Name: Formulacja nanomateriałów na bazie z wykorzystaniem ekstraktu z kory Eucommia ulmoides i ich potencjał gojenia ran (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: Poznaj syntezę nanocząstek tlenku cynku z ekstraktu kory Eucommia ulmoides i ich zastosowanie w gojeniu ran. Metoda wykorzystuje komórki HUVEC i test zadrapania, pokazując 81,5% zamknięcia rany przy stężeniu 20 μg/mL.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby serdecznie podziękować Wydziałowi Biologii Komórki, Central South University, Changsha, Chiny, za dostarczenie urządzeń.

UWAGA: Przed przygotowaniem ekstraktu, uzyskany materiał kory został dwukrotnie umyty wodą dejonizowaną i wysuszony w zacienionym miejscu. Wysuszoną w cieniu korę przechowywano w hermetycznym pojemniku.
1. Przygotowanie ekstraktu z kory Eucommia ulmoides
<ol>
	<li>Pokrój korę zebraną z drzewa Eucommia ulmoides na małe kawałki za pomocą nożyczek.</li>
	<li>Umyj posiekane materiały z kory dwukrotnie wodą podwójnie destylowaną.</li>
	<li>Suszyć kawałki kory w temperaturze 37 °C przez 24 godziny w zacienionych warunkach.
	<ol>
		<li>Dostosuj czas trwania procesu suszenia w zależności od ilości kory użytej do badania. Upewnij się, że kora jest całkowicie wysuszona przed pokrojeniem kory na małe kawałki. Unikaj bezpośredniego światła słonecznego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przenieść 20 g suszonej w cieniu kory do stożkowej kolby zawierającej 220 ml sterylnej, podwójnie destylowanej wody i ogrzewać w temperaturze 130 °C przez 20 minut.
	<ol>
		<li>Kolor roztworu reakcyjnego zmienia się na jasnożółty. Zmiany koloru roztworu następują po 10 minutach. Pozwól roztworowi podgrzać się przez kolejne 10 minut. Dostosuj objętość wody podwójnie destylowanej w zależności od ilości próbki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Surowy ekstrakt zawierający poliizopren należy przechowywać w temperaturze 4 °C do dalszego wykorzystania. Powstanie nitkowatej struktury wskazuje na obecność poliizoprenu w ekstraktach.</li>
</ol>
2. Biosynteza nanocząstek ZnO za pośrednictwem kory E. ulmoides
<ol>
	<li>Dodać 1 M dwuwodnego azotanu Zn (NO3)2 do 50 ml wody dejonizowanej w kolbie stożkowej o pojemności 500 ml. Mieszać w sposób ciągły za pomocą mieszania magnetycznego (60 obr./min). Zn (NO3)2 potrzebuje 30 minut, aby całkowicie się rozpuścić.</li>
	<li>Dodać kroplami 15 ml ekstraktu z kory E. ulmoides do 20 ml 1 M roztworu dwuwodnego azotanu (Zn (NO3)2).</li>
	<li>Umieść przykrytą mieszaninę reakcyjną na mieszadle magnetycznym, włącz mieszadło i wiruj z prędkością (60 obr./min) przez 3 godziny.</li>
	<li>Dodać kroplami 1 N roztwór wodorotlenku sodu NaOH (3 ml) do mieszaniny reakcyjnej, aby dostosować pH do 9. Dodawać NaOH, aż mieszanina roztworu zmieni kolor na mlecznobiały, a pH nie będzie większe niż 9. Roztwór nabiera mlecznobiałego koloru, gdy powstają nanocząstki ZnO.
	<ol>
		<li>Przygotowanie 1 M roztworu azotanu dwuwodnego Zn (NO3)2 objętości może się różnić w zależności od potrzeb doświadczalnych. Upewnij się, że używasz świeżo przygotowanych ekstraktów z kory. Jeśli pH przekroczy 10, spowoduje to agregację nanocząstek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przenieść zsyntetyzowane eu-ZnO-NPs do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml i odwirować ją przy 100 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. 
	UWAGA: Zanieczyszczeń można uniknąć poprzez natychmiastowe pranie.</li>
	<li>Umyte Eu-ZnO-NPs zebrać na szklanej płytce i wysuszyć w temperaturze 45-50 °C przez 1 godzinę w piecu z gorącym powietrzem. 
	UWAGA: Jeśli Eu-ZnO-NP są przechowywane dłużej niż 30 minut, może to mieć wpływ na fizykochemiczny charakter nanocząstek</li>
</ol>
3. Potwierdzenie rozmiaru za pomocą TEM
<ol>
	<li>Przygotować 1 mg/ml nanocząstek w DDH2O i załadować 5 μl próbki Eu-ZnO-NP do siatki miedzianej i poczekać, aż całkowicie wyschnie. Zwiruj próbkę przed załadowaniem na miedzianą siatkę.</li>
	<li>Załadować miedzianą siatkę zawierającą Eu-ZnO-NP do uchwytu próbki TEM i uzyskać obrazy w powiększeniach 50x i 100x. 
	UWAGA: Na tym etapie siatki należy podnieść za pomocą pęsety.</li>
</ol>
4. Ocena cytotoksyczności
<ol>
	<li>Wysiewać 1 × 104 HUVEC w każdym dołku 96-dołkowej płytki i umieścić ją w inkubatorze o temperaturze 5% CO2 37 °C.</li>
	<li>Dodać 10 μl o różnych stężeniach 0, 10, 20, 30, 40 i 50 μg/ml Eu-ZnO-NPs do 90% zlewających się komórek i inkubować przez 24 godziny.</li>
	<li>Po inkubacji usunąć starą pożywkę bez naruszania komórek, dodać 10 μl roztworu CCK-8 do każdej studzienki zawierającej 90 μl świeżej pożywki DMEM i inkubować w inkubatorze o stężeniu 5% CO2 i temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Zmierzyć absorbancję komórek poddanych działaniu roztworu CCK8 przy długości fali 450 nm za pomocą spektrofotometru. 
	UWAGA: Absorbancję zmierzono natychmiast w ciągu 15 minut, aby uniknąć zmian absorbancji.</li>
</ol>
5. Przygotowanie komórek HUVEC do testu scratch
<ol>
	<li>Wysiać odpowiednią ilość (1 × 105) HUVEC na 12-dołkowych płytkach hodowlanych zawierających zmodyfikowane podłoże Eagle firmy Dulbecco z 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS) i 1% paciorkowcem piórkowym i inkubować w inkubatorze o stężeniu 5% CO2 37 °C.
	<ol>
		<li>Przed wykonaniem testu zarysowania należy sprawdzić zbieg za pomocą mikroskopu odwróconego. 
		UWAGA: Do przeprowadzenia testu zarysowania zostaną użyte płytki 6-dołkowe lub 12 płytek w zależności od wymagań, a gęstość komórek będzie się różnić dla różnych płytek hodowlanych. Zastosowanie 70%-80% zlewających się komórek jest idealne i zalecane do testów zarysowania. Objętość pożywki DMEM może się różnić w zależności od płytek hodowlanych wykorzystanych w badaniu. Na przykład płytki 6-dołkowe wymagają 1-1,5 ml pożywki hodowlanej, a płytki 12-dołkowe wymagają 0,5-1,0 ml pożywki wzrostowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Delikatnie wykonać rysę za pomocą sterylnej końcówki pipety o pojemności 200 μl w reprezentatywnej ranie o szerokości rany 200 μm.</li>
	<li>Upewnij się, że końcówka używana do wykonywania zadrapań na monowarstwie ogniw styka się z powierzchnią komórek. 
	UWAGA: Za każdym razem, gdy wykonuje się zadrapanie, użyj sterylnej końcówki.</li>
	<li>Usuń całe podłoże i umyj monowarstwę HUVEC za pomocą 1 ml 1x PBS w celu usunięcia oderwanych komórek. 
	UWAGA: Upewnij się, że odłączone komórki jednowarstwowe zostały całkowicie usunięte z odpowiednich studzienek. Upewnij się, że w obszarze utworzonym przez ranę nie doszło do uszkodzenia.</li>
	<li>Aby ocenić potencjał gojenia się ran zsyntetyzowanych Eu-ZnO-NPs, dodaj do studzienek 0 (kontrola), 10 i 20 μg/ml stężenia nanocząstek Eu-ZnO w połączeniu z kompletną pożywką z 10% FBS. Utrzymywać płytki doświadczalne w temperaturze 37 °C w inkubatorze o stężeniu 5%CO2. 
	UWAGA: Nie naruszaj monowarstwy komórek podczas dodawania świeżej, kompletnej pożywki. Upewnij się, że komórki jednowarstwowe pozostają nienaruszone podczas inkubacji.</li>
	<li>Wykonać mikrofotografię po 0 h i 24 h za pomocą mikroskopu odwróconego. Użyj narzędzia do adnotacji, aby zmierzyć zamknięcie rany w różnych odstępach czasu.
	<ol>
		<li>Obliczyć procent zamknięcia rany, korzystając z następującego wzoru: Zamknięcie rany (%) = [(migracja komórek (w μm) po 0 h - migracja komórek (w μm) po 24 godzinach)/ migracja komórek (w μm) po 0 godzinach] x 100.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Bioactive ZnO Nanoparticles from Eucommia ulmoides for Wound Healing Enhancement

