Name: Stabilizacja osteotomii kości udowej z mocowaniem płytki w Ambystoma mexicanum (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Poznaj protokół osteotomii kości udowej z mocowaniem płytki w aksolotlu Ambystoma mexicanum. Ta metoda umożliwia badanie procesów gojenia złamań i regeneracji kości u płazów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Sabine Stumpp za doskonałe wsparcie techniczne oraz Lidii Grösser za pomoc w operacjach. Badania zostały sfinansowane przez Austriacki Fundusz Naukowy [stypendium Hertha Firnberg nr T-1219], ERC [Advanced Grant, 742046 RegGeneMems], DFG [CRC 1444].

Następująca procedura została przeprowadzona za zgodą Magistratu Wiednia (GZ: MA 58-65248-2021-26). 5-8 lat, ≥ 20 cm długości od pyska do końca ogona (od pyska do końca ogona) Aksolotle (Ambystoma mexicanum) były używane do operacji złamań i amputacji. Do operacji wykorzystywano zarówno mężczyzn, jak i kobiety. Aksolotle zostały wyhodowane w Instytucie Badawczym Patologii Molekularnej. Ból i ryzyko infekcji były kontrolowane za pomocą odpowiednich leków przeciwbólowych i antybiotyków, aby zapewnić pomyślny wynik. Odczynniki i sprzęt używany do badania są wymienione w Tabeli Materiałów.
1. Przygotowanie zwierząt
<ol>
	<li>Kąpać zwierzę w 0,03% roztworze benzokainy przez około 15-20 minut, aż do osiągnięcia pełnej sedacji i braku odruchowych ruchów po dotknięciu kończyny pęsetą.</li>
	<li>Ułóż zwierzę brzuszną stroną do dołu na mokrych ręcznikach papierowych nasączonych 0,03% roztworem benzokainy i przykryj je ręcznikami papierowymi nasączonymi benzokainą. Skóra zwierząt wodnych, takich jak aksolotle, jest wrażliwa na wysuszenie, dlatego konieczne jest pokrycie powierzchni ciała, aby zapobiec odwodnieniu i zapewnić oddychanie skórne (skórne).</li>
	<li>Rozciągnij kończynę tylną, która ma być operowana za pomocą kleszczy pierścieniowych. Nie stosuj odczynników dezynfekujących, takich jak etanol, ponieważ skóra aksolotla jest wrażliwa na chemikalia i łatwo ulega podrażnieniom. Zamiast tego należy użyć 0,7x PBS (A-PBS) z 50 U/ml penicyliny i 20 μg/ml streptomycyny do czyszczenia kończyny, a później do irygacji kości po piłowaniu. 
	UWAGA: Infekcja na ogół nie stanowi problemu w przypadku operacji wykonywanych na aksolotlach. Jednak ze względu na wodny charakter tych zwierząt i szwy umieszczone na powierzchni skóry, zalecamy stosowanie antybiotyków, aby zapobiec zanieczyszczeniu miejsca operowanego.</li>
</ol>
2. Chirurgia
UWAGA: Wysterylizuj wszystkie narzędzia chirurgiczne. Do tego celu odpowiednie są popularne metody sterylizacji, takie jak sterylizacja termiczna, autoklawowanie i mycie w 70% etanolu, a następnie dokładne usunięcie resztek alkoholu. W przypadku pracy na wielu zwierzętach sterylizuj narzędzia pomiędzy nimi za pomocą sterylizatora z gorącymi kulkami lub 70% etanolu.
<ol>
	<li>Wykonaj boczne nacięcie podłużne (1,5-2 cm) skalpelem nad kością udową obejmującą całe udo w górnej kończynie tylnej. W tym celu należy wykonać badanie dotykowe kości przed przecięciem skóry.</li>
	<li>Ostrożnie przemieszcz mięśnie i nerwy z miejsca operacji bez cięcia. Użyj wygiętych kleszczy, aby zrobić to skutecznie.</li>
	<li>Delikatnie umieść zgięte kleszcze pod kością udową, aby odsłonić ją do operacji.</li>
	<li>Umieść sztywną płytkę stabilizującą 7,75 mm z 4 otworami wraz z trzonem kości udowej, unikając dotykania stawów, i zabezpiecz ją w wyrównanej pozycji za pomocą kleszczy.</li>
	<li>Użyj czterech tytanowych 2 mm, aby przymocować kość do płytki. 
	UWAGA: użyte w tym protokole mają złożoną konstrukcję i składają się z 4 części: części głównej (zostanie wkręcona w kość), łba (umożliwia wykręcenie i płytki za pomocą klucza kwadratowego), węższej szyjki (używanej jako punkt złamania po dokręceniu w kości) i uchwytu (używanej do mocowania do śrubokręta i urządzenia prowadzącego piłę).</li>
	<li>Ważna jest kolejność mocowania. Zacznij najpierw od wewnętrznych, a następnie dwóch zewnętrznych, aby upewnić się, że płytka jest wyrównana z osią kości. Użyj wiertarki ręcznej, aby wykonać pierwszy otwór w kości w celu łatwego wkręcenia, a następnie wkręcenia 1.. Wywierć środek obwodu kości, aby uniknąć cieńszej kości po jednej stronie, co może spowodować samoistne złamanie kości. Podczas wiercenia należy stosować nawadnianie 0,7x PBS + 1% Pen/Strep. Nie odłamuj uchwytu 1st (opcjonalnie: 1st i 2nd) ().</li>
	<li>Nałóż przyrząd prowadzący piłę na 1(opcjonalnie: 1i 2) () i wyrównaj go z kością i płytką. 
	UWAGA: W tym protokole płyta,, prowadnica piły i piła są dostarczane przez tego samego producenta i zoptymalizowane tak, aby pasowały do siebie. Prowadnica piły może być dostępna w różnych rozmiarach, aby była kompatybilna z różnymi płytami i rozmiarami pił.</li>
	<li>Użyj prowadnicy piły, aby wywiercić i włożyć resztę. Upewnij się, że płytka jest wyrównana z kością. Oderwij uchwyty.</li>
	<li>Umieść kawałek folii z tworzywa sztucznego (6-7 mm na 4-5 cm), wysterylizowanej przez przetarcie 70% etanolem, a następnie autoklawizowanej lub sterylizowanej termicznie (140 °C przez 4 godziny), pod kością udową, aby zapobiec uszkodzeniu tkanek miękkich podczas procesu osteotomii. 
	UWAGA: W tym celu można użyć kawałka folii z tworzywa sztucznego, odciąć worek do sterylizacji termicznej.</li>
	<li>Umieść piłę drucianą Gigly między kością a folią ochronną.</li>
	<li>Wytnij kość za pomocą piły linowej Gigly 0,66 mm, tworząc pojedyncze cięcie o średnicy 0,7 mm w kości udowej. Stosuj ciągłe nawadnianie 0,7x PBS + 1% Pen/Strep podczas piłowania, aby zminimalizować uszkodzenia tkanek i tarcie.</li>
	<li>Wyjmij piłę i prowadnicę piły i użyj śrubokręta, aby odłamać uchwyty od.</li>
	<li>Usuń folię ochronną i przepłucz miejsce operacji 0,7x PBS + 1% Pen/Strep.</li>
	<li>Przykryj górną część płytki i sterylnym woskiem pszczelim, aby chronić skórę i mięśnie przed podrażnieniem przez krawędzie.</li>
	<li>Umieść mięśnie i skórę na wosku pszczelim z kości.</li>
	<li>Zamknij miejsce nacięcia szwem syntetycznym 7,0 (polipropylen/polietylen) za pomocą prostych przerywanych szwów. Nici syntetyczne stosuje się w celu zminimalizowania zanieczyszczenia bakteriami i grzybami przenoszonymi przez wodę.</li>
</ol>
3. Postępowanie pooperacyjne
<ol>
	<li>Aby obudzić zwierzę, umieść je w zbiorniku ze świeżą sztuczną wodą w stawie, uzupełnioną 50 U/ml penicyliny, 20 μg/ml streptomycyny i przeciwbólowym butorfanolem (0,5 mg/l wody).</li>
	<li>Obserwuj, jak zwierzę zaczyna poruszać skrzelami, stawiać kroki i pływać - zwykle w ciągu 1 godziny po operacji.</li>
	<li>Trzymaj zwierzę przez 3 dni w sztucznej wodzie ze stawem z 50 μg/ml penicyliny i 20 μg/ml streptomycyny przed powrotem do zbiornika. Aby zapewnić działanie przeciwbólowe, dodaj butorfanol (0,5 mg/l wody).</li>
	<li>Upewnij się, że szwy pozostają na swoim miejscu i następuje prawidłowe gojenie się ran.</li>
</ol>

