tabela uzupełniająca 1: Szablon arkusza oceny dla 1. dnia przesiewania z osobnikami dorosłymi. Skróty: CD-1 = ID myszy CD-1 poddanych przesiewaniu, Exp = ID eksperymentu, 3 min = czas trwania sesji przesiewowej dla dorosłych myszy C57BL/6, BL6 ID = ID dorosłych myszy C57BL/6 wykorzystanych do przesiewania, Lat 1 ADULTS = czas do pierwszego ataku myszy CD-1 na dorosłą mysz C57BL/6, # aggressions = liczba ataków wykonanych przez mysz CD-1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%201_RE.xlsx" target="_blank">Aby pobrać tę tabelę, kliknij tutaj.</a>
Tabela uzupełniająca 2: Szablon arkusza oceny dla przesiewu z udziałem osobników dorosłych i młodzieńczych. Skróty: Exp = ID eksperymentu, 1 min = czas trwania sesji przesiewowej dla dorosłych myszy C57BL/6, BL6 ID = ID dorosłych myszy C57BL/6 wykorzystanych w przesiewie, Lat 1 ADULTS = latencja pierwszego ataku myszy CD-1 na dorosłą mysz C57BL/6, # aggressions = liczba ataków wykonanych przez mysz CD-1, 5 min = czas trwania sesji przesiewowej dla młodzieńczych myszy C57BL/6, BL6 Ad = ID młodzieńczych myszy C57BL/6 wykorzystanych w przesiewie, Lat 1 Adolescents = latencja pierwszego ataku myszy CD-1 na młodzieńczą mysz C57BL/6, CD-1 = ID myszy CD-1 poddanych przesiewowi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%202_RE.xlsx" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>
Tabela uzupełniająca 3: Szablon arkusza oceny dla fazy primingu. Skróty: CD-1 = identyfikator myszy CD-1 użytej do primingu, Exp = identyfikator eksperymentu, 30 sec = czas trwania sesji primingu dla dorosłych myszy C57BL/6, BL6 ID = identyfikator dorosłej myszy C57BL/6 użytej do primingu, Lat 1 ADULTS = latencja pierwszego ataku myszy CD-1 na dorosłą mysz C57BL/6, # aggressions = liczba ataków wykonanych przez mysz CD-1, Min: 3 = czas trwania sesji primingu dla młodzieńczych myszy C57BL/6, BL6 Ad = identyfikator młodzieńczych myszy C57BL/6 użytych do primingu, Lat 1 Adolescents = latencja pierwszego ataku myszy CD-1 na młodzieńczą mysz C57BL/6, # mountings = liczba prób kopulacji (mountings) odniesionych przez młodzieńcze myszy C57BL/6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%203_RE.xlsx" target="_blank">Aby pobrać tę tabelę, kliknij tutaj.</a>
Tabela uzupełniająca 4: Szablon arkusza oceny dla harmonogramu stresu wywołanego porażką społeczną (20 myszy adolescentów). Skróty: CD1 = identyfikator myszy CD-1, E = eksperyment, H = wilgotność, 1 st = sesja 1, 2nd = sesja 2, BL6 adult = identyfikator dorosłych myszy C57BL/6 wykorzystanych do primingu, Weight = masa myszy adolescentów C57BL/6, # attacks = liczba ataków przeprowadzonych przez mysz CD-1, # wounds = liczba ran odniesionych przez myszy adolescenty C57BL/6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%204_RE.xlsx" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>
Tabela uzupełniająca 5: Przykład harmonogramu pokonania społecznego. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%205_RE.xlsx" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>
Tabela uzupełniająca 6: Szablon monitorowania obrażeń u dorosłych samców myszy C57BL/6. Skróty: 1st - # wounds = liczba ran odniesionych przez dorosłą mysz C57BL/6 w sesji 1, 2nd - # wounds = liczba ran odniesionych przez dorosłą mysz C57BL/6 w sesji 2, BL6 = identyfikator dorosłych myszy C57BL/6 wykorzystanych do primingu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%206_RE.xlsx" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>
Tabela uzupełniająca 7: Szablon harmonogramu dla grupy kontrolnej (10 adolescentnych myszy). Zasady losowania: Nie powtarzać tego samego osobnika tego samego gatunku; mysz nie może powtórnie przebywać po tej samej stronie boksu w tym samym dniu; myszy muszą być losowane z myszami z innych klatek niż ich klatka domowa; klatki domowe są ponumerowane; numery myszy są nadawane w zależności od numeru klatki domowej; grupy pokonane i kontrolne są pobierane losowo z klatek domowych. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%207_RE.xlsx" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>
Tabela uzupełniająca 8: Przykład harmonogramu grupy kontrolnej. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66455/Supplementary%20Table%208_RE.xlsx" target="_blank">Kliknij tutaj, aby pobrać tę tabelę.</a>