<ol><li>Williamson, E. M., Liu, X., Izzo, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+use%2C+pharmacology%2C+and+clinical+applications+of+emerging+herbal+nutraceuticals%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Trends in use, pharmacology, and clinical applications of emerging herbal nutraceuticals.</a> Br. J. Pharmacol. 177 (6), 1227-1240 (2020).</li>
<li>Cedillo-Cortezano, M., Martinez-Cuevas, L. R., López, J. A. M., Barrera López, I. L., Escutia-Perez, S., Petricevich, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+medicinal+plants+in+the+process+of+wound+healing%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals%22%5BJournal%5D)">Use of medicinal plants in the process of wound healing: a literature review.</a> Pharmaceuticals. 17 (3), 303(2024).</li>
<li>Budovsky, A., Yarmolinsky, L., Ben-Shabat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+medicinal+plants+on+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Effect of medicinal plants on wound healing.</a> Wound Repair Regen. 23 (2), 171-183 (2015).</li>
<li>Yazarlu, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspective+on+the+application+of+medicinal+plants+and+natural+products+in+wound+healing%3A+A+mechanistic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Perspective on the application of medicinal plants and natural products in wound healing: A mechanistic review.</a> Pharmacol Res. 174, 105841(2021).</li>
<li>Zhu, M. Q., Sun, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eucommia+ulmoides+Oliver%3A+a+potential+feedstock+for+bioactive+products%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Eucommia ulmoides Oliver: a potential feedstock for bioactive products.</a> J Agric Food Chem. 66 (22), 5433-5438 (2018).</li>
<li>Peng, M., Zhou, Y., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+and+potential+application+of+extracts+and+compounds+from+different+medicinal+parts+%28bark%2C+leaf%2C+staminate+flower%2C+and+seed%29+of+Eucommia+ulmoides%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Biological properties and potential application of extracts and compounds from different medicinal parts (bark, leaf, staminate flower, and seed) of Eucommia ulmoides: A review.</a> Heliyon. 10 (6), e27870(2024).</li>
<li>Xing, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+rheumatoid+arthritis+using+bark%2C+leaf%2C+and+male+flower+extracts+of+Eucommia+ulmoides%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Inhibition of rheumatoid arthritis using bark, leaf, and male flower extracts of Eucommia ulmoides.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2020, 3260278(2020).</li>
<li>Guo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+detection+of+natural+rubber+content+in+Eucommia+ulmoides+by+portable+pyrolysis-membrane+inlet+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Quantitative detection of natural rubber content in Eucommia ulmoides by portable pyrolysis-membrane inlet mass spectrometry.</a> Molecules. 28 (8), 3330(2023).</li>
<li>Yusof, H. M., Rahman, N. A., Mohamad, R., Zaidan, U. H., Samsudin, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+zinc+oxide+nanoparticles+by+cell-biomass+and+supernatant+of+Lactobacillus+plantarum+TA4+and+its+antibacterial+and+biocompatibility+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of zinc oxide nanoparticles by cell-biomass and supernatant of Lactobacillus plantarum TA4 and its antibacterial and biocompatibility properties.</a> Sci Rep. 10, 19996(2020).</li>
<li>Gosens, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+agglomeration+state+of+nano-and+submicron+sized+gold+particles+on+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Part+Fibre+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Impact of agglomeration state of nano-and submicron sized gold particles on pulmonary inflammation.</a> Part Fibre Toxicol. 7 (1), 37(2010).</li>
<li>Zare, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+nanoparticles+aggregation%2Fagglomeration+in+polymer+particulate+nanocomposites+by+mechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Compos+A+Appl+Sci+Manuf%22%5BJournal%5D)">Study of nanoparticles aggregation/agglomeration in polymer particulate nanocomposites by mechanical properties.</a> Compos A Appl Sci Manuf. 84, 158-164 (2016).</li>
<li>Kim, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+calcination+temperature+on+the+phase+composition%2C+photocatalytic+degradation%2C+and+virucidal+activities+of+TiO2+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">Effects of calcination temperature on the phase composition, photocatalytic degradation, and virucidal activities of TiO2 nanoparticles.</a> ACS Omega. 6 (16), 10668-10678 (2021).</li>
<li>Aydin Acar, C., Gencer, M. A., Pehlivanoglu, S., Yesilot, S., Donmez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+and+eco-friendly+biosynthesis+of+zinc+oxide+nanoparticles+using+Calendula+officinalis+flower+extract%3A+Wound+healing+potential+and+antioxidant+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Wound+J%22%5BJournal%5D)">Green and eco-friendly biosynthesis of zinc oxide nanoparticles using Calendula officinalis flower extract: Wound healing potential and antioxidant activity.</a> Int Wound J. 21 (1), e14413(2024).</li>
<li>Sana, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crotalaria+verrucosa+leaf+extract+mediated+synthesis+of+zinc+oxide+nanoparticles%3A+assessment+of+antimicrobial+and+anticancer+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Crotalaria verrucosa leaf extract mediated synthesis of zinc oxide nanoparticles: assessment of antimicrobial and anticancer activity.</a> Molecules. 25 (21), 4896(2020).</li>
<li>Zhang, H., Liang, Z., Zhang, J., Wang, W. P., Zhang, H., Lu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+oxide+nanoparticle+synthesized+from+Euphorbia+fischeriana+root+inhibits+the+cancer+cell+growth+through+modulation+of+apoptotic+signaling+pathways+in+lung+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arab+J+Chem%22%5BJournal%5D)">Zinc oxide nanoparticle synthesized from Euphorbia fischeriana root inhibits the cancer cell growth through modulation of apoptotic signaling pathways in lung cancer cells.</a> Arab J Chem. 13 (7), 6174-6183 (2020).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia

Uważa się, że kora, nasiona i liście E. ulmoides wykazują liczne korzyści zdrowotne. Nasze wyniki pokazały, że synteza nanocząstek EU-ZnO została osiągnięta przy użyciu prostego i opłacalnego podejścia. Do syntezy nanocząstek wykorzystano ekstrakt wodny. Podgrzewanie materiału kory w wysokich temperaturach może powodować degradację niektórych fitoskładników i obniżać wydajność ekstrakcji. Fitoskładniki obecne w wodnym ekstrakcie ziołowym mogą redukować jony metali, tworząc nanocząsteczki. Dwuwodny azotan jest wykorzystywany do wytwarzania nanocząstek ZnO ze względu na ich biokompatybilne i wysoce stabilne właściwości9. Stosowanie pierwiastków metalowych powodujących minimalną lub wysoką toksyczność do syntezy lub projektowania nanomateriałów jest ryzykowne i nie może być wykorzystywane do twierdzeń biomedycznych. Syntezę tę można przeprowadzić w ciągu jednego dnia (24 h). Jednak nietoksyczne metale i materiały biokompatybilne są uważane za bezpieczne i wykorzystywane do oceny skuteczności gojenia się ran. Główną przyczyną aglomeracji zsyntetyzowanych nanocząstek są wiązania fitochemiczne. Aglomeracja nanocząstek wynikała z atrakcyjnego charakteru oddziaływań Van der Waala i sił przyciągania między powierzchnią10,11. Aglomeracja nanocząstek może wpływać na właściwości fizyczne i optyczne. Wielkość i kształt nanocząstek można modyfikować za pomocą kalcynacji i wyżarzania12. Ponowne zawieszenie nanomateriałów w wodzie dejonizowanej i sonikacja mogą pomóc w uniknięciu aglomeracji nanocząstek. Obecność związków bioaktywnych lub grup funkcyjnych w ekstrakcie wodnym może mieć wpływ na proces redukcji. Wydajność nanocząstek zależy wyłącznie od objętości mieszaniny reakcyjnej użytej w procesie syntezy. Synteza nanocząstek na dużą skalę ma kilka ograniczeń, w tym aglomerację i niejednorodną wielkość cząstek.
Podobnie jak nasze odkrycia, Aydin Acar i wsp.13 stwierdzili, że nanocząstki ZnO za pośrednictwem ekstraktu z kwiatów nagietka lekarskiego wykazywały właściwości gojenia ran na komórkach L929 przy 69,1% zamknięciu rany. Co więcej, nanocząstki ZnO za pośrednictwem liści Crotalaria verrucosa wykazywały potencjał gojenia się ran przy stężeniu 5 μg/ml na liniach komórkowych HeLA przy 40,45% zamknięciu rany14. Zhang i wsp.15stwierdzili, że nanocząstki ZnO zsyntetyzowane przy użyciu Euphorbia fischeriana wykazały znaczące właściwości gojenia ran w stężeniach 10 i 15 μg/ml. Badania te dowiodły, że zsyntetyzowany nanopreparat może być stosowany jako środek gojący rany. Wyniki tych badań wykazały, że zsyntetyzowane związki mogą naprawiać ranę i pomagać w reepitelializacji w grupach leczonych.
Hemostaza i migracja komórek są uważane za ważne procesy w gojeniu się ran. Zadrapanie utworzone na monowarstwie HUVEC zostało wykonane przy użyciu końcówek pipet, aby naśladować sztuczne rany. Co więcej, tworzenie ran o tej samej szerokości jest dość trudne i skomplikowane. Z drugiej strony jest to tańsza metoda. W tym teście zaobserwowano, że zaprojektowane nanocząstki wykazywały doskonałe właściwości gojenia ran na HUVEC przy stężeniach 10-20 μg/ml w porównaniu z kontrolą. Co więcej, zsyntetyzowane Eu-ZnO-NP mają zdolność naprawy rany powstałej na monowarstwie komórki, nie powodując przy tym żadnych skutków toksycznych. Te eksperymenty in vitro mogą zostać wykorzystane do określenia skuteczności zsyntetyzowanych nanomateriałów na bazie polimerów przy użyciu modeli zwierzęcych.

Wykazano, że rośliny lecznicze i związki pochodzenia roślinnego wykazują liczne korzyści zdrowotne1. Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) poinformowała, że 80% światowej populacji polega na tradycyjnych roślinach leczniczych w podstawowej opiece zdrowotnej. Chiny są dobrze rozpoznawalne i popularne ze względu na praktyki Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (TCM). Doniesiono, że chińskie zioła lecznicze leczą różne choroby i są wykorzystywane ze względu na ich potencjał biologiczny. Rośliny lecznicze służą jako rezerwuary związków bioaktywnych i pełnią wiele ról terapeutycznych. Rośliny lecznicze były również wykorzystywane do leczenia ran. Istnieje kilka rodzajów podejść stosowanych w leczeniu ran przewlekłych2. Niedawne badania wykazały, że rośliny lecznicze są zaangażowane w proces gojenia się ran, zapewniając dogodne warunki do gojenia, wolne od infekcji i przyspieszając regenerację tkanek3. Tymczasem właściwości przeciwbakteryjne i przeciwgrzybicze związków bioaktywnych obecnych w roślinach leczniczych mogą pomóc w leczeniu ran i zwiększyć skuteczność gojenia się ran4.
Nanomateriały na bazie metalu zyskują na popularności ze względu na swoje właściwości biokompatybilne i biodegradowalne. Eucommia ulmoides, potocznie nazywana chińskim drzewem kauczukowym, jest rodzimym gatunkiem Chin. Liście i kora drzewa są wykorzystywane w praktykach leczniczych. Co najważniejsze, gatunek rośliny był uprawiany w centralnych i zachodnich prowincjach Chin5. Peng et al.6stwierdzili, że liście, kora i kwiaty pręcikowe są jadalne o potencjale terapeutycznym. Ponadto E. ulmoides jest najlepszym źródłem lignanów, fenylopropanoidów, irydoidów, flawonoidów, aminokwasów i pierwiastków śladowych. Ponadto kora została wykorzystana do różnych zastosowań biomedycznych, takich jak kontrolowanie ciśnienia krwi, obniżanie poziomu tłuszczu oraz promowanie antyosteroporozy i aktywności hipoglikemicznej7. Stąd niewątpliwie udowodniono, że ekstrakt z kory E. ulmoides ma długą historię w tradycyjnej medycynie chińskiej. Wcześniejsze doniesienia sugerowały, że naturalny polimer poliizoprenu jest bogaty w korę Eucommia ulmoides8. W oparciu o powyższe informacje, niniejsze prace mają na celu wytworzenie nanomateriałów z wykorzystaniem ekstraktów z kory Eucommia ulmoides. Połączenie z ekstraktem z kory jest atrakcyjnym wyborem do otrzymywania nanomateriałów. Ogólnie rzecz biorąc, ostatecznym celem niniejszego badania było wytworzenie nowatorskiego hybrydowego nanomateriału do zastosowań związanych z gojeniem się ran.