Using Plate Fixation to Study Bone Healing and Limb Regeneration in Axolotls

<ol><li>Amamoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+axolotls+can+regenerate+original+neuronal+diversity+in+response+to+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Adult axolotls can regenerate original neuronal diversity in response to brain injury.</a> Elife. 5, 13998(2016).</li>
<li>Butler, E. G., Ward, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+the+spinal+cord+following+ablation+in+urodele+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of the spinal cord following ablation in urodele larvae.</a> J Exp Zool. 160 (1), 47-65 (1965).</li>
<li>Echeverri, K., Tanaka, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectoderm+to+mesoderm+lineage+switching+during+axolotl+tail+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ectoderm to mesoderm lineage switching during axolotl tail regeneration.</a> Science. 298 (5600), 1993-1996 (2002).</li>
<li>Vargas-Gonzalez, A., Prado-Zayago, E., Leon-Olea, M., Guarner-Lans, V., Cano-Martinez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+regeneration+in+Ambystoma+mexicanum+after+surgical+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Cardiol+Mex%22%5BJournal%5D)">Myocardial regeneration in Ambystoma mexicanum after surgical injury.</a> Arch Cardiol Mex. 75 (3), S321-S329 (2005).</li>
<li>Vieira, W. A., Wells, K. M., McCusker, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+to+the+axolotl+model+for+regeneration+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Gerontology%22%5BJournal%5D)">Advancements to the axolotl model for regeneration and aging.</a> Gerontology. 66 (3), 212-222 (2020).</li>
<li>Song, F., Li, B., Stocum, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibians+as+research+models+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Amphibians as research models for regenerative medicine.</a> Organogenesis. 6 (3), 141-150 (2010).</li>
<li>McCusker, C., Bryant, S. V., Gardiner, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+axolotl+limb+blastema%3A+Cellular+and+molecular+mechanisms+driving+blastema+formation+and+limb+regeneration+in+tetrapods%5BTitle%5D)+AND+%22Regeneration+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">The axolotl limb blastema: Cellular and molecular mechanisms driving blastema formation and limb regeneration in tetrapods.</a> Regeneration (Oxf). 2 (2), 54-71 (2015).</li>
<li>Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fracture+healing%3A+Mechanisms+and+interventions%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Fracture healing: Mechanisms and interventions).</a> Nat Rev Rheumatol. 11 (1), 45-54 (2015).</li>
<li>Polikarpova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+specialist+in+regeneration-the+Axolotl-a+suitable+model+to+study+bone+healing%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">The specialist in regeneration-the Axolotl-a suitable model to study bone healing.</a> NPJ Regen Med. 7 (1), 35(2022).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+axolotl+fibula+as+a+model+for+the+induction+of+regeneration+across+large+segment+defects+in+long+bones+of+the+extremities%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The axolotl fibula as a model for the induction of regeneration across large segment defects in long bones of the extremities.</a> PLoS One. 10 (6), e0130819(2015).</li>
<li>Cosden-Decker, R. S., Bickett, M. M., Lattermann, C., MacLeod, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+analysis+of+intra-articular+interzone+tissue+in+axolotl+salamanders%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Structural and functional analysis of intra-articular interzone tissue in axolotl salamanders.</a> Osteoarthritis Cartilage. 20 (11), 1347-1356 (2012).</li>
<li>Williams, J. N., Li, Y., Valiya Kambrath, A., Sankar, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+generation+of+closed+femoral+fractures+in+mice%3A+A+model+to+study+bone+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The generation of closed femoral fractures in mice: A model to study bone healing.</a> J Vis Exp. (138), e58122(2018).</li>
<li>Cheung, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+externally+fixed+femoral+fracture+model+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">An externally fixed femoral fracture model for mice.</a> J Orthop Res. 21 (4), 685-690 (2003).</li>
<li>Jiang, S., Knapstein, P., Donat, A., Tsitsilonis, S., Keller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+protocol+for+a+standardized%2C+femoral+osteotomy+model+to+study+fracture+healing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An optimized protocol for a standardized, femoral osteotomy model to study fracture healing in mice.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100798(2021).</li>
<li>Matthys, R., Perren, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+fixator+for+use+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">Internal fixator for use in the mouse.</a> Injury. 40, Suppl 4 S103-S109 (2009).</li>
<li>Manassero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+segmental+femoral+critical-size+defect+model+in+mice+stabilized+by+plate+osteosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishment of a segmental femoral critical-size defect model in mice stabilized by plate osteosynthesis.</a> J Vis Exp. (116), e52940(2016).</li>
<li>Gunderson, Z. J., Campbell, Z. R., McKinley, T. O., Natoli, R. M., Kacena, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+review+of+mouse+diaphyseal+femur+fracture+models%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">A comprehensive review of mouse diaphyseal femur fracture models.</a> Injury. 51 (7), 1439-1447 (2020).</li>
