Name: Wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: Poznaj metodę wykrywania alkaloidów sporyszu w żywności za pomocą chromatografii cieczowej z jonową spektrometrią ruchliwości i wysokorozdzielczą spektrometrią mas. Ta technika poprawia bezpieczeństwo żywności.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie zostało sfinansowane przez Consejería de Universidad, Investigación e Innovación - Junta de Andalucía (PROYEXCEL_00195) oraz grant podoktorski przyznany przez Generalitat Valenciana i Europejski Fundusz Społeczny+ (CIAPOS/2022/049). Autorzy dziękują "Centro de Instrumentación Científica (CIC)" na Uniwersytecie w Granadzie za udostępnienie oprzyrządowania analitycznego użytego w tym protokole.

Enhanced Isomeric Separation of Ergot Alkaloids Using LC-IMS-MS

<ol><li>Kanu, A. B., Dwivedi, P., Tam, M., Matz, L., Hill, H. H. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+mobility-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Ion mobility-mass spectrometry.</a> J Mass Spectrom. 43 (1), 1-22 (2008).</li>
<li>Gabelica, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+reporting+ion+mobility+Mass+spectrometry+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Mass+Spectrom+Rev%22%5BJournal%5D)">Recommendations for reporting ion mobility Mass spectrometry measurements.</a> Mass Spectrom Rev. 38 (3), 291-320 (2019).</li>
<li>Feuerstein, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparability+of+steroid+collision+cross+sections+using+three+different+IM-HRMS+technologies%3A+An+interplatform+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Comparability of steroid collision cross sections using three different IM-HRMS technologies: An interplatform study.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 33 (10), 1951-1959 (2022).</li>
<li>Regueiro, J., Negreira, N., Berntssen, M. H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-mobility-derived+collision+cross+section+as+an+additional+identification+point+for+multiresidue+screening+of+pesticides+in+fish+feed%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Ion-mobility-derived collision cross section as an additional identification point for multiresidue screening of pesticides in fish feed.</a> Anal Chem. 88 (22), 11169-11177 (2016).</li>
<li>Regueiro, J., Negreira, N., Hannisdal, R., Berntssen, M. H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+approach+for+qualitative+screening+of+pesticides+in+salmon+feed+by+liquid+chromatography+coupled+to+traveling-wave+ion+mobility%2Fquadrupole+time-of-flight+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Targeted approach for qualitative screening of pesticides in salmon feed by liquid chromatography coupled to traveling-wave ion mobility/quadrupole time-of-flight mass spectrometry.</a> Food Control. 78, 116-125 (2017).</li>
<li>Hernández-Mesa, M., Monteau, F., Le Bizec, B., Dervilly-Pinel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+ion+mobility-mass+spectrometry+for+both+targeted+and+non-targeted+analysis+of+phase+II+steroid+metabolites+in+urine%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chim+Acta%3A+X%22%5BJournal%5D)">Potential of ion mobility-mass spectrometry for both targeted and non-targeted analysis of phase II steroid metabolites in urine.</a> Anal Chim Acta: X. 1, 100006(2019).</li>
<li>George, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplatform+comparison+between+three+ion+mobility+techniques+for+human+plasma+lipid+collision+cross+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Interplatform comparison between three ion mobility techniques for human plasma lipid collision cross sections.</a> Anal Chim Acta. 1304, 342535(2024).</li>
<li>Mairinger, T., Causon, T. J., Hann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+ion+mobility-mass+spectrometry+for+non-targeted+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">The potential of ion mobility-mass spectrometry for non-targeted metabolomics.</a> Curr Opin Chem Biol. 42, 9-15 (2018).</li>
<li>Hernández-Mesa, M., Escourrou, A., Monteau, F., Le Bizec, B., Dervilly-Pinel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+and+perspectives+of+ion+mobility+spectrometry+to+answer+chemical+food+safety+issues%5BTitle%5D)+AND+%22TrAC+Trend+Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Current applications and perspectives of ion mobility spectrometry to answer chemical food safety issues.</a> TrAC Trend Anal Chem. 94, 39-53 (2017).</li>
<li>European, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commission+Regulation+%28EU%29+2023%2F915+of+25+April+2023+on+maximum+levels+for+certain+contaminants+in+food+and+repealing+Regulation+%28EC%29+No+1881%2F2006%5BTitle%5D)+AND+%22Off+J+Eur+Union%22%5BJournal%5D)">Commission Regulation (EU) 2023/915 of 25 April 2023 on maximum levels for certain contaminants in food and repealing Regulation (EC) No 1881/2006.</a> Off J Eur Union. 119, 103-157 (2023).</li>
<li>Carbonell-Rozas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+egot+alkaloids+in+major+and+minor+cereals+from+Northern+Italy%3A+A+three+harvesting+years+scenario%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agricl+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Occurrence of egot alkaloids in major and minor cereals from Northern Italy: A three harvesting years scenario.</a> J Agricl Food Chem. 71 (42), 15821-15828 (2023).</li>
<li>Arroyo-Manzanares, N., Gámiz-Gracia, L., García-Campaña, A. M., Diana Di Mavungu, J., De Saeger, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aArroyo-Manzanares%2C+N+%22Fungal+Metabolites%22">Fungal Metabolites</a>. Jean-Michel Mérillon, J. -M., Ramawat, K. G. , Springer International Publishing. (2016).</li>
<li>van Dongen, P., de Groot, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+ergot+alkaloids+from+ergotism+to+ergometrine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Obstet+Gynecol+Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">History of ergot alkaloids from ergotism to ergometrine.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 60 (2), 109-116 (1995).</li>
<li>European Food Safety Authority. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+animal+dietary+exposure+to+ergot+alkaloids%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+J%22%5BJournal%5D)">Human and animal dietary exposure to ergot alkaloids.</a> EFSA J. 15 (7), e04902(2017).</li>
<li>Nam, M., Kim, D., Kim, M. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+total+ergot+alkaloids+in+wheat+flour+by+Orbitrap+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of total ergot alkaloids in wheat flour by Orbitrap mass spectrometry.</a> Food Chem. 441, 138363(2024).</li>
<li>García-Juan, A., León, N., Armenta, S., Pardo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+analytical+method+for+the+simultaneous+determination+of+12+ergot%2C+2+tropane%2C+and+28+pyrrolizidine+alkaloids+in+cereal-based+food+by+LC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an analytical method for the simultaneous determination of 12 ergot, 2 tropane, and 28 pyrrolizidine alkaloids in cereal-based food by LC-MS/MS.</a> Food Res Int. 174 (Pt 1), 113614(2023).</li>
<li>Carbonell-Rozas, L., Mahdjoubi, C. K., Arroyo-Manzanares, N., García-Campaña, A. M., Gámiz-Gracia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+ergot+alkaloids+in+barley+and+wheat+from+Algeria%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">Occurrence of ergot alkaloids in barley and wheat from Algeria.</a> Toxins. 13 (5), 316(2021).</li>
<li>Carbonell-Rozas, L., Gámiz-Gracia, L., Lara, F. J., García-Campaña, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+the+main+ergot+alkaloids+and+their+epimers+in+oat-based+functional+foods+by+ultra-high+performance+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Determination of the main ergot alkaloids and their epimers in oat-based functional foods by ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Molecules. 26 (12), 3717(2021).</li>
<li>Carbonell-Rozas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+mobility-mass+spectrometry+to+extend+analytical+performance+in+the+determination+of+ergot+alkaloids+in+cereal+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+A%22%5BJournal%5D)">Ion mobility-mass spectrometry to extend analytical performance in the determination of ergot alkaloids in cereal samples.</a> J Chromatogr A. 1682, 463502(2022).</li>
<li>European Commission. Commission Implementing Regulation (EU) 2023/2782 of 14 December 2023 laying down the methods of sampling and analysis for the control of the levels of mycotoxins in food and repealing Regulation (EC) No 401/2006. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Off+J+Eur+Union%22">Off J Eur Union</a>. , (2023).</li>
<li>Carbonell-Rozas, L., Vander Cruyssen, L., Dall'Asta, C., Leggieri, M. C., Battilani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fit-for-purpose+method+development+to+determine+co-occurring+multiclass+mycotoxins+in+apple+and+apple+puree+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Anal+Methods%22%5BJournal%5D)">Fit-for-purpose method development to determine co-occurring multiclass mycotoxins in apple and apple puree samples.</a> Food Anal Methods. 16 (8), 1403-1412 (2023).</li>
<li>Laouni, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+mycotoxin+occurrence+in+chicken+feed+and+eggs+from+Algeria%5BTitle%5D)+AND+%22Mycotoxin+Res%22%5BJournal%5D)">Emerging mycotoxin occurrence in chicken feed and eggs from Algeria.</a> Mycotoxin Res. 40, 447-456 (2024).</li>
<li>Ben Hassouna, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycotoxin+occurrence+in+milk+and+durum+wheat+samples+from+Tunisia+using+dispersive+liquid-liquid+microextraction+and+liquid+chromatography+with+fluorescence+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">Mycotoxin occurrence in milk and durum wheat samples from Tunisia using dispersive liquid-liquid microextraction and liquid chromatography with fluorescence detection.</a> Toxins. 15 (11), 633(2023).</li>
