Natychmiastowe częściowe usunięcie kompleksów cumulus-oocyty: wyrafinowane podejście do szybkiej obserwacji zapłodnienia in vitro

Nasze badania koncentrują się na poprawie wyników zapłodnienia in vitro poprzez ocenę, czy natychmiastowe częściowe usunięcie wzgórka jajowego powoduje kompresy, zwiększa zapłodnienie. Efektywność obserwacji wpływa na rasę zapłodnienia i jakość zarodków oraz optymalizuje procedury laboratoryjne. Naszym celem jest udoskonalenie technik zapłodnienia in vitro w celu uzyskania lepszych wyników klinicznych.

Ustaliliśmy, że w przyśrodkowym częściowym usunięciu wzgórka okopy oocyty znacznie się kompresują, zwiększa skuteczność obserwacji zapłodnienia w IVF. Prowadzi to do poprawy czasu oceny zapłodnienia i potencjalnie optymalizuje jakość zarodków i wyniki zapłodnienia in vitro. Nasz protokół zwiększa skuteczność zapłodnienia in vitro poprzez skrócenie czasu oczekiwania na zapłodnienie in vitro i zminimalizowanie narażenia środowiska oraz potencjalną poprawę jakości zarodków.

Oferuje usprawnione i skuteczne podejście w porównaniu z tradycyjnymi technikami. Na początek umieść szalki do pobierania oocytów w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc. Inkubować 12 mililitrów pożywki manipulacyjnej mieszków włosowych w 14-mililitrowych, okrągłodennych probówkach w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc.

Następnie przenieś probówki do wstępnie ogrzanego stojaka na probówki 30 minut przed pobraniem oocytów. Następnie dodaj dziewięć mililitrów pożywki manipulacyjnej mieszków włosowych do 14-mililitrowej probówki z okrągłym dnem i inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc. W dniu pobrania oocytów przenieś 4,5 mililitra pożywki do wstępnie inkubowanego naczynia do pobierania oocytów pokrytego dwoma mililitrami 100% oleju parafinowego.

Następnie dodaj 4,5 mililitra pożywki do nawożenia do naczynia do pobierania oocytów i inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc. Następnie dodaj jeden mililitr pożywki nawozowej do sześciocentymetrowego naczynia pokrytego 100% olejem parafinowym. Aby stępić i zaokrąglić końcówki szklanych pipet Pasteura, spal je na lampie alkoholowej przez około pięć sekund.

Przymocuj głowicę ssącą do końcówki pipet Pasteura tak, aby mogła dotykać dna naczynia bez zarysowania. Przepłucz szklankę obok pipet w 10-centymetrowych naczyniach z pożywką do manipulowania mieszkami włosowymi. Krótko mówiąc, użyj igły o rozmiarze 17, aby pobrać oocyty pod kontrolą ultrasonograficzną przezpochwową.

Wlej płyn pęcherzykowy zebrany w 14-mililitrowej probówce z okrągłym dnem do 10-centymetrowego naczynia. Umieść naczynie na platformie o stałej temperaturze. Obserwuj OCCC pod mikroskopem stereoskopowym, aby potwierdzić obecność oocytów i ocenić ich dojrzałość.

Potwierdź, czy w OCCC znajdują się oocyty i dokonaj wstępnej oceny dojrzałości oocytów. Przygotuj silikonową pipetę aspiracyjną z okrągłą, polerowaną płomieniowo pipetą Pasteura. Zassać OCCC, delikatnie podnosząc naczynie hodowlane w pozycji od dziewiątej do 10:00 lewym palcem serdecznym i przechylając je o około 15 stopni w lewo.

Podczas wypluwania zasysanego OCCC w pozycji 11:00 naczynia, delikatnie wydłużone poziomo w prawo. Następnie obserwuj wielkość komórek ziarnistych wokół rozszerzonego OCCC. Teraz użyj pipety Pasteura, aby delikatnie usunąć nadmiar komórek ziarnistości za pomocą szybkiego cięcia w dół w odpowiednim miejscu na wydłużonym OCCC.

Przenieś pocięte OCCC do naczynia zbiorczego, zawierającego roztwór płuczący OCCC. Wlej pozostały płyn pęcherzykowy do sterylnego pojemnika na próbkę. Na początek oceń koncentrację, ruchliwość i morfologię pobranej próbki nasienia pod mikroskopem świetlnym.

Następnie przenieś osad nasienia do nowej probówki wirówkowej i umyj go dwukrotnie w pożywce do zapłodnienia. Inkubuj je w 6% dwutlenku węgla i 37 stopniach Celsjusza, aż będą potrzebne. Po usunięciu nadmiaru komórek ziarnistości dodaj do naczynia nawozowego sześć do ośmiu OCCC i jeden mililitr pożywki nawozowej.

Inseminować OCCC modalnymi plemnikami w jednej kropli, około dwie do trzech godzin po pobraniu do naczynia do zapłodnienia. W przypadku zapłodnienia krótkoterminowego należy inkubować OCCC z plemnikami przez cztery do sześciu godzin. Po inkubacji mechanicznie usuń komórki wzgórka otaczające oocyty.

Odessać oocyty za pomocą pipety o średnicy wewnętrznej nieco mniejszej niż oocyty, aby zapewnić całkowite usunięcie komórek. Aby potwierdzić zapłodnienie, obserwuj obecność dwóch ciał polarnych. Oocyty, wykazujące drugie ciało polarne, uważa się za zapłodnione.

W celu regularnego zapłodnienia należy usunąć wzgórki za pomocą pipet po 18 do 20 godzinach wspólnej inkubacji w celu oceny zapłodnienia. Hoduj zapłodnione oocyty przez trzy do pięciu dni po pobraniu oocytów. Oceń zapłodnienie po 20 godzinach od inseminacji, aby określić liczbę przedjądrzy.

Następnie należy wyhodować każdą zygotę indywidualnie w pożywce kropelkowej i przenieść zarodki po zapłodnieniu do podłoża do rozszczepienia. Przenieś zarodki z trzeciego dnia do pożywki blastocytów i oceń w piątym dniu. Raportuj dane ciągłe jako średnią i odchylenie standardowe, a dane porządkowe wyrażaj jako proporcje.

Spośród 47 pacjentek otrzymujących krótkotrwałą inseminację nie zaobserwowano istotnych różnic pod względem wieku i liczby pobranych komórek jajowych. Średni czas zabiegu był istotnie krótszy w przypadku częściowego usunięcia OCC w porównaniu z grupą kontrolną, pomimo braku istotnych różnic w szybkości rozszczepienia, optymalnej częstości zarodków i optymalnej częstości występowania blastocytów. U pacjentek poddawanych tradycyjnemu zapłodnieniu in vitro stwierdzono podobieństwa w wieku pacjentek i liczbie pobranych komórek jajowych między obiema grupami.

Chociaż w przypadku częściowego usunięcia grupy OCCC zaobserwowano nieco krótszy średni czas operacji, nie stwierdzono istotnej statystycznie różnicy. Podobnie jak w poprzedniej grupie, nie stwierdzono istotnych rozbieżności w tempie rozszczepienia, optymalnym wskaźniku zarodków i optymalnym wskaźniku blastocytów.