Chirurgiczne podejście do zmiażdżenia nerwu wzrokowego w modelu królika
8 lipca 2025
Ten artykuł przedstawia szczegółowe instrukcje dotyczące wykonywania zmiażdżenia nerwu wzrokowego w modelu królika przy użyciu standardowych technik chirurgii okulistycznej.
Witam serdecznie. W tym filmie zademonstrujemy protokół wykonywania zmiażdżenia nerwu wzrokowego lub ONC w modelu królika przy użyciu standardowych okulistycznych technik chirurgicznych. Ta eksperymentalna technika generuje kontrolowane modele uszkodzeń nerwu wzrokowego, które są niezbędne do badania neuropatii nerwu wzrokowego i badania interwencji terapeutycznych. Stosując ONC u królików, dążymy do lepszego zrozumienia uszkodzeń nerwu wzrokowego w chorobach neurodegeneracyjnych i opracowania nowych strategii terapeutycznych. Przejdźmy do szczegółowej sekcji protokołu. Najpierw umieść szew rogówkowy o częściowej grubości przez górną obwodową rogówkę w pobliżu rąbka. Wykonaj górną spojówkę od godziny 10 do drugiej za pomocą nożyczek Westcotta i kleszczy o średnicy 12 milimetra. Ostrożnie przeanalizuj torebkę Tenona, aby odsłonić leżący pod spodem górny odbytnik prosty i górne mięśnie wzrokowe. Użyj haka mięśniowego, aby odizolować mięsień prosty górny. Teraz dwuramienny szew Vicryl zostanie przepuszczony na całej grubości przez środek odbytnicy górnej. Jest to zawiązane węzłem chirurgicznym. Igła jest przepuszczana częściową grubością przez całą długość mięśnia, od środka do krawędzi mięśnia. Igła jest ładowana z tyłu, a następnie przechodzi przez pełną grubość od spodu mięśnia, do przodu. Uchwyt igły przechodzi przez pętlę, a igła jest chwytana. Kiedy igła zostanie pociągnięta, szew zablokuje tę połowę mięśnia. Druga igła służy do zabezpieczenia drugiej połowy mięśnia w podobny sposób. Użyj nożyczek Westcotta, aby odłączyć mięsień prosty górny od gałki ziemskiej, uważając, aby nie przeciąć szwów. Delikatnie przeprowadź gałkę ziemską za pomocą szwu rogówkowego i wsuń szew mięśniowy z góry. Delikatnie wypreparuj otaczającą tkankę oczodołu, aby w pełni odsłonić nerw wzrokowy. Unikaj przecinania tkanek i stosuj tylko rozwarstwienie. Należy zachować ostrożność, aby uniknąć uszkodzenia żyły wirowej. Do odizolowania nerwu wzrokowego można użyć haka mięśniowego. Nerw wzrokowy królika jest nieco wyższy i otoczony tłuszczami zaoczodołowymi. Nerw jest biały i ma około jednego milimetra średnicy. Zacisnąć nerw wzrokowy za pomocą uchwytu na igłę przez 60 sekund, aby wywołać zmiażdżenie. Miejsce zgniecenia znajduje się około trzech milimetrów za głową nerwu wzrokowego, aby uniknąć uszkodzenia tętnicy ocznej. Teraz zreagtymuj mięsień prosty górny z powrotem do jego pierwotnego położenia na kuli ziemskiej. Przełóż dwie igły, które były wcześniej używane, aby częściowo zabezpieczyć mięsień prosty górny przez oryginalne wprowadzenie mięśnia. Zaciśnij szew i załóż węzeł chirurga. Zakończ zabieg, zszywając spojówkę do rąbka za pomocą trzech szwów neuroptycznych. W okresie rekonwalescencji i okresu postop należy zapewnić zwierzęciu środek przeciwbólowy i opiekę wspomagającą. Aby ocenić funkcję wzrokową, mierzymy stosunek średnicy źrenicy do średnicy bieli do bieli w warunkach oświetlenia mezopowego i błyskowego. Przed ONC źrenica znacznie się zwęziła w odpowiedzi na światło. Już pierwszego dnia po ONC średnica źrenicy wykazywała niewielkie lub żadne zmiany, co