Name: Ograniczone ściółkowanie i gniazdowanie jako model przeciwności losu we wczesnym okresie życia u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T14:25:00.000+00:00
Duration: 4 min 20 s
Description: Poznaj model ograniczonego ściółkowania i gniazdowania u myszy do badania wpływu przeciwności losu we wczesnym życiu na rozwój mózgu i ryzyko zaburzeń psychicznych. Ta metoda pozwala zrozumieć rolę mikrogleju w przewodzeniu stresu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez NIMH K99/R00 Pathway to Independence Award #MH120327, Whitehall Foundation Grant #2022-08-051 oraz NARSAD Young Investigator Grant #31308 od Brain & Behavior Research Foundation oraz The John and Polly Sparks Foundation. Autorzy chcieliby podziękować Wydziałowi Zasobów Zwierzęcych na Uniwersytecie Stanowym Georgii za zapewnienie wyjątkowej opieki naszym zwierzętom oraz Ryanowi Sleethowi za doskonałe wsparcie techniczne w konfiguracji i utrzymaniu naszego systemu zarządzania wideo. Dr Bolton chciałaby również podziękować dr Tallie Z. Baram, która stworzyła model LBN i podzieliła się nim z nią.

Modeling Early-Life Adversity in Mice Using Limited Bedding and Nesting

Autorzy nie pozostają w konflikcie interesów.

Ten artykuł zawiera szczegółowy protokół stosowania modelu LBN u myszy. Model ten jest ważnym narzędziem do zrozumienia, w jaki sposób etologicznie i translacyjnie istotna forma przewlekłego stresu we wczesnym okresie życia przyczynia się do rozwoju zaburzeń neuropsychiatrycznych upotomstwa13. Jest również przydatny do badania zachowań matek i wszelkich zmian w mózgu matek z perspektywy molekularnej, neuroendokrynnej lub opartej na obwodach24. W przypadku tego typu pytań wieloparzystość może być ważniejszą zmienną do rozważenia. Zaobserwowaliśmy, że wyniki entropii zachowania matki pozostają spójne w wielu miotach w obrębie tej samej matki (Rysunek 2C), co sugeruje, że entropia może być nieco stabilną cechą dla każdej matki. Odkrycie to może uzasadniać wykorzystanie wieloródek samic myszy, gdy nie jest możliwe użycie tylko nieródek, tak jak w przypadku kosztownych lub rzadkich myszy transgenicznych. Ze względu na możliwy niezamierzony wpływ wielorózdności na inne zmienne (np. środowisko wewnątrzmaciczne), zaleca się, aby eksperymentator statystycznie kontrolował wykorzystanie wieloródek podczas analizy danych.
Należy zauważyć, że model ten jest bardzo wrażliwy na zakłócenia środowiskowe. Wiele czynników może zakłócać pracę zwierząt, powodując problemy i nieoptymalne wyniki, takie jak zalanie klatki lub głośne dźwięki, takie jak pobliskie budowy. Zazwyczaj zakłócenia te spowodują, że zwierzęta kontrolne będą zestresowane, a zatem nie będzie różnic między warunkami kontrolnymi i LBN. Wskaźnikiem tych problemów mogą być podobne wagi u szczeniąt kontrolnych i LBN na poziomie P10 oraz podobne wartości entropii w zachowaniach związanych z opieką nad matką. Z tego powodu idealnym miejscem jest pokój opieki nad matką, który jest używany wyłącznie do tego celu, cichy i z dala od kolonii i innego personelu laboratoryjnego. Zaburzenia mogą również prowadzić do kanibalizmu młodych, zwłaszcza u matek młodszych niż P75. Ryzyko utraty młodych z powodu kanibalizmu jest mniejsze u matek po P75 i często po pierwszym miocie. Alternatywna wersja tej metody przesuwa czas eksperymentalnej manipulacji na P4-P11, aby jeszcze bardziej zmniejszyć ryzyko kanibalizmu25,26; chociaż nie jest to konieczne w obecnych warunkach laboratoryjnych. Inna wersja LBN nie wykorzystuje przegrody siatkowej, ale nadal ogranicza ilość ściółki i materiału gniazdowego przez cały okres przed odsadzeniem po urodzeniu27. Ważne jest, aby pamiętać, że zmiana osi czasu może prowadzić do różnych wyników, takich jak znęcanie się nad matką, co z kolei może skutkować różnymi wynikami dla potomstwa, takimi jak zachowania podobne do lęku25,28. Inne częste problemy obejmują utratę danych o zachowaniu matki z powodu kąta kamery i dużego rozmiaru gniazda; Aby temu zapobiec, zaleca się umieszczenie lustra z tyłu klatki i upewnienie się, że w stanie kontrolnym jest tylko jedno gniazdo, aby zapobiec zbyt dużemu gniazdu i ukryciu szczeniąt przed kamerą. Wreszcie, niezbędne jest upewnienie się, że siatka jest prawidłowo dopasowana do klatki, aby zapobiec utknięciu lub zranieniu szczeniąt.
Zaletą modelu LBN jest to, że można go łatwo dostosować i połączyć z innymi czynnikami eksperymentalnymi. Przykładami zmiennych, które można dodać do tego protokołu, są dieta29,30, wyzwania immunologiczne30,31, różne linie transgeniczne32,33 i chemogenetyka19. Co więcej, niektóre wersje tego modelu wykorzystują ramy czasowe P10-P17 i łączą je z separacją matek (MS)34,35,36. Ten paradygmat został również zaadaptowany jako stresor prenatalny, w którym matki są trzymane w środowisku LBN od E14 do E1937,38, ale młode nigdy nie są bezpośrednio narażone na stres. Wreszcie, niektóre badania wykorzystują model dwóch trafień, który obejmuje ELA w połączeniu z różnymi testami warunków skrajnych na potomstwie, gdy osiąga dorosłość19,39.
Jednym z ograniczeń tej metody jest to, że nie ma ona dużej przepływności. Ilość generowanych danych jest ograniczona liczbą kamer i przestrzenią dostępną w tym samym czasie, chociaż śmieci można łatwo rozłożyć w czasie. Ręczna ocena zachowania matki jest szczególnie czasochłonna i może wprowadzać stronniczość obserwatora, ale automatyczna ocena jest obecnie rozwijana40, dzięki pojawieniu się podejść opartych na uczeniu maszynowym. Jeśli dane są oceniane ręcznie, zaleca się, aby ta sama osoba oceniła wszystkie filmy w jednym eksperymencie w celu zmniejszenia zmienności między obserwatorami. Innym ograniczeniem jest to, że model ten jest przeznaczony dla gryzoni, które polegają głównie na opiece matczynej, co utrudnia badanie opieki dwurodzicielskiej. Jednak niektóre grupy przyjęły deprywację ojcowską jako alternatywę dla stwardnienia rozsianego u gatunków dwurodzicielskich, takich jak mysz kalifornijska41,42, więc można sobie wyobrazić, że LBN może być również przystosowany do tych gatunków.
Oprócz LBN, separacja matki jest drugim najbardziej widocznym modelem ELA, ponieważ inne formy stresu stosowane u dorosłych (tj. stres związany z powściągliwością) nie są etologicznie istotne i nie wpływają w ten sam sposób na młode. LBN różni się od stwardnienia rozsianego, ponieważ jest to forma przewlekłego stresu, która wywołuje fragmentaryczne i nieprzewidywalne zachowanie matki, podczas gdy w stwardnieniu rozsianym deprywacja jest przerywana i zwykle występuje w przewidywalnych porachkażdego dnia. Co ciekawe, oba modele mogą powodować zmiany w osi HPA i zachowania podobne do depresji u gryzoni, chociaż LBN może być bardziej powtarzalnym protokołem z mniejszą interakcją eksperymentatora i wyższą spójnością we wszystkich laboratoriach 1,11,13,16. Chociaż protokół ten jest przydatny w łagodzeniu niektórych źródeł zmienności (takich jak związane z eksperymentatorem), inne aspekty, takie jak różnice w obiektach dla zwierząt, pochodzenie zwierząt lub szczep, mogą wpływać na wyniki. Na przykład wiadomo, że myszy BALB/c mają wyraźniejszą reakcję na przewlekły stres związany z powściągliwością i mogą być inaczej wrażliwe na ELA niż C57BL/6J27,44.
Podsumowując, model LBN wykorzystuje środowisko o niskich zasobach z nieprzewidywalną opieką matczyną i jest użytecznym podejściem do zrozumienia, w jaki sposób stres we wczesnym okresie życia wpływa na wiele różnych procesów, takich jak fizjologiczne adaptacje do stresu, zachowanie matki i rozwój mózgu. Warto zauważyć, że model ten został wykorzystany do zrozumienia, w jaki sposób i dlaczego ELA jest czynnikiem ryzyka zaburzeń neuropsychiatrycznych 1,5,9,12. W przyszłości zastosowanie LBN poszerzy naszą wiedzę na temat biologicznych podstaw zaburzeń zarówno psychicznych, jak i fizycznych oraz pomoże wyjaśnić nowe cele terapeutyczne w leczeniu skutków stresu w wrażliwym okresie okołoporodowym.

