Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Hsuan-Ti Wang; Cheng-Chang Chen

doi:10.3791/67519

Techniki patch-clamp do analizy pojedynczych pęcherzyków endolizosomalnych

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Patch-Clamp Techniques for Single Endolysosomal Vesicle Analysis

Techniki patch-clamp do analizy pojedynczych pęcherzyków endolizosomalnych

Full Text

1,214 Views

05:47 min

April 4, 2025

DOI: 10.3791/67519-v

Hsuan-Ti Wang¹, Cheng-Chang Chen^1,2

¹Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, ²Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Ten protokół szczegółowo opisuje metodę bezpośredniego pomiaru aktywności kanałów jonowych na wewnątrzkomórkowych pęcherzykach za pomocą ręcznego endolizosomalnego systemu patch-clamp. Ilustrujemy metodę polegającą na powiększaniu endolizosomów i ręcznym izolowaniu tych pęcherzyków. Takie podejście gwarantuje, że badacze mogą dokładnie odtworzyć i zastosować procedurę.

Przedziały endolizosomalne to najmniejsze organelle w komórkach. Tradycyjne techniki elektrofizjologiczne nie są w stanie bezpośrednio zmierzyć zmian ich napięcia i prądu. Technika endolizosomów typu patch-clamp umożliwia bezpośrednie zapisy, co pozwala nam na wcześniejsze badanie w kanałach jonowych.

Głównym wyzwaniem eksperymentalnym jest to, że nie wszystkie związki skutecznie powiększają lizosomy. Identyfikacja odpowiednich komórek jest trudna, a nawet przy idealnych lizosomach nie gwarantuje się pomyślnego zapisu kanału jonowego. Opracowaliśmy technikę zacisku endolizosom-łata w celu umożliwienia bezpośrednich zapisów elektrofizjologicznych z błon endolizosomalnych.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos