Stworzenie modeli szczurów naśladujących terapie hormonalne afirmujące płeć

W naszych badaniach opracowaliśmy modele zwierzęce do replikacji terapii hormonalnych afirmujących płeć dla osób transpłciowych przy użyciu testosteronu dla transpłciowych mężczyzn i estrogenu z antyandrogenem dla kobiet transpłciowych. Badamy, czy osoby poddawane tym terapiom są tak samo podatne na chemikalia środowiskowe jak ogół populacji i czy istnieją jakiekolwiek długotrwałe skutki uboczne leczenia hormonalnego. Model ten jest unikalny w swojej dziedzinie, ponieważ obecnie dostępne są dane i narzędzia do oceny potencjalnie różnej podatności na chemikalia osób transpłciowych poddawanych terapii hormonalnej i ich skutków ubocznych.

Znaczącym odkryciem naszej pracy jest zastosowanie specyficznego dla płci wątrobowego CPS jako markera do oceny skuteczności terapii hormonalnych. Podejście to, opracowane po raz pierwszy w naszym badaniu, stanowi cenne narzędzie do potwierdzenia dokładności i skuteczności modelu.

Nasz protokół wypełnia lukę w zrozumieniu długoterminowych skutków terapii hormonalnych. Bada również, czy codzienne narażenie na żywność i chemikalia środowiskowe może wchodzić w interakcje z terapiami hormonalnymi lub zmieniać ich działanie w czasie.

W przyszłości zbadamy, czy model nadaje się do długoterminowych testów, a także zbadamy dodatkowe biomarkery, takie jak wąskie testy behawioralne, aby lepiej ocenić efekty terapii.

[Instruktor] Zacznij od uszczypnięcia i uniesienia skóry w miejscu wstrzyknięcia, aby podać testosteron i estradiol oraz octan cyproteronu rozpuszczony w oleju sezamowym. Włóż igłę jednomililitrowej strzykawki równolegle do grzbietu zwierzęcia. Gdy igła znajdzie się w środku, powoli wstrzyknij 100 mikrolitrów testosteronu lub 200 mikrolitrów estradiolu i octanu cyproteronu, w zależności od modelu. Po dwóch tygodniach leczenia umieść każdego znieczulonego szczura w pozycji leżącej na poduszce grzewczej. Następnie przygotuj pięciomililitrową strzykawkę z igłą o rozmiarze 21, upewniając się, że próżnia została usunięta. Użyj palców, aby zlokalizować serce. Delikatnie oczyść ścianę klatki piersiowej i ostrożnie włóż igłę w boczną ścianę klatki piersiowej, prostopadle do ciała, w miejscu wyrównanym ze zgiętymi łokciami, między żebrami piątym a szóstym. Gdy igła dotrze do komory serca, krew dostanie się do strzykawki przez naczynia włosowate. Powoli i w sposób ciągły cofać tłok strzykawki, aż do pobrania krwi. Po złożeniu ofiary połóż każde zwierzę na stole sekcyjnym na wznak, z przednimi nogami skierowanymi do góry, a tylnymi w dół. Przymocuj kończyny za pomocą szpilek, a następnie spryskaj brzuszną powierzchnię zwierzęcia roztworem dezynfekującym, aby przygotować się do sekcji. Za pomocą nożyczek przetnij wzdłuż linii środkowej od łona do górnej części brzucha. Wykonaj dwa boczne nacięcia wzdłuż przyśrodkowych powierzchni każdej kończyny tylnej od środkowego nacięcia brzusznego brzucha i odsłoń wnętrzności brzuszne. U samców szczurów należy wyciąć jądra znajdujące się w worku mosznowym wewnątrz jamy brzusznej. Naciśnij worek mosznowy, aby upewnić się, że jądra wystają i delikatnie je chwyć. Użyj szczypiec, aby przytrzymać tłuszcz trzewny, a następnie ostrożnie odetnij jądra od wnętrzności. Zważyć jądra przed umieszczeniem ich w roztworze Bois do analizy histopatologicznej. U samic szczurów delikatnie chwyć macicę. Zidentyfikuj jajniki na końcach obu rogów macicy i odetnij je od otaczającej trzewnej tkanki tłuszczowej. Zważ jajniki po wycięciu. Następnie chwyć wątrobę kleszczami, upewniając się, że się nie złamie. Użyj szczypiec, aby uchwycić wyrostek mieczykowaty i całkowicie przeciąć membranę nożyczkami. Użyj nożyczek, aby oddzielić wątrobę od przepony. Podnieś wyrostek mieczykowaty za pomocą kleszczy i wyekstrahuj wątrobę z jamy brzusznej. Po wycięciu zważyć wątrobę i odpowiednio ją przechowywać. Za pomocą nożyczek tnij prostopadle wzdłuż szyi zwierzęcia. Usuń skórę i mięśnie, aby odsłonić tchawicę, w której znajduje się tarczyca. Delikatnie przytnij końce tchawicy, aby usunąć tarczycę. Po usunięciu jądra chwyć najądrza, które jest przyczepione do tylnego brzegu jądra i znajduje się w mosznie. Aby pobrać nasienie, oczyść ogon prawego najądrza, usuwając tłuszcz i tkankę łączną za pomocą nożyczek. Oddziel ogon od pozostałej części i umieść go na szalce Petriego zawierającej jeden mililitr DMEM. Odetnij ogon nożyczkami i użyj poprzedniej pipety, aby delikatnie spuścić zawartość i ułatwić uwolnienie. Teraz przenieś zebraną ciecz do 15-mililitrowej probówki i dostosuj objętość do 10 mililitrów za pomocą DMEM, aby osiągnąć współczynnik rozcieńczenia od jednego do 10. Odpipetować zawartość do homogenizacji i utworzyć zawiesinę. Po delikatnym wstrząśnięciu weź 10 mikrolitrów zawiesiny, aby załadować komorę Neubauera.