<li>Narváez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+and+exposure+assessment+of+mycotoxins+in+ready-to-eat+tree+nut+products+through+ultra-high+performance+liquid+chromatography+coupled+with+high+resolution+Q-orbitrap+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolites%22%5BJournal%5D)">Occurrence and exposure assessment of mycotoxins in ready-to-eat tree nut products through ultra-high performance liquid chromatography coupled with high resolution Q-orbitrap mass spectrometry.</a> Metabolites. 10 (9), 344(2020).</li>
<li>Arroyo-Manzanares, N., Rodríguez-Estévez, V., García-Campaña, A. M., Castellón-Rendón, E., Gámiz-Gracia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+principal+ergot+alkaloids+in+swine+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sci+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">Determination of principal ergot alkaloids in swine feeding.</a> J Sci Food Agric. 101 (12), 5214-5224 (2021).</li>
<li>Pereira, V. L., Fernandes, J. O., Cunha, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+assessment+of+three+cleanup+procedures+after+QuEChERS+extraction+for+determination+of+trichothecenes+%28type+A+and+type+B%29+in+processed+cereal-based+baby+foods+by+GC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Comparative assessment of three cleanup procedures after QuEChERS extraction for determination of trichothecenes (type A and type B) in processed cereal-based baby foods by GC-MS.</a> Food Chem. 182, 143-149 (2015).</li>
<li>Tuzimski, T., Szubartowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+development+for+selected+bisphenols+analysis+in+sweetened+condensed+milk+from+a+can+and+breast+milk+samples+by+HPLC-DAD+and+HPLC-QqQ-MS%3A+Comparison+of+sorbents+%28Z-SEP%2C+Z-SEP+Plus%2C+PSA%2C+C18%2C+chitin+and+EMR-lipid%29+for+clean-up+of+QuEChERS+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Method development for selected bisphenols analysis in sweetened condensed milk from a can and breast milk samples by HPLC-DAD and HPLC-QqQ-MS: Comparison of sorbents (Z-SEP, Z-SEP Plus, PSA, C18, chitin and EMR-lipid) for clean-up of QuEChERS extract.</a> Molecules. 24 (11), 2093(2019).</li>
<li>Łozowicka, B., Rutkowska, E., Jankowska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+QuEChERS+modifications+on+recovery+and+matrix+effect+during+the+multi-residue+pesticide+analysis+in+soil+by+GC%2FMS%2FMS+and+GC%2FECD%2FNPD%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Pollut+Res%22%5BJournal%5D)">Influence of QuEChERS modifications on recovery and matrix effect during the multi-residue pesticide analysis in soil by GC/MS/MS and GC/ECD/NPD.</a> Environ Sci Pollut Res. 24 (8), 7124-7138 (2017).</li>
<li>Schummer, C., Xandonella, I., van Nieuwenhuyse, A., Moris, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epimerization+of+ergot+alkaloids+in+feed%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Epimerization of ergot alkaloids in feed.</a> Heliyon. 6 (6), e04336(2020).</li>
<li>Cherewyk, J. E., Grusie-Ogilvie, T. J., Parker, S. E., Blakley, B. R., Al-Dissi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+storage+temperature+and+time+on+ergot+alkaloid+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">The impact of storage temperature and time on ergot alkaloid concentrations.</a> Toxins. 15 (8), 497(2023).</li>
<li>Silva, Â, Mateus, A. R., Barros, S. C., Silva, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ergot+alkaloids+on+cereals+and+seeds%3A+Analytical+methods%2C+occurrence%2C+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Ergot alkaloids on cereals and seeds: Analytical methods, occurrence, and future perspectives.</a> Molecules. 28 (20), 7233(2023).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Skuteczne zastosowanie tego protokołu opiera się na optymalizacji procedury ekstrakcji, wcześniej przeprowadzonej przez Carbonell-Rozas i wsp.17, którzy wdrożyli użycie rozpuszczalnika ekstrakcyjnego wystarczająco skutecznego do ekstrakcji EA ze złożonych matryc spożywczych, takich jak jęczmień i pszenica, oraz oczyszczania, które zapewniło stosunkowo niskie wartości SSE. Wybór rozpuszczalnika ekstrakcyjnego stanowi krytyczny krok, biorąc pod uwagę charakterystykę chemiczną analitów oraz podatność EA na rozkład i epimeryzację, ale jednocześnie skład matrycy poddanej analizie. W tym przypadku EA (i ogólnie mykotoksyny) zapewniają bardzo dobrą wydajność, gdy wybranym rozpuszczalnikiem jest acetonitryl (rozpuszczalnik nieprotonowy, który może zapobiegać epimeryzacji) 21,22,23,24. Co więcej, w przypadku EA dodatek węglanu amonu zwiększa wydajność ekstrakcji poprzez zapewnienie zasadowego pH25. Ponadto należy wziąć pod uwagę stosunek rozpuszczalnika do próbki, ponieważ użycie małych objętości rozpuszczalnika może spowodować nasycenie26, co znajduje odzwierciedlenie w słabych wartościach odzysku. Ponadto duże objętości rozpuszczalników oznaczają większe rozcieńczenie roztworów analitów, utrudniając ich wykrywanie i/lub sprzyjając ekstrakcji związków matrycowych, które mogą zakłócać ich oznaczanie. Kolejny krok w tej metodologii ekstrakcji – etap oczyszczania – musi zostać zaprojektowany z perspektywy dopasowania do celu, biorąc pod uwagę skład matrycy. To ostatecznie określi, jak czyste są ekstrakty i jak silnie matryca wpływa na oznaczenie analityczne. W tym protokole mieszanina C18:Z-Sep+ (1:1, w/w) została z powodzeniem wykorzystana jako dyspersyjny sorbent w fazie stałej, co znalazło odzwierciedlenie w stosunkowo niskim zgłoszonym SSE. Biorąc pod uwagę, że EA są dobrze ekstrahowane acetonitrylem, w ekstrakcie można również spodziewać się innych słabo lub niepolarnych koeluantów. W tym kontekście C18 jest sorbentem czyszczącym tradycyjnie stosowanym do celów ogólnych, zatrzymującym związki niepolarne z matrycy, podczas gdy Z-Sep+ jest zwykle zalecany do matryc zawierających wysoki procent tłuszczu lub pigmentów27. Należy zauważyć, że większość sorbentów, w tym szeroko stosowana amina pierwszorzędowo-drugorzędowa (PSA) lub grafityzowana sadza (GCB), może wchodzić w interakcje z analitami, powodując ich zatrzymywanie w fazie stałej i utratę do późniejszego oznaczenia analitycznego28. Możliwe interakcje między analitami a sorbentami mogą być również przedmiotem badań podczas optymalizacji etapu oczyszczania, więc zmiana typologii lub, co ważniejsze, ilości sorbentu może być dobrym punktem wyjścia do optymalizacji. W protokole tym zastosowano wcześniej opracowaną metodę ekstrakcji, mimo że obserwowana tu poprawność dla Etn mocno różniła się od wartości uzyskanych w poprzednim badaniu. Chociaż para Et/Etn została opisana jako stabilna chemicznie29, wcześniej obserwowano niespójności po długotrwałym przechowywaniu30. Protokół ten został opracowany w celu zachowania integralności wzorców analitycznych poprzez suszenie, przechowywanie, a następnie ponowne zawieszanie w tym samym dniu analizy; niemniej jednak integralność norm analitycznych EA powinna zostać sprawdzona przed rozpoczęciem części doświadczalnej.
Protokół ten wybiera LC-IMS-MS jako platformę analityczną w celu wykazania jego stosowalności i poprawy wydajności w porównaniu z tradycyjnymi podejściami LC-MS obejmującymi określenie tych samych EA. Jak pokazano na rysunku 3, separacja chromatograficzna badanych EA jest optymalna dla pięciu z sześciu głównych par EA-epimer, co oznacza, że jeszcze bardziej zoptymalizowana metoda chromatograficzna może doprowadzić do całkowitego rozdzielenia pików. Niemniej jednak nie był konieczny żaden dodatkowy wysiłek w celu poprawy separacji chromatograficznej, ponieważ wymiar IMS był w stanie naprawić słabą rozdzielczość pokazaną w LC. Wadą zmniejszonej optymalizacji separacji chromatograficznej jest zwiększona złożoność przetwarzania danych, wynikająca z wprowadzenia dodatkowego etapu separacji, który dodaje kolejny wymiar. Chociaż protokół ten jest teoretycznie zaprojektowany jako metoda celowana do specyficznego oznaczania EA, akwizycja danych w spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (HRMS) została przeprowadzona jako nieukierunkowane badanie przesiewowe. Oznacza to, że urządzenie stale skanowało każdą cechę pochodzącą z próbki, a retrospektywnie EA zostały zidentyfikowane i określone ilościowo. Wiadomo, że takie podejście zmniejsza czułość metody, ale wręcz przeciwnie, pozwala na identyfikację nieznanych związków. Niemniej jednak LOQ podane w tabeli 2 [0,65 - 2,6 ng/ml (0,49 - 1,95 μg/kg w próbkach)] są porównywalne z tymi zgłaszanymi przez tradycyjne metody LC-MS do oznaczania EA, które działają poprzez ukierunkowane akwizycje31. Może to oznaczać, że implementacja IMS zapewnia wzmocniony sygnał analityczny, który umożliwia lepszą dyskryminację od szumu tła, co bezpośrednio wpływa na czułość metody. Kluczowym czynnikiem, który wpływa również na intensywność sygnału analitycznego, jest skuteczność jonizacji w źródle. Jeśli źródło nie zapewnia optymalnych warunków pod względem głównie napięcia, warunków gazowych i temperatury, nie wszystkie cząsteczki analitu zostaną zjonizowane i wykryte; w związku z tym powodując utratę intensywności bezwzględnej. W związku z tym zaleca się zbadanie parametrów źródła jonów w celu uzyskania lepszego sygnału analitycznego.
Celem tego protokołu jest pokazanie zalet stosowania LC-IMS-MS w analizie bezpieczeństwa żywności na przykładzie oznaczania EA. Integracja spektrometrii ruchliwości jonów z przepływami pracy chromatografii cieczowej i spektrometrii mas zapewnia zwiększoną czułość i lepszą rozdzielczość do rozdzielania tych związków, co może stać się szczególnie skomplikowane, biorąc pod uwagę izomerię regulowanych alkaloidów sporyszu. Jak wykazano, ta platforma analityczna z powodzeniem pokonała wyzwania chromatograficzne spowodowane częściowym oddzieleniem pików chromatograficznych od epimerów, a jednocześnie nieukierunkowana akwizycja zapewniła LOQ porównywalne z tymi zgłaszanymi metodami celowanymi. Opierając się na wykazanych wynikach, LC-IMS-MS okazuje się być potężną platformą analityczną do opracowywania metodologii wielopozostałościowych dla zanieczyszczeń żywności przy użyciu metod nieukierunkowanych.