wskazuje na znaczną utratę funkcji wzrokowych. Zarejestrowaliśmy również potencjały wywołane w trybie błyskowym, VEPs, zarówno z zmiażdżenia nerwu wzrokowego, jak i nieleczonych oczu przeciwległych. Pomiary Flash VEP odzwierciedlają odpowiedź siatkówki, przez nerw wzrokowy, do mózgu. Podczas gdy latencja P1 pozostała stała, amplituda P1 znacznie się zmniejszyła w oczach ONC, co wskazuje na znaczną utratę funkcji wzrokowych. Do oceny utraty aksonów po zabiegu ONC wykorzystano obrazowanie fluorescencyjne podłużnych odcinków nerwu wzrokowego. W grupie nieleczonej następczy znacznik aksonów CTB wykazywał ciągłe znakowanie w całym nerwie wzrokowym. Jednak w grupie zmiażdżonej znakowanie aksonów zatrzymało się w miejscu zgniecenia, co wskazuje na uszkodzenie nerwów. Profile intensywności fluorescencji ilościowo to potwierdziły, wykazując znaczny spadek średniej intensywności aksonów znakowanych CTB dystalnie do miejsca zgniecenia. Podsumowując, przedstawiliśmy przewodnik krok po kroku dotyczący procedury ONC w modelu królika, zapewniający wiarygodną replikację. Nie zaobserwowaliśmy żadnych powikłań. Skuteczność techniki ONC w tworzeniu uszkodzeń nerwu wzrokowego i upośledzenia wzroku została potwierdzona poprzez ocenę odpowiedzi źrenic i VEP. Ten model królika stanowi opłacalną alternatywę dla większych modeli zwierzęcych, z bliższym anatomicznym i fizjologicznym podobieństwem do ludzi. Dziękuję za oglądanie.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejsze badanie szczegółowo opisuje protokół wykonywania zmiażdżenia nerwu wzrokowego (ONC) w modelu króliczym przy użyciu standardowych technik chirurgii okulistycznej. Celem jest stworzenie kontrolowanych modeli uszkodzenia nerwu wzrokowego w celu zbadania neuropatii optycznych oraz interwencji terapeutycznych. Wyniki wskazują na skuteczność techniki ONC w wywoływaniu upośledzenia wzroku, co zostało potwierdzone poprzez reakcję źrenic oraz wzrokowe potencjały wywołane (VEPs).
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Oftalmologia
- Neurobiologia
Wstęp
- Zgniecenie nerwu wzrokowego (ONC) jest stosowane w badaniach do modelowania uszkodzeń nerwu wzrokowego.
- Model ten dostarcza wiedzy na temat chorób neurodegeneracyjnych i potencjalnych terapii.
- Króliki wykazują podobieństwa anatomiczne i fizjologiczne do ludzkich nerwów wzrokowych.
- Technika ta umożliwia badanie funkcji wzrokowych po urazie.
Cel badania
- Opracowanie wiarygodnego modelu do badania neuropatii nerwu wzrokowego.
- Badanie interwencji terapeutycznych w przypadku uszkodzeń nerwu wzrokowego.
- Ocena powrotu funkcji wzroku po kontrolowanym uszkodzeniu nerwu wzrokowego.
Zastosowane metody
- W badaniu wykorzystano model królika w celu wywołania uszkodzenia nerwu wzrokowego.
- ZC (zgniatanie nerwu wzrokowego) wykonuje się przy użyciu precyzyjnych technik chirurgicznych, obejmujących szycie i dyssekcję.
- Funkcję wzrokową ocenia się poprzez reakcję źrenic oraz potencjały wywołane wzrokowe (VEP).
- Kluczowe etapy obejmują staranną ekspozycję nerwu wzrokowego oraz indukcję urazu przez zgniatanie.
Główne wyniki
- Procedura ONC skutecznie doprowadziła do znacznej utraty funkcji wzrokowych.
- Średnica źrenicy po ONC nie wykazywała większych zmian, co wskazuje na upośledzenie funkcji.
- Oceny VEP ujawniły zmniejszoną amplitudę w oczach poddanych ONC w porównaniu z grupą kontrolną.
