Name: Radiosynteza, kontrola jakości i obrazowanie pozytonowej tomografii emisyjnej małych zwierząt 68nanocząsteczek znakowanych Ga (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 55 s
Description: Poznaj radiosyntezę i kontrolę jakości nanocząsteczek znakowanych izotopem 68Ga do obrazowania PET/CT małych zwierząt. Ta metoda umożliwia badaczom ocenę nowych radioznaczników w modelach ksenotransplantacyjnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są wdzięczni Susanne Allekotte za jej wsparcie techniczne.

Radiosynthesis and PET/CT Imaging of 68Ga-Labelled Nanobody in Xenograft Models

<ol><li>American Cancer Society. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+facts+%26+figures+2024%22">Cancer facts & figures 2024</a>. , https://www.cancer.org/research/cancer-facts-statistics/all-cancer-facts-figures/2024-cancer-facts-figures.html (2024).</li>
<li>Cancer Research UK. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Ovarian+cancer+survival%22">Ovarian cancer survival</a>. , https://www.cancerresearchuk.org/about-cancer/ovarian-cancer/survival (2021).</li>
<li>Siegel, R. L., Giaquinto, A. N., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2024%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2024.</a> CA Cancer J Clin. 74 (1), 12-49 (2024).</li>
<li>Altunay, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Her2-directed+antibodies%2C+affibodies+and+nanobodies+as+drug-delivery+vehicles+in+breast+cancer+with+a+specific+focus+on+radioimmunotherapy+and+radioimmunoimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Nucl+Med+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Her2-directed antibodies, affibodies and nanobodies as drug-delivery vehicles in breast cancer with a specific focus on radioimmunotherapy and radioimmunoimaging.</a> Eur J Nucl Med Mol Imaging. 48 (5), 1371-1389 (2021).</li>
<li>Altunay, B., Morgenroth, A., Mottaghy, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+radionuclide-based+imaging+methods+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Use of radionuclide-based imaging methods in breast cancer.</a> Semin Nucl Med. 52 (5), 561-573 (2022).</li>
<li>Mcgale, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pet%2Fct+and+spect%2Fct+imaging+of+her2-positive+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Pet/ct and spect/ct imaging of her2-positive breast cancer.</a> J Clin Med. 12 (15), 4882(2023).</li>
<li>Zhang-Yin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+the+art+in+2022+pet%2Fct+in+breast+cancer%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">State of the art in 2022 pet/ct in breast cancer: A review.</a> J Clin Med. 12 (3), 968(2023).</li>
<li>USFD Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Pet+drug+products+-+current+good+manufacturing+practice+%28cgmp%29%22">Pet drug products - current good manufacturing practice (cgmp)</a>. , https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/pet-drug-products-current-good-manufacturing-practice-cgmp (2018).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Official+Journal+of+the+European+Union%2C+L238%22">Official Journal of the European Union, L238</a>. 60, https://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/?uri=OJ:L:2017:238:TOC (2017).</li>
<li>Korde, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Position+paper+to+facilitate+patient+access+to+radiopharmaceuticals%3A+Considerations+for+a+suitable+pharmaceutical+regulatory+framework%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Radiopharm+Chem%22%5BJournal%5D)">Position paper to facilitate patient access to radiopharmaceuticals: Considerations for a suitable pharmaceutical regulatory framework.</a> EJNMMI Radiopharm Chem. 9 (1), 2(2024).</li>
<li>Korde, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+considerations+for+navigating+the+regulatory+landscape+of+non-clinical+studies+for+clinical+translation+of+radiopharmaceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Radiopharm+Chem%22%5BJournal%5D)">Practical considerations for navigating the regulatory landscape of non-clinical studies for clinical translation of radiopharmaceuticals.</a> EJNMMI Radiopharm Chem. 7 (1), 18(2022).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22European+Pharmacopeia%22">European Pharmacopeia</a>. , (2023).</li>
<li>Volokhov, D. V., Graham, L. J., Brorson, K. A., Chizhikov, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycoplasma+testing+of+cell+substrates+and+biologics%3A+Review+of+alternative+non-microbiological+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Probes%22%5BJournal%5D)">Mycoplasma testing of cell substrates and biologics: Review of alternative non-microbiological techniques.</a> Mol Cell Probes. 25 (2-3), 69-77 (2011).</li>
<li>Dülsner, A., et al. Technical information from the Committee for Animal Welfare Officers (GV-SOLAS) and Working Group 4 in the TVT Recommendation on substance administration to laboratory animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aD%C3%BClsner%2C+A+%22GV-SOLAS%22">GV-SOLAS</a>. , (2017).</li>
<li>derived xenograft (pdx) protocols at the jackson laboratory. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://tumor.informatics.jax.org/mtbwi/live/www/html/SOCHelp.html">https://tumor.informatics.jax.org/mtbwi/live/www/html/SOCHelp.html</a> (2020).</li>
<li>Velikyan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68ga-based+radiopharmaceuticals%3A+Production+and+application+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">68ga-based radiopharmaceuticals: Production and application relationship.</a> Molecules. 20 (7), 12913-12943 (2015).</li>
<li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reporting+animal+research%3A+Explanation+and+elaboration+for+the+arrive+guidelines+2.0%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Reporting animal research: Explanation and elaboration for the arrive guidelines 2.0.</a> PLoS Biol. 18 (7), e3000411(2020).</li>
<li>Smith, A. J., Clutton, R. E., Lilley, E., Hansen, K. E. A., Brattelid, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prepare%3A+Guidelines+for+planning+animal+research+and+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Prepare: Guidelines for planning animal research and testing.</a> Lab Anim. 52 (2), 135-141 (2018).</li>
<li>Landesamt Für Natur UUVN. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Tierversuche%22">Tierversuche</a>. , https://www.lanuv.nrw.de/verbraucherschutz/tierversuche (2024).</li>
<li>Herrmann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+controversies+in+clinical+research%3A+Publication+bias+evaluations+are+not+routinely+conducted+in+clinical+oncology+systematic+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Statistical controversies in clinical research: Publication bias evaluations are not routinely conducted in clinical oncology systematic reviews.</a> Ann Oncol. 28 (5), 931-937 (2017).</li>
<li>Johnsen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+evaluation+of+amicon+ultra+centrifugal+filters+for+separating+proteins%2C+drugs+and+nanoparticles+in+biosamples%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">A critical evaluation of amicon ultra centrifugal filters for separating proteins, drugs and nanoparticles in biosamples.</a> J Pharm Biomed Anal. 120, 106-111 (2016).</li>
<li>TVT-Veröffentlichungen zum Download. , Society for Laboratory Animal Science (GV-SOLAS). Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.tierschutz-tvt.de/alle-merkblaetter-und-stellungnahmen/">https://www.tierschutz-tvt.de/alle-merkblaetter-und-stellungnahmen/</a> (2024).</li>
<li>Bedard, P. L., Hansen, A. R., Ratain, M. J., Siu, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+in+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity in the clinic.</a> Nature. 501 (7467), 355-364 (2013).</li>
</ol>

