Wykorzystanie testu przesunięcia termicznego do badania wiązania substratu z selenoproteiną O

Naszym celem jest zbadanie aktywności biochemicznej białek o nieznanych funkcjach. Wiązanie kofaktora jest nie tylko niezbędne dla aktywności niektórych białek, ale może również wpływać na ich stabilność termiczną. Jednym z praktycznych zastosowań tego zjawiska jest wykorzystanie zmiany stabilności termicznej, mierzonej temperaturą topnienia białka, do analizy wiązania ligandów.

Test przesunięcia termicznego jest wszechstronnym narzędziem do badania interakcji białek z potencjalnymi kofaktorami lub lekami oraz do określania warunków stabilizujących krystalografię. Niektóre z jej zalet w porównaniu z innymi metodami przesiewania to stosunkowo prosta konfiguracja i wysoka przepustowość z płytkami 96 lub 384-dołkowymi. Selenoproteina O lub SelO jest ewolucyjnie konserwatywną pseudokinazą, która przenosi monofosforan adenozyny z ATP do substratów białkowych w modyfikacji potranslacyjnej znanej jako AMPylacja W tym protokole używamy TSA do analizy wiązania nukleotydów i metali z SelO.