Spektrometria mas z mobilnością jonów (IMS) staje się coraz częściej wykorzystywaną techniką analityczną, często przedstawianą jako dodatkowy wymiar rozdziału zintegrowany z tradycyjnymi przepływami pracy chromatografii cieczowej/gazowej (LC/GC) sprzężonej z MS. IMS polega na rozdziałie cząsteczek w komorze mobilności wypełnionej gazem buforowym, w polu elektrycznym i pod ciśnieniem atmosferycznym1. W zależności od stosunku masy do ładunku (m/z) oraz konformacji geometrycznej, zjonizowana cząsteczka będzie oddziaływać z gazem buforowym podczas przemieszczania się przez komorę mobilności, co znajduje odzwierciedlenie w parametrze mobilności jonów (K)2, obliczanym za pomocą następującego równania:
<img alt="Równanie kinetyczne, K=D/(td×E), równowaga statyczna, wzór, schemat edukacyjny." src="/files/ftp_upload/67484/67484eq01v2.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Równanie 1">
gdzie D oznacza całkowitą długość strefy migracji, td jest całkowity czas dryfu oraz E jest pole elektryczne. Zatem K mierzy się w m2 V−1 s−1choć z przyczyn praktycznych często wyraża się go w cm2 V−1 s−1Wewnętrzna zdolność do przemieszczania się przez komórkę mobilności może być mierzona za pomocą czasu dryfu, a następnie przeliczona na tak zwaną wartość przekroju poprzecznego zderzeń (CCS), która jest parametrem wysoce powtarzalnym dla każdej cząsteczki, niezależnie od zastosowanego urządzenia IMS.3Wartość CCS można wyznaczyć na podstawie ruchliwości zgodnie z następującym równaniem:
<img alt="Równanie mobilności jonowej K=3q/16N×√(2π/μkBT)×1/CCS, stosowane w analizie spektrometrii mas." src="/files/ftp_upload/67484/67484eq02v2.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Równanie 2">
q oznacza ładunek jonu; N gęstość liczbową gazu buforowego; µ masę zredukowaną partnerów kolizyjnych gazu buforowego i jonu; kB stałą Boltzmanna; a T temperaturę gazu buforowego. W związku z tym IMS dostarcza dodatkowych informacji uzupełniających dane analityczne wynikające z analiz chromatograficznych i MS.
Wykazano, że implementacja IMS w platformach LC-MS zwiększa wiarygodność oznaczeń analitycznych, zwłaszcza w przypadku związków występujących w stężeniach śladowych. W kilku badaniach stwierdzono, że metody LC-IMS-MS poprawiają jakość widm masowych poprzez redukcję szumu tła, co w efekcie wpływa na czułość metody, oraz zmniejszają odsetek wyników fałszywie dodatnich i ujemnych otrzymywanych w wielorezydualnych metodologiach LC-MS4,5,6. Ponadto powtarzalność wartości CCS umożliwia porównania nie tylko między różnymi instrumentami wykorzystującymi tę samą technologię, ale także między różnymi technologiami mobilności jonów, mianowicie spektrometrią mobilności jonów z falą przemieszczającą się (TWIMS), spektrometrią mobilności jonów pułapkowanych (TIMS) oraz spektrometrią mobilności jonów w rurze dryfu (DTIMS)2,7, które są najczęściej stosowanymi systemami1. Zatem istotną konsekwencją potencjału CCS jako parametru identyfikacyjnego jest możliwość tworzenia bibliotek CCS, co znajduje odzwierciedlenie w ich zastosowaniu w badaniach metabolomicznych8. Niemniej jednak jedną z najpotężniejszych funkcji IMS jest zdolność do rozdzielania związków izomerycznych i izobarycznych, które mogą nie zostać wystarczająco rozdzielone za pomocą metod LC-MS. Może to mieć miejsce podczas pracy z dużymi zestawami interesujących analitytów w złożonych matrycach, co jest częstą sytuacją w analizach środowiskowych i żywności. W tym kontekście metody LC-IMS-MS zostały zaproponowane do monitorowania pestycydów oraz, w mniejszym stopniu, leków weterynaryjnych i mikotoksyn w żywności9.
Dzięki wysokiej rozdzielczości i selektywności, platformy LC/GC-IMS-MS stają się najużyteczniejszymi narzędziami do rozwiązywania niektórych z obecnych problemów w zakresie bezpieczeństwa żywności, szczególnie tych związanych z mieszaninami izomerycznymi. Zagrożenia zdrowotne związane z mieszaninami izomerycznymi jako zanieczyszczeniami żywności zostały odzwierciedlone w aktualnych przepisach europejskich, które na przykład ograniczają maksymalną stężenie sześciu głównych alkaloidów sporyszu (EAs) oraz ich odpowiadających sześciu epimerów w kilku produktach spożywczych10.
Alkaloidy sporyszowe (EA) stanowią rodzinę toksycznych metabolitów wtórnych produkowanych przez szeroki zakres grzybów, głównie z rodziny Clavicipitaceae (np. Claviceps purpurea, najważniejszego producenta EA ze względu na szeroki zakres gospodarzy), ale także Trichocomaceae, które mogą pasożytować na kłosach żywych roślin (takich jak żyto, jęczmień, pszenica i owies) w czasie kwitnienia11,12. W określonych warunkach, zwłaszcza w zależności od temperatury i aktywności wody, grzyby z rodzaju Claviceps mogą produkować EA, które kumulują się w owocnikach, znanych jako sklerocja lub sporysz, w uprawach gospodarza. W pewnym stopniu EA mogą przetrwać przetwarzanie surowca aż do uzyskania produktu końcowego, dostając się tym samym do łańcucha pokarmowego. Spożycie zanieczyszczonej żywności może prowadzić do zatrucia EA, znanego jako sporyszizm, który objawia się ostrymi symptomami, takimi jak bóle brzucha, wymioty, uczucie pieczenia skóry, bezsenność i halucynacje13. Aby ograniczyć wpływ EA na zdrowie ludzi, Komisja Europejska ustanowiła poziomy maksymalne (ML) w kilku produktach spożywczych dla sumy głównych EA: R-epimerów ergometryny (Em), ergotaminy (Et), ergosyny (Es), ergokrystyny (Ecr), ergokryptyny (Ekr) i ergokorniny (Eco) oraz ich odpowiadających S-epimerów: ergometryniny (Emn), ergosyniny (Esn), ergotamininy (Etn), ergokornininy (Econ), ergokryptyniny (Ekrn) i ergokrystyniny (Ecrn). Związki te mogą ulegać epimeryzacji z form R na S i vice versa, szczególnie pod wpływem silnego światła, długotrwałego przechowywania lub kontaktu z niektórymi rozpuszczalnikami przy wysokim lub niskim pH 12. Chociaż proporcje form R i S mogą się różnić w zależności od warunków, panel CONTAM EFSA zgłosił częstsze występowanie form R niż form S po przeanalizowaniu dostępnej literatury na temat EA w produktach spożywczych14. Zatem poziomy ML różnią się w zależności od kilku czynników, takich jak podatność uprawy, stopień przetworzenia lub częstotliwość spożycia. W ramach regulacji UE poziomy ML dla produktów mącznych z jęczmienia, pszenicy, pszenicy płaskurki i owsa ustalono na 50 lub 150 µg/kg (odpowiednio w zależności od zawartości popiołu niższej lub wyższej niż 900 mg/100 g), podczas gdy zboża przeznaczone bezpośrednio do spożycia przez ludzi podlegają ML na poziomie 150 µg/kg, z wyjątkiem żywności dla niemowląt na bazie zbóż, w której ML jest obniżony do 20 µg/kg10.
Te rygorystyczne przepisy wymagają metod analitycznych o czułości wystarczającej do oznaczania poziomów śladowych stężeń (µg/kg), przy jednoczesnej właściwej identyfikacji regulowanych EA oraz ich odpowiadających epimerów, ponieważ obie formy, izomery R- i S-, mogą występować razem w zanieczyszczonych próbkach. Zadanie to stanowi ogromne wyzwanie, ponieważ każda para toksyna-epimer posiada tę samą dokładną masę i wzór fragmentacji. Ponadto prawidłowa separacja chromatograficzna obu związków może być złożona. Dlatego wymagane są dobrze zoptymalizowane gradienty LC, aby uniknąć błędów w oznaczaniu ilościowym, gdy epimery EA współwystępują w próbkach żywności. Chociaż w kilku badaniach zgłoszono metody LC-MS dla jednoznacznego oznaczania EA15,16,17,18, metoda chromatograficzna musi być szeroko badana, aby uzyskać odpowiednią separację pików chromatograficznych w celu jednoznacznej identyfikacji EA. Jednak nie jest to zazwyczaj możliwe w przypadku metod wieloklasowych, w których jednocześnie oznaczane są zanieczyszczenia należące do różnych rodzin chemicznych. W tym kontekście w niedawnym badaniu przeprowadzonym przez Carbonell-Rozas, Hernández-Mesa i wsp.19 opisano metodę LC-IMS-MS do ilościowego oznaczania EA w próbkach pszenicy i jęczmienia, z wykorzystaniem dwóch różnych instrumentów TWIMS, które zapewniły powtarzalne wartości CCS i niskie granice oznaczania ilościowego (LOQs), pozwalając wykryć wszelkie niezgodności z aktualnym ustawodawstwem. Celem niniejszego protokołu jest zatem pokazanie, w jaki sposób integracja IMS w schematach LC-MS przyczynia się do separacji izomerycznych EA, zwiększając selektywność metody analitycznej. Dodatkowo ilustruje on, jak tworzenie bibliotek CCS poprzez charakterystykę standardów analitycznych zapewnia wyższą pewność identyfikacji mikotoksyn. Protokół ten został zaprojektowany, aby jasno wyjaśnić korzyści z wdrożenia IMS w analizie bezpieczeństwa żywności, przyjmując za przykład oznaczanie EA w zbożach. Protokół ten obejmuje przygotowanie próbek w oparciu o procedurę QuEChERS, analizę próbek metodą LC-TIMS-MS oraz ekstrakcję i interpretację danych IMS.

