Optymalizacja technik urodynamicznych myszy w celu zwiększenia dokładności

Celem tego badania jest udoskonalenie technologii urodynamicznej w celu zwiększenia dokładności pomiaru moczu. Dokładny pomiar parametrów moczu po wybudzeniu ma kluczowe znaczenie dla zrozumienia dysfunkcji dolnych dróg moczowych, szczególnie w stanach takich jak pęcherz neurogenny, pourazowy uraz kręgosłupa. Opracowaliśmy unikalną metodę wykorzystującą klej cyjanoakrylowy do stworzenia wodoodpornej bariery skórnej wokół ujścia cewki moczowej i brzucha, zapobiegając wchłanianiu moczu i zapewniając precyzyjne pomiary objętości mikcji.

Użyjemy tego dokładniejszego testu do oceny funkcji układu moczowego w modelach zwierzęcych urazów rdzenia kręgowego oraz w innych chorobach neurodegeneracyjnych. Aby rozpocząć, wytnij 30-centymetrową rurkę z polietylenu PE 30. Ostrożnie włóż około trzech czwartych igły o rozmiarze 25 do jednego końca rurki.

Po przygotowaniu strzykawki o pojemności jednego mililitra napełnij ją sterylnym 0,9% roztworem chlorku sodu i podłącz do igły o rozmiarze 25. Następnie delikatnie zaparz sól fizjologiczną, aby sprawdzić, czy okrągła końcówka jest prawidłowa i czy nie ma wycieku z końców igły. Przygotuj dwa stalowe druty o długości 20 centymetrów każdy.

Następnie włóż igłę o rozmiarze 25 po jednej stronie drutu. Użyj lutu, aby przymocować kołek do drugiego końca drutu w paski. Na początek przymocuj kończyny znieczulonego zwierzęcia taśmą.

Użyj elektrycznej maszynki do golenia, aby ogolić sierść w dolnej części brzucha i wokół ujścia cewki moczowej. Pod mikroskopem operacyjnym użyj prostych, nożyczek Metzenbaum, aby wykonać jedno- lub dwucentymetrowe nacięcie w linii środkowej skóry miednicy brzusznej. Naciąć powięź i mięśnie w linii środkowej, aby odsłonić pęcherz przez ranę po nacięciu.

Gdy pęcherz jest widoczny przez ranę, w razie potrzeby cofnij wszelkie otaczające narządy lub tkanki, aby uzyskać wyraźny widok pola operacyjnego. Następnie chwyć kopułę pęcherza moczowego i użyj niewchłanialnego szwu monofilamentowego 5/0 z igłą ze stożkową końcówką, aby umieścić sznurek do torebki. Za pomocą mikronożyczek wykonaj małą cystostomię w sznurku torebki i zrób dziurę, aż mocz wypłynie.

Teraz chwyć okrągły koniec końcówki cewnika i włóż go przez otwór. Gdy końcówka rurki przejdzie przez otwór, zszyj sznurek torebki wokół rurki. Następnie delikatnie pociągnij rurkę na zewnątrz, aż końcówka zostanie wyczuwalna pod szwem.

Następnie powoli wlej jeden mililitr soli fizjologicznej z drugiego końca rurki, aby rozciągnąć pęcherz i sprawdź, czy nie ma wycieków wokół cewnika. Gdy sól fizjologiczna wydostanie się z cewki moczowej, wycofaj sól fizjologiczną, aby odbarczyć pęcherz. Użyj nożyczek chirurgicznych, aby przedłużyć nacięcie brzucha aż do dna miednicy.

W linii z pęcherzem moczowym przenieś mięśnie i błony do kanałów sromowych i zlokalizuj cewkę moczową i mięsień zwieracza zewnętrznego. Za pomocą igły zawierającej elektrodę nakłuć skórę obustronnie w odległości jednego centymetra od ujścia cewki moczowej. Następnie ostrożnie chwyć końcówkę haczyka kleszczami i delikatnie odciągnij igłę od skóry Za pomocą końcówki elektrod ostrożnie zaczep obustronnie mięsień zwieracza cewki moczowej zewnętrznej.

Użyj niewchłanialnej żyłki 3/0 do zszycia mięśni miednicy i brzucha oraz skóry. Aby zamocować elektrody na miejscu, nałóż cienką warstwę kleju cyjanoakrylowego na skórę w miejscu, z którego wychodzą elektrody. Następnie użyj mikropipety o pojemności od 0,5 do 10 mikrolitrów, aby pobrać płyn przyspieszający w celu wysuszenia kleju.

Następnie dodaj płyn przyspieszający, aby zapewnić prawidłową reakcję adhezyjną. Przygotuj odwróconą łódź do ważenia polistyrenu o długości, szerokości i głębokości 4,5 centymetra. Pokrój go w kształt trójkąta o podstawie czterech centymetrów, aby umieścić ujście cewki moczowej myszy w tej przestrzeni.

Umieść jednorazową formę bazową pod przestrzenią do zbierania moczu. Następnie ustaw mysz w pozycji leżącej i ostrożnie przenieś ją na specjalnie wykonaną płytę, wyposażoną w maskę przeciwgazową. Upewnij się, że przewód moczowy jest prawidłowo umieszczony w rowku.

Delikatnie przymocuj głowę i kończyny myszy taśmą i umieść płytkę na poduszce grzewczej, aż mysz odzyska pełną świadomość. Aby rozpocząć, wszczepij cewnik do pęcherza moczowego i elektrodę EUS znieczulonej myszy. Po zaimpregnowaniu skóry myszy należy przygotować ją do zabiegu urodynamicznego.

Upewnij się, że mysz jest w pełni wyleczona ze znieczulenia, monitorując funkcję oddechową przez cały czas. Następnie weź 20-mililitrową strzykawkę i napełnij ją sterylnym 0,9% roztworem chlorku sodu o temperaturze pokojowej. Przymocować strzykawkę do pompy infuzyjnej i ustawić prędkość infuzji na 0,01 mililitra na minutę.

Teraz podłącz strzykawkę za rurkę PE 30 z jednej strony złącza trójdrożnego. Podłącz cewnik pęcherza moczowego na drugą stronę i do przetwornika ciśnienia. Zamocuj przetwornik ciśnienia na tym samym poziomie co pęcherz myszy.

Następnie przymocuj jeden haczyk do linii uziemiającej do skóry, a drugi do miejsc złącza elektrody. Zapisz ciśnienie w oprogramowaniu. Po uruchomieniu oprogramowania należy sprawdzić ciśnienie dopęcherzowe i sygnały elektromiografii zwieracza cewki moczowej zewnętrznej.

Zapisz nazwę próbki i ustaw czas. Na koniec uruchom infuzję pompy i nagraj sygnały.