Wczesny okres poporodowy to krytyczne okno rozwojowe, w którym wpływy środowiska mogą zmienić trajektorię rozwoju. Na przykład przeciwności losu we wczesnym okresie życia (ELA) mogą zmienić rozwój mózgu, aby wywołać długotrwałe zmiany w funkcjach poznawczych i emocjonalnych. Przykłady ELA obejmują przemoc fizyczną lub emocjonalną, zaniedbanie, niewystarczające zasoby i nieprzewidywalne środowisko domowe występujące w dzieciństwie lub okresie dojrzewania1. Wiadomo, że ELA jest czynnikiem ryzyka rozwoju zaburzeń, takich jak depresja, zaburzenia związane z używaniem substancji, zespół stresu pourazowego (PTSD) i lęk2,3,4,5. Jest to ważne, biorąc pod uwagę, że poziom ubóstwa wśród dzieci w USA wzrósł ostatnio ponad dwukrotnie, z 5,2% w 2021 r. do 12,4% w 2022 r6, i chociaż ubóstwo samo w sobie niekoniecznie jest ELA, zwiększa prawdopodobieństwo wystąpienia różnych rodzajów ELA7.
Modele zwierzęce od dawna są niezbędne do zrozumienia wpływu stresu we wczesnym okresie życia na rozwój mózgu i wyniki dorosłych. Dwa główne modele zwierzęce wykorzystywane w ostatnich latach do analizy tego zjawiska to separacja matek (MS) i zubożałe środowisko wywołane ograniczoną ilością ściółki i materiałów do budowy gniazd (LBN). Stwardnienie rozsiane zostało opracowane jako model deprywacji rodzicielskiej8. W nim matki gryzoni są zabierane od swoich młodych, zwykle na kilka godzin, każdego dnia, aż do odsadzenia8. Stwierdzono, że paradygmat stwardnienia rozsianego skutkuje zachowaniami depresyjnymi i lękowymi w wieku dorosłym9, a także nieprawidłową reakcją na przewlekły stres10,11. Z drugiej strony, model LBN, po raz pierwszy opracowany w laboratorium Baram 12, nie oddziela matki od szczeniąt, ale raczej modyfikuje środowisko, w którym młode są hodowane, naśladując środowisko o niskich zasobach12,13. Zmniejszenie ilości materiału do gniazdowania i uniemożliwienie bezpośredniego dostępu do ściółki w tym modelu powoduje zakłócenie opieki nad matką ze strony matek3. Ponieważ solidna i przewidywalna opieka matczyna jest niezbędna do prawidłowego rozwoju poznawczych i emocjonalnych obwodów mózgu14, fragmentaryczna opieka matczyna z LBN może skutkować szeregiem wyników, w tym nadaktywną osią podwzgórze-przysadka-nadnercza (HPA), przesuniętą równowagą pobudzająco-hamującą w wielu regionach mózgu, zwiększonym poziomem hormonu uwalniającego kortykotropinę (CRH) i zachowaniem podobnym do depresyjnego u potomstwa13,15,16,17,18,19.
Dokładny mechanizm, dzięki któremu ELA powoduje zwiększone ryzyko zaburzeń neuropsychiatrycznych, nie jest w pełni zrozumiały. Uważa się, że jest to związane ze zmianami w obwodach osi HPA19,20, a ostatnie dowody wskazują, że może to być spowodowane zmianami w przycinaniu synaps mikrogleju19. Wykazano, że model LBN jest kluczowym narzędziem do zrozumienia wpływu środowiska okołoporodowego na rozwój mózgu i długoterminowe wyniki behawioralne. Chociaż model ten został początkowo opracowany dla szczurów, został również zaadaptowany dla myszy, aby wykorzystać istniejące narzędzia transgeniczne12,13. Warto zauważyć, że model jest bardzo podobny u obu gatunków i prowokuje wysoce zbieżne wyniki, takie jak zmiany w osi HPA, deficyty poznawcze i zachowania podobne do depresji, podkreślając w ten sposób jego międzygatunkową użyteczność i potencjał translacyjny. W tym artykule szczegółowo opisano, w jaki sposób zastosować model ograniczonego ściółkowania i gniazdowania u myszy, zbierając i analizując zachowania matek i wyniki potomstwa w celu zweryfikowania skuteczności modelu i oczekiwanych wyników.