Opracowaliśmy model przyspieszonego stresu związanego z porażką społeczną dla dorastających myszy C57BL/6, który działa zarówno u samców, jak i samic i umożliwia ekspozycję podczas dyskretnych okresów dojrzewania. Ekspozycja na ten model indukuje unikanie społeczne, ale tylko w podgrupie pokonanych samców i samic myszy.

Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Social adversity in adolescence is prevalent and can negatively impact mental health trajectories. Modeling social stress in adolescent male and female ...

Badamy wpływ przeciwności społecznych nastolatków na rozwój neurologiczny i wyniki behawioralne, koncentrując się w szczególności na samcach i samicach myszy C57BL / 6. Modelujemy cierpienie społeczne za pomocą zaadaptowanej wersji paradygmatu chronicznej porażki społecznej. Nasz model, zwany przyspieszonym stresem porażki społecznej, jest dostosowany do jego stosowania u dorastających myszy C57BL/6.Protokół stresu porażki społecznej wymaga agresywnego zachowania od odpornej myszy. Istniejące badania są często przeprowadzane w połowie okresu dojrzewania lub brakuje im swoistości pod względem dnia ekspozycji po urodzeniu. Niektóre badania rozciągają się na wczesną dorosłość lub wykorzystują szczepy myszy, które nie są powszechnie stosowane.Wdrożenie modelu porażki społecznej u dorastających myszy C57BL/6 było wyzwaniem, ponieważ myszy dorosłe lub dorastające zazwyczaj nie atakują myszy płci męskiej lub żeńskiej we wczesnym okresie dojrzewania, a okres dojrzewania to krótki okres życia, który obejmuje dyskretne okna czasowe podatności. Model AcSD skutecznie indukuje unikanie społeczne 24 godziny później zarówno u mężczyzn, jak i kobiet. Jest wystarczająco krótki, aby umożliwić ekspozycję w dyskretnych okresach dojrzewania.Umożliwia segregację odpornych i podatnych myszy i jest pierwszym dostępnym modelem do badania stresu porażki społecznej u dorastających samic myszy C57BL / 6. Nasz model został wygenerowany do użytku u dorastających samców i samic myszy C57BL/6. Ten czterodniowy paradygmat stresu, z dwiema sesjami ataku fizycznego dziennie, wykorzystuje dorosłą mysz płci męskiej C57BL / 6 do przygotowania myszy CD-1 do agresywności, zapewniając, że mysz CD-1 łatwo zaatakuje eksperymentalnego samca lub samicę myszy.Na początek umieść dorastającą mysz C57BL/6 w tej samej klatce, co mysz z zagruntowaną płytą CD-1. Kiedy mysz CD-1 gryzie lub umieszcza zęby na jakiejkolwiek części ciała dorastającej myszy, zarejestruj to jako atak. Kiedy mysz C57BL/6 odsuwa obie tylne łapy od pozycji, w której początkowo się znajdowały, uważa się, że się odsuwa.Oddziel zwierzęta plastikową linijką, jeśli mysz CD-1 gryzie więcej niż raz z rzędu. Podobnie, rozdziel zwierzęta, jeśli mysz CD-1 gryzie i nie puszcza lub jeśli mysz C57BL/6 jest uwięziona w rogu lub przygwożdżona przez mysz CD-1 i nie może się ruszyć. Aby przebadać i zagruntować myszy CD-1, załóż parę rękawiczek do badania nitrylowego.Pierwszego dnia wprowadź dorosłego samca myszy C57BL/6 w wieku 65 lat lub starszego po urodzeniu jako intruza do klatki myszy CD-1 na trzy minuty. Zarejestruj opóźnienie do pierwszej agresji i liczbę wykonanych agresji. Od drugiego do ostatniego dnia badań przesiewowych i przygotowania wprowadź dorosłego samca C57BL/6 w wieku 65 lat po urodzeniu lub starszego na jedną minutę, a następnie zamień go na pięć minut z dorastającą myszą C57BL/6 w 25. dniu po