FMM jest doradcą medycznym dla NanoMab Technology Ltd. i Advanced Accelerator Applications (AAA) GmbH. Ostatnio otrzymał granty instytucjonalne od NanoMab Technology Ltd., Siemens i GE Precision Healthcare LLC. Ponadto posiada kontrakt na badania interwencyjne z CURIUM.

Radiosynteza Opisana tutaj radiosynteza jest typowa dla nowego związku znakowanego 68Ga - krótki czas syntezy, z naciskiem na odpowiednie pH i unikanie metali, gdy tylko jest to możliwe. W tym celu ważne jest, aby ściśle przestrzegać kolejności dodawania składników. W każdym przypadku wartość pH roztworu 68Ga musi być najpierw dostosowana do pH 4 przy 3 M NH4OAc; w przeciwnym razie nanocząsteczka może ulec degradacji, jeśli pH jest zbyt kwaśne. Ogólne koncepcje syntezy 68Ga zostały opisane wcześniej16, więc nie będziemy tutaj wchodzić w szczegóły. Moduł automatycznej syntezy wymaga dalszej optymalizacji pod kątem redukcji dawki promieniowania. Wymaga to znacznego wysiłku, który wykracza poza zakres badań eksploracyjnych w typowym eksperymencie przedklinicznym, jak opisano tutaj. Co więcej, jest mało prawdopodobne, aby zautomatyzowana synteza dała tak małe objętości, jakie możemy wyprodukować obecną metodą (< 1 ml), co pozwala na uzyskanie wyższych stężeń 68Ga i wyższej aktywności właściwej.
Kontrola jakości powinna być nadal przeprowadzana i rejestrowana w bardzo szczegółowy sposób. Jedynym wyjątkiem od tej zasady jest pH: podczas gdy pomiary pH do syntez klinicznych są często wykonywane bardzo dokładnie przy użyciu pH-metrów, w tym przypadku wystarczy zmierzyć pH za pomocą prostego paska pH, ponieważ pozwalają na to wymagania dotyczące wstrzyknięć dożylnych (dopuszczalne jest dowolne pH między 6 a 814). Ta prosta technika zmniejsza koszty i ryzyko skażenia sprzętu materiałem radioaktywnym.
Preparaty dla modeli zwierzęcych Ostateczna formuła znacznika jest kluczowym aspektem znacznika, aspektem, który często jest słabo opisywany w badaniach przedklinicznych. Chociaż istnieją jasne przepisy dotyczące formułowania farmaceutyków do badań klinicznych na ludziach, w tym radiofarmaceutyków, istnieją jedynie wytyczne17,18, które nie omawiają konkretnie rozpuszczalników ani postaci użytkowych. Wytyczne te są często wykorzystywane przy sporządzaniu lub ocenie wymaganych prawem protokołów do zatwierdzenia przez komisje etyczne (dotyczące zwierząt) (w Niemczech: LANUV19), ale dokumenty te niewystarczająco podkreślają znaczenie formuły. Jest prawdopodobne, że złe formuły mogą prowadzić do fałszywych (negatywnych) wyników, ale takie twierdzenie jest trudne do zweryfikowania, biorąc pod uwagę utrzymującą się stronniczość publikacji, która nadal istnieje, również w dziedzinie onkologii20.
Oprócz wytycznych ARRIVE zdecydowaliśmy się w jak największym stopniu przestrzegać przepisów przeznaczonych do stosowania u ludzi, zakładając, że preparaty odpowiednie dla ludzi są zasadniczo odpowiednie również dla gryzoni. Główną różnicą jest wielkość przedmiotu, a co za tym idzie, ilość objętości, którą można bezpiecznie wstrzyknąć. W tym celu zdecydowaliśmy się na oczyszczanie związku, gdy tylko jest to możliwe, za pomocą filtrów odcięcia masy cząsteczkowej (MWCO), ponieważ udowodniono, że są one skuteczne w oczyszczaniu dużych związków21. Pozwalają one na ostateczne rozpuszczenie typowego znacznika znakowanego 68Ga w wybranym roztworze i w małej objętości odpowiedniej dla myszy (typowe maksymalne wstrzyknięcie dożylne 100 - 150 μL).
W Niemczech GV-SOLAS (Gesellschaft für Versuchstierkunde, pol. Stowarzyszenie na rzecz zwierząt laboratoryjnych) służy jako pośrednik między ochroną zwierząt a badaniami, przynosząc korzyści zarówno ludziom, jak i zwierzętom. W związku z tym stowarzyszenie to opracowało zalecenia dotyczące wielu aspektów badań na zwierzętach, zwłaszcza w dziedzinie onkologii i anestezjologii, w celu standaryzacji opieki nad zwierzętami na poziomie krajowym14. Od tego czasu większość kompetentnych organów i krajowych komitetów etycznych egzekwuje przestrzeganie tych zaleceń zgodnie z protokołami dotyczącymi zwierząt. GV-SOLAS zawiera zalecenia dotyczące maksymalnych objętości większości ścieżek aplikacji. W przypadku wstrzyknięcia dożylnego zaleca się maksymalnie 5 ml/kg masy ciała; w przypadku myszy o wadze 25 g odpowiada to 150 μl. Z tego powodu wszystkie produkcje znaczników promieniotwórczych są ustawione na maksymalną objętość wstrzyknięć wynoszącą 150 μl na zwierzę. Przekroczenie tego progu podczas wstrzykiwania dożylnego zwiększa ryzyko ostrej niewydolności serca spowodowanej hiperwolemią. Wielokrotne wstrzyknięcia dożylne przekraczające ten próg prowadzą do zwiększonego ryzyka zwłóknienia płuc, ponieważ każde wstrzyknięcie, w zależności od prędkości przepływu, powoduje niewielki obrzęk płuc. Ludzkim odpowiednikiem mysiego dożylnego dożylnego przedstawionego w tej pracy byłoby wstrzyknięcie dożylnie w bolusie (w ciągu 10 s) całkowitej objętości 375 ml dla człowieka o wadze 75 kg. W standardowej opiece klinicznej podaje się 500 ml 0,9% roztworu NaCl w ciągu 1 godziny; Oznacza to, że 375 ml należy podać w ciągu 45 minut, aby uniknąć powikłań.