<table><tbody><tr><td>2-calowa kamera sieciowa 4 MP z 4-krotnym zoomem IR Mini PT Dome</td><td>Hikvision</td><td>DS-2DE2A404IW-DE3(S6)</td><td></td></tr><tr><td>Amazon Basics Aluminiowy statyw fotograficzny z etui - zestaw 2, 2,8 - 6,7 stopy, 3,66 funta,</td><td>Amazon</td><td></td><td>od Amazon</td></tr><tr><td>Niebieska tęczówka</td><td>Niebieska tęczówka Bezpieczeństwo</td><td></td><td>niebieskiej tęczówki Opcjonalne oprogramowanie</td></tr> <tr><td>do zarządzania materiałem wizyjnymCAMVATE 1/4"-20 Mini głowica kulowa z uchwytem sufitowym do CCTV i Uchwyt do monitorów ściennych wideo - 1991</td><td>Camvate</td><td></td><td>od Amazon</td></tr><tr><td>Ściółka z kolb kukurydzy</td><td>Gniazdo bawełniane Andersons</td><td>4B</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ancare</td><td>NES3600</td><td></td></tr><tr><td>Przegroda siatkowa</td><td>McNICHOLS</td><td>4700313244</td><td>Standard, aluminium, stop 3003-H14, 3/16" nr .032 Standard (podniesiony), 70% otwarta przestrzeń</td></tr><tr><td>Oświetlacz podczerwieni Tendelux DI20</td><td>Tendelux</td><td></td><td>od Amazonka</td></tr></tbody></table>

ograniczone ściółkowanie i gniazdowanie jako model przeciwności losu we wczesnym okresie życia u myszy