<li>Riquelme-Guzman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postembryonic+development+and+aging+of+the+appendicular+skeleton+in+Ambystoma+mexicanum%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Postembryonic development and aging of the appendicular skeleton in Ambystoma mexicanum.</a> Dev Dyn. 251 (6), 1015-1034 (2022).</li>
<li>Gentz, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medicine+and+surgery+of+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Medicine and surgery of amphibians.</a> ILAR J. 48 (3), 255-259 (2007).</li>
<li>Lang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+I-based+scaffolds+negatively+impact+fracture+healing+in+a+mouse-osteotomy-model+although+used+routinely+in+research+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Collagen I-based scaffolds negatively impact fracture healing in a mouse-osteotomy-model although used routinely in research and clinical application.</a> Acta Biomater. 86, 171-184 (2019).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów.

Obecnie opisana metoda stabilizacji płytki udowej i osteotomii pozwala na jej zastosowanie u zwierząt wodnych, takich jak Ambystoma mexicanum (aksolotl). Ta metoda chirurgiczna została niedawno wykorzystana do porównania gojenia się złamań i regeneracji kończyn u aksolotli z gojeniem złamań u myszy9. Podobnie jak u myszy, 4-otworową płytkę stabilizującą można przymocować do kości za pomocą samołamiących się, a piła Gigly może być użyta do stworzenia złamania o jednolitym rozmiarze15. Mocowanie płytki ułatwia zachowanie wielkości szczeliny i zapewnia wyrównanie fragmentów kości. Metoda analgezji została również zoptymalizowana poprzez wdrożenie kąpieli butorfanolowych, ponieważ jest ona mniej inwazyjna (w porównaniu z zastrzykami z buprenorfiny), co nie wpływa na gojenie się kości (jak w przypadku karprofenu). Ponieważ jednak niewiele wiadomo na temat leczenia bólu u w ogóle, a bólu pooperacyjnego w szczególności, można zasugerować zastosowanie prewencyjnego leczenia przeciwbólowego jako dalsze udoskonalenie procedury. W tym przypadku można uznać za adaptację protokołów stosowanych u innych gatunków19. W celu dalszej obiektywnej oceny stanu zdrowia zwierzęcia po operacji zaleca się wdrożenie i stosowanie specjalnych arkuszy punktacji w celu określenia interwencyjnych i punktów końcowych dla ludzi.
W przeciwieństwie do metody opisanej dla myszy16, folia z tworzywa sztucznego jest używana do ochrony tkanki leżącej pod spodem przed osteotomią. Ponadto, ze względu na wodny charakter i mniej wyraźną muskulaturę kończyn, aksolotle wymagały plastra ochronnego z wosku pszczelego na wierzchu płytki i, a także należało zwrócić szczególną uwagę na stosowanie syntetycznych szwów skórnych, ponieważ biofilmy zbierano na wchłanialnych szwach (na bazie poliglaktyny 910). Penicylina-streptomycyna jest stosowana w ramach leczenia pooperacyjnego w celu zapobiegania zanieczyszczeniu ran i szwów.
Metoda została zoptymalizowana dla 5-8 letnich aksolotle o długości od pyska do ogona o długości ≥20 cm, a tym samym ograniczona do dużych, dość starych zwierząt. Może to być również przyczyną wolniejszego gojenia się kości niż u ssaków ze względu na ogólnie niższe tempo proliferacji komórek u tak starych zwierząt. Może to być jednak korzystne, jeśli trzeba rozwiązać drobniejsze etapy gojenia kości20. Kolejną ważną cechą metody jest komercyjny charakter głównych materiałów eksploatacyjnych użytych w protokole: płytki mocującej, i piły Gigly. Ze względu na zoptymalizowaną kompatybilność tych urządzeń powstają ubytki kostne o niezawodnych rozmiarach i odległości od końców kości. W obecnym protokole opisano zastosowanie tytanowej płytki metalowej na kościach aksolotl. Dla myszy opracowano płytki z tworzywa sztucznego PEEK, aby ułatwić obrazowanie mikrotomografiąpróbek17. Płytki PEEK w aksolotlach również zostały przetestowane z podobnymi wynikami; Można je jednak stosować tylko u większych zwierząt ze względu na nieco większą objętość plastikowych płytek stabilizujących w porównaniu z płytkami metalowymi.
W tym badaniu wykorzystaliśmy zwierzęta w wieku 5-8 lat i zaobserwowaliśmy niepowodzenie fiksacji w 23,5% wszystkich operacji, z wyższymi wskaźnikami niepowodzeń u młodszych zwierząt. Dlatego zalecamy wykorzystanie starszych zwierząt o wyższym stopniu kostnienia kości. Wskaźnik niepowodzeń był niezależny od płci; Tak więc obie płcie są jednakowo wykwalifikowane. W przypadku planowania wielkości próby należy obliczyć około 20% straty próbki z powodu niekorzystnego wyniku. Dokładna liczba zwierząt zależy od planu doświadczenia i liczby warunków, które mają być analizowane; Jednak zalecana minimalna liczba zwierząt w grupie powinna wynosić 5+20% = 6 zwierząt.
Ogólnie rzecz biorąc, metoda ta daje znaczną poprawę w porównaniu z poprzednio stosowanymi operacjami niefiksowanymi lub z sąsiednimi kośćmi. Co więcej, za pomocą tej metody możliwe jest badanie dużych aksolotlów, które mają kości podobne pod względem wielkości i dojrzałości do tych stosowanych w badaniach na myszach. Jest to ważne, ponieważ mikrotomografia komputerowa jest możliwa tylko u dużych aksolotli ze względu na stopień kostnienia.
Metoda ta stanowi istotny postęp w tej dziedzinie, ponieważ pozwala na bezpośrednie porównanie regeneracji kończyn aksolotla z gojeniem złamań, z kontrolowaną wielkością szczeliny i prawidłowym ustawieniem kości (w 76,5% wykonanych operacji). Co więcej, dzięki płytkom mocującym z tworzywa PEEK, mikrotomografia komputerowa i promieniowanie rentgenowskie mogą być używane do oceny procesu gojenia kości. Wreszcie, opisana tutaj operacja może być dostosowana do innych wodnych, takich jak traszki i żaby, co dodatkowo ułatwia międzygatunkowe badania gojenia złamań kości.