GV-SOLAS zaleca, aby obciążenie guzem nie przekraczało 5%; W przypadku, gdy zwierzę jest w trakcie leczenia, obciążenie może zostać zwiększone do 10%22. Ta różnica między grupami leczonymi i nieleczonymi może potencjalnie powodować błąd systematyczny w badaniach, szczególnie w przypadku przeżycia, ponieważ leczone myszy nowotworowe mogą osiągnąć wyższe obciążenie guzem niż grupa kontrolna otrzymująca aferent. Aby uniknąć takich przypadków, należy również ustalić 5% obciążenie guzem dla zwierząt leczonych; Może to jednak prowadzić do dylematów etycznych związanych z zabijaniem zwierząt badawczych przed osiągnięciem tzw. humanitarnego punktu końcowego lub (najlepiej) argumentować, że wzrost do 10% w przypadku aferentnych grup kontrolnych jest etycznie uzasadniony w celu uniknięcia stronniczości.
Ponieważ masa guza musi być obliczana codziennie w sposób nieinwazyjny, stosujemy współczynnik korekcyjny (tj. 0,82), aby przeliczyć codziennie obliczaną objętość guza na masę guza. Obliczyliśmy ten czynnik, mierząc średnicę guza za pomocą suwmiarki cyfrowej przed zabiciem zwierząt zgodnie z protokołem, a następnie rzeczywistą masę guza za pomocą wagi. Ten współczynnik korekcyjny różni się od gęstości tkanki nowotworowej, ponieważ zmierzona objętość guza obejmuje również skórę. Dlatego czynnik ten wynosi prawdopodobnie < 1,0, ponieważ zmierzona objętość guza jest większa niż rzeczywista objętość guza. Ponieważ guzy, które zważyliśmy, były stosunkowo duże, ponieważ ocena została przeprowadzona w ostatnim dniu eksperymentu, czynnik ten rzeczywiście zawyża wagę małych guzów. Powinien być stosowany wyłącznie w ocenie obciążenia guza.
Innym aspektem zaleceń GV-SOLAS jest to, że dla myszy stała średnica guza wynosząca 15 mm jest ustalana jako humanitarny punkt końcowy17. Często guz ma tendencję do szybkiego wzrostu wzdłuż kanału igły wykonanego przez wstrzyknięcie podskórne, jeśli po roztworze zawierającym komórki nowotworowe nie zostanie wstrzyknięte powietrze ani czopek. W związku z tym 15 mm są osiągane szybciej przy niektórych drogach aplikacji. Ponieważ, biorąc pod uwagę doświadczenie, niektóre guzy rosną w kształcie elipty, dostosowaliśmy i wykorzystaliśmy wyżej wspomnianą formułę objętości guza, aby dokonać bezstronnych porównań między różnymi drogami aplikacji.
Używane przez nas modele zwierzęce są projektowane zgodnie z wytycznymi ARRIVE17 i PREPARE18 , co pozwala na łatwą reprodukcję eksperymentalną. Model podlega pewnym zmianom, ponieważ tempo wzrostu guza różni się u różnych myszy, co utrudnia standaryzację i interpretację. Jednak różnice te odzwierciedlają heterogeniczność wewnątrz- i międzyguzową występującą u pacjentów z rakiem23.
Protokół ten nie jest pozbawiony ograniczeń. Zwierzęta muszą być uspokojone podczas wstrzyknięcia, zwłaszcza podczas badania PET/CT. Sedacja, szczególnie izofluranem, wpływa na przepływ krwi, a zwierzęta mogą stać się hipotermiczne, co wymaga użycia maty grzewczej i monitorowania głębokości sedacji. Tego problemu można uniknąć, skanując obudzone zwierzęta; Wymaga to jednak specjalistycznego oprogramowania i wiedzy specjalistycznej, które często nie są dostępne.
Kolejnym ograniczeniem jest dawka promieniowania. Chociaż dawka otrzymana przez zwierzęta jest znikoma dla pojedynczego skanowania, wykonanie wielu skanów (tj. zwłaszcza jeśli jest ich więcej niż 10) może skutkować znaczną dawką skumulowaną, potencjalnie wpływając na wzrost guza. Gdy wzrost guza jest parametrem odczytu, ważne jest, aby wszystkie zwierzęta otrzymały taką samą liczbę skanów i dawek, aby zapewnić porównywalne grupy, co zwiększa obciążenie całego projektu. Stosowanie systemu PET/MRI zamiast systemu PET/CT może zmniejszyć narażenie na promieniowanie. Takie podejście wiąże się jednak z dłuższym czasem skanowania, dodatkowymi kosztami i inną metodą pozyskiwania informacji anatomicznych.
Stosując się do zaleceń organizacji zajmujących się dobrostanem, takich jak GV-SOLAS w Niemczech, i postępując zgodnie z ustalonymi wytycznymi, takimi jak ARRIVE i PREPARE, dążymy do standaryzacji modeli zwierzęcych i minimalizacji zmienności w protokołach eksperymentalnych. Wysiłki te mają zasadnicze znaczenie dla zapewnienia wiarygodności i odtwarzalności badań przedklinicznych, co ostatecznie ułatwi translację obiecujących radiofarmaceutyków z laboratorium do łóżka pacjenta.