<table><tbody><tr><td>Płytka 12-dołkowa</td><td>NEST</td><td>703011</td><td>Służy do hodowli komórkowych i oznaczania</td></tr><tr><td>Wirówka</td><td>SCILOGEX</td><td>SC1406</td><td>Służy do oddzielania nanocząstek od mieszaniny koloidalnej</td></tr><tr><td>Probówka wirówkowa &ndash; 15 mL</td><td>BIOFIL</td><td>CFT-312150</td><td>Do odwirowania zsyntetyzowanego roztworu&nbsp;</td></tr><tr><td>Probówka wirówkowa &ndash; 5 ml</td><td>Biosharp&nbsp;</td><td>BS-50-CM-S</td><td>Do przechowywania nanocząstek</td></tr><tr><td>Inkubator CO2</td><td>Thermo scientific</td><td>3010</td><td>Do hodowli komórek HUVEC</td></tr><tr><td>Woda odnotowana</td><td>Millipore</td><td>Nie dotyczy&nbsp;</td><td>Do przygotowania ekstraktu&nbsp;</td></tr><tr><td>Pożywka DMEM</td><td>Cytiva</td><td>SH30243.01</td><td>Służy do prac związanych z hodowlami komórkowymi</td></tr><tr><td>Lejek</td><td>Thermo naukowy</td><td>42600060</td><td>Do przytrzymywania bibuły filtracyjnej podczas filtracji</td></tr><tr><td>Zlewki</td><td>szklane borokrzemianowe&nbsp;</td><td>1102-50</td><td>Służy do przygotowania ekstraktu wodnego</td></tr><tr><td>Piec z gorącym powietrzem</td><td>Genetimes</td><td>Nie dotyczy&nbsp;</td><td>Służy do suszenia nanocząstek i zbierania w postaci proszku</td></tr><tr><td>Mieszadło magnetyczne</td><td>KYLIN-BELL</td><td>GL-5250-A</td><td>Służy do syntezy nanocząstek</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Nikon Eclipse</td><td>Ts2</td><td>Służy do wykonywania mikrofotografii&nbsp;</td></tr><tr><td>szalka</td><td>Petriego NEST</td><td>753001</td><td>Służy do zbierania nanocząstek&nbsp;</td></tr><tr><td>Pipeta 1 ml</td><td>Nauka laboratoryjna&nbsp;</td><td>YEA17AD0055580</td><td>Aby wziąć/dodać określoną objętość roztworu/ekstraktu</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 1 ml</td><td>SAINING&nbsp;</td><td>3014200-T</td><td>Aby wziąć/dodać określoną objętość roztworu/wyekstrahować</td></tr><tr><td>Mieszalnik magnetyczny PTFE Mieszadła</td><td>LAN RAN</td><td>Nie dotyczy&nbsp;</td><td>Służy do procesu syntezy nanomateriałów</td></tr><tr><td>Wodorotlenek sodu</td><td>Sigma Alrich</td><td>71690</td><td>Służy do regulacji pH podczas syntezy</td></tr><tr><td>Nożyczki ze stali nierdzewnej</td><td>Deli</td><td>6034</td><td>Służy do rozdrabniania materiałów z kory</td></tr><tr><td>Kolba do hodowli tkankowych T25</td><td>NEST</td><td>707001</td><td>Służy do utrzymania komórek&nbsp;</td></tr><tr><td>Waga wagowa&nbsp;</td><td>Radwag&nbsp;</td><td>AS220R2</td><td>Służy do ważenia chemikaliów&nbsp;</td></tr><tr><td>Bibuła filtracyjna Whatman nr 1</td><td>Newstar</td><td>GB/T1914-2017</td><td>Służy do filtrowania ekstraktu do syntezy</td></tr><tr><td>Azotan&nbsp;</td><td>Sigma Alrich</td><td>13778-30-8</td><td>Używany jako prekursor nanocząstki" s synteza</td></tr></tbody></table>

formulacja nanomateriałów na bazie z wykorzystaniem ekstraktu z kory eucommia ulmoides i ich potencjał gojenia ran

Formulation of Zinc-Based Nanomaterials using the Eucommia ulmoides Bark Extract and their Wound Healing Potential

Wodny ekstrakt z kory Eucommia ulmoides służy jako bogate źródło związków bioaktywnych o licznych korzyściach zdrowotnych. Protokół ten ma na celu zbadanie przygotowania nanocząstek tlenku (ZnO) przy użyciu wodnego ekstraktu wodnego bogatego w poliizopren za pośrednictwem kory Eucommia ulmoides. Tymczasem proponowany protokół wiąże się z przygotowaniem materiału gojącego rany poprzez ułatwienie tego procesu. Ponadto potencjał gojenia się ran zsyntetyzowanych nanocząstek (Eu-ZnO-NPs) oceniono za pomocą prostego testu zarysowania na monowarstwie ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC). Po 24 godzinach leczenia Eu-ZnO-NPs oceniono proliferację i migrację komórek HUVEC. Pod koniec badania zaobserwowano proliferację i migrację komórek w porysowanej monowarstwie potraktowanej różnymi stężeniami Eu-ZnO-NPs, podczas gdy w komórkach kontrolnych zaobserwowano słabe tempo migracji i proliferacji komórek. Spośród wybranych stężeń 20 μg/ml nanomateriały Eu-ZnO wykazały lepszą migrację komórek i zwiększony potencjał gojenia się ran.