Aksolotl (Ambystoma mexicanum) jest ważnym modelem regeneracji narządów, w tym ogona, rdzenia kręgowego, mózgu, serca, skrzeli i kończyn1,2,3,4,5. Szczegółowe badania nad regeneracją kończyn aksolotla ujawniły mechanizmy odróżnicowania komórek i tworzenia się puli komórek macierzystych, blastemy, w miejscu amputacji. Ze względu na zdolność komórek blastemy do rekonstrukcji wszystkich brakujących części kończyn, w tym wzorzystego szkieletu6,7, aksolotl wydaje się być atrakcyjnym organizmem modelowym do badań nad gojeniem kości. Ostatnio kilka badań skupiło się bardziej na biologii kości u aksolotlów, opisując morfologię szkieletu, skład komórkowy i dynamikę kostnienia.
Stwierdzono u ssaków, że proces gojenia kości w długich kościach odbywa się poprzez kostnienie śródchrzęstne i składa się z kilku etapów: krwiaka, ziarniny tkanki i tworzenia miękkiego kalusa, kostnienia kalusa w twardy kalus i tkaną kość oraz przebudowy kości8. Niedawne badania wykazały, że podobne etapy można zaobserwować w procesie gojenia się kości aksolotla 9.
Do tej pory złamania aksolotla były badane w systemie niestabilizowanym, w którym kość jest po prostu cięta nożyczkami do irydektomii. Duże złamania powstały w zeugopodzie, gdzie osteotomia wykonywana jest na jednej z kości, podczas gdy druga służy jako podpora10,11. W przeciwieństwie do tego, złamania są rutynowo badane u ssaków, w tym szczurów i myszy, przy użyciu niezawodnych systemów mocowania, takich jak szpilka śródszpikowa i płytki wyrównujące kości, w celu kontrolowania wielkości złamań i zapewnienia wyrównania kości.
Tak więc, metoda ma na celu zapewnienie stabilnego i równomiernego mocowania kości udowej aksolotla przed osteotomią. Aby badania aksolotla były bardziej porównywalne ze ssakami, w tym myszami i ludźmi, pin12, zewnętrzny stabilizator płytki13,14, oraz wewnętrzna płytka wyrównująca kości15,16,17fiksacji. Wykazano, że ten ostatni zapewnia prawidłowe utrwalenie kości i pozwala na stworzenie szczeliny o określonej wielkości za pomocą jednego lub dwóch cięć piłą Gigly o określonej średnicy. Ponieważ aksolotle reprezentują wodne larwy Ambystoma mexicanum, zewnętrzny stabilizator mógł spowodować powikłania pooperacyjne z powodu otwartej rany i kontaktu z wodą. Ponieważ aksolotle nie rozwijają wtórnych centrów kostnienia nawet na bardzo późnym etapie rozwoju (20 years old18), a zatem standardowy gwóźdź śródszpikowy stosowany u myszy może nie być zabezpieczony przed nakłuciem nasad, podjęto decyzję o zastosowaniu metody wewnętrznego mocowania płytki do dużych aksolotlów. U dużych aksolotli rozmiar kości udowej i stopień kostnienia przypominają dorosłej myszy, co pozwala na osteotomię środkowej części trzonu z fiksacją płytki tytanowej1.
Rozmiar szczeliny między złamaniami w dużej mierze decyduje o dynamice gojenia i wyniku. Na przykład u myszy złamania stabilizowane o średnicy 0,25 mm goją się głównie przez kostnienie błoniaste ze względu na ich mały rozmiar i sztywną stabilizację; złamanie o średnicy 0,7 mm goi się przez kostnienie śródchrzęstne, z utworzeniem chrzęstnego kalusa wokół złamania; Duże defekty, takie jak defekty o krytycznym rozmiarze 3,5 mm, nie goją się całkowicie i dlatego są wykorzystywane do modelowania złamania kości bez zrostu16. W tym badaniu ustalono protokół mocowania płytki kości udowej aksolotla przed osteotomią na przykładzie szczeliny złamania 0,7 mm, a ostatecznym celem było porównanie gojenia kości aksolotla z gojeniem się kości mouse9.
Po osteotomii, złamania uległy procesowi kostnienia śródchrzęstnego, aczkolwiek wolniejszemu niż u myszy, prawdopodobnie z powodu wodnego trybu życia aksolotli i wolniejszego tempa podziałów komórkowych. W przedstawionej tutaj metodzie pokazano osteotomię szczeliny 0,7 mm z mocowaniem sztywnej płytki; Potencjalnie możliwe są jednak inne rozmiary szczelin i stabilizatory półelastyczne, a także płyty z różnych materiałów. Ogólnie rzecz biorąc, przedstawiona tutaj metoda może być stosowana do standaryzowanego mocowania kości i będzie pomocna w badaniach porównujących regenerację kończyn aksolotla z gojeniem kości lub badaniu gojenia kości u aksolotli w różnych warunkach, aby zapewnić standaryzowane unieruchomienie złamań.