<table><tbody><tr><td>Acetonitryl</td><td>VWR</td><td>83640.32</td><td></td></tr><tr><td>Probówki ze szkła bursztynowego 4 ml</td><td>VWR</td><td>548-0052</td><td></td></tr><tr><td>Probówki ze szkła bursztynowego 12 ml</td><td>VWR</td><td>548-0903</td><td></td></tr><tr><td>Fiolki bursztynowe 1,5 ml</td><td>Agilent</td><td>5190-9063</td><td></td></tr><tr><td>Węglan amonu</td><td>Fluka</td><td>9716</td><td></td></tr><tr><td>Waga analityczna BAS 31&nbsp;</td><td>Boeco</td><td>4400519</td><td></td></tr><tr><td>Balance CP 323 S&nbsp;</td><td>Sartorius</td><td>23-84182</td><td></td></tr><tr><td>C18</td><td>Supelco</td><td>52604-U</td><td></td></tr><tr><td>Probówki wirówkowe, 15 ml</td><td>VWR</td><td>525-1082</td><td></td></tr><tr><td>Probówki wirówkowe, 50 ml</td><td>VWR</td><td>525-0155</td><td></td></tr><tr><td>Wirówka uniwersalna 320 R</td><td>Hettich</td><td>1406</td><td></td></tr><tr><td>Kompas HyStar&nbsp;</td><td>Oprogramowanie do akwizycji</td> <td>danych Bruker</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie</td><td>jakościowe</td><td>Bruker</td><td></td></tr><tr><td>Elute PLUS&nbsp; Parownik UHPLC</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EVA EC-S</td><td>VLM</td><td>V830.012.12</td><td></td></tr><tr><td>Kwas mrówkowy GR do analizy ACS, Reag. Ph Eur</td><td>Merck</td><td>100264</td><td></td></tr><tr><td>Młynek TitanMill300</td><td>Cecotec</td><td>1559</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>VWR</td><td>83638.32</td><td></td></tr><tr><td>System oczyszczania wody Milli-Q (18,2 M&Omega; cm)</td><td>Milipore</td><td>ZD5211584</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 1- 5 ml</td><td>Labortecnic</td><td>162005</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 100 - 1000 i mikro; L</td><td>Labortecnic</td><td>1622222</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki do pipet 5 - 200 i mikro; L</td><td>Labortecnic</td><td>162001</td><td></td></tr><tr><td>Pippette Transferpette S zmienna, DE-M 10 - 100 &mikro; L</td><td>BRAND</td><td>704774</td><td></td></tr><tr><td>Pippette Transferpette S zmienna, DE-M 100 - 1000 &micro; L</td><td>BRAND</td><td>704780</td><td></td></tr><tr><td>Pippette Transferpette S zmienna, DE-M 500 - 5000 &micro; L</td><td>MARKA</td><td>704782</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 2 ml</td><td>VWR</td><td>613-2003</td><td></td></tr><tr><td>Filtr strzykawkowy 13 mm, 0,22&mikro; m</td><td>Phenomenex</td><td>AF-8-7707-12</td><td></td></tr><tr><td>TASQ</td><td>Bruker</td><td></td><td>Oprogramowanie ilościowe</td></tr><tr><td>timsTOFPro2 IM-HRMS</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex Genie 2</td><td>Scientific Industries</td><td>15547335</td><td></td></tr><tr><td>Kolumna Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 (50&nbsp; x&nbsp; 2,1 mm, 1,8 i mikro; m wielkość cząstek)</td><td>Agilent&nbsp;</td><td>959757-902</td><td></td></tr><tr><td>Z-Sep+</td><td>Supelco</td><td>55299-U</td><td>Sorbent na bazie tlenku cyrkonu</td></tr><tr><td>alkaloidy sporyszu</td><td></td><td></td><td>Sorbent rejestru CAS</td></tr><tr><td>Ergocornine (Eco)</td><td>Techno Spec</td><td>E178</td><td>564-36-3</td></tr><tr><td>Ergocorninine (Econ)</td><td>Techno Spec</td><td>E130</td><td>564-37-4</td></tr><tr><td>Ergocristine (Ecr)</td><td>Techno Spec</td><td>E180</td><td>511-08-0</td></tr><tr><td>Ergokrystynina (Ecrn)</td><td>Techno Spec</td><td>E188</td><td>511-07-9</td></tr><tr><td>Ergokryptyna (Ekr)</td><td>Techno Spec</td><td>E198</td><td>511-09-1</td></tr><tr><td>Ergopkryptynina (Ekrn)</td><td>Techno Spec</td><td>E190</td><td>511-10-4</td></tr><tr><td>Ergometryna (Em)</td><td>Romer Labs</td><td>"002067"</td><td>60-79-7</td></tr><tr><td>Ergometryna (Emn)</td><td>Romer Labs</td><td>LMY-090-5ML</td><td>479-00-5</td></tr><tr><td>Ergozyna (Es)</td><td>Techno Spec</td><td>E184</td><td>561-94-4</td></tr><tr><td>Ergozynina (ESN)</td><td>Techno Spec</td><td>E194</td><td>596-88-3</td></tr><tr><td>Ergotamina (Et)</td><td>Romer</td> <td>Labs"002069"</td><td>113-15-5</td></tr><tr><td>Ergotaminina (Etn)</td><td>Romer Labs</td><td>"002075"</td><td>639-81-6</td></tr></tbody></table>

wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu

Detection of Regulated Ergot Alkaloids in Food Matrices by Liquid Chromatography-Trapped Ion Mobility Spectrometry-Time-of-Flight Mass Spectrometry

Spektrometria mas ruchliwości jonów (IMS) działa jako dodatkowy wymiar separacji, gdy jest zintegrowana z przepływami pracy chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC-MS). Metody LC-IMS-MS zapewniają wyższą rozdzielczość szczytową, lepszą separację związków izobarycznych i izomerycznych oraz lepszy stosunek sygnału do szumu (S/N) w porównaniu z tradycyjnymi metodami LC-MS. IMS zapewnia kolejną cechę molekularną do identyfikacji analitów, a mianowicie parametr przekroju zderzenia (CCS), co zmniejsza liczbę wyników fałszywie dodatnich. W związku z tym metody LC-IMS-MS odpowiadają na ważne wyzwania analityczne w dziedzinie bezpieczeństwa żywności (tj. wykrywanie związków na poziomach śladowych w złożonych matrycach żywności oraz jednoznaczna identyfikacja cząsteczek izobarycznych i izomerycznych).
Alkaloidy sporyszu (EA) to rodzina mykotoksyn wytwarzanych przez grzyby, które atakują wiele różnych gatunków traw, w tym małe ziarna, takie jak żyto, pszenżyto, pszenica, jęczmień, proso i owies. Najwyższe dopuszczalne poziomy tych mikotoksyn zostały ustanowione w kilku środkach spożywczych, zgodnie z rozporządzeniem Komisji (WE) 2023/915. To nowe prawodawstwo obejmuje sześć głównych EA i odpowiadających im epimerów, dlatego potrzebna jest skuteczna metodologia, aby właściwie rozróżnić te cząsteczki izomeryczne, biorąc pod uwagę ich współwystępowanie.
Dlatego celem tego protokołu jest pokazanie, w jaki sposób integracja IMS w przepływach pracy LC-MS przyczynia się do separacji izomerycznych EA, zwiększając selektywność metody analitycznej. Ponadto zilustrowano, w jaki sposób generowanie bibliotek CCS poprzez charakterystykę wzorców analitycznych zapewnia większą pewność identyfikacji mikotoksyn. Protokół ten ma na celu jasne wyjaśnienie korzyści płynących z wdrożenia ZSZ w zakresie bezpieczeństwa żywności, na przykładzie oznaczania EA w zbożach. Ekstrakcja oparta na QuEChERS, a następnie analiza spektrometrii ruchliwości jonów uwięzionych w cieniu cieplnym (TIMS)-MS zapewniła granice kwantyfikacji w zakresie od 0,65 do 2,6 ng / g z akceptowalną dokładnością (chociaż niski odzysk dla ergotamininy) przy 1,5x, 1x i 0,5x ML i wykazała znikomy efekt matrycy.