Celem niniejszego badania jest synteza nanocząsteczek z wykorzystaniem kory drzewa Eucommia ulmoides. Materiał z kory został całkowicie wysuszony w zacienionym środowisku (Rysunek 1). Materiały z kory wykorzystano do przygotowania wodnego ekstraktu surowego w gorącej wodzie poprzez podgrzewanie próbek w temperaturze 130 °C przez 20 min. Niewielka zmiana temperatury i czasu trwania procesu może doprowadzić do rozkładu fitozwiązków i uczynić je niezdatnymi do przygotowania ekstraktu wodnego. Przygotowano wodne ekstrakty surowe z kory E. ulmoides, które wykorzystano do syntezy nanocząsteczek (Rysunek 2). Przygotowany ekstrakt można wykorzystać niezwłocznie. Ekstrakt przechowywany przez dłuższy czas może wpłynąć na proces syntezy. Dlatego do przygotowania nanocząsteczek zaleca się stosowanie świeżo przygotowanego ekstraktu.
Pomyślną syntezę nanocząstek ZnO z wykorzystaniem surowego ekstraktu z kory potwierdzono poprzez pojawienie się mlecznobiałego koloru oraz zmianę pH (Rysunek 3). Wartość pH jest ściśle powiązana z rozmiarem nanocząstek, a pH przekraczające 9 prowadzi do aglomeracji i nierównomiernego rozmiaru. Strukturę zsyntetyzowanego nanomateriału potwierdzono za pomocą analizy TEM; zsyntetyzowane nanocząstki wykazały rozmiar cząstek 80-90 nm, co przedstawiono na Rysunku 4. NaOH należy dodawać kroplami, aby zapobiec gwałtownej zmianie w mieszaninie reakcyjnej. Nanoformulacje na bazie metali są odpowiednie, niedrogie i wykazują niską toksyczność. Co więcej, nanomateriały na bazie metali są znane ze swoich funkcji biologicznych.
Cytotoksyczność Eu-ZnO-NPs wobec komórek HUVEC określono za pomocą testu CCK-8 po 24-godzinnej ekspozycji na różne stężenia Eu-ZnO-NPs. Wyniki wykazały, że Eu-ZnO-NPs nie wywołały zauważalnych zmian w cytotoksyczności wobec komórek HUVEC przy wyższym stężeniu 50 µg/mL (Rycina 5). Następnie naniesiono odpowiednią liczbę komórek i za pomocą sterylnego końcówki do pipety 200 µL wykonano rany o jednolitym rozmiarze. Objętość komórek przekraczająca dopuszczalną granicę może spowodować zmianę pH i spowolnienie tempa proliferacji. Migracja komórek i zamykanie się rany zostały zaobserwowane w grupie badawczej po 24 h od rozpoczęcia traktowania, podczas gdy w grupie kontrolnej nie odnotowano podobnych zmian. Wyniki aktywności gojenia ran wykazały, że syntetyzowane Eu-ZnO-NPs wykazują właściwości przyspieszające gojenie ran w liniach komórkowych HUVEC. Stężenie 20 µg/mL nanomateriałów Eu-ZnO promuje szybszą migrację komórek i wzmacnia właściwości gojenia ran. Co najważniejsze, syntetyzowane nanocząsteczki Eu-ZnO wykazały mechanizm działania zależny od stężenia. Ponadto po 24 h traktowania w porysowanej monowarstwie zaobserwowano proliferację i migrację komórek, podczas gdy w komórkach kontrolnych odnotowano niską migrację i tempo proliferacji (Rycina 6). Procent zamykania się rany po 24 h wyniósł 16% dla grupy kontrolnej, 51% dla grupy traktowanej stężeniem 10 µg/mL oraz 81,5% dla grupy traktowanej stężeniem 20 µg/mL (Rycina 7).
<img alt="Analiza kory drzewnej, okaz botaniczny do identyfikacji materiału, badanie tekstury." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Kolekcja kawałków kory Eucommia ulmoides. Zdjęcie kory Eucommia ulmoides wykorzystanej do przygotowania wodnego ekstraktu na gorąco. Przed ekstrakcją korę należy dokładnie umyć w celu usunięcia zanieczyszczeń i całkowicie wysuszyć w cieniu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Roztwór chemiczny w laboratoryjnej butelce o pojemności 250 ml, odpowiedni do analizy chromatograficznej lub spektroskopowej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Przygotowanie ekstraktu z kory Eucommia ulmoides: Zdjęcie ekstraktów z kory Eucommia ulmoides wykorzystanych do syntezy nanocząstek. Przygotowano 200 mL ekstraktu z kory Eucommia ulmoides, używając 20 g kawałków kory. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Równowaga statyczna w cieczy, kolba Erlenmeyera, stabilność zawiesiny, zestaw do eksperymentu laboratoryjnego." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Synteza nanocząsteczek ZnO z wykorzystaniem ekstraktu z kory Eucommia ulmoides. Zdjęcie przedstawia proces powstawania nanocząsteczek Eu-ZnO; roztwór o mlecznobiałym kolorze świadczy o utworzeniu się nanocząsteczek Eu-ZnO. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Struktura nanocząsteczek; obraz mikroskopowy; analiza materiałów w nanoskali; porównanie rozmiarów; 100 nm vs 50 nm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4: Analiza transmisyjna elektronowa: Obraz przedstawia różne powiększenia nanocząsteczek ZnO otrzymanych z udziałem kory Eucommia ulmoides (A) przy powiększeniu 100 nm oraz (B) przy powiększeniu 50 nm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Analiza żywotności komórek, wykres słupkowy; stężenie a % żywotności, wyniki farmakologii eksperymentalnej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 5"> 
Rycina 5: Test żywotności komórek CCK-8.Wykresy słupkowe przedstawiają żywotność komórek po zastosowaniu różnych stężeń w zakresie 0-50 µg/mL, natomiast komórki niepoddane działaniu preparatu służą jako kontrola negatywna. Dane przedstawiają średnią i odchylenie standardowe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig05large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Test migracji komórek, gojenie ran; mikroskopia poklatkowa w 0 h, 24 h; wykres różnych stężeń." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig06.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 6"> 
Rysunek 6: Test zarysowania (scratch assay) do oceny zamykania się rany. Komórki traktowano syntetycznymi NP EU-ZnO (10 µg/mL i 20 µg/mL) oraz pozostawiono bez NP EU-ZnO (grupa kontrolna), a następnie inkubowano przez 24 h. Obserwowano proliferację i migrację komórek traktowanych NP EU-ZnO. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig06large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Wykres słupkowy przedstawiający procenty zamykania rany w ciągu 24 godzin przy różnych rodzajachy terapii." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67416/67416fig07.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 7"> 
Rycina 7: Procent zamykania rany. Wykresy słupkowe przedstawiają procent zamykania rany w monowarstwie HUVEC z zastosowaniem i bez zastosowania nanocząsteczek EU-ZnO NP w 0 h i 24 h. Dane przedstawiają średnią i odchylenie standardowe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67416/67416fig07large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Tutaj prezentujemy protokół syntezy nanocząsteczek tlenku (ZnO) przy użyciu bogatego w poliizopren wodnego ekstraktu uzyskanego z kory drzewa Eucommia ulmoides. Potencjał gojenia się ran wykazywany przez zsyntetyzowane nanocząstki ZnO na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) oceniono za pomocą testu scratch, który jest prostą, opłacalną i wydajną metodą.