Limited Bedding and Nesting as a Model for Early-Life Adversity in Mice

Przeciwności losu we wczesnym okresie życia (ELA), takie jak znęcanie się, zaniedbanie, brak zasobów i nieprzewidywalne środowisko domowe, są znanym czynnikiem ryzyka rozwoju zaburzeń neuropsychiatrycznych, takich jak depresja. Modele zwierzęce ELA zostały wykorzystane do zbadania wpływu przewlekłego stresu na rozwój mózgu i zazwyczaj polegają na manipulowaniu jakością i/lub ilością opieki nad matką, ponieważ jest to główne źródło doświadczeń we wczesnym okresie życia u ssaków, w tym ludzi. W tym miejscu przedstawiono szczegółowy protokół stosowania modelu Limited Bedding and Nesting (LBN) u myszy. Model ten naśladuje środowisko o niskich zasobach, które prowokuje fragmentaryczne i nieprzewidywalne wzorce opieki nad matką w krytycznym oknie rozwojowym (dni po porodzie 2-9) poprzez ograniczenie ilości materiałów gniazdowych podawanych matce w celu zbudowania gniazda dla jej młodych i oddzielenie myszy od ściółki za pomocą siatki w klatce. Przedstawiono reprezentatywne dane w celu zilustrowania zmian w zachowaniu matki, a także zmniejszonej masy ciała młodych i długoterminowych zmian w podstawowym poziomie kortykosteronu, które wynikają z modelu LBN. Wykazano, że jako dorośli dzieci wychowane w środowisku LBN wykazują nieprawidłową reakcję na stres, deficyty poznawcze i zachowania podobne do anhedonii. Dlatego model ten jest ważnym narzędziem do określenia, w jaki sposób dojrzewanie wrażliwych na stres obwodów mózgowych jest zmieniane przez ELA i skutkuje długoterminowymi zmianami behawioralnymi, które nadają podatność na zaburzenia psychiczne.

Reprezentatywne wyniki pokazują, jak ELA, wywołana przez zubożone środowisko w klatkach LBN, wpływa na opiekę macierzyńską oraz fizjologiczne skutki u potomstwa. Dzienną entropię zachowań opieki macierzyńskiej w grupie LBN jest wyższa w dniach P3-P6 (F1,58 = 7.21, p = 0.0094; Rysunek 2A), podobnie jak średnia entropia każdej samicy w tym okresie (t15 = 3.03, p = 0.0085; Rysunek 2B). Co istotne, nie stwierdzono istotnej różnicy w średnim tempie entropii między różnymi miotami tej samej samicy w obrębie tej samej grupy badawczej (F1.699,4.247 = 0.57, p = 0.58; Rysunek 2C), co sugeruje, że tempo entropii może być cechą stosunkowo stabilną dla każdej samicy. Wśród wszystkich zachowań, lizanie i pielęgnacja okazały się najbardziej fragmentaryczne w warunkach LBN3. Samice LBN wykazują wyższą częstotliwość lizania i pielęgnacji młodych (LG) (t16 = 4.04, p = 0.0010; Rysunek 2D) oraz krótsze serie tych zachowań (t16 = 3.25, p = 0.0050; Rysunek 2E). Jednak nie ma istotnej różnicy w całkowitym czasie trwania LG między samicami z grupy kontrolnej a grupą LBN (t16 = 1.52, p = 0.15; Rysunek 2F).
<img alt="Wykresy tempa entropii w dniach postnatalnych A-F; LBN vs. CTL, analiza danych statystycznych, badanie porównawcze." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66879/66879fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2Analiza zachowań macierzyńskich. (A) Dobowa stopa entropii jest wyższa u samic z ograniczonym dostępem do ściółki i gniazdowania (LBN) kontrakontrolną (CTL) analizowaną za pomocą modelu efektów mieszanych (F1,58 = 7.21, p = 0.0094). (B) Średnia stopa entropii jest wyższa w przypadku zapór LBN kontraCTL (t15 = 3.03, p = 0.0085). (CŚrednia szybkość entropii (P3-P6) nie wykazuje istotnych różnic pomiędzy wieloma miotami u tej samej samicy, gdy są one utrzymywane w tej samej grupie badawczej (F1.699,4.247 = 0.57, p = 0,58). Każda linia reprezentuje jedną samicę matkę. (D) Skumulowana częstotliwość zdarzeń lizania i pielęgnacji (LG) jest wyższa u matek LG kontraCTL (limfocyty T cytotoksyczne)16 = 4.04, p = 0.0010). (E) Średnia długość pojedynczego epizodu LG jest krótsza u matek LG kontraCTL (t16 = 3.25, p = 0.0050). (F) skumulowany czas spędzony w pozycji LG nie różni się znacząco ze względu na LBN (t16 = 1.52, p = 0,15). Dane przedstawiono jako średnia ± SEM, * p &lt; 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66879/66879fig02large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej figury.</a>
Szczenięta hodowane w warunkach LBN są znacząco mniejsze w 10. dniu po urodzeniu (P10) (t61 = 6,30, p &lt; 0,0001; Rysunek 3A). Różnica ta zazwyczaj utrzymuje się w wieku odsadzenia (t62 = 6,29, p = &lt;0,0001; Rysunek 3B), ale nie jest już obserwowana w wieku dorosłym (t38 = 1,08, p = 0,29; Rysunek 3C). Jednak poziomy kortykosteronu w stanie spoczynkowym są podwyższone w wieku dorosłym (t18,79 = 2,23, p = 0,038; Rysunek 3D), co sugeruje trwałe efekty fizjologiczne LBN. Są to spodziewane różnice w przypadku prawidłowo przeprowadzonego układu doświadczalnego. W przypadku układu suboptymalnego wartości długości epizodów LG, entropii oraz wagi szczeniąt mogą nie wykazywać różnic, co prawdopodobnie wynika z wystąpienia stresu w grupie „Kontrolnej”. Na potrzeby niniejszej pracy, podczas analizy wyników potomstwa pominięto podział na płeć, ponieważ różnice płciowe zazwyczaj nie są obserwowane w opisanych tutaj efektach fizjologicznych; jednak różnice płciowe w innych typach wyników, takich jak zachowania poznawcze i emocjonalne, są powszechnie raportowane w tym modelu i powinny być dalej badane4.
<img alt="Wykres słupkowy porównujący grupy CTL i LBN: masa w P10, masa w P21, masa dorosłych osobników, podstawowy poziom kortykolsteronu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66879/66879fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Wyniki potomstwa. (A) Ograniczenie dostępności ściółki i materiałów do budowy gniazda (LBN) zmniejsza masę młodych w P10, tuż przed powrotem do standardowych klatek (t61 = 6,30, p &lt; 0,0001). (B) Masa w wieku odsadzenia nadal pozostaje obniżona w grupie LBN (t62 = 6,29, p &lt; 0,0001). (C) Masa dorosłych osobników nie wykazuje już różnic wynikających z LBN (t38 = 1,08, p = 0,29). (D) Podstawowe stężenie kortykosteronu w wieku dorosłym jest zwiększone w grupie LBN, zgodnie z analizą testem t Welcha (t18,79 = 2,23, p = 0,038). Na wszystkich wykresach samice oznaczono kółkami, a samce trójkątami. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM, *p &lt; 0,05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66879/66879fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Ten protokół opisuje model zwierzęcy do badania, jak przeciwności losu we wczesnym okresie życia, sprowokowane przez zubożałe środowisko i nieprzewidywalną opiekę matki we wczesnym okresie poporodowym, wpływają na rozwój mózgu i przyszłe ryzyko zaburzeń psychicznych.