<table><tbody><tr><td>Piła druciana Gigly 0,66 mm&nbsp;</td><td>RISystem</td><td>RIS.590.120</td><td></td></tr><tr><td>7.0 Szew Optilenowy&nbsp;</td><td>Braun</td><td>C3090538</td><td></td></tr><tr><td>Benzokaina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1501</td><td>rozcieńczyć do 0,03%&nbsp; przed użyciem</td></tr><tr><td>Butorfanol (Butomidor 10 mg/mL)</td><td>Richter Pharma AG -</td><td></td> <td>rozcieńczyć do 0,5 mg/L&nbsp; przed użyciem</td></tr><tr><td>Wiertło 0,30 mm</td><td>RISystem</td><td>RIS.590.200</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Kleszcze - Standard/Inox</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Wiertarka ręczna</td><td>RISystem</td><td>RIS.390.130</td><td>lepiej mieć co najmniej 3 sztuki</td></tr><tr><td>Analizator danych Micro CT</td><td>Bruker, Billerica, MA, USA</td><td>Oprogramowanie</td><td></td>SkyScan NRecon</tr><tr><td>Skaner próbek Micro CT</td><td>Bruker, Billerica, MA, USA</td><td>SkyScan 1172&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki do tęczówki Moria MC31b - gładkie, zakrzywione, 10 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11373-12FST</td><td>2 sztuki</td></tr><tr><td>MouseFix Drill-& Prowadnica piły 1,75 mm, sztywna</td><td>RISystem</td><td>RIS.301.102</td><td></td></tr><tr><td>MouseFix płytka 4-otworowa, sztywna</td><td>RISystem</td><td>RIS.401.110</td><td></td></tr><tr><td>Śruba</td><td>RISystem</td><td>RIS.401.100</td><td>potrzebna 4 na kość</td></tr><tr><td>Kleszcze wąskowzoru</td><td>VWR</td><td>FSCI11002-12</td><td></td></tr><tr><td>penicylina/streptomycyna</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze pierścieniowe</td><td>Fine Science Tools</td><td>11103-09</td><td></td></tr><tr><td>skalpel #15</td><td>B Braun, Thermo Fischer Scientific</td><td>5518032</td><td></td></tr><tr><td>Klucz nasadowy kwadratowy 0,50 mm</td><td>RISystem</td><td>RIS.590.111</td><td></td></tr><tr><td>Sterylny wosk kostny, 2,5 g</td><td>Ethicon, Johnson & </td> Cienkie nożyczki studenckie Johnson <td>W810</td><td></td></tr><tr><td>- proste/11.5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>91460-11</td><td></td></tr></tbody></table>

stabilizacja osteotomii kości udowej z mocowaniem płytki w ambystoma mexicanum

Stabilizing a Femur Osteotomy with a Plate Fixation in Ambystoma mexicanum

Aksolotl (Ambystoma mexicanum) jest obiecującym organizmem modelowym dla medycyny regeneracyjnej ze względu na jego niezwykłą zdolność do regeneracji utraconych lub uszkodzonych organów, w tym kończyn, mózgu, serca, ogona i innych. Badania nad aksolotlem rzuciły światło na szlaki komórkowe i molekularne rządzące aktywacją progenitorów i odbudową tkanek po urazie. Wiedza ta może być zastosowana w celu ułatwienia leczenia urazów niezdolnych do regeneracji, takich jak brak zrostu kostnego. W obecnym protokole opisano stabilizację osteotomii kości udowej za pomocą wewnętrznego systemu mocowania płytki. Zabieg został dostosowany do stosowania u zwierząt wodnych (aksolotl, Ambystoma mexicanum). Zastosowano aksolotle o długości od pyska do ogona o długości od pyska do ogona o długości ≥20 cm z całkowicie skostniałymi, porównywalnymi wielkością mięśni udowych, a szczególną uwagę zwrócono na ułożenie i stabilizację płytki, a także na opiekę pooperacyjną. Ta technika chirurgiczna pozwala na standaryzowane i ustabilizowane unieruchomienie kości i może być przydatna do bezpośredniego porównania z regeneracją kończyn aksolotla i analogicznymi badaniami gojenia się kości u i ssaków.