Formulacja nanomateriałów na bazie z wykorzystaniem ekstraktu z kory Eucommia ulmoides i ich potencjał gojenia ran

The aqueous extract from the bark of Eucommia ulmoides serves as a rich source of bioactive compounds with numerous health benefits. The protocol here ...

Nasze badania koncentrują się na odkryciu potencjału gojenia się ran bioinżynieryjnych nanocząstek metali. Naszym celem jest zrozumienie, w jaki sposób te nanocząstki wpływają na proces gojenia i mechanizm ich działania, aby odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące ich terapeutycznego zastosowania w naprawie tkanek. Udało nam się opracować różne opatrunki na bazie nanopostaci przy użyciu naturalnych polimerów, demonstrując ich potencjał w różnorodnych zastosowaniach w gojeniu ran i rozwijając innowacyjne podejścia do naprawy tkanek.Badania te ułatwią identyfikację potencjalnych mechanizmów w modelach in vivo i przyczynią się do opracowania materiałów do gojenia ran o właściwościach biokompatybilnych, zwiększając ich skuteczność i bezpieczeństwo stosowania w różnych zastosowaniach medycznych. Na początek posiekaj korę zebraną z drzewa Eucommia ulmoides na małe kawałki za pomocą nożyczek. Umyj posiekane materiały z kory dwukrotnie wodą podwójnie destylowaną.Następnie susz kawałki kory w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 24 godziny w zacienionych warunkach. Przenieś 20 gramów suszonej w cieniu kory do stożkowej kolby zawierającej 220 mililitrów sterylnej, podwójnie destylowanej wody. Następnie podgrzewać kolbę w temperaturze 130 stopni Celsjusza przez 20 minut.Należy pamiętać, że kolor roztworu zmienia się na jasnożółty po 10 minutach. Następnie surowy ekstrakt zawierający poliizopren należy przechowywać w temperaturze czterech stopni Celsjusza do dalszego wykorzystania. Powstanie nitkowatej struktury wskazuje na obecność poliizoprenu w ekstraktach.Dodaj jeden molowy dwuwodny azotan do 50 mililitrów wody dejonizowanej w kolbie stożkowej o pojemności 500 mililitrów. Mieszać roztwór w sposób ciągły z prędkością 60 obr./min za pomocą mieszadła magnetycznego, aż dwuwodny azotan całkowicie się rozpuści. Następnie dodaj kroplami 15 mililitrów ekstraktu z kory Eucommia ulmoides do 20 mililitrów jednego molowego roztworu dwuwodnego azotanu.Umieść przykrytą mieszaninę reakcyjną na mieszadle magnetycznym. Włącz go i ustaw tak, aby wirował przez trzy godziny. Następnie dodaj kroplami jeden normalny roztwór wodorotlenku sodu do mieszaniny reakcyjnej, aby dostosować pH do dziewięciu.Dodawaj wodorotlenek sodu, aż roztwór zmieni kolor na mlecznobiały, utrzymując pH poniżej dziewięciu, co wskazuje na tworzenie się nanocząstek tlenku. Następnie przenieś zsyntetyzowane nanocząstki tlenku Eucommia ulmoides do 50-mililitrowej probówki wirówkowej i wiruj przy 100 G przez pięć minut w czterech stopniach Celsjusza. Umyte nanocząstki tlenku Eucommia ulmoides zebrać na szklanej płytce i suszyć w temperaturze od 45 do 50 stopni Celsjusza przez godzinę w piekarniku z gorącym powietrzem.Na początek wysiewaj 1 razy 10 do potęgi 4 ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej w każdym dołku 96-dołkowej płytki. Umieść płytkę w inkubatorze ustawionym na 5% dwutlenku węgla i 37 stopni Celsjusza. W celu oceny cytotoksyczności dodaj 10 mikrolitrów różnych stężeń nanocząstek tlenku Eucommia ulmoides do 90% zlewających się komórek.Inkubować płytkę przez 24 godziny w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze z 5% dwutlenkiem węgla. Po inkubacji ostrożnie usuń starą pożywkę, nie naruszając komórek. Dodaj 10 mikrolitrów roztworu CCK-8 do każdej studzienki zawierającej 90 mikrolitrów świeżej pożywki DMEM i inkubuj płytkę, jak pokazano wcześniej.Następnie zmierz absorbancję komórek potraktowanych roztworem CCK-8 przy 450 nanometrach za pomocą spektrofotometru. Wysiew 1 razy 10 do potęgi 5 ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej w 12-dołkowych płytkach hodowlanych zawierających DMEM, uzupełnionych 10% FBS i 1% streptomycyną penicyliny. Umieść płytki w inkubatorze ustawionym na 5% dwutlenku węgla i 37 stopni Celsjusza.Delikatnie wykonaj rysę w poprzek monowarstwy komórek za pomocą sterylnej końcówki pipety o pojemności 200 mikrolitrów, aby utworzyć reprezentatywną ranę o szerokości 200 mikrometrów. Po usunięciu całego podłoża ze studzienek, delikatnie umyj monowarstwę za pomocą jednego mililitra PBS w celu usunięcia oderwanych komórek. Teraz dodaj do studzienek roztwory nanocząstek tlenku Eucommia ulmoides o stężeniu 0, 10 i 20 mikrogramów na mililitr, w połączeniu z kompletną pożywką zawierającą 10% FBS.Inkubuj płytki w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze z 5% dwutlenkiem węgla. Wykonaj mikrofotografie rany po zadrapaniu w godzinach zero i 24 godziny za pomocą mikroskopu odwróconego. Oblicz procent zamknięcia rany, korzystając ze wzoru pokazanego tutaj.Nanocząstki tlenku Eucommia ulmoides nie wykazały cytotoksyczności na komórkach śródbłonka żyły pępowinowej człowieka w stężeniach do 50 mikrogramów na mililitr po 24 godzinach. Zamknięcie rany uległo znacznej poprawie w komórkach potraktowanych nanocząstkami tlenku Eucommia ulmoides w dawce 20 mikrogramów na mililitr, wykazując 81,5% zamknięcie po 24 godzinach w porównaniu z 16% w grupie kontrolnej. Obrazy mikroskopowe wykazały zmniejszoną szerokość szczeliny rany w grupie leczonej 20 mikrogramami na mililitr w porównaniu z grupą kontrolną po 24 godzinach.