Jednym z tematów, który ma ogromne znaczenie, są badania w dziedzinie raka piersi. Rak piersi pozostaje często występującym nowotworem, stanowiąc około 1/3 wszystkich nowotworów u kobiet. Leczenie jest dostosowane do biologicznej i histologicznej charakterystyki guza oraz do stadium choroby. Szansa na przeżycie jest na ogół duża, chyba że guz ma już przerzuty, w którym to przypadku 5-letnie przeżycie wynosi tylko około 30%1. Podobny los spotyka inne nowotwory ginekologiczne, na przykład rak jajnika wykazuje > 95% 5-letniego przeżycia w przypadku guzów w stadium 1, ale tylko 15% w przypadku guzów w stadium 4 z przerzutami2,3.
Nieinwazyjne obrazowanie, w szczególności pozytonowa tomografia emisyjna (PET), przekształca badania nad rakiem, oferując niezrównany wgląd w aspekty molekularne guza, takie jak metabolizm, ekspresja receptorów i odpowiedź terapeutyczna4,5,6. Pozwala zarówno na wizualizację, jak i kwantyfikację określonych obszarów metabolicznych - pozwalając nie tylko na trafną diagnozę, ale także na monitorowanie efektu (nowych) terapii w bardzo krótkich punktach czasowych. Rzeczywiście, PET umożliwia ocenę odpowiedzi w porównaniu z brakiem odpowiedzi po 1-3 cyklach terapii i robi to lepiej i szybciej w porównaniu ze zmianami morfologicznymi obserwowanymi przez klasyczną tomografię komputerową (CT)7. Nieinwazyjny charakter PET umożliwia również badania podłużne.
Każdy model zwierzęcy wymaga maksymalnej standaryzacji w celu dokładnej oceny zdolności terapeutycznej nowych (radioaktywnych) farmaceutyków, więc należy położyć na to nacisk - zarówno w generowaniu modelu nowotworu, jak i w obrazowaniu/analizie danych PET dla małych zwierząt. Można by dyskutować o najlepszym modelu guza u zwierząt (inokulacja podskórna lub implantacja ortotopowa, nowotwory mysie, ludzkie lub syngeniczne, którym towarzyszy rutynowa opieka kliniczna lub nie), ale byłoby to poza celem tej publikacji. Do badań nad nowotworami wykorzystujemy kilka modeli, a ten opisany tutaj jest stosunkowo prostym modelem podskórnym.
Kontrola jakości w radiochemii jest najważniejsza dla bezpieczeństwa zwierząt i skuteczności leczenia. Ma to wpływ nie tylko na sam radiofarmaceutyk, ale także na postać produktu. Istnieje obszerne prawodawstwo dotyczące produkcji radiofarmaceutyków do zastosowań klinicznych8,9 (zobacz 10 w celu uzyskania obszernego przeglądu obowiązujących przepisów i wytycznych) oraz kilka wytycznych dotyczących właściwości radiofarmaceutyków do badań przedklinicznych (zobacz 11 w celu uzyskania obszernego przeglądu). Produkujemy radiofarmaceutyki zarówno do zastosowań klinicznych, jak i przedklinicznych, upraszczając przejście od wysokiej klasy kontroli jakości, jaką można znaleźć w syntezach do zastosowań klinicznych, na te do zastosowań przedklinicznych.
Nasze badania koncentrują się na teranostyce ukierunkowanej, szczególnie na nowotworach ludzkiego naskórkowego czynnika wzrostu 2 (HER2)-dodatnich. W związku z tym opracowujemy nowe radiofarmaceutyki do diagnozowania i monitorowania nowotworów w trakcie leczenia. Skuteczne radiofarmaceutyki diagnostyczne są również oceniane jako związki terapeutyczne wykorzystujące różne izotopy promieniowania. Ocena tych radiofarmaceutyków jest przeprowadzana początkowo na modelach zwierzęcych, dążąc do przełożenia klinicznego po obiecujących wynikach przedklinicznych. W tym artykule przedstawimy stosowane protokoły, na przykładzie jednego radiofarmaceutyku, w celu zapewnienia kontroli i zapewnienia jakości, a także standardową praktykę w zakresie wstrzykiwań dożylnych u myszy i skanowania PET/CT, w celu poprawy dokładności i wiarygodności badań przedklinicznych w obrazowaniu molekularnym. Protokół jest podzielony na trzy różne sekcje: radiochemia (synteza znaczników i kontrola jakości), generowanie modelu zwierzęcego (podskórny model guza) i obrazowanie.

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miernik aktywności ISOMED 2010</td><td>Nuviatech Healthcare&nbsp;</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka MIKRO 185</td><td>Andreas Hettich GmbH & Co. KG</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>Badanie endotoksyn Endosafe nexgen-PTS</td><td>Charles</td> <td>River-Blok</td><td></td></tr> <tr><td>grzewczy NANOCOLOR VARIO C2</td><td>Macherey-Nagel</td><td>919350</td><td></td></tr><tr><td>System HPLC, w tym detektor radiowy</td><td>Knauer & Oprogramowanie do</td> analizy obrazu <td>Raytest-Pmod</td><td></td></tr> <tr><td>4.4&nbsp;</td><td>PMOD Technologies LLC</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>System PET/CT dla małych zwierząt &beta;-CUBE i X-CUBE</td><td>Molecubes NV-TLC</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>MiniGITA*</td><td>Elysia-Raytest</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td><mocny>Materiały</mocny></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Średnica 0,3 mm Rurka PE10</td><td>fisher scientific</td><td>22-204008</td><td></td></tr><tr><td>Igła 30G</td><td>B|Braun</td><td>4656300</td><td></td></tr><tr><td>Filtr odśrodkowy; 10 kDa MWCO, 0,5 ml</td><td>miliporów</td><td>UFC501008</td><td></td></tr><tr><td>Pasek bibuły chromatograficznej iTLC-SG</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td></td></tr><tr><td>Endotoxin Cartridge, czułość 0,05 EU/ml&nbsp;</td><td>Charles River</td><td>PTS-2005</td><td></td></tr><tr><td>Kolumna HPLC Biosep SEC-s2000</td> Probówka do mikrowirówek <td>Phenomenex</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>(1,5 ml)</td><td>Eppendorf</td><td>0030125150</td><td></td></tr><tr><td>pasek pH 0,0 - 6,0</td><td>Merck KGaA</td><td>109531</td><td></td></tr><tr><td>pasek pH 0-14</td><td>Merck KGaA</td><td>109535</td><td></td></tr><tr><td>PS-H+ wkład SPE</td><td>Macherey Nagel GmbH &; Co. KG</td><td>731861</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna fiolka 10 ml</td><td>ALK Life Science Solutions</td><td>SEV100</td><td></td></tr><tr><td>odczynniki</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>68Ge/68Ga-Generator</td><td>NRF-iThembaLABS-Amonamacetate</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Merck KGaA</td><td>101116</td><td></td></tr><tr><td>Kwas cytrynowy</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>100241</tr><tr><td>Kwas solny</td><td>Merck KGaA</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Nanobody NM-02</td><td>Radiopharm Theranostics-P-SCN-Bz-DOTA-GA</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>CheMatech</td><td>C115</td><td></td></tr><tr><td>Kwas trifluorooctowy</td><td>Merck KGaA</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Woda ultraczysta</td><td>Merck KGaA</td><td></td><td></td>101262</tr></tbody></table>

radiosynteza, kontrola jakości i obrazowanie pozytonowej tomografii emisyjnej małych zwierząt 68nanocząsteczek znakowanych ga