urodzeniu.Jeśli torowanie ma na celu agresywność w stosunku do samic myszy C57BL/6, należy przeprowadzić badanie przesiewowe i gruntowanie na dorastających samicach myszy. Zarejestruj opóźnienie do pierwszej agresji, liczbę ataków i rany odniesione przez wszystkie myszy C57BL/6. Jeśli mysz CD-1 nie zbliża się do dorastających myszy C57BL/6 przez dwa dni podczas badania przesiewowego lub gruntowania, nie dołączaj myszy CD-1.Na początek użyj przegród ze szkła akrylowego, aby podzielić klatki regałów na dwie komory. Dodaj ściółkę z twardych wiórów drzewnych po obu stronach klatki, a następnie umieść bawełniany kwadrat z każdej strony. Zabezpiecz górę drutu za pomocą spinaczy do segregatorów.Następnie umieść pokrywę bez bawełny ochronnej na klatce. Umieść mysz CD-1 po jednej stronie przegrody. Oznacz klatkę znacznikiem umieszczonym na zewnątrz, aby ułatwić identyfikację każdej myszy.W przypadku sesji porażki ułóż harmonogram dwóch sesji dziennie przez cztery dni z innym agresorem na każdą sesję. Zważ młodocianą mysz C57BL/6. Następnie wprowadź samca myszy C57BL/6 w wieku 65 lat lub starszej po urodzeniu na 30 sekund do strony CD-1 klatki porażki.Zamień go na dorastającą mysz C57BL/6 w wieku od 24 do 28 dni po urodzeniu na 10-minutowy epizod porażki lub do momentu wystąpienia 10 ataków. Zarejestruj opóźnienie do pierwszej agresji, liczbę ataków i rany odniesione przez wszystkie myszy C57BL/6. Oddziel zwierzęta po każdym ataku plastikową linijką.Po każdej sesji porażki sprawdź, czy nie ma kontuzji i potraktuj je kremem przeciwbólowym. Zarejestruj liczbę urazów. Umieść pokonaną młodocianą mysz C57BL/6 w wolnej komorze obok jej agresora i zostaw ją tam do następnej sesji.Rozpocznij nową sesję z myszami eksperymentalnymi i agresorowymi, które nie zostały sparowane w poprzedniej sesji. Monitoruj obrażenia dorosłych samców myszy C57BL/6 używanych do gruntowania. W przypadku myszy kontrolnych umieść dwie myszy kontrolne w klatce, po jednej z każdej strony klatki.Umieść je w aparacie porażki społecznej w oddzielnym pomieszczeniu od myszy porażki społecznej. Dla każdej sesji występującej w grupie porażki należy obracać myszy w grupie kontrolnej tak, aby każda eksperymentalna mysz została wprowadzona do klatki nieznanej myszy C57BL/6. Myszy CD-1 atakowały myszy C57BL / 6 w spójny sposób w wielu kohortach.Dorastający mężczyźni otrzymali więcej ataków z użyciem myszy z CD-1 podczas przyspieszonej porażki społecznej niż dorastający mężczyźni narażeni na protokół przewlekłej porażki społecznej. Przygotowane myszy CD-1 wykazywały agresywne ataki w stosunku do dorastających samców i samic myszy C57BL / 6. Nie stwierdzono interakcji między dniem a kohortą w różnych eksperymentach.Porównując liczbę ataków otrzymanych przez odporne i podatne myszy doświadczające przyspieszonej porażki społecznej, nie stwierdzono różnicy, jeśli eksperymenty przeprowadza się na samcach czy samicach.

social-defeat-stress-model-for-adolescent-c57bl6-male-and-female-mice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Zadanie bariery labiryntu Y to test zachowania, który bada motywację do wydatkowania wysiłku na nagrodę. W tym miejscu omawiamy testowanie wielu dobrze zweryfikowanych przewlekłych stresorów, w tym przewlekłego kortykosteronu i stresu porażki społecznej z tym zachowaniem, a także nowego przewlekłego niedyskryminującego stresu porażki społecznej (CNSDS), który jest skuteczny u kobiet.

