Mysie modele ran i przygotowanie zawiesin jednokomórkowych

Nasze badania koncentrowały się głównie na wpływie pępowiny nośników zewnątrzkomórkowych pochodzących z MSC na gojenie się ran na poziomie pojedynczej komórki. Głównym celem tej części badania jest ustalenie stabilnego, ostrego modelu masy urazu o pełnej grubości, który jest kluczową podstawą naszych eksperymentów. Proces gojenia się ran jest niezwykle złożony i obejmuje zsynchronizowane współdziałanie różnych komórek w czasie i przestrzeni.

Pojedyncza komórka i sekwencjonowanie stały się najnowszą metodą badania pomysłowości komórkowej i przewidywania różnicowania komórek i trajektorii rozwojowych podczas gojenia kości. Uzyskanie wysokiej jakości zawiesiny pojedynczej komórki ze zniekształconych tkanek jest kluczem do tych badań. Nasz protokół tworzy bardziej stabilny, pełny model myszy z urazami, unikając problemów z cyklem włosowym i napięciem bocznym, a także zapobiega wpływowi drapania myszy i naturalnej aktywności na wyniki.

Dodatkowo używamy mieszanych enzymów do efektywnej dysocjacji tkanek, uzyskując wysokiej jakości zawiesiny jednokomórkowe. Na początek losowo przypisz myszy do grup kontrolnych i eksperymentalnych i umieść je w określonym obiekcie dla zwierząt wolnych od patogenów. Zapewnij myszom nieograniczony dostęp do standardowego pożywienia i wody z kranu w autoklawie.

Delikatnie zabezpiecz mysz w pozycji leżącej i oczyść brzuch wacikami nasączonymi alkoholem. Po znieczuleniu myszy nałóż krem do depilacji na plecy i odczekaj dwie minuty. Delikatnie zetrzyj krem wilgotną gazą, aby uniknąć uszkodzenia skóry.

Następnie przetrzyj skórę wysuszoną sterylną gazą. Ułóż stempel do biopsji skóry w autoklawie, nożyczki, kleszcze i świeżą szmatkę chirurgiczną na sterylnej platformie. Umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej i zdezynfekuj skórę grzbietową trzema naprzemiennymi wacikami Betadine i 70% alkoholu.

Zanurz stempel w atramencie i zrób znak w górnej środkowej części grzbietu myszy. Za pomocą nożyczek chirurgicznych ostrożnie wytnij całą warstwę skóry pleców wzdłuż okrągłego znaku, całkowicie odsłaniając warstwę mięśniową. Pozostaw ranę otwartą bez opatrunku, pozwalając jej naturalnie utworzyć strup.

Podawać 0,1 mililitra 10% chlorowodorku buprenorfiny podskórnie w pobliżu rany. Umieść mysz z powrotem w indywidualnej klatce w pozycji leżącej. Po znieczuleniu obserwuj i fotografuj ranę myszy co dwa dni, aby zmierzyć rozmiar rany.

Podskórnie wstrzyknij 100 mikrogramów ludzkiego egzosomu mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących z ludzkiej pępowiny wokół miejsca nacięcia znieczulonej myszy z grupy leczonej. Wstrzyknąć 200 mikrolitrów PBS wokół miejsca nacięcia myszy z grupy kontrolnej. Umieszczenie ran po obu stronach myszy spowodowało zauważalne różnice w obszarze rany ze względu na elastyczność skóry myszy.

Grupa leczona egzosomami pochodzącymi z mezenchymalnych komórek macierzystych ludzkiej pępowiny wykazała szybsze gojenie w porównaniu z grupą kontrolną. Całkowite gojenie nastąpiło szybciej w modelu stemplowym niż w grupie zszytego metalowego pierścienia.