Radiosynthesis, Quality Control, and Small Animal Positron Emission Tomography Imaging of 68Ga-Labelled Nano Molecules

Techniki obrazowania pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) i tomografii komputerowej emisji pojedynczych fotonów (SPECT) są kluczowe w przedklinicznych badaniach nad rakiem, wymagając skrupulatnej uwagi przy syntezie radioznaczników, zapewnieniu jakości i protokołach iniekcji in vivo. Badanie to przedstawia kompleksowy przebieg pracy dostosowany do zwiększenia odporności i odtwarzalności eksperymentów PET na małych zwierzętach. Proces syntezy w laboratorium radiochemicznym przy użyciu 68Ga jest szczegółowy, z naciskiem na rygorystyczne protokoły kontroli jakości i zapewnienia dla każdej produkcji radioznacznika. Parametry takie jak stężenie, aktywność molowa, pH i czystość są rygorystycznie monitorowane, zgodnie ze standardami mającymi zastosowanie w badaniach na ludziach. Metodologia ta wprowadza usprawnione przygotowanie strzykawki i specjalnie zaprojektowaną kaniulę 30G do precyzyjnych wstrzyknięć dożylnych myszom. Monitorowanie stanu zdrowia zwierząt podczas skanowania, w tym temperatury i tętna, zapewnia ich dobre samopoczucie przez cały czas trwania zabiegu. Dawki dla skanów PET i SPECT są z góry określone, aby zrównoważyć pozyskiwanie danych z minimalizacją narażenia na promieniowanie zwierząt i badaczy. Podobnie, tomografia komputerowa wykorzystuje wstępnie zaprogramowane ustawienia w celu ograniczenia narażenia na promieniowanie, co jest szczególnie istotne w długoterminowych badaniach oceniających efekty leczenia. Optymalizując te etapy, przepływ pracy ma na celu standaryzację procedur, zmniejszenie zmienności i poprawę jakości obrazowania PET/SPECT/CT małych zwierząt. Zasób ten dostarcza cennych informacji dla badaczy dążących do poprawy dokładności i wiarygodności badań przedklinicznych w obrazowaniu molekularnym, co ostatecznie przyczyni się do postępu w tej dziedzinie.

Jednym z najważniejszych aspektów kontroli jakości radiofarmaceutyku jest analiza za pomocą HPLC, ponieważ pozwala ona nie tylko określić czystość chemiczną i radiochemiczną (w tym przypadku 98,2%), ale także potwierdzić tożsamość radiofarmaceutyku poprzez porównanie czasu elucji i kształtu piku z tymi dla niepromienistego związku referencyjnego. Związkiem referencyjnym jest w tym przypadku nieznakowane nanociało, którego tożsamość została potwierdzona klasycznymi metodami, takimi jak spektrometria mas lub magnetyczny rezonans jądrowy. Metod tych nie można zastosować bezpośrednio do związku radioaktywnego (masa jest zbyt mała, aby wygenerować sygnał), jednak poprzez porównanie związku radioaktywnego z jego wzorcem gromadzi się wystarczające dowody na to, że oznakowano właściwy związek i nie uległ on zmianie podczas syntezy. Należy zwrócić uwagę na niewielką różnicę w czasie retencji między produktem radioaktywnym a wzorcem na Rysunku 1, co wynika z szeregowego pomiaru przepływu w układzie HPLC (najpierw mierzona jest absorpcja UV, a następnie przepływ potrzebuje około 0,2 min, aby dotrzeć do detektora promieniowania w typowej konfiguracji).
<img alt="Schemat wyników chromatografii; rozdział peptydów za pomocą HPLC; detekcja UV przy 280 nm; dane CPS." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Typowy chromatogram analityczny HPLC dla kontroli jakości nanociała NM-02 znakowanego 68Ga (GLNM-02). Absorbancja UV związku nieznakowanego (tj. górny panel) jest mierzona przy 280 nm i wykazuje pik w 4,18 min, z przesunięciem o 0,22 min. Pik produktu znakowanego 68Ga jest widoczny w detektorze gamma (tj. dolny panel). Wydajność radiochemiczna wynosi 98,2%. mAU = mili jednostek absorbancji, NM-02 = nasz produkt, UV = kanał światła ultrafioletowego, nm = nanometr, min = minuta, CPS = zliczenia na sekundę, GLMN-02 = nanociało NM-02 znakowane 68Ga, 68Ga-DOTA-GA = [68Ga]Ga-DOTA-GA, γ ChA = kanał gamma. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
W przypadku braku HPLC lub jako metoda uzupełniająca, TLC może być wykorzystana do określenia wydajności znakowania i czystości produktu końcowego (jednak nie do potwierdzenia jego tożsamości i z mniejszą szczegółowością niż HPLC). Ze względu na niską złożoność, TLC jest idealna w sytuacjach, gdy ścieżka radiosyntezy jest jeszcze optymalizowana. Rycina 2 przedstawia chromatogram TLC nanociała NM-02 znakowanego 68Ga (pozorna czystość radiochemiczna 99,9%).
<img alt="Wykres chromatograficzny, wynik TLC, stężenie w funkcji odległości, analiza piku, wizualizacja czoła rozpuszczalnika." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Typowy analityczny chromatogram TLC dla kontroli jakości nanociała NM-02 znakowanego 68Ga (GLNM-02). Liczba zliczeń powierzchniowych została naniesiona w funkcji odległości przebytej przez rozpuszczalnik (cytrynian) na płytce TLC. Wartość Rf wynosi 0.2, a czystość radiochemiczna 99,9%. C = zliczenia, mm = milimetr, GLNM-02 = nanociało NM-02 znakowane 68Ga, TLC = chromatografia cienkowarstwowa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
W procesie przygotowywania danych obrazowych do publikacji standardową praktyką jest przedstawienie przynajmniej jednego samodzielnego obrazu CT i PET. Takie podejście umożliwia kompleksową ocenę biodystrybucji znacznika. Standardowe skalowanie CT mieści się w zakresie od -1000 HU do 1000 HU, co pozwala na wizualizację wszystkich tkanek miękkich w ramach jednego okna. Jak pokazano na Rysunku 3A, metoda ta umożliwia wyraźne wyznaczenie granic nerek myszy, pozwalając jednocześnie na ocenę kości.
W przypadku skali PET należy ustawić dolny próg na poziomie SUV 0,0, zachowując minimalny próg górny wynoszący 1,0 (Rycina 3B), najlepiej stosując normalizację do masy ciała podczas obliczania SUV (tj. SUVbw). Ponadto do kwantyfikacji preferowany jest SUVmean w porównaniu do SUVmax; w przypadku zastosowania SUVmax należy użyć średniej z 10 najgorętszych wokseli zamiast wartości pojedynczego najgorętszego woksela w obliczeniach SUVbw. Należy przygotować fuzje cech obrazów PET/CT poprzez scalenie przekrojów CT i PET (Rycina 3C).
Aby umożliwić czytelnikom niezależną ocenę biodystrybucji znacznika w całym organizmie, maksymalną projekcję intensywności tego samego skanu PET można przedstawić przy użyciu tej samej skali co w przypadku przekroju PET (Rysunek 3D).
<img alt="Schemat porównawczy obrazowania CT, PET, PET/CT; ujawnia dane anatomiczne i funkcjonalne w badaniu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67048/67048fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Obrazy PET/CT in vivo myszy z podskórnym guzami SKOV-3. Obraz uzyskano 3 h po dożylnym wstrzyknięciu 5 MBq nanociała NM-02 (GLNM-02) znakowanego 68Ga. (A) Obraz CT jest przeskalowany w zakresie od -1000 HU do 1000 HU, natomiast (B) obraz PET znajduje się w zakresie SUV od 0,0 do 5,0. (C) Fuzja PET/CT wykorzystuje tę samą skalę. (D) Obraz PET z maksymalną projekcją intensywności (MIP) jest również przeskalowany przy użyciu SUV od 0,0 do 5,0. Wszystkie obrazy PET wykazują dobry wychwyt GLNM-02 przez guz, a klirens nerkowy jest wyraźnie widoczny. CT = tomografia komputerowa, PET = pozytonowa tomografia emisyjna, MIP = maksymalna projekcja intensywności, HU = jednostka Hounsfielda, SUV = standaryzowana wartość wychwytu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67048/67048fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
W konkretnym przypadku nanociała NM-02 znakowanego 68Ga można zaobserwować wyraźne wychwycenie znacznika przez guz w lewym boku myszy. Dodatkowo widoczne jest wydalanie znacznika przez nerki. Dzięki przedstawieniu maksymalnej projekcji intensywności (MIP) obrazowania PET widoczna staje się również aktywność w pęcherzu moczowym, co potwierdza nerkowy klirens znacznika. W tym konkretnym przypadku warto wspomnieć, że nerki, guz i pęcherz nie mogą być wyświetlone na tym samym przekroju 2D. Uwzględnienie maksymalnej projekcji intensywności w publikacjach pozwala na przedstawienie pełnej biodystrybucji znacznika na jednym obrazie.