Przewlekły stres zmienia zachowania związane z wysiłkiem w zadaniu bariery Y-Maze u myszy

Test bezpieczeństwa społecznego pozwala na jednoczesną ocenę rozwoju unikania społecznego jako miary awersyjnego uczenia się warunkowego i zdolności do dyskryminacji w zakresie bezpieczeństwa społecznego, oba wykorzystywane do identyfikacji osób podatnych na stres i odpornych na stres w jednej grupie chronicznie społecznie pokonanych samców myszy.

Test bezpieczeństwa zagrożeń społecznych odkrywa fenotypy związane ze stresem psychospołecznym

Ten protokół szczegółowo opisuje, jak przeprowadzić 10-dniowy przewlekły stres społeczny u wcześnie dorastających samców myszy, aby doprowadzić do długotrwałego unikania społecznego w wieku dorosłym u ponad 60% myszy.

Przewlekły stres związany z porażką społeczną u myszy we wczesnym okresie dorastania

Poprzez integrację czterech codziennych stresorów społecznych, niniejsze badanie opisuje model wielokrotnego zintegrowanego stresu społecznego (MISS) dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J. Po dziesięciu dniach powtarzającej się ekspozycji na MISS myszy rozwinęły fenotypy podobne do depresji i lęku, zapewniając w ten sposób naturalny, oparty na etiologii model zwierzęcy do badania zaburzeń psychicznych u kobiet.

Wieloraki zintegrowany model stresu społecznego dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J

Labirynt Lashley III to zadanie polegające na nauce trasy, które nie opiera się na bodźcach awersyjnych ani wskazówkach wizualnych. Stanowi on zatem bardzo atrakcyjną opcję do oceny uczenia się i pamięci, zwłaszcza u starszych myszy lub w sytuacjach, w których istotnym czynnikiem jest stres.

Nauka trasy przy niskim poziomie stresu z wykorzystaniem labiryntu Lashley III u myszy

Procedura opisana w niniejszym protokole wykazuje, że podawanie testosteronu oraz powszechne przekonania na jego temat mogą być powiązane z bezpośrednio przeciwstawnymi zachowaniami społecznymi.

Połączenie endokrynologii behawioralnej i ekonomii eksperymentalnej: testosteron a podejmowanie decyzji społecznych

W niniejszym materiale opisujemy szczegółowy protokół badania socjalizacji u myszy z wykorzystaniem testu socjalizacji i preferencji nowości społecznej według Crawleya. Opisujemy zalety i możliwe zastosowania tej procedury, w tym istotne szczegóły ważne dla prawidłowej interpretacji wyników.

Ocena zachowań interakcji społecznych

Ulepszone testy neurotoksyczności in vitro pomogłyby w identyfikacji nowych związków neuroprotekcyjnych. Przedstawiono przydatność analizatora komórkowego opartego na impedancji w czasie rzeczywistym do określania cytotoksyczności i cytoprotekcji w liniach komórek neuronalnych oraz do wyznaczania udziału szlaków drugiego przekaźnika, uzyskując w ten sposób wgląd w mechanizm neuroprotekcji.

Analizator komórek oparty na impedancji w czasie rzeczywistym jako narzędzie do wyznaczania szlaków molekularnych zaangażowanych w neurotoksyczność i neuroprotekcję w linii komórek neuronalnych

Tutaj prezentujemy protokół do ilościowego określenia unikania osób zestresowanych. Ten paradygmat jest potężny, ale przyjazny dla użytkownika i może być wykorzystany do oceny wpływu genów i środowiska na jeden rodzaj interakcji społecznych u Drosophila melanogaster.

Prosty test do ilościowego oznaczania unikania społecznego u Drosophila melanogaster

Ten artykuł opisuje test behawioralny, który wykorzystuje popęd godowy samców u Drosophila melanogaster do badania motywacji. Korzystając z tej metody, naukowcy mogą wykorzystać zaawansowane techniki neurogenetyczne much, aby odkryć mechanizmy genetyczne, molekularne i komórkowe, które leżą u podstaw tej motywacji.

Pomiar i zmiana popędu godowego u samca Drosophila melanogaster

Poznaj model przyspieszonego stresu porażki społecznej dla dorastających myszy C57BL/6 obu płci. Ta metoda pozwala badać wpływ stresu na rozwój neuronalny i zachowanie, umożliwiając rozróżnienie osobników odpornych i wrażliwych.

Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Przeglądaj więcej filmów