W pierwszej kolejności do instrumentu LC-IMS-MS wstrzyknięto roztwory wzorców roboczych w celu uzyskania wszystkich cech identyfikacyjnych (tj. czasu retencji, CCS i widm masowych) dla każdego analizowanego tutaj EA. Ponieważ parametry identyfikacyjne, z wyjątkiem dokładnej masy, były początkowo nieznane, metoda akwizycji opierała się na zdarzeniu dwuskanowym, rozpoczynającym się od pełnego skanowania całego widma masowego, a następnie bbCID. Retrospektywne podejście do niniejszego badania jest możliwe dzięki wysokorozdzielczemu spektrometrowi mas Q-TOF, który pozyskuje i generuje dane bez żadnych danych wejściowych ani uprzednich informacji o analitach. W pozyskanych danych wyszukano dokładną masę każdej pary głównych epimerów EA, aby uzyskać również ich pozostałe charakterystyki identyfikacyjne (tj. czasy retencji i wartości CCS), które zostaną wykorzystane do stworzenia metody ilościowej do przetwarzania danych z próbek. Parametry eksperymentalne uzyskane po analizie przedstawiono szczegółowo w Tabeli 1.
Rozdział chromatograficzny zapewnił wyraźne i dobrze rozdzielone piki dla każdej głównej pary epimerów EA, z wyjątkiem Et i Etn (Rysunek 3). Podobieństwo czasów retencji pików chromatograficznych dla Et (6,85 min) i Etn (6,98 min) spowodowało niewystarczającą rozdzielczość między nimi, co objawia się niewielkim nakładaniem na siebie i w konsekwencji może prowadzić do błędów w oznaczaniu ilościowym, biorąc pod uwagę, że czasy retencji mogą ulegać przesunięciom w trakcie serii pomiarowych. Niemniej jednak, w widmach mobilności jonowej (Rysunek 4) zaobserwowano rozdzielenie tej samej pary cząsteczek do linii bazowej, uzyskując rozróżnialne wartości CCS dla każdego anality; wykazuje to zatem zalety zastosowania IMS podczas pracy z zestawem związków o podobnej strukturze.
Po ustaleniu parametrów identyfikacji dla każdego EA, zestaw próbek przygotowano zgodnie z obowiązującymi przepisami europejskimi dotyczącymi walidacji metod analitycznych20. Wybrano trzy poziomy kalibracyjne w oparciu o ML ustanowiony przez organy europejskie: sam limit (150 µg/kg), 1,5x ML (225 µg/kg) oraz 0,5x ML (75 µg/kg). Należy pamiętać, że ten ML odpowiada sumie całkowitej 12 EA. Na potrzeby walidacji przyjęto równy udział w ML; w związku z tym testowane poziomy stężeń dla każdego EA wynosiły odpowiednio 12,50, 18,75 i 6,25 µg/kg. Ponadto przygotowano zestaw ośmiu próbek ślepych oraz dwie krzywe kalibracyjne w czystym rozpuszczalniku (standardowa krzywa kalibracyjna) wraz z krzywą kalibracyjną dopasowaną do matrycy, a następnie przeanalizowano je w ramach tej samej serii analitycznej. Zakres liniowy oceniano w siedmiu punktach w zakresie stężeń od 0,08 do 41,6 ng/L (instrumentalne poziomy stężeń dla każdego EA). Parametry sprawności metody przedstawiono w Tabeli 2.
W pierwszej kolejności w oprogramowaniu ilościowym sporządzono krzywe kalibracyjne dla każdego związku, a zakres liniowy oceniono, przyjmując powierzchnię piku jako funkcję stężenia analitytu. Ważne jest uzyskanie dobrego dopasowania liniowego (R2 &gt; 0,99) przy jednoczesnym zapewnieniu względnego odchylenia standardowego poniżej 20% w odniesieniu do precyzji dla każdego poziomu stężenia. W tym celu można zmienić wagę krzywej na „1/x”. Dobą liniowość zaobserwowano dla wszystkich analitytów w zakresie liniowym 2,6-41,3 ng/mL (1,95-31,2 g/kg w próbkach); jednak dla niektórych analitytów zakres liniowy był jeszcze szerszy, z dolną granicą na poziomie 0,65 ng/mL, przy zachowaniu stosunku sygnału do szumu powyżej 10. Rysunek 5 przedstawia przykład (a) standardowej i (b) dopasowanej do matrycy krzywej kalibracyjnej dla Econ.
Porównanie nachyleń krzywych kalibracyjnych standardowych i dopasowanych do matrycy dostarcza informacji o tym, jak potencjalne substancje współeluujące z matrycy mogą wpływać na analizę. Zakłócenie to jest znane jako efekt tłumienia/wzmocnienia sygnału (SSE) i można je ocenić poprzez porównanie nachyleń obu krzywych kalibracyjnych i zastosowanie następującego równania:
<img alt="Wzór SSE dla kalibracji; równanie służące do porównania krzywych standardowej i dopasowanej do matrycy; analiza danych." src="/files/ftp_upload/67484/67484eq03v3.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Równanie 3">
Jak pokazano w Tabeli 2, wartość SSE mieściła się w przedziale od -23 do 18%, co wskazuje, że obecność matrycy niemal nie wpływa na jonizację analitów; w związku z tym ich oznaczanie ilościowe można przeprowadzić przy użyciu standardowej krzywej kalibracyjnej.
Następnie, znając wpływ matrycy, kolejny krok polega na oznaczeniu ilościowym wzbogaconych próbek na trzech wspomnianych wcześniej poziomach stężeń z wykorzystaniem krzywych kalibracyjnych, aby ocenić, jaka część początkowego EA zostaje odzyskana po procesie ekstrakcji. Ze względu na niską wartość SSE, w oprogramowaniu ilościowym wykorzystano krzywe kalibracyjne przygotowane w rozpuszczalniku, aby automatycznie wyznaczyć stężenie w próbach wzbogaconych. Aby obliczyć odzysk, zmierzone stężenie porównano następnie ze stężeniem teoretycznym zgodnie z poniższym równaniem:
<img alt="Wzór na odzysk: 100 x (stężenie zmierzone/stężenie teoretyczne); równanie, obliczenie." src="/files/ftp_upload/67484/67484eq04.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Równanie 4">
Wszystkie anality pokazaly wartości odzysku w zakresie 72-117% dla wszystkich poziomów stężeń. Oznacza to, że metoda dostarczyła pomiarów stężeń w próbkach wzbogaconych na tyle zbliżonych do wartości teoretycznych, że wykazała tym samym właściwą dokładność. Niemniej jednak, metoda wykazała ograniczoną dokładność w przypadku Etn, którego wartości stężeń wynosiły od 43% do 45% w odniesieniu do teoretycznych poziomów wzbogacenia. Precyzję pomiarów oceniono poprzez obliczenie względnego odchylenia standardowego (RSD) odzysku dla każdego poziomu wzbogacenia otrzymanego w tym samym dniu (RSDr, n = 3) oraz w trakcie całego badania (RSDWR, n = 9). Odnotowano akceptowalną precyzję, biorąc pod uwagę, że wszystkie wartości wahały się poniżej 20%.
W celu oceny czułości proponowanej metody określono granice oznaczania (LOQ) na podstawie krzywej kalibracyjnej dopasowanej do matrycy. W niniejszym protokole wartości te wyznaczono jako najniższe stężenie w zakresie liniowym krzywej, dla którego odchylenie od wartości teoretycznej było mniejsze niż 20%, a stosunek sygnału do szumu przekraczał 10. Jak pokazano w Tabeli 2, wartości LOQ mieściły się w zakresie od 0,65 do 2,60 ng/mL (od 0,49 do 1,95 μg/kg w próbkach).
<img alt="Schemat przygotowania roztworu alkaloidów sporyszowych, przedstawiający etapy rozcieńczania i użycie acetonitrylu do walidacji." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67484/67484fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Figure 1"> 
Rycina 1: Schematyczny przebieg przygotowania pośrednich i roboczych roztworów wzorcowych. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67484/67484fig01large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat listy roboczej chromatografii; kalibracja rozpuszczalnika, krzywe dopasowane do macierzy, analiza próbek zbóż." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67484/67484fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Lista robocza opracowana dla analizy LC-IMS-MS w badaniu walidacyjnym połączonych próbek zbóż. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67484/67484fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Wykres chromatograficzny przedstawiający piki rozdzielenia związków; wyniki analizy danych intensywności w funkcji czasu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67484/67484fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Nałożone na siebie ekstrakowane chromatogramy jonowe analizowanych EAs. Skróty: EAs = alkaloidy sporyszowe; Eco = ergokornina; Econ = ergokorninina; Ecr = ergokrystyna; Ecrn = ergokrystynina; Ekr = ergokryptyna; Ekrn = ergokryptynina; Emn = ergometrynina; Es = ergosyna; Esn = ergosynina; Et = ergotamina; Etn = ergotaminina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67484/67484fig03large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykres chromatograficzny pokazujący intensywność Et, Etn w funkcji czasu i mobilności; analiza rozdziału." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67484/67484fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Ekstrahowany chromatogram jonowy (góra) oraz widma mobilności jonowej (dół) dla Et i Etn. Skróty: Et = Ergotamina; Etn = Ergotaminina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67484/67484fig04large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Stężenie ergokornininy w funkcji liniowości sygnału, R²&gt;0,99, wykres kalibracyjny, chemia analityczna." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67484/67484fig05.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5: Krzywe kalibracyjne dla Econ. (A) Czysty rozpuszczalnik i (B) dopasowane do matrycy. Skrót: Econ = Ergokorninina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67484/67484fig05large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anality</td>
			<td>Rt (min)</td>
			<td>CCS (Å)2)</td>
			<td>[M+H]⁺+ (m/z)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekologiczne</td>
			<td>6.95</td>
			<td>231.67</td>
			<td>562.3029</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekonomia</td>
			<td>8.21</td>
			<td>229.96</td>
			<td>562.3029</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecr</td>
			<td>8.61</td>
			<td>237.74</td>
			<td>610.3029</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ercn</td>
			<td>9.85</td>
			<td>235.56</td>
			<td>610.3029</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekr</td>
			<td>8.15</td>
			<td>233.61</td>
			<td>576.3185</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekrn</td>
			<td>9.38</td>
			<td>229.93</td>
			<td>576.3185</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Em</td>
			<td>3.57</td>
			<td>179.35</td>
			<td>326.1668</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emn</td>
			<td>4.48</td>
			<td>179.01</td>
			<td>326.1668</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Es</td>
			<td>6.41</td>
			<td>229.29</td>
			<td>548.2872</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esn</td>
			<td>6.54</td>
			<td>226.65</td>
			<td>548.2872</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Et</td>
			<td>6.85</td>
			<td>230.33</td>
			<td>582.2716</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Etn</td>
			<td>6.98</td>
			<td>228.3</td>
			<td>582.2716</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Scharakteryzowane parametry LC-IMS-MS służące do jednoznacznej identyfikacji alkaloidów sporyszowych z zastosowaniem metody opisanej w niniejszym protokole.Skróty: Rt = czas retencji; CCS = przekrój czynny zderzeń; LC-IMS-MS = chromatografia cieczowa sprzężona ze spektrometrią mas z mobilnością jonową.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td colspan="3">Odzysk (%)</td>
			<td colspan="3">Precyzja (%) [RSDr, (RSDWR)]</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anality</td>
			<td>Linearność (R2)</td>
			<td>SSE (%)</td>
			<td>0,5 ml</td>
			<td>ML</td>
			<td>1,5 ml</td>
			<td>0,5 ml</td>
			<td>Uczenie maszynowe</td>
			<td>1,5 ml</td>
			<td>LOQ w próbce (µg/kg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekologia</td>
			<td>0.9937</td>
			<td>-23</td>
			<td>114</td>
			<td>111</td>
			<td>100</td>
			<td>6 (15)</td>
			<td>4 (19)</td>
			<td>13 (17)</td>
			<td>0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekonomia</td>
			<td>0.9915</td>
			<td>-12</td>
			<td>105</td>
			<td>117</td>
			<td>124</td>
			<td>6 (10)</td>
			<td>7 (18)</td>
			<td>8 (14)</td>
			<td>0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ecr</td>
			<td>0.9965</td>
			<td>18</td>
			<td>79</td>
			<td>107</td>
			<td>110</td>
			<td>13 (19)</td>
			<td>13 (18)</td>
			<td>6 (18)</td>
			<td>0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ercn</td>
			<td>0.9906</td>
			<td>-20</td>
			<td>99</td>
			<td>110</td>
			<td>104</td>
			<td>10 (15)</td>
			<td>11 (10)</td>
			<td>12 (10)</td>
			<td>0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekr</td>
			<td>0.992</td>
			<td>-10</td>
			<td>106</td>
			<td>101</td>
			<td>93</td>
			<td>6 (9)</td>
			<td>7 (7)</td>
			<td>10 (9)</td>
			<td>0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ekrn</td>
			<td>0.9925</td>
			<td>-16</td>
			<td>97</td>
			<td>118</td>
			<td>114</td>
			<td>5 (11)</td>
			<td>7 (4)</td>
			<td>9 (9)</td>
			<td>0.98</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Em</td>
			<td>0.9947</td>
			<td>-9</td>
			<td>72</td>
			<td>79</td>
			<td>74</td>
			<td>7 (8)</td>
			<td>6 (5)</td>
			<td>9 (9)</td>
			<td>0.98</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emn</td>
			<td>0.9909</td>
			<td>-32</td>
			<td>83</td>
			<td>87</td>
			<td>84</td>
			<td>6 (5)</td>
			<td>11 (10)</td>
			<td>7 (9)</td>
			<td>1.95</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Es</td>
			<td>0.9953</td>
			<td>-16</td>
			<td>89</td>
			<td>112</td>
			<td>111</td>
			<td>5 (7)</td>
			<td>8 (5)</td>
			<td>15 (8)</td>
			<td>0.98</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esn</td>
			<td>0.9971</td>
			<td>-13</td>
			<td>86</td>
			<td>90</td>
			<td>81</td>
			<td>3 (6)</td>
			<td>14 (12)</td>
			<td>10 (10)</td>
			<td>0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Et</td>
			<td>0.9953</td>
			<td>-16</td>
			<td>79</td>
			<td>88</td>
			<td>81</td>
			<td>12 (15)</td>
			<td>19 (18)</td>
			<td>11 (20)</td>
			<td>0.98</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Etn</td>
			<td>0.9997</td>
			<td>-1</td>
			<td>45</td>
			<td>43</td>
			<td>44</td>
			<td>9 (12)</td>
			<td>5 (13)</td>
			<td>12 (17)</td>
			<td>0.98</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 2: Parametry wydajności metod EA pod kątem liniowości, efektu matrycy, odzysku, precyzji i granic oznaczalności.Skróty: Eco = ergokornina; Econ = ergokorninina; Ecr = ergokrystyna; Ecrn = ergokrystynina; Ekr = ergokryptyna; Ekrn = ergokryptynina; Emn = ergometrynina; Es = ergosyna; Esn = ergosynina; Et = ergotamina; Etn = ergotaminina; LOQ = granica oznaczalności; ML = poziom maksymalny; RSDr = względne odchylenie standardowe powtarzalności; RSDWR = względne odchylenie standardowe wewnątrz laboratorium; SEE = efekt tłumienia/wzmocnienia.