Ten artykuł opisuje radiosyntezę, formułowanie, kontrolę jakości nowej sondy znakowanej radioaktywnie (tj. nanoniki NM-02 znakowanej 68Ga) oraz jej zastosowanie do obrazowania PET/CT małych zwierząt w modelu ksenoprzeszczepu.

Radiosynteza, kontrola jakości i obrazowanie pozytonowej tomografii emisyjnej małych zwierząt 68nanocząsteczek znakowanych Ga

Small animal Positron Emission Tomography (PET) and Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) imaging techniques are crucial in preclinical ...

Nasze badania koncentrują się na radiofarmacji, a więc na wytwarzaniu nowych radiofarmaceutyków zarówno dla zwierząt, jak i ludzi. W końcu chcemy zobrazować aspekty danej choroby, w naszym przypadku raka, i w ten sposób wspomóc leczenie w klinice. Teraz idziemy w kierunku czegoś więcej niż tylko obrazowania.Zamiast tego opracowujemy teranostyki, związki, które mogą być stosowane zarówno do obrazowania, jak i do terapii, po prostu poprzez zmianę radioaktywnego izotopu, który jest wbudowany w znacznik. Podstawową technologią stosowaną w medycynie nuklearnej jest pozytonowa tomografia emisyjna, krótka, PET, która jest dostępna zarówno dla małych zwierząt laboratoryjnych, jak i dla praktyki klinicznej. Korzystając z PET, możemy określić ilościowo i zlokalizować akumulację radioaktywnego znacznika wewnątrz organizmu, a to z kolei umożliwia nam ocenę wykonalności nowych znaczników w małych laboratoryjnych modelach chorób zwierząt pod kątem ich wykonalności w zastosowaniu klinicznym.Głównym wyzwaniem eksperymentalnym jest posiadanie radiofarmaceutyku, który nadaje się do wstrzykiwań dożylnych. Dodatkowo w modelu zwierzęcym jest wyzwanie. Z jednej strony chcemy modelu zwierzęcego, który naśladuje ludzką sytuację.Z drugiej strony chcemy modelu zwierzęcego, który jest powtarzalny i przewidywalny, a to jest trudne połączenie. W przyszłości nasze laboratorium będzie nadal koncentrować się na nieinwazyjnym obrazowaniu i terapii raka piersi. Pomimo kilku postępów w dziedzinie onkologii w ostatnich latach, nadal występuje wysoka śmiertelność i zachorowalność na raka piersi.Staje się to szczególnie trudne, gdy ten typ nowotworu ma przerzuty, a za pomocą nieinwazyjnego obrazowania molekularnego chcielibyśmy poprawić diagnostykę tych pacjentów. A także stosując radioterapię, chcielibyśmy zwiększyć ich przeżywalność. Na początek zmierz aktywność znakowanej radioaktywnie próbki koniugatu chelatora nanocząsteczki w probówce z mikrowirówką za pomocą miernika aktywności przy odpowiednim ustawieniu.Znajdź próbkę o pojemności od 10 do 15 mikrolitrów na pasku testowym pH, aby zmierzyć pH. Umieścić jeden mikrolitr mieszaniny reakcyjnej znakowanej radioizotopem na nasączonym krzemionką pasku TLC i pozostawić do wyschnięcia na jedną minutę. Napełnij komorę TLC kwasem cytrynowym jako fazą ruchomą i uruchom pasek, aż płyn dotrze do górnej części paska.Umieść pasek TLC na skanerze radiowym TLC i zmierz go zgodnie z protokołem producenta. Obliczyć wydajność reakcji znakowania radioaktywnego za pomocą chromatogramu radiowego, dzieląc obszar zintegrowany pod krzywą od RF przez całkowity obszar pod krzywą i mnożąc przez 100. Po zalaniu linii HPLC przez 10 minut odpowiednim rozpuszczalnikiem, dostosuj ustawienie do pomiaru przy użyciu izokratycznego przepływu 50-50 mieszaniny acetonitrylu jako rozpuszczalnika A i mieszaniny 0,9% roztworu chlorku sodu w połączeniu z kwasem trifluorooctowym i roztworem cytrynianu jako rozpuszczalnikiem B. Zmierz absorbancję UV na 280 nanometrach.Rozcieńczyć pięć mikrolitrów produktu w 15 mikrolitrach 0,9% chlorku sodu. Wstrzyknąć 15 mikrolitrów mieszaniny do radiowej HPLC analitycznej. Korzystając z wcześniej opisanych ustawień, zmierz sygnał radioaktywny i absorbancję UV produktu na poziomie 280 nanometrów.Niewielkie przesunięcie czasów retencji między kanałami UV i gamma wynika z konstrukcji HPLC. Następnie określ czystość radiochemiczną, całkując piki w kanale gamma. Zintegruj wszystkie inne piki w kanale gamma i oceń je jako