Opisana tutaj procedura chirurgiczna (Rysunek 1) trwa od 20 min do 30 min i wymaga udziału chirurga oraz asystenta. Opcjonalnie można użyć binokularowego mikroskopu sekcyjnego lub systemu powiększającego.
<img alt="Schemat stabilizacji złamania kości; proces obejmuje etapy wiercenia, wkręcania, osadzania klatki stabilizującej oraz testowania." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66648/66648fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rysunek 1Schematy procedury chirurgicznej i układu eksperymentalnego. (AKość udową odsłania się poprzez rozcięcie skóry i odsunięcie mięśni od pola operacyjnego.B) Płytka tytanowa zostaje wyrównana względem kości udowej. (C) 1st Otwór wewnętrzny wykonuje się za pomocą wiertła ręcznego.D) Śrubę umieszcza się w 1st otwór. (E) Prowadnicę piły i wiertła wprowadza się i mocuje do uchwytu 1Niestety, nie dostarczyłeś tekstu źródłowego do przetłumaczenia. Prześlij proszę treść, którą chcesz przełożyć na język polski. śruba. (FPozostałe śruby mocuje się w wskazanej kolejności.G) Prowadnice piły i wiertła są ostrożnie usuwane, a łebki śrub zostają odłamane podczas obracania śrubokrętem ze względu na większą sztywność kości w porównaniu z szyjką śruby. (H) Pod kością umieszczono folię ochronną oraz piłę Gigli. (IOsteotomia jest wykonywana przy stałym nawadnianiu miejsca cięcia.J) Głowice śrub zostają pokryte sterylnym woskiem kostnym przed przywróceniem mięśni i zamknięciem skóry za pomocą szwów. (D,E,F): liczby wskazują kolejność wiercenia otworów i umieszczania wkrętów. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66648/66648fig01large.jpg" target="_blank">Aby wyświetlić powiększoną wersję tej figury, kliknij tutaj.</a>
Szczególną uwagę należy zwrócić na etapy dopasowania płytki do kości oraz jej mocowania (Rysunek 2). Różnice w wieku aksolotli prowadzą do niewielkich odmienności w wielkości, kształcie i stopniu kostnienia kości udowej. W związku z tym w niektórych przypadkach trudne było znalezienie optymalnej pozycji płytki, aby zapewnić wystarczającą przestrzeń do przykręcenia śrub. Łącznie niepowodzenia w stabilizacji zaobserwowano u 23,5% zwierząt, co mogło wynikać z węższych lub słabiej zkostniałych kości u młodszych osobników (Rysunek 3). Niepowodzenie stabilizacji skutkowało nieprawidłowym ustawieniem osteotomizowanej kości. Można to było stwierdzić po obecności poluzowanych śrub, przemieszczeniu fragmentów kości z odchyleniem od osi kości &gt;20° lub wyraźnym przemieszczeniu bocznym. Podczas gdy pierwszy z tych objawów mógł być zauważony podczas pobierania próbek, pozostałe mogły nie być oczywiste aż do momentu przeprowadzenia analizy microCT. W kończynach prawidłowo ustawionych tkanka ziastkowa znajdowała się w szczelinie złamania 3 tygodnie po operacji, natomiast w próbkach z nieprawidłowym ustawieniem była ona znacznie większa, co prawdopodobnie stanowiło próbę stabilizacji kości.
<img alt="Eksperyment regeneracji kończyny: procedura chirurgiczna z urządzeniem do stabilizacji, przedstawiono wynik po regeneracji." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66648/66648fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Przegląd procedury chirurgicznej i zwierzęcia po wykonanej osteotomii lewej kończyny tylnej. (A) Przedstawiono główne etapy operacji: odsłonięcie kości udowej, prawidłowe ustawienie płytki tytanowej, wykorzystanie prowadnicy piły do wykonania otworów w kości za pomocą wiertarki ręcznej i aplikację śrub, użycie folii ochronnej i prowadnicy piły (żółta strzałka) do wykonania osteotomii, złamanie kości udowej o szerokości 0,7 mm (biała strzałka), pokrycie łebków śrub sterylnym woskiem kostnym (fioletowa strzałka) oraz końcowy wynik z zamkniętą kończyną. (B) Zwierzę po operacji. Strzałka wskazuje lewą kończynę tylną, w której wykonano zabieg osteotomii. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66648/66648fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
Zastosowanie sterylnego wosku pszczelego do kości przed zszyciem skóry (Rycina 2) ograniczyło pooperacyjne rozstąpienie się rany w skórze nad płytką stabilizującą. Kończyna pozostała funkcjonalna i mogła być wykorzystywana do stania oraz chodzenia wkrótce po ustąpieniu działania znieczulenia.
<img alt="Schemat etapów gojenia kości; modele 3D i histologia procesu stabilizacji w czasie." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66648/66648fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Reprezentatywne wyniki osteotomii ustabilizowanej płytką u aksolotla. (A) Skanowanie MicroCT nienaruszonych i złamanych kości udowych. Zauważalna przerwa w kości 3 tygodnie po złamaniu. W 23,5% kończyn wystąpiła nieudana stabilizacja, co doprowadziło do nieprawidłowego ustawienia kości. W próbkach stabilizowanych w 6-9 miesiącach po złamaniu tworzy się twardy zrost. (B) Barwienie Safranin O/Light Green nienaruszonych i złamanych kości udowych. Zauważalna przerwa z tkanką ziarninową w kości 3 tygodnie po złamaniu. W 6 miesiącu po złamaniu twardy zrost składa się z kości tkankowej i chrząstki. Paski skali: 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66648/66648fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
Analiza MicroCT oraz analiza histologiczna (barwienie safraniną O i zielenią jasną) pozwoliły na wizualizację położenia fragmentów kości i wielkości szczeliny złamania, a także stanu gojenia kości. Dane MicroCT pozyskano przy nominalnej rozdzielczości wynoszącej 10.05 µm w komercyjnie dostępnym skanerze preparatów, a następnie przeanalizowano przy użyciu zgodnego oprogramowania (patrz Tabela materiałów) zgodnie z opisem Polikarpovej i wsp.9W przeciwieństwie do ssaków, u których złamanie o tej samej wielkości (0,7 mm) ulega zamknięciu poprzez wytworzenie kostnej i chrzęstnej kostni w ciągu 3–5 tygodni po zabiegu, u axolotla nie zaobserwowano kostni 3 tygodnie po operacji. Zazwyczaj kostna chrzęstna była widoczna 3 miesiące po zabiegu.9oraz zkostniały zrost kostny – 6 miesięcy po operacji (Rycina 3).