Ten protokół przedstawia zweryfikowaną metodę chromatografii cieczowej, mobilności jonów i spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości, do określania obecności alkaloidów sporyszu w żywności, zgodnie z niedawno wydanym rozporządzeniem Komisji (UE) 2023/915.

Wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu

Ion mobility mass spectrometry (IMS) acts as an additional separation dimension when integrated into liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) ...

Celem naszej grupy jest zaproponowanie nowej metodologii analitycznej, która umożliwi efektywną kontrolę zanieczyszczeń i pozostałości w różnych matrycach poprzez unikalną identyfikację związków w boksach. Staraliśmy się rozwiązać niektóre wyzwania związane z bezpieczeństwem żywności za pomocą zaawansowanych platform analitycznych i zrównoważonego traktowania próbek. Ostatnie badania nad mikotoksynami podkreślają postęp w metodach wykrywania, takich jak masywna spektrometria i bioczujniki.Bada również wpływ na zdrowie i strategie redukcji zanieczyszczeń, mające na celu poprawę bezpieczeństwa żywności i opracowanie skutecznych procesów detoksykacji w praktykach rolniczych. Spektrometria mas ma kluczowe znaczenie dla wykrywania pozostałości chemicznych i zanieczyszczeń, w tym mikotoksyn w żywności. Ostatnie postępy w spektrometrii mas przesunęły badania z metody analitycznej docelowej na niedocelową, a komercjalizacja ruchliwości jonów, spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości przyczynia się do tego rosnącego trendu.Pozwala na analityczne ilościowe określenie każdego regulowanego alkaloidu sporyszu. Analiza chromatograficzna tych związków może prowadzić do błędnej kwantyfikacji, zwłaszcza jeśli piki nie są wystarczająco rozdzielone. Tak więc wdrożenie spektrometrii ruchliwości jonów zapewnia kolejny wymiar do ich ilościowego określania na podstawie ich wartości ruchliwości.Nasze zainteresowanie przyszłymi badaniami polega nie tylko na dalszym zajmowaniu się kontrolą pojawiających się zanieczyszczeń w żywności, ale także na skupieniu się na biomonitoringu ekspozomicznym i biomonitoringu ludzi. Kluczowe znaczenie ma zrozumienie związku między narażeniem środowiskowym a zdrowiem, mierząc chemikalia, toksyny i inne metabolity w płynach biologicznych. Na początek przygotuj dwie 1,5-mililitrowe bursztynowe fiolki z 500 mikrolitrami roztworu pośredniego i kolejną fiolkę z mieszaniną rozpuszczalników jako roztworem do mycia.Podczas kondycjonowania kolumny chromatografii cieczowej napisz listę roboczą, w tym dwa roztwory. W kolumnie pliku metody na liście roboczej załaduj plik metody akwizycji, zapisany z wymaganymi parametrami. Utwórz folder, w którym zostaną zapisane wszystkie pobrane pliki danych.Rozkieruj wszystkie próbki do wybranego folderu w kolumnie ścieżki próbki. Przejdź do górnego paska narzędzi oprogramowania i uruchom listę roboczą. Po wykonaniu listy roboczej otwórz oprogramowanie jakościowe.Aby załadować wszystkie analizowane próbki, wybierz plik, a następnie otwórz listę roboczą. Kliknij prawym przyciskiem myszy próbkę odpowiadającą rozwiązaniu EA. Przejdź do edycji chromatogramu, a następnie wybierz typ, a następnie chromatogram jonowy wyekstrahowany.Wprowadź teoretyczną masę cząsteczkową protonowanego jonu dla każdego EA, a następnie kliknij dodaj i OK. Pojawi się sześć wyekstrahowanych chromatogramów jonowych, odpowiadających sześciu EA i ich epimerom. Na każdym wyekstrahowanym chromatogramie jonowym pojawią się dwa piki odpowiadające głównemu EA i jego epimerowi. Kliknij prawym przyciskiem myszy, zaznaczając cały obszar jednego piku, a pojawi się widmo ruchliwości jonów.Przejdź do osi x widma ruchliwości jonów, kliknij prawym przyciskiem myszy i kliknij przekrój kolizji. Jeśli wartość CCS nie zostanie wyświetlona, kliknij prawym przyciskiem myszy na spektrum mobilności i wybierz opcję kopiuj do mobilogramu, a następnie ponownie kliknij prawym przyciskiem myszy na spektrum mobilności i wybierz przypisany stan naładowania. Wprowadź dokładną masę i ładunek jonu.Następnie, na podstawie danych dotyczących fragmentacji z literatury i baz danych, porównaj i wybierz najbardziej intensywny jon produktu jako uzupełniający punkt identyfikacji. Zanotuj czas retencji, wartość CCS i dokładną masę adduktu jonów głównych dla każdego EA, aby utworzyć metodę oceny ilościowej. Następnie otwórz oprogramowanie do przetwarzania danych i kliknij zakładkę zarządzania metodami, a następnie kliknij ustawienia analitu.Wprowadź nazwę każdego EA wraz z jego czasem przechowywania, wartością CCS i masą protonowanych adduktów. W razie potrzeby dostosuj tolerancję dla każdego punktu identyfikacyjnego, korzystając z ustawień domyślnych. Na początek kondycjonuj kolumnę chromatografii cieczowej i skonfiguruj parametry akwizycji.Zważyć jeden gram próbki w 50-mililitrowej probówce wirówkowej. Dodać cztery mililitry roztworu ekstrakcyjnego i wirować próbkę przez jedną minutę. Odwirowywać próbkę przez pięć minut w temperaturze 9,750 g i czterech stopniach Celsjusza.Przenieść cały supernatant do 15-mililitrowej probówki wirówkowej zawierającej 150 miligramów mieszaniny sorbentu i wirować próbkę przez jedną minutę. Po odwirowaniu próbki zebrać supernatant i przenieść go do czteromililitrowej fiolki ze szkła bursztynowego. Odparować ekstrakt pod delikatnym strumieniem azotu, a następnie rozpuścić próbkę w 750 mikrolitrach mieszaniny metanolu i wody.Za pomocą dwumililitrowej strzykawki przefiltrować próbkę przez nylonowy filtr 0,22 mikrometra do 1,5-mililitrowej bursztynowej fiolki chromatograficznej. Na początek przygotuj próbki alkaloidu sporyszu lub EA i uzyskaj krzywą kalibracyjną dopasowaną do matrycy za pomocą chromatografii cieczowej. Otwórz oprogramowanie ilościowe i przejdź do szybkiej karty zadań.Kliknij importuj partię. Po zaimportowaniu partii kliknij pozycję Przetwarzaj partię poniżej opcji Importuj partię. Po zakończeniu przetwarzania danych przejdź do przeglądu przesiewowego i sprawdź, czy nie występują problemy związane z automatyczną integracją, takie jak nieprawidłowe piki chromatograficzne znajdujące się zbyt blisko siebie.W takim przypadku należy zawęzić lub poszerzyć wartości odnoszące się do tolerancji czasu retencji, tolerancji wartości CCS lub błędu masy początkowo ustalonego w pliku metody ilościowej, a następnie ponownie przetworzyć dane. Jeśli automatyczna całkowanie pików nadal wybiera nieprawidłowe piki, ręcznie wybierz obszar na chromatogramie, który pojawia się w oknie przeglądu przeglądowego. Na karcie zarządzanie partiami przejdź do okna stężenia partii i określ wartość stężenia dla każdego ustalonego wcześniej poziomu.Po zakończeniu kliknij zapisz stężenia. Kliknij ilościowo partię i dostosuj parametry, takie jak model, aby dopasować go do danych kalibracji, oczekiwanie i wymuszanie przekroczenia zera modelu. Po zakończeniu kwantyfikacji alkaloidów sporyszu kliknij kartę oznaczania ilościowego, a następnie kliknij prawym przyciskiem myszy folder wsadowy po lewej stronie i wybierz generuj raport.Na koniec wybierz kwantyfikację analitu i wyeksportuj raport w żądanym formacie. Separacja chromatograficzna ujawniła wyraźne piki dla każdej pary epimerów EA, z wyjątkiem ergotaminy i ergotaminy, które wykazywały niewielkie nakładanie się ze względu na ich bliskie czasy retencji. Spektrometria ruchliwości jonów pozwoliła na oddzielenie ergotaminy od ergotaminy, zapewniając rozróżnialne wartości CCS.Analiza efektu tłumienia sygnału lub wzmocnienia wykazała minimalne zakłócenia matrycy w zakresie od minus 32% do 18%, co pozwoliło na dokładne określenie ilościowe przy użyciu standardowej krzywej kalibracyjnej, z wyjątkiem ergametraniny, która wymagała od krzywej kalibracyjnej dopasowanej do matrycy. Dokładność metody została potwierdzona przez wskaźniki odzysku dla wszystkich analitów w zakresie od 72 do 117%, z wyjątkiem ergotaminy, która wykazała wartości odzysku od 43 do 45%Granica wartości oznaczalności wahała się od 0,65 do 2,6 nanogramów na mililitr, co potwierdza czułość metody.