zanieczyszczenia.Przygotować rozcieńczenie produktu od 1 do 20 o końcowej objętości 150 mikrolitrów, używając certyfikowanej wody wolnej od endotoksyn. Włóż jednorazowy wkład z endotoksyną napełniony wszystkimi niezbędnymi odczynnikami do czytnika do testowania endotoksyn. Załadować 25 mikrolitrów rozcieńczonego produktu do każdej komory naboju.Po przeprowadzeniu testu przez 15 minut, PTS obejmuje wewnętrzne kontrole dodatnie i ujemne. Produkt uważa się za wolny od endotoksyn, jeśli zawartość endotoksyny jest mniejsza niż 8,7 jednostki endotoksyny na mililitr przy maksymalnej objętości 20 mililitrów. Analiza HPLC potwierdziła czystość chemiczną i radiochemiczną radiofarmaceutyku na poziomie 98,2% i wykazała niewielką różnicę w czasie retencji między produktem radioaktywnym a nieradioaktywnym związkiem odniesienia.Chromatogram TLC wykazał pozorną czystość radiochemiczną na poziomie 99,9% dla nanonika znakowanego 68-galem NM02. Rozpocząć od napełnienia strzykawki znacznikiem radioaktywnym, w zależności od drogi podania. Zmierz radioaktywność znacznika za pomocą miernika aktywności.Aby przygotować cewnik o rozmiarze 30, usuń metalowy trzon igły z igły o rozmiarze 30, przecinając go metalowymi nożyczkami lub odginając od plastiku. Ręcznie włóż rurkę PE-10 o średnicy 0,3 milimetra do części wału wyjętej z piasty. Napełnij cewnik o rozmiarze 30 0,9% buforem chlorku sodu.Nałóż maść okulistyczną na oczy znieczulonej myszy, aby zapobiec wysuszeniu podczas sedacji. Po wybraniu żyły z ogona lekko obróć ogon, aby wybrana żyła zetknęła się z matą grzewczą i pozwól jej rozszerzyć się na minutę. Następnie obróć mysz do pozycji bocznej, tak aby wybrana żyła skierowała się ku górze.Przymocuj końcówkę i podstawę ogona taśmą. Weź cewnik o rozmiarze 30 ręką dominującą i delikatnie umieść palec wskazujący ręki niedominującej na wybranej żyle, aby utworzyć kopię zapasową krwi w środku, tworząc mały garb. Ręką dominującą umieść cewnik o rozmiarze 30 równolegle do ogona, skierowany w stronę garbu żyły.Przesuń dominującą rękę do przodu, aby zapewnić bezpośrednie nakłucie żyły. Po wejściu do żyły refluks krwi staje się widoczny w plastikowej rurce. Zamocować plastikową rurkę, aby upewnić się, że igła nie przesuwa się wewnątrz żyły podczas wstrzyknięcia.Na wolnym końcu rurki włożyć strzykawkę znacznikową podłączoną do igły o rozmiarze 30. Powoli wstrzykiwać zawartość strzykawki znacznikowej przez 10 sekund. Trzymając igłę w rozmiarze 30 G podłączoną do systemu cewnika, wyjmij tylko strzykawkę znacznikową i podłącz strzykawkę z 0,9% buforem chlorku sodu w celu przepłukania cewnika.Usuń cewnik o rozmiarze 30 z żyły ogonowej i użyj sterylnego bawełnianego kompresu, aby zatrzymać krwawienie. Oblicz pozostałą aktywność, mierząc aktywność cewnika o rozmiarze 30G, strzykawki buforowej, pustej strzykawki znacznikowej i kompresu bawełnianego za pomocą miernika aktywności. Umieść uspokojoną mysz w pozycji brzusznej na łóżku dla zwierząt i przymocuj ją do skanera PET.Upewnij się, że częstość oddechów myszy podczas skanowania wynosi od 75 do 50 oddechów na minutę. Przymocuj mysz za szyją do legowiska dla zwierząt za pomocą taśmy medycznej. Ustaw czas akwizycji na 45 minut i wybierz obszar zainteresowania do skanowania.Wprowadź ilość wstrzykniętej aktywności i czas wstrzyknięcia. Następnie wybierz 68-gal jako badany izotop i rozpocznij skanowanie. Obraz z tomografii komputerowej wyraźnie wyznaczał nerki myszy i pozwalał na ocenę kości.Obraz PET, przy użyciu standaryzowanej skali wartości wychwytu od zera do 5,0, wykazał znaczny wychwyt guza w lewej stronie myszy i klirens nerkowy znacznika. Obraz fuzyjny PET-CT pozwolił na kompleksową ocenę biodystrybucji znaczników. Projekcja maksymalnej intensywności PET ujawniła aktywność pęcherza moczowego, wzmacniając klirens nerkowy znacznika.

radiosynthesis-quality-control-small-animal-positron-emission

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Demonstrujemy półautomatyczną syntezę radiochemiczną [18F]3F4AP i procedury kontroli jakości.