- Obrazowanie fluorescencyjne potwierdziło utratę aksonów w miejscu zmiażdżenia.
Wnioski
- Niniejsze badanie ustanawia protokół wiarygodnego wywołania uszkodzenia nerwu wzrokowego u królików.
- Wyniki wykazują potencjał tego modelu w badaniu chorób nerwu wzrokowego.
- Otrzymane rezultaty przyczyniają się do zrozumienia mechanizmów uszkodzeń neuronalnych oraz możliwości terapeutycznych.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Opracowanie powtarzalnego modelu zmiażdżenia nerwu wzrokowego (ONC) u królików pozwala na wypełnienie luki translacyjnej pomiędzy badaniami na gryzoniach a ludzkimi neuropatiami nerwu wzrokowego. Model ten umożliwia bardziej predykcyjną ocenę strategii neuroprotekcyjnych oraz mechanistyczną redukcję ryzyka w procesie rozwoju terapii chorób neurodegeneracyjnych oka. Jego istotność anatomiczna pozwala na uzyskanie większej pewności w zakresie przedklinicznej walidacji celów terapeutycznych oraz oceny skuteczności leczenia.
Zastosowania strategiczne w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania i walidacja celu
- Umożliwia badanie mechanizmów uszkodzenia nerwu wzrokowego w systemie anatomicznie bardziej zbliżonym do ludzkiego.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów poprzez mierzalną utratę funkcji wzrokowej po urazie.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego poprzez izolację efektów specyficznych dla nerwu wzrokowego.
Przesiewanie i opracowywanie testów
- Zapewnia zwalidowaną platformę in vivo do oceny kandydackich związków neuroprotekcyjnych.
- Dostarcza zestandaryzowane i powtarzalne wyniki w zakresie urazu oraz funkcji do rozwoju testów.
- Umożliwia ilościowy pomiar reakcji źrenicznej i VEP w celu określenia punktów końcowych przesiewu.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Dostosowuje modele przedkliniczne do anatomii oka człowieka w celu zwiększenia istotności translacyjnej.
- Zapewnia ciągłość procesu od etapu odkrycia po przedkliniczne badanie skuteczności interwencji terapeutycznych.
- Umożliwia podejmowanie decyzji o dalszym rozwoju projektu z uwzględnieniem ryzyka, w oparciu o wyniki funkcjonalne i anatomiczne.
Integracja potoków i przepływów pracy
Ten króliczy model ONC wpisuje się w proces obejmujący etapy od wczesnego odkrywania po walidację przedkliniczną terapeutyków w leczeniu neuropatii nerwu wzrokowego.
- Biologia odkrywcza: Umożliwia testowanie hipotez dotyczących mechanizmów uszkodzenia i regeneracji nerwu wzrokowego.
- Przesiew: Zapewnia powtarzalne, ilościowe punkty końcowe funkcji do oceny związków chemicznych.
- Analityka: Umożliwia statystyczne porównanie funkcji wzrokowej i integralności aksonów w grupach eksperymentalnych.
- Badania translacyjne: Niweluje luki anatomiczne i fizjologiczne między modelami gryzoni a chorobami ludzi.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Oferuje skalowalny, cost-effective model do powtarzalnej oceny terapeutycznej.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną w zakresie walidacji celu oraz badań mechanistycznych.
- Wartość operacyjna: Standaryzuje indukcję urazu i ocenę funkcjonalną w celu zapewnienia powtarzalności.
- Wartość strategiczna: Redukuje ryzyko biologiczne na późnych etapach dzięki poprawie translacyjności modelu.
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację kandydatów neuroprotekcyjnych z uwzględnieniem ryzyka.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymaga doświadczenia w zakresie okulistycznej mikrochirurgii i pracy ze zwierzętami.
- Wymaga dostępu do infrastruktury do rejestracji elektrofizjologicznej i obrazowania fluorescencyjnego.
- Wymaga standaryzacji protokołów chirurgicznych i oceny pomiędzy zespołami.
- Możliwa jest konieczność adaptacji dla innych gatunków lub różnych stopni ciężkości urazu.
- Ograniczenia modelu obejmują anatomiczną zmienność międzyosobniczą oraz odpowiedzi specyficzne dla danego gatunku.