Przedstawiono protokół operacji osteotomii kości udowej z użyciem wewnętrznego mocowania płytki u dojrzałych aksolotlów. Zabieg może być wykorzystany do wykonywania badań porównawczych nad regeneracją kończyn i gojeniem złamań u wodnych.

Stabilizacja osteotomii kości udowej z mocowaniem płytki w Ambystoma mexicanum

The axolotl (Ambystoma mexicanum) is a promising model organism for regenerative medicine due to its remarkable ability to regenerate lost or damaged ...

Badamy regenerację czworonogów i używamy aksolotla jako gatunku regeneracyjnego najwyższego poziomu, porównując go z żabami i myszami, aby odkryć komórkowe i molekularne mechanizmy regeneracji. Rozwój transgeniki i edycji genomu, składanie genomu aksolotla oraz zastosowanie RNA-Seq, ATAC-Seq, transkryptomiki przestrzennej i proteomiki pozwala nam głębiej zrozumieć mikrośrodowisko regeneracyjne i porównać je z mniej regeneracyjnymi gatunkami, w tym z ludźmi. Ustaliliśmy udział komórek w tkankach w regenerującej się kończynie i rdzeniu kręgowym oraz główne regulatory początkowej proliferacji komórek i tożsamości pozycyjnej w blastemie.W niedawnej pracy pokazaliśmy gojenie się kości aksolotla poprzez kostnienie śródchrzęstne, a poziom komórkowy był podobny do ssaków. W przeciwieństwie do poprzednich technik, w których złamanie aksolotla było albo nienaprawione, albo sąsiednia kość służyła jako podpora, w obecnym protokole kość jest unieruchomiona płytką, co pozwala na stworzenie powtarzalnego i wyrównanego złamania i umożliwia solidne porównanie z badaniami na myszach. Protokół pozwala na stabilne złamanie o stałym rozmiarze czapeczka, rozszerzając badania nad złamaniami zmocowanymi płytowo na.Pomimo ich ekstremalnych zdolności regeneracyjnych i pełnej odbudowy kończyn po amputacji, aksolotl zaskakująco nie jest w stanie wyleczyć dużych złamań kości z krytycznymi ubytkami. Naszym celem jest zdefiniowanie pro-degeneracyjnych czynników blastema w leczeniu braku zrostu kostnego w krytycznym ubytku wielkości. Na początek umieść uspokojoną Ambystoma mexicanum brzuszną stroną do dołu na mokrych ręcznikach papierowych nasączonych 0,03% roztworem benzokainy.Przykryj zwierzę ręcznikami papierowymi nasączonymi benzokainą. Użyj pary kleszczy pierścieniowych, aby rozciągnąć operowaną tylną kończynę. Za pomocą skalpela wykonaj boczne podłużne nacięcie powyżej kości udowej, obejmujące całe udo w górnej kończynie tylnej.Ostrożnie przemieszcz mięśnie i nerwy z miejsca operacji bez cięcia. Delikatnie umieść kleszcze Bodego pod kością udową, aby odsłonić ją do operacji. Teraz umieść sztywną 7,75-milimetrową płytkę stabilizującą z czterema otworami wzdłuż trzonu kości udowej bez dotykania stawów i zabezpiecz ją w wyrównanej pozycji za pomocą kleszczy.Użyj czterech dwumilimetrowych tytanowych, aby przymocować kość do płytki. Podczas irygacji 0,7x PBS i 1% penicyliny streptomycyny, ręcznie wywierć, aby utworzyć pierwszy otwór w kości do wprowadzenia. Następnie umieść pierwszą w otworze.Nałóż urządzenie prowadzące piłę na pierwszą i wyrównaj je z kością i płytką. Użyj prowadnicy piły do wiercenia i wkładania pozostałych. Po upewnieniu się, że płyta jest wyrównana z kością, zdejmij prowadnicę piły i za pomocą śrubokręta odłam uchwyty od.Umieść kawałek wysterylizowanej folii z tworzywa sztucznego pod kością udową, aby zapobiec uszkodzeniu tkanek miękkich podczas procesu osteotomii. Następnie umieść drżącą piłę drucianą między kością a folią ochronną. Przetnij kość za pomocą podrygowanej piły drucianej, tworząc pojedyncze 0,7-milimetrowe nacięcie w kości udowej.Usuń piłę i folię ochronną, a następnie przepłucz miejsce operacji 0,7x PBS i 1% penicyliną-streptomycyną. Przykryj górną część płytki i sterylnym woskiem kostnym, aby chronić skórę i mięśnie przed podrażnieniem przez krawędzie. Ułóż mięśnie i skórę na wosku.Zamknij miejsce nacięcia syntetycznym szwem w rozmiarze 7,0, używając prostych przerywanych szwów. Po operacji, aby się obudzić, umieść zwierzę w świeżym sztucznym zbiorniku na wodę w stawie, uzupełnionym penicyliną, streptomycyną i butorfanolem. Mikrotomografia komputerowa i analiza histologiczna ułatwiły wizualizację kości, pozycji fragmentów i rozmiarów szczelin oraz stanu gojenia.Warto zauważyć, że Ambystoma mexicanum nie wykazywała zrogowaciałych kształtów trzy tygodnie po operacji, w przeciwieństwie do ssaków. Modzel chrzęstny był widoczny po trzech miesiącach, a skostniały modzel kostny pojawił się po sześciu miesiącach od operacji.