Zautomatyzowana synteza radiochemiczna [18F]3F4AP: nowy znacznik PET do obrazowania chorób demielinizacyjnych

Opisujemy protokół przedklinicznego śledzenia in vivo przerzutów nowotworowych. Opiera się on na reporterze radionuklidowo-fluorescencyjnym łączącym symporter jodku sodu, wykrywany przez nieinwazyjny [18F]tetrafluoroboran-PET, oraz białko fluorescencyjne w celu usprawnionego potwierdzenia ex vivo. Metoda ma zastosowanie do przedklinicznego śledzenia komórek in vivo poza biologią guza.

Obrazowanie genu reporterowego radionuklidowo-fluorescencyjnego w celu śledzenia progresji guza w modelach guzów gryzoni

Tutaj prezentujemy protokół do uzyskania 68Ga domieszkowanych rdzeniem nanocząstek tlenku żelaza poprzez szybką syntezę mikrofalową. Metodologia ta pozwala uzyskać nanocząstki PET/(T1)MRI o skuteczności znakowania radioaktywnego wyższej niż 90% i czystości radiochemicznej 99% w 20-minutowej syntezie.

Synteza nanocząstek tlenku żelaza domieszkowanego rdzeniem 68Ga do podwójnej pozytonowej tomografii emisyjnej /(T1)Obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego

Miejsca obrazowania pozytonowej tomografii emisyjnej (PET), które biorą udział w wielu wczesnych badaniach klinicznych, wymagają solidnych i wszechstronnych możliwości produkcji radioznaczników. Na przykładzie radioznacznika [18F] Klofarabiny ilustrujemy, jak zautomatyzować syntezę radioznacznika za pomocą elastycznego radiosyntezatora opartego na kasecie i zwalidować syntezę do użytku klinicznego.

Automatyzacja protokołu syntezy radioznacznika metodą pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) do produkcji klinicznej

Tutaj reprezentujemy protokół do w pełni zautomatyzowanego znakowania radioaktywnego [11C]SNAP-7941 i analizy kinetyki w czasie rzeczywistym tego znacznika PET na komórkach wykazujących ekspresję i nieeksprymujących P-gp.

Techniczny aspekt automatycznej syntezy i oceny kinetycznej w czasie rzeczywistym [11C]SNAP-7941

Ta metoda szacuje pochłoniętą dawkę różnych struktur do terapii receptorami peptydowymi-radionuklidami (PRRT) z możliwością uniknięcia nakładania się narządów na projekcjach 2D. Seryjne obrazy płaskie całego ciała pozwalają na oszacowanie średnich dawek pochłoniętych w całym ciele, podczas gdy podejście hybrydowe, łączące obrazy płaskie i obraz 3D-SPECT/CT, przezwycięża ograniczenia związane z nakładaniem się struktur.

Protokół dozymetrii całego ciała w terapii radionuklidami peptydowo-receptorowymi (PRRT): obrazy planarne 2D i hybrydowe metody obrazowania 2D+3D SPECT/CT

Synteza radiofarmaceutyków znakowanych fluorem-18 (18F) do pozytonowej tomografii emisyjnej zazwyczaj wymaga miesięcy doświadczenia. Po włączeniu do radioznacznika, motyw akceptora krzemowo-fluorkowego (SiFA) umożliwia prosty protokół znakowania 18F, który jest niezależny od kosztownego sprzętu i szkolenia przygotowawczego, przy jednoczesnym zmniejszeniu ilości potrzebnego prekursora i wykorzystaniu łagodniejszych warunków reakcji.

Rozdział 18Znakowanie F radioznaczników funkcjonalizowanych akceptorem fluorku krzemu (SiFA) do pozytonowej tomografii emisyjnej

To badanie opracowało nieinwazyjną metodę oceny rozkładu programowanego ligandu śmierci 1 w całym ciele, na podstawie obrazowania tomograficznego emisji pozytonów antagonisty D-dodekapeptydu [68Ga]. Technika ta ma przewagę nad konwencjonalną immunohistochemią i poprawia skuteczność identyfikacji odpowiednich pacjentów, którzy odniosą korzyści z terapii blokującej immunologiczne punkty kontrolne.

Opracowanie znacznika PET znakowanego 68galem peptydu D do obrazowania ekspresji programowanego ligandu śmierci 1

Ta praca opisuje zautomatyzowaną produkcję do 1,7 GBq [68Ga]Ga-FAPI-46 na syntezatorze iPHASE MultiSyn do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty.

Zautomatyzowana radiosynteza [68Ga]Ga-FAPI-46 do rutynowego stosowania klinicznego

Ten protokół przedstawia szczegółową procedurę przygotowania czterech radioznaczników węgla-11 za pomocą "metody pętlowej" [11C]metylacji. Opisujemy procedurę syntezy [11C]ER-176, z danymi dla trzech dodatkowych radioznaczników: [11C]MRB, [11C]mHED i [11C]PiB. Metoda pętlowa zapewnia wydajną syntezę ze zwiększoną wydajnością radiochemiczną w porównaniu z tradycyjną metylacją naczynia reakcyjnego [11C].

Zwiększenie wydajności i wydajności znakowania radioligandów węgla-11 w badaniach klinicznych z wykorzystaniem metody pętli

To badanie opisuje zautomatyzowany proces produkcji [68Ga]Ga-3BP-3940 za pomocą syntezatora GAIA V2, do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty. Przedstawiono również wyniki badań kontroli jakości przeprowadzonych na trzech seriach testowych.

Automatyczne przygotowanie [68Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza

Poznaj radiosyntezę i kontrolę jakości nanocząsteczek znakowanych izotopem 68Ga do obrazowania PET/CT małych zwierząt. Ta metoda umożliwia badaczom ocenę nowych radioznaczników w modelach ksenotransplantacyjnych.

Radiosynteza, kontrola jakości i obrazowanie pozytonowej tomografii emisyjnej ^{małych zwierząt 68}nanocząsteczek znakowanych Ga

Przeglądaj więcej filmów