Ograniczone ściółkowanie i gniazdowanie jako model przeciwności losu we wczesnym okresie życia u myszy

Early-life adversity (ELA), such as abuse, neglect, lack of resources, and an unpredictable home environment, is a known risk factor for developing ...

W naszym laboratorium staramy się zrozumieć, w jaki sposób przeciwności losu we wczesnym okresie życia wpływają na rozwój mózgu i późniejsze ryzyko zaburzeń psychicznych, takich jak depresja i uzależnienie. Jesteśmy szczególnie zainteresowani tym, w jaki sposób mikroglej oddziałujący z wrażliwymi na stres neuronami w wielu obszarach mózgu może być mechanizmem, za pomocą którego następuje przeprogramowanie obwodu. Wcześniej odkryliśmy, że ten model ELA wywołuje nieprawidłowe reakcje stresowe w wieku dorosłym.Było to spowodowane dysfunkcyjnym przycinaniem synaps pobudzających mikrogleju na neurony eksprymujące hormon uwalniający kortykotropinę w jądrze przykomorowym podwzgórza, a tym samym hiperaktywację tego obszaru mózgu reagującego na stres. Chociaż wiemy, że niekorzystne doświadczenia we wczesnym okresie życia zwiększają ryzyko rozwoju wszelkiego rodzaju problemów zdrowotnych u ludzi, model ograniczonego ściółkowania i gniazdowania pozwala nam udowodnić mechanizmy, w jaki sposób zachodzą one u gryzoni laboratoryjnych. I nigdy wcześniej nie opublikowano protokołu wideo tego modelu.Model ograniczonego ściółkowania i gniazdowania jest bardzo istotny z punktu widzenia ekologii i translacji, ponieważ środowisko o niskich zasobach powoduje nieprzewidywalną opiekę matczyną, zjawisko, które można również badać u ludzi. Wymaga również minimalnej interwencji eksperymentalnej i został z powodzeniem wdrożony przez wiele laboratoriów na całym świecie. Na początek weź siatkową przegrodę przyciętą zgodnie z wymiarami klatki dla myszy, pozostawiając nadmiar trzech centymetrów na dłuższych bokach.Złóż krawędzie, aby stworzyć platformę, która idealnie pasuje do krawędzi klatki na wysokości 2,5 centymetra nad podłogą. Po skonfigurowaniu kamer sprawdź interfejs oprogramowania menedżera wideo pod kątem ciągłego nagrywania. Następnie sparuj od jednej do czterech samic z pojedynczym samcem myszy hodowlanej.Po 17 dniach ciąży lub po widocznej ciąży należy umieścić samice w ich własnych standardowych klatkach z pleksiglasu. Umieść bawełniane gniazdo w klatce, aby umożliwić samicom zbudowanie gniazda. Po kilku dniach, gdy samice urodzą, zapisz datę urodzenia.W drugiej dobie po urodzeniu przenieś szczenięta do nowej, czystej klatki. Podziel samce i samice na grupy i policz. Zapisz liczbę samców i samic w każdym miocie.Aby ustawić warunek kontrolny, napełnij klatkę na buty myszy o standardowym rozmiarze około 220 gramami ściółki z kolb kukurydzy. Dodaj jedno standardowe kwadratowe gniazdo bawełniane. Aby pomóc myszom zaaklimatyzować się w tym nieznanym środowisku, umieść po jednym z ich kałów ze starej klatki w każdym rogu nowej klatki.Przenieś niewielką ilość zużytego bawełnianego gniazda z poprzedniej klatki na nowe gniazdo. Aby ustawić LBN, czyli ograniczone warunki ściółki i gniazdowania, zważ 110 gramów ściółki z kolb kukurydzy. Następnie napełnij standardową klatkę pudełka po butach kolbą kukurydzy i umieść w niej przygotowaną przegrodę siatkową.Na koniec dodaj połowę bawełnianego kwadratu gniazdowego i powtórz te same kroki aklimatyzacji, co w klatce kontrolnej. Teraz dodaj szczenięta do odpowiednich klatek, umieszczając je na gnieździe. Umieść matkę w klatce przodem do młodych.Umieść kamerę na statywie przed klatką, aby zapewnić wyraźny widok z boku na matkę i jej młode. W 10. dniu po urodzeniu należy najpierw przenieść matkę do standardowych warunków trzymania w sadzach. Następnie zważ szczenięta, gdy są przenoszone pojedynczo do standardowej klatki.Młode, które były hodowane w warunkach LBN, były znacznie mniejsze w 10. dniu po urodzeniu niż młode kontrolne.

limited-bedding-nesting-as-model-for-early-life-adversity

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Pokazujemy użyteczność budowania gniazd u myszy laboratoryjnych jako wskaźnik dobrostanu. Punktacja gniazdowa to wrażliwa technika, która jest zmieniana przez temperaturę, chorobę i agresję. Czas integracji z testem gniazdowym (TINT) to prosta ocena przy klatce, która może wykryć ból pooperacyjny.

Budowanie gniazd jako wskaźnik zdrowia i dobrostanu myszy laboratoryjnych

Tutaj prezentujemy protokół do ilościowego określania zachowań związanych z budowaniem gniazd u myszy, o których wiadomo, że są upośledzone w kilku zaburzeniach i chorobach neurologicznych. Protokół ten bada użyteczność czterech materiałów i oferuje możliwość ilościowego określenia zgodności oceniającego w punktacji, poprawiając ważność i wiarygodność testu.