detection-regulated-ergot-alkaloids-food-matrices-liquid

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Przedstawiono protokół wykrywania trichotecenów (mykotoksyn stanowiących zagrożenie dla zdrowia ludzi) z wykorzystaniem nowo opracowanej metody przesiewowej, opartej na konkurencyjnej metodzie immunochemicznej oraz końcowej detekcji elektrochemicznej.

Metoda ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) do wykrywania mikotoksyn

Przedstawiono metodę identyfikacji gatunków materiału botanicznego poprzez bezpośrednią analizę w czasie rzeczywistym - spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości i wielowymiarowa analiza statystyczna.

Szybka, wysokoprzepustowa identyfikacja gatunków materiału botanicznego za pomocą bezpośredniej analizy w czasie rzeczywistym Spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości

Metoda badania analogów fentanylu na podstawie czasu ich retencji, mobilności i wzorca fragmentacji spektrometrii mas.

Analogowe badanie przesiewowe fentanylu przy użyciu LC-TIMS-TOF MS/MS

Prezentujemy metodę szybkiej spektrometrii mas (MS)/spektrometrii mas (MS) opartej na adnotacji i klasyfikacji alkaloidów tropanowych, przydatną zarówno do wstępnej dereplikacji próbek zawierających tropan jak i odkrywania nowych alkaloidów do izolacji.

Zastosowania tandemowej spektrometrii mas chromatografii cieczowej w badaniach nad produktami naturalnymi: alkaloidy tropanowe jako studium przypadku

Niniejsze badanie opracowało metodę chromatografii cieczowej wysokiej rozdzielczości połączoną ze spektrometrią mas z potrójnym kwarcykiem (HPLC-QQQ-MS) w celu identyfikacji i ilościowego określania alkaloidów tropanowych (hioscyjamina, anizodamina, skopolamina) w Anisodus tanguticus. Metoda ta okazała się szybką, dokładną i niezawodną dla analizy wysokowydajnej roślin leczniczych.

Skuteczną i szybką metodę HPLC-QQQ-MS do ilościowego oznaczania alkaloidów tropanowych w roślinach leczniczych

Profilowanie metabolitów nieukierunkowanych za pomocą ultra wydajnej chromatografii cieczowej w połączeniu ze spektrometrią mas (UPLC-MS) jest potężną techniką badania metabolizmu.  W tym artykule przedstawiono typowy przepływ pracy wykorzystywany do nieukierunkowanego profilowania metabolitów w surowicy, w tym organizację i przygotowanie próbki, pozyskiwanie danych, analizę danych, kontrolę jakości i identyfikację metabolitów.

Wielkoskalowe, nieukierunkowane profilowanie metabolomiczne surowicy za pomocą ultrasprawnej chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (UPLC-MS)

Nieukierunkowana metabolomika dostarcza hipotezy generującej migawkę profilu metabolicznego.  Protokół ten zademonstruje ekstrakcję i analizę metabolitów z komórek, surowicy lub tkanki.  Szereg metabolitów jest badany za pomocą ekstrakcji ciecz-faza cieczowa, ultraprzepływowej chromatografii cieczowej/spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS) w połączeniu z oprogramowaniem do analizy różnicowej.

Nieukierunkowana metabolomika ze źródeł biologicznych przy użyciu ultrasprawnej chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas o wysokiej rozdzielczości (UPLC-HRMS)

Opisano protokół określający skuteczność fotokatalizatorów w modelowaniu stężenia powietrza w pomieszczeniach (ppb) lotnych węglowych węgli organicznych, takich jak 2-propanol.

Analiza fotoutleniania 2-propanolu przy stężeniach na poziomie powietrza w pomieszczeniach przy użyciu spektrometrii asymetrycznej ruchliwości jonów

Tutaj opisujemy test chromatograficzny połączony z separacją ruchliwości jonów prekursorów peptydów, po której następuje detekcja MS w wysokiej rozdzielczości (~30 000) MS dla kwantyfikacji wzorców peptydów wzbogaconych w trawieniu przeciwciał monoklonalnych.

Test HS-MRM do oznaczania ilościowego białek komórek gospodarza w biofarmaceutykach białkowych za pomocą chromatografii cieczowej Mobilność jonów Spektrometria mas QTOF

Spektrometria mas jonów wtórnych czasu przelotu jest stosowana do zademonstrowania mapowania chemicznego i morfologii korozji na styku metalu i farby stopu aluminium po wystawieniu na działanie roztworu soli w porównaniu z próbką wystawioną na działanie powietrza.

Obrazowanie korozji na granicy faz metal-farba przy użyciu spektrometrii mas jonów wtórnych czasu przelotu

Poznaj metodę wykrywania alkaloidów sporyszu w żywności za pomocą chromatografii cieczowej z jonową spektrometrią ruchliwości i wysokorozdzielczą spektrometrią mas. Ta technika poprawia bezpieczeństwo żywności.

Wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu (Wideo) | JoVE Journal

Wykrywanie regulowanych alkaloidów sporyszu w matrycach spożywczych za pomocą chromatografii cieczowej - spektrometria ruchliwości jonów uwięzionych w elektronice - spektrometria mas czasu przelotu

Przeglądaj więcej filmów