stabilizing-femur-osteotomy-with-plate-fixation-ambystoma

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Niniejszy artykuł opisuje metodę stabilizacji złamań kości długich opartą na zastosowaniu zmodyfikowanych zewnętrznych stabilizatorów Ilizarova 1-3. Po zastosowaniu stabilizatorów i wywołaniu urazu kostnego można oceniać proces gojenia, przeprowadzać osteogenezę dystrakcyjną lub tworzyć staw rzekomy bądź defekt o rozmiarze krytycznym w celu badania interwencji terapeutycznych.

Tworzenie sztywno stabilizowanych złamań do oceny kostnienia błonowego, osteogenezy dystrakcyjnej lub gojenia ubytków o rozmiarze krytycznym

Jednym z ograniczeń badań przedklinicznych w dziedzinie naprawy kości jest brak eksperymentalnej kontroli nad lokalnym środowiskiem mechanicznym w obrębie gojącej się zmiany kostnej. Przedstawiamy projekt i zastosowanie stabilizatora zewnętrznego do naprawy kości z możliwością zmiany sztywności stabilizatora in vivo.

Regulowana sztywność, stabilizator zewnętrzny do osteotomii kości udowej szczura i modele segmentalnych ubytków kostnych

Chociaż modele mysie są nieocenionymi narzędziami do inżynierii tkanki kostnej, modele długich wad kostnych są rzadkie. Ta potrzeba zmotywowała do opracowania obecnego protokołu, który wykorzystuje płytkę blokującą z czterema i dedykowanym przyrządem do wykonania i ustabilizowania powtarzalnego ubytku udowego o krytycznej wielkości przy niskiej zachorowalności.

Ustalenie segmentalnego modelu ubytku krytycznej wielkości kości udowej u myszy stabilizowanych przez osteosyntezę płytkową

Ten protokół opisuje technikę osteosyntezy wykorzystującą gwóźdź blokujący śródszpikowy do standaryzacji osteotomii kości udowej, która może być używana do analizy prawidłowego i wadliwego gojenia kości u myszy.

Śródszpikowy gwóźdź blokujący do standaryzowanego mocowania osteotomii kości udowej w celu analizy prawidłowego i wadliwego gojenia kości u myszy

To badanie opisuje powtarzalny i szczegółowy protokół wykorzystujący nowo opracowany zewnętrzny stabilizator do osteogenezy dywersyjnej (DO) w modelu szczura kości udowej, który pozwala na fizjologiczne obciążanie zwierzęcia po usunięciu zewnętrznego stabilizatora.

Skuteczny i powtarzalny protokół osteogenezy dyfuzyjnej w modelu szczurzym prowadzący do funkcjonalnej regeneracji kości udowej

Ten protokół opisuje minimalnie inwazyjną technikę osteosyntezy wykorzystującą śródszpikową do standaryzowanej stabilizacji złamań kości udowej, która może być wykorzystana do analizy endochrzęstnego gojenia kości u myszy.

Minimalnie inwazyjny model do analizy gojenia złamań śródchrzęstnych u myszy w standaryzowanych warunkach biomechanicznych

Modele in vivo krytycznych wymiarów kości u ssaków są niezbędne dla badaczy badających mechanizmy leczenia i terapie ortopedyczne. W tym miejscu wprowadzamy protokół tworzenia powtarzalnych, segmentowych ubytków kości udowej u szczurów stabilizowanych za pomocą stabilizacji zewnętrznej.

Wiarygodny i powtarzalny model segmentalnej wady kości udowej o krytycznej wielkości u szczurów stabilizowany za pomocą niestandardowego stabilizatora zewnętrznego

Tutaj prezentujemy protokół opisujący minimalnie inwazyjną technikę unieruchomienia stawu kolanowego na modelu szczurzym. Ten powtarzalny protokół, oparty na sposobie separacji mięśni-szczelina i umiejętności mini-nacięcia, jest odpowiedni do badania mechanizmu molekularnego leżącego u podstaw nabytego przykurczu stawów.

Miniinwazyjna technika stabilizacji wewnętrznej do badania przykurczu zgięciowego kolana wywołanego unieruchomieniem u szczurów

Tutaj prezentujemy protokół dostępu do prowadnika śródszpikowego gwoździa udowego u otyłych pacjentów za pomocą własnego szydła. Użycie nowego szydła z dystalnym pozycjonerem do wprowadzania prowadnika i otwierania kości może zwiększyć wydajność wprowadzania prowadnika i zmniejszyć trudność operacji.

Leczenie z blokowaniem gwoździ śródszpikowych w przypadku złamania międzykrętarzowego kości udowej przy użyciu nowego szydła z pozycjonerem dystalnym

Niniejszy protokół opisuje metodę znakowania i śledzenia losów niewielkich grup komórek w embrionach ryb danio pręgowany poprzez UV-odblokowanie uwięzionej fluoresceiny, a następnie immunoznakowanie całego preparatu w celu wzmocnienia sygnału z odblokowanej fluoresceiny.

Znakowanie linii komórkowych ryb danio-pręgowanych za pomocą dekstranu fluoresceiny uwalnianego laserowo

Poznaj protokół osteotomii kości udowej z mocowaniem płytki w aksolotlu Ambystoma mexicanum. Ta metoda umożliwia badanie procesów gojenia złamań i regeneracji kości u płazów.

Stabilizacja osteotomii kości udowej z mocowaniem płytki w Ambystoma mexicanum

Przeglądaj więcej filmów