formulation-zinc-based-nanomaterials-using-eucommia-ulmoides-bark

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opisujemy technikę nanoformowania, która pozwala na tanie wzorowanie na nanoskali funkcjonalnych materiałów, stosów materiałów i całych urządzeń. Nanoformowanie może być wykonywane na dowolnym zestawie nanoimprintingu i może być stosowane do szerokiej gamy materiałów i procesów osadzania.

Nanoformowanie materiałów funkcjonalnych, wszechstronna metoda komplementarnej replikacji wzoru do nanoimprintingu

Tutaj prezentujemy krok po kroku protokół dyspersji nanomateriałów w środowisku wodnym z charakterystyką w czasie rzeczywistym w celu określenia optymalnych warunków sonikacji, intensywności i czasu trwania dla poprawy stabilności i jednorodności dyspersji nanocząstek bez wpływu na integralność próbki.

Dyspersja nanomateriałów w środowisku wodnym: w kierunku optymalizacji protokołu

Obecne modele hodowli dwuwarstwowych nie pozwalają na funkcjonalne badania in vitro, które naśladują mikrośrodowiska in vivo. Wykorzystując glikol polietylenowy i metodę szablonowania tlenku, protokół ten opisuje rozwój ultracienkiej biomimetycznej błony podstawnej o regulowanej sztywności, porowatości i składzie biochemicznym, która ściśle naśladuje matryce zewnątrzkomórkowe in vivo.

Ultracienkie porowane elastyczne hydrożele jako biomimetyczna błona podstawna do hodowli dwukomórkowej

Tutaj opisujemy produkcję i charakterystykę czynników bioaktywnych zawierających nanodyski. Nanodyski amfoterycyny B są traktowane jako przykład, aby opisać protokół w sposób krokowy.

Formulacja i charakterystyka czynnika bioaktywnego zawierającego nanodyski

Opisujemy nowatorskie, proste metodologie syntezy i charakterystyki biokompatybilnych mikro- i submikronowych cząsteczek ligniny. Preparaty te zapewniają łatwe podejście do wykorzystania heteropolimeru, a także alternatywę dla racjonalnego projektowania wielofunkcyjnych matryc nośnikowych z potencjalnymi zastosowaniami w biomedycynie, technologii farmaceutycznej i przemyśle spożywczym.

Zielona synteza, charakterystyka, enkapsulacja i pomiar potencjału uwalniania nowych mikro-/submikronowych cząstek alkaliów ligniny

W tym badaniu, nanocząstki tlenku zostały zsyntetyzowane przy użyciu metody wytrącania. Działanie przeciwbakteryjne zsyntetyzowanych cząstek przetestowano przeciwko wielolekoopornym szczepom szczepów Staphylococcus aureus (MRSA) opornych na metycylinę i Pseudomonas aeruginosa.

Otrzymywanie nanocząstek tlenku i ocena ich działania przeciwbakteryjnego

Pełne genotypowanie próbki ogona myszy, obejmujące trawienie tkanki i odczyt PCR, wykonuje się w półtorej godziny przy użyciu zestawu Sigma SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR.

Szybkie genotypowanie tkanek mysich z wykorzystaniem zestawu Sigma Extract-N-Amp Tissue PCR Kit

Niniejszy protokół wideo prezentuje metodę generowania transgenicznych Xenopus laevis poprzez wprowadzanie transgenów do jąder plemników, a następnie transplantację jąder do niezapłodnionych komórek jajowych.

Produkcja transgenicznych Xenopus laevis poprzez integrację za pośrednictwem enzymów restrykcyjnych i transplantację jąder

Opracowaliśmy oparty na kolagenie test in vitro, który stymuluje proliferację i inwazję w próbkach wszystkich podtypów raka piersi. Do wizualizacji i kwantyfikacji ekspansji guza wykorzystano optyczną tomografię projekcyjną, będącą techniką mikroskopii trójwymiarowej. Test ten może być wykorzystywany do ilościowej oceny odpowiedzi na leki w poszczególnych próbkach guzów.

Długoterminowa hodowla próbek raka piersi u ludzi i ich analiza z wykorzystaniem optycznej tomografii projekcyjnej

Opisujemy stosunkowo szybką (30 min) i realistyczną metodę jednoczesnego pomiaru przewodności hydraulicznej liścia (Kleaf) oraz przewodności szparkowej (gs) dla transpirujących liści odciętych. Metodę tę można zmodyfikować w celu pomiaru odpowiedzi Kleaf oraz gs na światło i odwodnienie.

Pomiar przewodności hydraulicznej liści oraz przewodności szparkowej i ich odpowiedzi na natężenie promieniowania oraz odwodnienie z wykorzystaniem metody strumienia ewaporacyjnego (EFM)

Poznaj syntezę nanocząstek tlenku cynku z ekstraktu kory Eucommia ulmoides i ich zastosowanie w gojeniu ran. Metoda wykorzystuje komórki HUVEC i test zadrapania, pokazując 81,5% zamknięcia rany przy stężeniu 20 μg/mL.

Formulacja nanomateriałów na bazie z wykorzystaniem ekstraktu z kory Eucommia ulmoides i ich potencjał gojenia ran

Przeglądaj więcej filmów