Zachowanie związane z budowaniem gniazda jako wczesny wskaźnik deficytów behawioralnych u myszy

Zakażenie matki jest czynnikiem ryzyka zaburzeń neurorozwojowych. Mysie modele aktywacji immunologicznej matki (MIA) mogą wyjaśnić wpływ infekcji na rozwój i funkcjonowanie mózgu. W tym miejscu przedstawiono ogólne wytyczne i procedurę produkcji niezawodnie odpornego i podatnego potomstwa narażonego na MIA.

Generowanie powtarzalnego modelu aktywacji immunologicznej matki w połowie ciąży przy użyciu poli(I:C) w celu zbadania podatności i odporności u potomstwa

Prezentowany tutaj jest mysi model lęku wywołanego izolacją społeczną (SI), który wykorzystuje myszy C56BL/6J typu dzikiego do wywoływania stresu i zachowań podobnych do lęku przy minimalnym użyciu i bez inwazyjnych procedur. Model ten odzwierciedla współczesne wzorce życia związane z izolacją społeczną i jest idealny do badania lęku i powiązanych zaburzeń.

Model izolacji społecznej: nieinwazyjny model stresu i lęku u gryzoni

Opracowaliśmy model przyspieszonego stresu związanego z porażką społeczną dla dorastających myszy C57BL/6, który działa zarówno u samców, jak i samic i umożliwia ekspozycję podczas dyskretnych okresów dojrzewania. Ekspozycja na ten model indukuje unikanie społeczne, ale tylko w podgrupie pokonanych samców i samic myszy.

Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Ten protokół szczegółowo opisuje, jak przeprowadzić 10-dniowy przewlekły stres społeczny u wcześnie dorastających samców myszy, aby doprowadzić do długotrwałego unikania społecznego w wieku dorosłym u ponad 60% myszy.

Przewlekły stres związany z porażką społeczną u myszy we wczesnym okresie dorastania

Opisujemy protokół znakowania in vivo węchowych neuronów czuciowych za pomocą elektroporacji, a następnie konfokalnego skanowania laserowego lub mikroskopii wielofotonowej w celu wizualizacji morfologii neuronów i ich rozwoju w czasie.

Układ węchowy jako model do badania wzorców wzrostu i morfologii aksonów in vivo

Test Cold Plantar (CPA) mierzy reakcję na zimno w zakresie od 30 °C do 5 °C, a także może mierzyć adaptację do zimna. Protokół ten opisuje, jak używać CPA do pomiaru nadwrażliwości na zimno, analgezji i adaptacji u myszy.

Prosta i niedroga metoda określania wrażliwości na zimno i adaptacji u myszy

Ten protokół przedstawia użycie iniekcji do zwoju korzenia grzbietowego (DRG) z wektorem wirusowym i równoczesnym uszkodzeniem zmiażdżenia korzenia grzbietowego u dorosłego szczura jako model do badania regeneracji aksonów czuciowych. Model ten nadaje się do badania zastosowania terapii genowej w celu promowania regeneracji aksonów czuciowych.

Iniekcja zwoju korzenia grzbietowego i uraz zmiażdżenia korzenia grzbietowego jako model regeneracji aksonów czuciowych

Ten artykuł pokazuje, jak embrionalny tyłomózgowie myszy może być wykorzystany jako model do badania neurogenezy rozwojowej zarówno w preparatach całego narządu, jak i sekcji tkankowych.

Tyłomózgowie myszy jako model do badania neurogenezy embrionalnej

Poznaj model ograniczonego ściółkowania i gniazdowania u myszy do badania wpływu przeciwności losu we wczesnym życiu na rozwój mózgu i ryzyko zaburzeń psychicznych. Ta metoda pozwala zrozumieć rolę mikrogleju w przewodzeniu stresu.

Ograniczone ściółkowanie i gniazdowanie jako model przeciwności losu we wczesnym okresie życia u myszy

Przeglądaj więcej filmów